Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский

институт фармакологии имени В.В. Закусова» Российской академии медицинских наук

На правах рукописи

СЕДОВА МАРИЯ КОНСТАНТИНОВНА

Разработка состава и методов контроля качества твердой

лекарственной формы левофлоксацина

14.04.02 – Фармацевтическая химия и фармакогнозия

14.04.01 – Технология получения лекарств

Диссертация на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ

доктор фармацевтических наук,

Л.Н.Грушевская

кандидат фармацевтических наук

Е.В.Блынская

МОСКВА 2016

2

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ВЭТСХ - высокоэффективная тонкослойная хроматография

ГФ –государственная фармакопея

ГЖХ – газо-жидкостная хроматография

ИК - инфракрасная спектроскопия

МКЦ – микрокристаллическая целлюлоза

НД – нормативная документация

СО - стандартный образец

ТСХ – тонкослойная хроматография

УФ – ультрафиолетовая область

ФС – фармацевтическая субстанция

ФСП – фармакопейная статья предприятия

ФХ - фторхинолоны

ЯМР –спектроскопия ядерного магнитного резонанса

3

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ………………………………………….…. 2

ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………. 7

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ……………………………………… 14

1.1. Химическая характеристика группы фторхинолонов…………….. 14

1.2. Фармакологическая характеристика группы фторхинолонов…… 14

1.3. Левофлоксацин как представитель группы фторхинолонов.

Химическая и фармакологическая характеристика…………………….

16

1.4. Методы фармацевтического анализа препаратов группы

фторхинолонов……………………………………………………………

20

1.4.1. Спектральные методы анализа. Флюориметрия………………… 20

1.4.2. Химические и электрохимические методы анализа……............. 23

1.4.3. Хроматографические методы анализа…………………………… 25

1.4.4. Методы анализа оптической и энантиомерной чистоты

фторхинолонов……………………………………………………………

33

1.5. Методы анализа левофлоксацина………………………………….. 37

1.6. Технологические подходы к разработке лекарственных

препаратов группы фторхинолонов……………………………………..

41

1.6.1. Роль вспомогательных веществ в производстве таблеток

фторхинолонов……………………………………………………………

43

1.6.2. Роль пленочных покрытий в технологии таблеток

фторхинолонов……………………………………………………………

45

Заключение……………………………………………………………….. 47

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ……………… 48

2.1. Объекты исследований…………………………………………..….. 48

2.2. Методы исследования……………………………………………….. 52

2.2.1. Методы контроля качества субстанции и лекарственной формы

левофлоксацина…………………………………………………………..

52

4

2.2.2. Методики определения технологических характеристик

порошков и гранулятов……………………………………………….…

54

2.2.3. Методики оценки технологических показателей таблеток

левофлоксацина…......................................................................................

59

ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ И

РАЗРАБОТКА МЕТОДИК АНАЛИЗА СУБСТАНЦИИ

ЛЕВОФЛОКСАЦИНА……………………………………………………

60

3.1. Изучение физико-химических свойств субстанции

левофлоксацина..........................................................................................

60

3.1.1. Внешний вид и температура плавления субстанции

левофлоксацина…………………………………………………………...

60

3.1.2. Растворимость субстанции левофлоксацина…………………..... 60

3.1.3. Определение удельного вращения субстанции левофлоксацина. 61

3.1.4. Определение потери в массе при высушивании образцов

субстанции………………………………………………………………..

62

3.1.5. Изучение спектральных характеристик левофлоксацина……… 63

3.1.5.1. УФ-спектроскопия…………………………………………….... 63

3.1.5.2. ИК-спектроскопия…………………………………………..…... 64

3.1.5.3. ПМР-спектроскопия…………………………………………….. 65

3.2. Хроматографические методы в анализе субстанции

левофлоксацина…………………………………………………………..

66

3.2.1. Разработка методики определения посторонних примесей в

субстанции левофлоксацина…………………………………………….

67

3.2.2. Определение содержания R-офлоксацина в субстанции

левофлоксацина……..................................................................................

76

3.2.3. Газо-жидкостная хроматография в анализе субстанции

левофлоксацина…………………………………………………………..

81

3.3. Разработка методики количественного определения субстанции

5

левофлоксацина………………………………………………………….. 86

3.3.1. Метод неводного титрования……………………………………. 86

3.3.2. Метод ВЭЖХ…………………………………………………..….. 88

3.4. Определение стабильности субстанции левофлоксацина и

определение сроков годности……………………………………………

92

3.5. Установление норм качества субстанции левофлоксацина………. 92

ВЫВОДЫ………………………………………………………………… 97

ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА И СОЗДАНИЕ ТВЕРДОЙ

ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ЛЕВОФЛОКСАЦИНА И ЕЕ

СТАНДАРТИЗАЦИЯ.................................................................................

98

4.1. Изучение технологических характеристик субстанции

левофлоксацина…………………………………………………………...

98

4.2. Разработка состава и технологии таблеток………………………... 100

4.2.1. Подбор оптимальной технологии для получения таблеток

левофлоксацина…......................................................................................

101

4.2.2. Разработка состава таблетированной формы левофлоксацина... 101

4.2.3 Изучение влияния вспомогательных веществ на

технологические характеристики модельных смесей и таблеток

левофлоксацина с применением дисперсионного анализа……….........

102

4.2.4 Определение зависимости времени распадаемости таблеток

левофлоксацина от типа и количества дезинтегрантов, влияние

увлажняющего агента на распадаемость таблеток левофлоксацина,

полученных методом влажной грануляции…………………………….

107

4.2.5. Влияние влажности гранулята и давления прессования на

качество таблеток левофлоксацина, полученных методом влажной

грануляции………………………………………………………………...

115

4.2.6. Аргументирование выбора пленочных покрытий……………..... 117

4.2.7. Определение эквивалентности профилей растворения

6

разработанных таблеток левофлоксацина и препарата сравнения

«Таваник»………………………………………………………………….

119

4.3. Технологическая схема производства таблеток левофлоксацина... 120

4.4. Разработка методик анализа и установление норм качества

таблеток левофлоксацина………………………………………………..

123

4.4.1. Внешний вид……………………………………………………..... 123

4.4.2.Подлинность……………………………………………………….. 123

4.4.3. Средняя масса и отклонения от средней массы………………… 127

4.4.4. Распадаемость……………………………………………………… 127

4.4.5.Посторонние примеси………………………………………............ 127

4.4.6 Количественное определение……………………………………... 131

4.4.7.Разработка методики определения показателя «Растворение»…. 136

4.4.8 Установление сроков годности таблеток левофлоксацина……... 138

4.4.9 Установление норм качества таблеток левофлоксацина………... 140

ВЫВОДЫ…………………………………………………….…............... 141

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ…………………………………………………….... 142

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ………………………………………………. 144

ПРИЛОЖЕНИЯ………………………………………………………….. 168

7

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Инфекции дыхательных путей по частоте возникновения занимают первое

место среди инфекционных заболеваний человека. Так как в последние годы

наблюдается отчетливая тенденция к увеличению смертности от инфекционных

заболеваний, вызванных резистентными штаммами, растет интерес к новым

антибактериальным средствам с меньшим уровнем резистентности бактерий. В

настоящее время в связи с высокой активностью и широким спектром действия

фторхинолоны составляют серьезную конкуренцию другим антибиотикам,

существующим на фармацевтическом рынке.

Первые препараты группы фторхинолонов были внедрены в клиническую

практику в 1978 - 1980 гг, и с тех пор их число значительно увеличилось

[19,20,32].

Важное значение при разработке новых препаратов группы фторхинолонов

имели итоги клинического применения первых препаратов этой группы, в первую

очередь - ципрофлоксацина и офлоксацина, а также выделение в самостоятельный

препарат действующего начала офлоксацина, получившего международное

название левофлоксацин [32].

В настоящее время левофлоксацин является одним из важнейших

соединений группы фторхинолонов в клинической практике с достаточно

длительным периодом применения[32,41,52].

Настоящие исследования были проведены в рамках государственного

контракта № 02.522.12.2011 от «02»марта 2009 г., выполняемого в рамках

федеральной целевой научно-технической программы «Исследования и

разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического

комплекса России на 2007-2012 годы» по теме: «Разработка технологий синтеза

соединений фторхинолонового ряда и выпуск на их основе опытных партий

антибактериального препарата левофлоксацина для лечения широкого круга

инфекций» в сотрудничестве с Институтом органического синтеза им. И.Я.

8

Постовского Уральского отделения РАН, где был разработан новый

оригинальный способ синтеза субстанции левофлоксацина.

Новый отечественный способ основан на получении энантиомерно чистой

субстанции левофлоксацина путем стереоспецифического синтеза, что позволяет

исключить из технологии синтеза дорогостоящий процесс разделения рацемата.

Кроме того, создание отечественного аналога существующих на западном рынке

препаратов левофлоксацина позволит внести вклад в программу

импортозамещения лекарственных средств в Российской Федерации.

Вместе с тем появление нового препарата на фармацевтическом рынке

невозможно без исследований, посвященных разработке его состава и технологии

производства, а также исследований по его стандартизации.

Все вышесказанное определило цель и задачи настоящего исследования.

Степень разработанности темы исследования

В Институте органического синтеза им. И.Я. Постовского Уральского

отделения РАН был разработан новый оригинальный способ синтеза субстанции

левофлоксацина. В ФГБНУ «Научно-исследовательский институт фармакологии

имени В.В. Закусова» была проведена разработка методик контроля качества

субстанции левофлоксацина, синтезированной по оригинальному способу, с

использованием материалов монографии USP-NF на субстанцию левофлоксацина.

Однако поскольку синтез отечественной субстанции проводится по

принципиально новому способу, в настоящей работе методики монографии USP

были пересмотрены, в случае необходимости модифицированы, и валидированы.

Целью настоящей работы являлось проведение комплекса исследований по

изучению и стандартизации субстанции левофлоксацина, синтезированной по

новому способу, а также разработке состава, технологии производства, методик

анализа и норм качества его таблетированной лекарственной формы.

9

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие

задачи:

1. Изучить физико-химические свойства и спектральные характеристики

субстанции левофлоксацина;

2. Разработать методики определения посторонних примесей и остаточных

органических растворителей в субстанции левофлоксацина;

3. Разработать методику количественного определения субстанции

левофлоксацина;

4. Обосновать выбор вспомогательных веществ и разработать состав и

рациональную технологию получения таблетированной лекарственной формы

левофлоксацина;

5. Доказать эквивалентность профилей высвобождения левофлоксацина из

таблеток разработанного состава и оригинального препарата;

6. Обосновать показатели качества таблетированной лекарственной формы

левофлоксацина и разработать методики их определения;

7. Изучить стабильность, установить сроки годности субстанции и

лекарственной формы левофлоксацина и разработать соответствующую

нормативную документацию.

Научная новизна

В рамках проведенных исследований были изучены физико-химические

свойства и спектральные характеристики субстанции левофлоксацина,

полученной по новому оригинальному способу, изучена ее хроматографическая

чистота с помощью метода ВЭЖХ, а также стабильность субстанции при

хранении.

Проведен комплекс физико-химических и технологических исследований с

целью выбора и научного обоснования состава и технологии лекарственной

формы левофлоксацина. Изучены технологические характеристики субстанции,

проведен выбор состава вспомогательных веществ с помощью дисперсионного

анализа, выявлены математические зависимости, определяющие наиболее

10

значимые факторы, влияющие на технологические характеристики таблеточных

масс и показатели качества таблеток, подобрана оптимальная технология для

производства таблеток левофлоксацина, включающая в себя нанесение

пленочного покрытия.

Изучены спектральные и хроматографические характеристики, а также

стабильность при хранении таблеток левофлоксацина оригинального состава, что

позволило установить научно обоснованные нормы качества и сроки годности

препарата.

Новизна проведенных исследований подтверждена патентом РФ на

изобретение №2497501 от 10.11.2013 г.

Теоретическая значимость работы

В результате проведенных исследований получены новые данные о физико-

химических свойствах, хроматографической чистоте, а также технологических

характеристиках субстанции левофлоксацина, полученной по новому

оригинальному способу, которые можно будет использовать в дальнейшей

фармацевтической разработке препаратов на ее основе.

Практическая значимость работы и внедрение в практику

На основании проведенных исследований были разработаны:

- Валидированные методики анализа, научно обоснованные нормы качества и

сроки годности субстанции левофлоксацина;

- Проект ФС на субстанцию левофлоксацина;

- Лабораторный регламент на «Левофлоксацин, таблетки, покрытые

оболочкой, 500 мг»;

- Валидированные методики анализа, научно обоснованные нормы качества и

сроки годности таблеток левофлоксацина 500 мг, покрытых оболочкой;

- Проект НД «Левофлоксацин, таблетки покрытые оболочкой, 500 мг».

Методология и методы исследования

Методология исследования построена на анализе литературных данных,

оценке степени разработанности и актуальности темы исследования, постановке

11

целей и задач исследования по изучению и стандартизации субстанции

левофлоксацина, синтезированной по новому способу, и разработке состава,

технологии производства, методик анализа и норм качества его таблетированной

лекарственной формы. В процессе выполнения исследования использовались

методы: ИК-, УФ-, ЯМР 1Н-спектроскопия, поляриметрия, оптическая микроско-

пия, ВЭЖХ, ГЖХ, метод кислотно-основного титрования в неводных средах,

потенциометрия. Статистическая обработка полученных результатов проводилась

в соответствии с общей фармакопейной статьей ГФ XII, в. 2, ОФС 42-0111-09.

Публикации

По материалам исследования опубликовано 7 печатных работ (4 из них – в

изданиях, рекомендованных ВАК РФ) и 1 патент (Патент на изобретение

№2497501.Бюл. №31. 2013).

Степень достоверности результатов исследования

Экспериментальные исследования проведены на современном

сертифицированном оборудовании; разработанные аналитические методики были

валидированы; проведена статистическая обработка полученных

экспериментальных данных, что позволяет считать их достоверными.

Апробация работы

Основные результаты проведенных исследований были представлены на IV

съезде фармакологов России «Инновации в современной фармакологии» (Казань,

2012), на международной научно-практической конференции «Актуальные

вопросы в научной работе и образовательной деятельности» (Тамбов, 2013).

Личный вклад автора

Автору принадлежит ведущая роль в выполнении экспериментальных

исследований, разработке и валидации методик, анализе и обобщении

полученных результатов, проведении аналитической и статистической обработки

результатов, написании публикаций и нормативных документов.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

12

Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности

14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия и 14.04.01 – технология

получения лекарств. Результаты проведенного исследования соответствуют

области исследования специальности, конкретно пунктам 2 и 3 паспорта

специальности «фармацевтическая химия, фармакогнозия» и пункту 3 паспорта

специальности «технология получения лекарств».

Связь исследования с проблемным планом фармацевтической науки.

Исследования проведены в рамках государственного контракта № 02.522.12.2011

от «02» марта 2009 г., выполняемого в соответствии с федеральной целевой

научно-технической программой «Исследования и разработки по приоритетным

направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2012

годы» по теме: «Разработка технологий синтеза соединений фторхинолонового

ряда и выпуск на их основе опытных партий антибактериального препарата

левофлоксацина для лечения широкого круга инфекций».

Основные положения, выносимые на защиту:

- Экспериментальное обоснование выбора аналитических методик,

установленных норм качества и сроков годности субстанции и таблеток

левофлоксацина 500 мг, покрытых оболочкой;

- Теоретическое и экспериментальное обоснование состава, технологии

получения таблеток левофлоксацина 500 мг, покрытых оболочкой.

Объём и структура диссертации

Диссертация изложена на 176 страницах машинописного текста и состоит

из введения, обзора литературы, экспериментальной части (материалы и методы,

результаты исследований и их обсуждение), выводов, списка литературы, а также

Приложения. Работа иллюстрирована таблицами, рисунками и схемами.

Библиографический указатель включает 189 источников, из них 148 на

иностранных языках.

13

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи

исследования, научная новизна и практическая значимость работы, положения,

выносимые на защиту.

Первая глава содержит анализ отечественной и зарубежной литературы по

теме диссертации.

Вторая глава включает описание объектов, материалов и методов

исследования, а также используемого оборудования.

Третья глава посвящена результатам исследований по изучению физико-

химических и спектральных характеристик субстанции левофлоксацина,

разработке методик анализа, установлению норм качества и сроков годности

субстанции.

Четвертая глава содержит результаты по разработке состава и технологии

таблетированной лекарственной формы левофлоксацина, а также результаты

исследований по ее стандартизации.

В Приложения вынесены титульные листы проекта ФС на субстанцию и

проекта НД на таблетки левофлоксацина 500 мг, покрытые оболочкой, и

лабораторного регламента на производство таблеток левофлоксацина 500 мг,

покрытых оболочкой, а также титульный лист патента «Фармацевтическая

композиция, выполненная в твердой лекарственной форме, и способы ее

получения».

14

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Химическая характеристика группы фторхинолонов

Фторхинолоны – большая группа высокоэффективных антимикробных

препаратов с широкими показаниями к применению, введенная в

терапевтическую практику в концеXX века [32,41,55].

Термин “фторхинолоны” (“6-фторхинолоны”) говорит о принадлежности

препаратов к классу хинолонов (или родственным по структуре соединениям) с

наличием атома фтора в молекуле, в строго определенном положении 6

хинолонового цикла [32,57,58].

Новые по степени активности, соединения с невысокой токсичностью были

получены при введении в молекулу хинолона атома фтора в положение 6 цикла и

шестичленного пиперазинильного радикала (или его аналогов) в положение 7

[15,19-23,32]. На основе этих соединений былиразработанывысокоактивные

антимикробные препараты, вошедшие в мировую клиническую практику.

Соединения принадлежащие к классу хинолонов присутствует фрагмент

пиридона, является шестичленнымазотистым гетероцикломс карбоксильной

группой в положении 3 и кетогруппой в положении 4 по отношению к атому

азота в цикле. Фрагмент пиридона, независимо от наличия фтора в молекуле,

определяет основной механизм действия всех хинолонов: ингибирование

фермента ДНК-гиразы. [32,41,62].

1.2. Фармакологическая характеристика группы фторхинолонов

Фторхинолоны – группа синтетических химиотерапевтических

антимикробных препаратов класса хинолонов, которые обладают выраженной

противомикробной активностью, за счет ингибирования двух ключевых

ферментов клетки из класса топоизомераз, отвечающих за биосинтез и

репликацию ДНК: ДНК-гиразы и топоизомеразы IV [32, 35, 60].

15

Первым препаратом, который был использован в клинической практике для

лечения кишечных инфекций и инфекций мочевыводящих путей из класса

хинолонов, была налидиксовая кислота (неграм), применяемая с 1962 г. Данный

препарат и последующие синтезированные хинолоны имеют ограниченную

область применения, так же к ним быстро развивается резистентность бактерий

[58,59, 94,187].

Первые препараты группы фторхинолонов были использованы в

клинической практике в 1978 - 1980 гг. путем введении атома фтора в 6-е

положение молекулы хинолона. Наличие одного или нескольких атомовфтора в

молекуле и различных заместителей в разных позициях определяет особенности

антибактериальной активности и фармакокинетических свойств препарата. В

зависимости от числа атомов фтора фторхинолоны разделяют на

монофторированные, дифторированные и трифторированные соединения. В

настоящее время получено более 30 препаратов фторхинолонов, так же появились

активные соединения, не содержащие фтор в 6-ом положении —

десфторхинолоны (например, гареноксацин) [21, 32, 76, 113, 114].

Для клинической практики за истекшие 20 лет предложено более 30

фторхинолонов, однако широкое применение в международной клинической

практике нашли около 15 препаратов.Фторхинолоны, несмотря на наличие ряда

общих характеристик, могут различаться по степени активности, особенностям

фармакокинетики и токсикологии, в зависимости от химического строения и

физико-химических свойств. Большое число фторхинолонов и различия между

ними, включая особенности механизма действия на микробную клетку, не всегда

хорошо укладываются в хронологию (последовательность) введения препаратов в

практику [137,148]. Это обусловило особенности классификации фторхинолонов

(ФХ), в структуре которых в настоящее время целесообразно рассматривать две

группы препаратов:

I группа - ФХ 80-х гг., первые («ранние», «старые») ФХ

16

II группа - ФХ 90-х гг., новые («поздние») ФХ (Таблица 1.1), причем в

пределах каждой группы могут наблюдаться существенные различия между

ФХ, (например, препарат I группы норфлоксацин с ограниченными

показаниями к применению в сравнении с другими ФХ)[32, 41].

Таблица 1.1

Антимикробные препараты класса хинолонов

Нефторированные

хинолоны

1962-1980 гг.

6-фторхинолоны (ФХ) Возможные

хинолоны

будущего I группа, первые ФХ

1978-90 гг.

II группа, новые

ФХ 1991-2002 гг.

Налидиксовая

кислота,

Оксолиновая

кислота,

Пипемидоваякислота,

Циноксацин,

Розоксацин и

некоторые др.

Флумеквин,

Норфлоксацин,

Ципрофлоксацин,

Офлоксацин,

Пефлоксацин,

Ломефлоксацин,

Эноксацин,

Дифлоксацин,

Флероксацин,

Руфлоксацин,

Тосуфлоксацин и

некоторые др.

Левофлоксацин,

Парфлоксацин,

Моксифлоксацин,

Гатифлоксацин,

Гемифлоксацин,

Ситафлоксацин,

Пазлуфлоксацин,

Тровафлоксацин,

Балуфлоксацин и

др.

Препараты не

содержащие

фтор по

положению во

фрагменте

хинолона;

фтор введен в

структуру

заместителя по

С8: соединение

BMS -284756 и

др.

1.3. Левофлоксацин как представитель группы фторхинолонов.

Химическая и фармакологическая характеристика

Левофлоксацин представляет собой левовращающий изомер рацемической

смеси офлоксацина – (S)-9-фтор-2,3-дигидро-3-метил-10-(4-метил-1-

пиперазинил)-7-оксо-7Н-пиридо[1,2,3-de]-1,4-бензоксазин-6-карбоновой кислоты

гемигидрат.

17

N

O

F

O O

OH

CH3

N

NH3C

1/2 H2O

С18Н20FN3O4 х ½ Н2О М.м. 370,4

Левофлоксацин представляет собой светло желтый кристаллический

порошок или кристаллы. Левофлоксацин легко растворим в воде при pH 0,6–6,7.

Молекула существует в виде биполярных ионов при значениях кислотности,

соответствующих кислотности в тонкой кишке здорового человека. Может

образовывать стабильные соединения с ионами многих металлов [41, 75].

Офлоксацин (рацемат) применяется в медицинской практике более 15 лет,

начиная с периода клинического изучения с 1986 г.Препарат характеризуется

высокой клинической эффективностью, широкими показаниями к применению,

устойчивостью молекулы к трансформации в организме ихорошей

переносимостью [22, 42, 43].

По химическому строению офлоксацин, в отличие от большинства

фторхинолонов, представляет собой соединение трициклической структуры,

полученное путем циклизации базовой структуры хинолона по положениям 1 и 8

бензоксазиновым циклом. Благодаря такой структуре молекула характеризуется

устойчивостью к трансформации в организме, что обеспечивает длительную

циркуляцию в организме неизменного активного препарата. В молекуле

офлоксацина атом фтора находится в положении 9, что соответствует положению

6 во фрагменте хинолона. Все важные для проявления высокой активности

группировки (карбоксильная и кето-группы и метилпиперазинильный радикал) в

структуре офлоксацина сохранены.

18

Офлоксацин представляет собой рацемическую смесь двух оптически

активных изомеров: левовращающего изомера (L -офлоксацин, S -офлоксацин) и

правовращающего изомера (D -офлоксацин, R -офлоксацин) [29, 69, 74, 75].

Характер оптической активности L и D изомеров определяется

особенностями положения (связи) метильной группы (-СН3) с углеродом в

бензоксазольном фрагменте молекулы.

Левофлоксацин (L-офлоксацин), как антимикробный препарат, обладает

большей активностью, чем D-офлоксацин, и в 2-4 раза более активен, чем рацемат

[88, 78, 118, 172 ]. D-изомер слабо активен; в рацемической смеси за счет D-

изомера антимикробная активность офлоксацина существенно снижается [69,

186].

Левофлоксацин, также как и другие фторхинолоны, характеризуется

бактерицидным типом действия и аналогичным офлоксацину широким

антимикробным спектром. Основное различие между левофлоксацином и

офлоксацином, имеющее значение для определения преимущественных

показаний к применению нового фторхинолона, - более высокая активность

левофлоксацина в отношении грамположительных аэробных бактерий,

«атипичных» патогенов - хламидий и микоплазм, и микобактерий [5, 88, 118 172].

Левофлоксацин как лекарственный препарат разработан в конце 80-х

японскими исследователями фирмы DaichiPharmaceuticalLtd [88, 172] и

предложен для применения в Японии после крупных клинических испытаний в

1993 г. Затем расширенное изучение препарата и разработка инъекционной

формы проводились специалистами фирмы Hoechst - MarionRussel (Германии).

Препарат апробирован в клиниках Европы, Америки, странах Азии. В настоящее

время левофлоксацин выпускается под торговым названием Таваник® фирмой

Aventis (Франция - Германия) в двух лекарственных формах: пероральной и

инъекционной [32, 55, 56, 187]. В России левофлоксацин (Таваник®)

зарегистрирован и разрешен для применения в 2000 г [32].

19

Однако необходимо отметить, что процесс выделения активного изомера из

рацемата представляет определенные технологические трудности, что приводит к

повышению цены на препарат на первых этапах его выпуска на

фармацевтический рынок [32].

В Институте органического синтеза УрО РАН был разработан

альтернативный метод получения левофлоксацина, в основе которого лежит

кинетическое разделение энантиомеровбензоксазина:

Данный метод запатентован в Японии [166], Южной Корее и России. В

основе метода лежит принцип, в котором хиральные агенты вступают в реакцию

с одним из энантиомеровбензоксазина в 10 раз быстрее, чем с другим, что и

позволяет достичь их эффективного разделения [57, 59, 61]. Расчёты показывают,

что это связно с определённой пространственной ориентацией переходных

комплексов и различиях в их энергетических характеристиках [187].

Образцы субстанции, синтезированной по новой технологии, были

переданы в ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» для разработки

готовой лекарственной формы и нормативной документации в рамках работ по

Государственному контракту № 02.522.12.2011 от «02» марта 2009 г (Договор №

ЖС-2011/03-09 от 23 марта 2009 г. Дополнительное соглашение № 1 от «20» мая

20

2009 г. по теме «Разработка технологии получения готовой лекарственной

формылевофлоксацина, проведение доклинического изучения препарата и

разработка нормативно-технической документации»).

1.4. Методы фармацевтического анализа препаратов группы

фторхинолонов

Нами был проведен анализ литературы, касающейся методов качественного

и количественного анализа фторхинолонов (в частности, левофлоксацина) в виде

субстанций, лекарственных препаратов, а также в биологических объектах.

В основном, для качественного и количественного анализа фторхинолонов

и в биологических объектах, и в лекарственных формах, в настоящее время

используют метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с

различными способами детектирования – спектрофотометрическим [43, 149, 169],

флюориметрическим [103, 63 и др.], масс-спектрометрическим [54].

Однако имеются данные по применению и других методов анализа, таких

как УФ-, ИК-, ПМР-спектроскопия, флюориметрия, химические и

электрохимические методы, а также тонкослойная хроматография и капиллярный

электрофорез. Для анализа фторхинолонов были также предложены методы ИК-

спектроскопии [158, 159 и др.], ЯМР 1Н -спектроскопии [112],

электрохимические и химические методы [42,47, 81, 96, 109, 136], хроматография

в тонком слое сорбента (ТСХ и ВЭТСХ) [44, 150, 142], капиллярный

электрофорез [48, 82, 43, 181, 182].

1.4.1. Спектральные методы анализа. Флюориметрия

Для анализа фторхинолонов применяются методы спектрофотометрии в

ультрафиолетовой [131] и в видимой области спектра после образования

окрашенных продуктов: комплексов с ионами металлов, например, железа III в

сернокислой среде [86] или рейнекатом аммония [47, 136], ионных ассоциатов с

индикаторами (метиловым оранжевым, бромкрезоловым зеленым,

21

бромкрезоловым пурпуровым, бромтимоловым синим, тропеолином 00 и др. в

кислых средах [46, 116, 141], путем косвенного определения по окрашенным

продуктам окисления, например, по реакции с перманганатом калия [119] или с

ванадатом аммония в сернокислой среде [136].

Анализ фторхинолонов также проводят методом флюориметрии,

основанной на собственной флюоресценции фторхинолонов под действием

возбуждающего электромагнитного излучения [85, 137, 136] и флюоресценции

комплексов фторхинолонов с лантаноидами, например, с тербием Tb (III) [64,

124], европием Eu (III) [65, 87] и иттрием [52, 189].Была показана возможность

применения реакции образования комплексов ципрофлоксацина с тербием (III)

для постколоночнойдериватизации при определении ципрофлоксацина методом

обращено-фазной ВЭЖХ [77, 79, 140].

Описаны методики количественного анализа, основанные на измерении

поглощения или флюоресценции комплексов с переносом заряда фторхинолонов

с органическими реагентами – 2,3,5,6-тетрабром-1,4-бензохиноном [80, 177],

2,3,5,6-тетрахлор-пара-бензохиноном [84, 173], 7,7,8,8-тетрацианохинодиметаном

[72], хлоранилиновой кислотой, тетрацианоэтиленом, 2,3-дихлор-5,6-дициано-

пара-бензохиноном [71, 115] и др.

Подавляющее большинство описанных выше методик спектрофотометрии и

флюориметрии разработаны для количественного анализа фторхинолонов в

биологических объектах, но некоторые из них также можно применять и для

анализа лекарственных препаратов.

В фармацевтической практике наиболее часто применяется метод прямой

спектрофотометрии, основанной на собственном поглощении химических

соединений в растворах электромагнитного излучения в УФ-области спектра.

Метод прямой УФ-спектрофотометрии применяется для подтверждения

подлинности субстанции оксолиновой кислоты (по наличию максимумов

поглощения при 260, 322 и 336 нм и соотношению поглощения при максимумах

269 и 336 нм от 4,9 до 5,2), субстанции норфлоксацина [73, 151] и глазных капель

22

норфлоксацина (по соответствию максимумов и минимумов испытуемого

раствора и раствора стандартного образца) [56, 75, 151], для идентификации

офлоксацина в субстанции [151].

Была показана возможность применения УФ-спектрофотометрии при

подтверждении подлинности субстанций норфлоксацина, пефлоксацина,

ципрофлоксацина гидрохлорида, ципрофлоксацина, моксифлоксацина

гидрохлорида, офлоксацина, левофлоксацинагемигидрата, ломефлоксацина

гидрохлорида, спарфлоксацина, а также таблеток, содержащих норфлоксацин

(нолицин) и ципрофлоксацина гидрохлорид (ципробай) [93, 165]. Для растворения

субстанций и извлечения действующих веществ из таблеток использовали воду,

0,01М растворы хлористоводородной кислоты и натрия гидроксида, этиловый

спирт 96%.

Согласно данным, представленным в Британской и Европейской

фармакопеях, для количественного определения фторхинолонов в субстанциях и

таблетированных лекарственных формах метод УФ-спектрофотометрии не

используется. Однако Дорофеевым В.Л. и соавт. было показано, что метод можно

применять для количественного определения спарфлоксацина и моксифлоксацина

в таблетках. Для извлечения действующих веществ использовали 0,01М раствор

кислоты хлористоводородной [19-23, 155].

Для количественного определения спарфлоксацина в таблетках также был

предложен метод УФ-спектрофотометрии, действующее вещество извлекали из

таблеток метанолом, растворы до нужной концентрации разбавляли

дистиллированной водой [91].

Метод УФ-спектрофотометрии был предложен и для количественного

определения гатифлоксацина в таблетках [97, 146, 175]. В качестве растворителей

были использованы 0,1М фосфатный буфер (рН 7,4) и 0,1М раствор

хлористоводородной кислоты.

Кроме того, метод УФ-спектрофотометрии применяется для

количественного анализа фторхинолонов при проведении теста «Растворение»

23

таблетированных лекарственных форм. Так, метод используется для оценки

высвобождения действующих веществ из таблеток ципрофлоксацина,

норфлоксацина [143-145, 151], налидиксовой кислоты [151]. Были проведены

исследования по разработке методик теста «Растворение» для препаратов-

дженериков, содержащих ципрофлоксацин [156] и офлоксацин [147, 157].

Для анализа фторхинолонов были также предложены методы ИК-

спектроскопии [158, 159 и др.]. Согласно данным литературы, метод ИК-

спектроскопии в анализе фторхинолонов применяется, в основном, в

фармацевтической практике для подтверждения подлинности субстанций [151,

158, 159]. Имеются данные по определению подлинности таблеток

фторхинолонов (нолицин, норилет, абактал, ципробай, ципролет, таривид,

таваник и др.) с помощью ИК-спектроскопии [152, 176].

Метод ЯМР не включен в фармакопейные статьи и монографии на

препараты группы фторхинолонов, однако в литературе были найдены отчеты об

исследованиях, посвященных разработке методик определения посторонних

примесей и количественного содержания фторхинолонов с помощью метода

ЯМР. Так, описана методика определения состава и содержания примесей в

таблетках ципрофлоксацина, выпущенных разными производителями, с помощью

метода ядерного магнитного резонанса (ЯМР 19F и ЯМР 1Н) [153, 170]. Были

предприняты попытки количественного определения энрофлоксацина и

ципрофлоксацина с помощью методики ЯМР, основанной на зависимости

смещения сигналов ароматических протонов вследствие ассоциации от

концентрации препарата [112, 154-157].

1.4.2. Химические и электрохимические методы анализа

Химические и электрохимические методы применяются, в основном, для

количественного анализа фторхинолонов.

Сообщается о применении метода кондуктометрии для количественного

анализа фторхинолонов (норфлоксацина, ципрофлоксацина, офлоксацина,

24

энрофлоксацина, гатифлоксацина, моксифлоксацина и спарфлоксацина) в

лекарственных формах, методики основывались на образовании стабильных ион-

парных комплексов фторхинолонов с рейнекатом аммония, растворимых в

ацетоне [136, 47].

Для количественного определения ципрофлоксацина в лекарственных

препаратах был применен метод электролитического потенциометрического

титрования. Методика была основана на образовании комплекса

ципрофлоксацина с железом (III) (1:3) в среде 0,09М раствора серной кислоты [42,

159, 160].

Потенциометрическое титрование в неводных средах является наиболее

распространенным методом количественного определения субстанций

фторхинолонов, оксолиновой и налидиксовой кислот в фармакопейных статьях

[75].

Согласно данным Европейской и Британской фармакопей, этим методом

проводится количественное определение субстанций офлоксацина,

ципрофлоксацина, норфлоксацина и пефлоксацинамезилата.

Анализ офлоксацина, ципрофлоксацина, норфлоксацина проводят в среде

ледяной уксусной кислоты, а пефлоксацинамезилата – в среде ледяной уксусной

кислоты и уксусного ангидрида (15:75), титрант – 0,1М раствор хлорной кислоты.

Согласно фармакопее США (USP 29 – NF 24) количественный анализ

субстанции офлоксацина проводят в среде уксусного ангидрида, а норфлоксацина

– в среде ледяной уксусной кислоты. Титрант – 0,1М раствор хлорной кислоты.

Количественное определение оксолиновой кислоты проводят в среде

диметилформамида, в качестве титранта используют 0,1М раствор

тетрабутиламмония гидроксида, конечную точку титрования определяют

потенциометрически, используя в качестве индикаторного электрода стеклянный,

а в качестве электрода сравнения – каломельный электрод, заполненный

насыщенным раствором калия хлорида в метаноле [56, 75].

25

Определение количественного содержания налидиксовой кислоты

определяют в среде диметилформамида, нейтрализованного по тимолфталеину, в

качестве титранта используют 0,1М раствор лития метилата в метаноле [151].

Группой исследователей MaronaH.L. и SchapovalE.E. была также

разработана методика количественного определения спарфлоксацина в таблетках

с применением потенциометрического титрования в среде ледяной уксусной

кислоты, титрант – 0,1М раствор хлорной кислоты [109, 110].

Конечную точку титрования также определяют и по переходу окраски

индикатора – кристаллического фиолетового. Так, разработана методика

количественного определения ципрофлоксацина гидрохлорида в субстанции и

таблетках методом титрования в среде ледяной уксусной кислоты с добавлением

ацетата окисной ртути и уксусного ангидрида (15:1:4). В качестве титранта

использовали 0,1М раствор хлорной кислоты, конечную точку титрования

определяли по переходу окраски кристаллического фиолетового от голубой до

голубовато-зеленой [120,121].

1.4.3. Хроматографические методы анализа

Метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) является фармакопейным как в

странах Европы и США, так и в Российской Федерации. Основным применением

метода является разработка методик анализа чистоты и подлинности субстанций

и лекарственных форм фармакологически активных веществ.

В фармакопейном анализе хинолонов и фторхинолонов метод используется

для идентификации оксолиновой кислоты, ципрофлоксацина, ципрофлоксацина

гидрохлорида и пефлоксацинамезилата в субстанциях, норфлоксацина и

ципрофлоксацина гидрохлорида в таблетках, ципрофлоксацина в инъекционном

растворе офлоксацина в глазных каплях, для определения посторонних примесей

в субстанциях ципрофлоксацина, ципрофлоксацина гидрохлорида, офлоксацина,

оксолиновой и налидиксовой кислот и норфлоксацина (см. ниже) [75, 83, 89, 90].

26

Согласно данным Европейской и Британской фармакопей, идентификацию

оксолиновой кислоты методом ТСХ проводят на пластинках, покрытых слоем

силикагеля, в системе ацетонитрил – аммиака раствор концентрированный –

метанол – дихлорметан (10:20:40:40), перед хроматографированием пластинку

обрабатывают парами аммиака в течение 15 мин, детектирование зон адсорбции

проводят в УФ-свете с длиной волны 254 нм [56, 75].Идентификацию проводят по

соответствию длины пробега, величины и интенсивности зон адсорбции

испытуемого раствора и раствора стандартного образца оксолиновой кислоты.

Для хроматографического анализа пефлоксацинамезилата используют систему

растворителей следующего состава: вода – водный раствор аммиака – н-бутанол –

ацетон (5:10:20:65), проявление хроматографической пластинки проводят путем

опрыскивания щелочным спиртовым раствором бромкрезолового

пурпурового[95, 100, 101].

Методику ТСХ для идентификации норфлоксацина воспроизводят на

пластинках, покрытых силикагелем GF254, предварительно промытых метанолом

и высушенных на воздухе. В качестве системы для хроматографирования

предложена смесь воды, диэтиламина, толуола и хлороформа (8:14:20:40).

Норфлоксацин из таблеток извлекают смесью воды, дихлорметана и

подкисленного хлористоводородной кислотой метанола при обработке

ультразвуком. Проявляют пластинки в УФ-свете с длиной волны 254 и 365 нм.

При постановке методики необходимо избегать воздействия на растворы и

хроматографическую пластинку солнечного света [56, 75].

Идентификацию таблеток ципрофлоксацина методом ТСХ проводят на

пластинках, покрытых слоем силикагеля F254 для высокоэффективной

хроматографии (допускается использование готовых пластинок Mercksilicagel 60

F254), в качестве хроматографической системы используют смесь ацетонитрила,

13,5М раствора аммиака, дихлорметана и метанола (10:20:40:40).

Ципрофлоксацина гидрохлорид из растертых таблеток извлекают смесью

ацетонитрила и 0,245% раствора фосфорной кислоты, рН которого доведен до 3,0

27

триэтиламином (13:87). Пластинки проявляют в УФ-свете с длиной волны 254 и

365 нм [56, 75, 105-108].

По данным Фармакопеи США, идентификацию ципрофлоксацина и

ципрофлоксацина гидрохлорида в субстанциях и ципрофлоксацина в растворе для

инъекций проводят на пластинках, покрытых слоем силикагеля для

хроматографии в той же системе, что была рекомендована для таблеток

ципрофлоксацина в Европейской и Британской фармакопеях, проявляют

пластинки так же в УФ-свете.

Идентификацию офлоксацина в глазных каплях рекомендовано проводить в

системе, представляющей собой смесь хлороформа, метанола и (1:30) раствора

аммония гидроксида (150:75:15) [117, 129, 130].

Идентификацию норфлоксацина в таблетках по Фармакопее США проводят

на пластинках, покрытых слоем силикагеля для хроматографии, в качестве

подвижной фазы используют смесь хлороформ – метанол – толуол – диэтиламин

– вода (40:40:20:14:8). Действующее вещество и примеси из таблеток извлекают

смесью метанола, подкисленного раствором хлористоводородной кислоты, и

дихлорметана (1:1). Детектирование проводят в УФ-свете [75, 132-134].

Определение «Примеси А» (7-хлор-1-циклопропил-6-фтор-4-оксо-1,4-

дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты) в субстанциях ципрофлоксацина,

ципрофлоксацина гидрохлорида проводят на пластинках силикагеля F254 в

системе ацетонитрил – концентрированный раствор аммиака – метанол –

дихлорметан (10:20:40:40), перед хроматографированием пластинку

обрабатывают парами аммиака в течение 15 мин, детектирование зон адсорбции

проводят в УФ-свете с длиной волны 254 нм [56, 75, 126].

Согласно Фармакопее США, определение «Содержания фторхинолоновой

кислоты» в субстанции ципрофлоксацина гидрохлорида проводят в тех же

условиях: на пластинках силикагеля, предварительно обработанных парами

аммиака, в системе дихлорметан – метанол – аммония гидроксид – ацетонитрил

(4:4:2:1), проявляют пластинки в УФ-свете.

28

Содержание «Примеси А» ((R,S)-9,10-дифтор-3-метил-7оксо-2,3-дигидро-

7Н-пиридо [1,2,3-де]-1,4-бензоксазин-6-карбоновой кислоты) в субстанции

офлоксацина оценивают при хроматографировании на пластинках, покрытых

слоем силикагеля GF254 (2-10 мкм) в системе ледяная уксусная кислота – вода –

этилацетат (1:1:2), детектирование зон адсорбции проводят в УФ-свете с длиной

волны 254 нм [56, 75, 163].

Содержание «Родственных соединений» (BP, EP) и «Хроматографической

чистоты» (USP) в субстанции норфлоксацина определяют путем

хроматографирования на пластинках, покрытых слоем силикагеля,

предварительно промытых метанолом и высушенных на воздухе, в системе вода –

диэтиламин – толуол – хлороформ – метанол (8:14:20:40:40). Обнаружение зон

адсорбции проводят в УФ-свете с длиной волны 254 и 365 нм [75, 127, 138].

Определение «Родственных соединений» в субстанции оксолиновой

кислоты проводится на пластинках с целлюлозой в системе растворителей аммиак

– вода – пропанол (15:30:55), детектируют зоны адсорбции в УФ-свете с длиной

волны 254 нм [56, 75, 184, 185].

Хроматографическую чистоту налидиксовой кислоты определяют на

пластинках силикагеля, в системеэтанол – хлороформ – 5М раствор аммиака

(70:20:10), проявляют прастинки в УФ-свете [151].

В литературе представлены данные об исследованиях хроматографической

подвижности фторхинолонов (гатифлоксацина) методом высокоэффективной

тонкослойной хроматографии (ВЭТСХ) [150, 161, 162, 186].

С помощью ВЭТСХ на пластинках, покрытых слоем силикагеля 60F254 с

толщиной 0,2 мм, в системе хлороформ – метанол – этанол – раствор аммиака

(4:2:2:2% о/о/о/о) были разделены гатифлоксацин и парацетамол, обнаружение

зон адсорбции проводили путем облучения пластинки УФ-светом с длиной волны

291 нм [161, 187-189].

Разделение гатифлоксацина и орнидазола в комбинированной

таблетированной лекарственной форме было достигнуто на пластинках

29

силикагеля 60F254 с применением системы растворителей н-бутанол – метанол –

6М раствор аммиака (8:1:1,5 о/о/о), детектирование проводили вУФ-свете с

длиной волны 302 нм [162, 168].

Разделение гатифлоксацина и продуктов его деградации в кислой и

щелочной среде, а также при нагревании, было проведено на алюминиевых

пластинках, покрытых слоем силикагеля 60F254 в системе н-пропанол – метанол –

25% раствор аммиака (5:1:0,9 о/о/о), детектировали пластинки в УФ-свете с

длиной волны 292 нм. С применением этой методики было проведено

количественное определение гатифлоксацина с помощью денситометрии [150,

174].

Основным методом анализа фторхинолонов, согласно литературным

данным, является метод высокоэффективной жидкостной хроматографии

(ВЭЖХ). Метод является универсальным и может быть использован как для

качественного, так и для количественного анализа.

Для анализа фторхинолонов методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии чаще всего применяется ее обращено-фазный вариант на

колонках, заполненных сорбентом С18 или С8 со спектрофотометрическим или

флюориметрическим детектированием [99, 103, 128, 169, 171, 178, 179].

В фармакопейном анализе фторхинолонов, согласно данным Британской и

Европейской Фармакопей, метод обращено-фазной ВЭЖХ применяется для

оценки содержания «родственных соединений» в субстанциях

пефлоксацинамезилата, ципрофлоксацина, ципрофлоксацина гидрохлорида и

офлоксацина и в таблетках ципрофлоксацина, для количественного определения

ципрофлоксацина гидрохлорида в субстанции, норфлоксацина в глазных каплях,

для идентификации и количественного определения норфлоксацина в таблетках,

для идентификации, определения посторонних примесей и количественного

содержания ципрофлоксацина втаблетках и растворе для инфузий [56, 75, 91,

176].

30

Для идентификации ципрофлоксацина в растворе для инфузий в Британской

и Европейской фармакопеях рекомендован также метод ионообменной ВЭЖХ.

По данным Фармакопеи США метод ВЭЖХ применяется для

количественного определения норфлоксацина в таблетках и ципровлоксацина в

глазных каплях, идентификации и количественного определения

ципрофлоксацина в таблетках и глазной мази, налидиксовой кислоты в таблетках

и суспензии для внутреннего применения, хроматографической чистоты и

количественного определения субстанций ципрофлоксацина и ципрофлоксацина

гидрохлорида и инъекционного раствора ципрофлоксацина, хроматографической

чистоты офлоксацина в субстанции, идентификации и количественного

определенияофлоксацина и норфлоксацина в глазных каплях.

Тест «Родственные соединения» в субстанции пефлоксацинамезилата

проводится с помощью метода ВЭЖХ на стальной колонке длиной 150 мм и

внутренним диаметром 6 мм, заполненной октадецилсилилвинильным полимером

с размером частиц 5 мкм. В качестве подвижной фазы используют смесь

ацетонитрил – раствор, содержащий 2,7 г/л N-гексадецил-N,N,N-

триметиламмония бромида (цетилтриметиламмония бромида) и 6,18 г/л борной

кислоты, доведенный до рН 8,30 1М раствором натрия гидроксида –

тиодиэтиленгликоль (30:70:0,2), режим элюирования изократический, скорость

потока подвижной фазы – 1 мл/мин, детектирование спектрофотометрическое,

при длинах волн 258 и 273 нм [56, 75, 92, 96].

Определение содержания родственных соединений в субстанциях

ципрофлоксацина и ципрофлоксацина гидрохлорида, а также идентификацию,

определение содержания родственных соединений и количественное определение

в таблетках и растворе для инфузийципрофлоксацина проводят методом

обращено-фазовой ВЭЖХ, на колонке длиной 250 мм и внутренним диаметром

4,6 мм, заполненной сорбентом С18 с размером частиц 5 мкм, в подвижной фазе

ацетонитрил – раствор фосфорной кислоты с концентрацией 2,45 г/л (0,025М

раствор), доведенный до рН 3,0 триэтиламином (13:87), скорость потока

31

подвижной фазы – 1,5 мл/мин. При проведении анализа используют подогрев

хроматографическойколонки до 40 ºС. Детектирование спектрофотометрическое,

при длине волны 278 нм [56, 75].

По данным Фармакопеи США определение хроматографической чистоты и

количественного содержания субстанций ципрофлоксацина и

ципрофлоксацинагидрохлорида,определениесодержания этилендиаминового

аналога и количественное определение в растворе ципрофлоксацина для

инъекций, проводят в аналогичных условиях, за исключением внутреннего

диаметра колонки (он составляет 4,0 мм) и температуры колонки (30 ± 1 °С). А

для идентификации и количественного определения таблеток ципрофлоксацина

внутренний диаметр хроматографической колонки составляет 4,6 мм, остальные

условия аналогичны.

Идентификацию и количественное определение ципрофлоксацина в глазной

мази и количественное определение ципрофлоксацина в глазных каплях, согласно

монографиям Фармакопеи США, следует проводить на хроматографической

колонке, заполненной сорбентом С18, длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6

мм, в подвижной фазе следующего состава: 0,005М раствор тетрабутиламмония

фосфата (рН доведен до 2,0 фосфорной кислотой) – метанол (750:250). Скорость

потока подвижной фазы 1,5 мл/мин, аналитическая длина волны– 280 нм.

Европейская и Британская фармакопеи (EP 5 и BP 2005) рекомендуют

анализ показателя «Родственные примеси» в субстанции офлоксацина проводить

методом обращено-фазной ВЭЖХ, на стальных колонках длиной 150 мм и

внутренним диаметром 4,6 мм, заполненных сорбентом С18 с размером частиц 5

мкм, в подвижной фазе, состоящей из раствора 4,0 г ацетата аммония и 7,0 г

натрия перхлората в 1300 мл воды и 240 мл ацетонитрила.Температура колонки

45 ºС, длина волны спектрофотометрического детектора – 294 нм.

Фармакопея США для определения хроматографической чистоты в

субстанции офлоксацина рекомендует колонку 100 х 4,6 мм, заполненную

сорбентом C18. Подвижная фаза – раствор 27,2 г калия фосфата одноосновного в

32

1000 мл воды (0,02 М раствор) – ацетонитрил (90:10), скорость потока – 2 мл/мин,

температура колонки комнатная, длина волны детектирования – 294 нм.

Для идентификации и количественного определения офлоксацина в глазных

каплях, согласно Фармакопее США, следует использовать колонку 250 х 4,6 мм,

заполненную сорбентом С18 с размером частиц 5 мкм. В качестве подвижной

фазы используют смесь 0,24% водного раствора натрия додецилсульфата,

ацетонитрила и ледяной уксусной кислоты (580:400:20), скорость потока 1,5

мл/мин, температура колонки около 35 °С, длина волны

спектрофотометрического детектора – 294 нм.

По данным Европейской, Британской фармакопей и Фармакопеи США

идентификацию и количественное определение норфлоксацина в таблетках

проводят методом обращено-фазовой ВЭЖХ на стальной колонке длиной 300 мм

и внутренним диаметром 3,9 мм, с сорбентом С18 с размером частиц 10 мкм

(например, μBondapakC18), температура колонки 40 °С, подвижная фаза – смесь

ацетонитрил – 0,1% (о/о) раствор фосфорной кислоты (150:850), скорость потока

подвижной фазы – 2 мл/мин, детектирование спектрофотометрическое, длина

волны детектирования – 275 нм. Перед насыщением колонки подвижной фазой ее

необходимо кондиционировать 0,01М раствором безводного натрия

дигидрофосфата, рН которого доводят до 4,0 фосфорной кислотой при скорости

потока 0,5 мл/мин в течение 8 часов.

Согласно методикам Европейской, Британской фармакопей и Фармакопеи

США, количественное определение норфлоксацина в глазных каплях проводят в

тех же условиях, что и в таблетках, за исключением температуры колонки

(должна составлять 50 °С) и длины волны детектирования (должна составлять 278

нм) [56, 75, 115, 116].

Для идентификации и количественного определения налидиксовой кислоты

в таблетках и суспензии для внутреннего применения (USP 29 – NF24) применяют

метод обращено-фазной ВЭЖХ на колонке 390 х 4,6 мм, запоненной сорбентом

С18, подвижная фаза: смесь 325 мл водного раствора 0,784 г калия фосфата

33

двухосновного и раствора 2,62 г гексадецилтриметиламмония бромида в 350 мл

метанола (рН около 10,0). Скорость потока подвижной фазы – 1,5 мл/мин, длина

волны детектора – 254 нм [121].

Условия для идентификации ципрофлоксацина методом ионообменной

ВЭЖХ (BP 2005, EP 5) предлагаются следующие: стальная колонка длиной 30 см

и внутренним диаметром 7,8 мм, заполненная сильным катионобменным

сорбентом, содержащий сульфонатные привитые группы на основе сополимера

стирола и дивинилбензола, размер частиц сорбента от 7 до 11 мкм (например,

AminexHPX-87 H).Подвижная фаза– смесь ацетонитрила и 0,0025М раствора

серной кислоты (15:85), скорость потока подвижной фазы 0,6 мл/мин,

температура колонки 40 °С. После каждого единичного определения колонку

промывают смесью 0,005М раствора серной кислоты и ацетонитрила, а затем

регенерируют 0,025М раствором серной кислоты [56, 75].

1.4.4. Методы анализа оптической и энантиомерной чистоты

фторхинолонов

Существуют различные методы изучения оптически активных соединений:

поляриметрия, спектрополириметрия, спектроскопия ЯМР, рентгеноструктурный

анализ, хроматографические методы и др.

Метод поляриметрии позволяет определить удельное вращение соединения

и путем сравнения с известными данными определить подлинность или

оптическую чистоту соединения. С использованием кругового дихроизма

(различия в поглощении лево- и правополяризованных компонентов циркулярно

поляризованного света хиральным соединением) можно измерить как функции

длины волны дифференциальное дихроичноепоглощение. Полученные спектры

позволяют установить конформацию и конфигурацию изучаемых соединений [66,

111-115].

34

С помощью метода ЯМР получить расщепление сигналов энантиомеров

можно при использовании хиральных растворителей, а также лантаноидных

сдвигающих реагентов [66, 119].

Существуют методики разделения энантиомеров с помощью тонкослойной

хроматографии. Для этой цели были использованы пластинки с целлюлозой и ее

производными в качестве сорбента, а также обращено-фазный силикагель,

импрегнированный производными пролина в качестве хирального селектора и

ионами меди (II). Для разделения энантиомеров аминокислот силикагель

импрегнировали (-) бруцином [67].

Для разделения энантиомеров применяется и метод капиллярного

электрофореза. В качестве селекторов используются циклодекстрины, краун-

эфиры, хиральные полимеры, а также антибиотики (например, ванкомицин,

рифамицин и пр.) [66].

Однако в настоящее время чаще всего энантиомерную чистоту соединений

определяют с помощью методов газовой и высокоэффективной жидкостной

хроматографии.

Все способы хроматографического анализа энантиомеров основаны на

взаимодействии разделяемой пары с оптически активным расщепляющим

агентом. Это взаимодействие может осуществляться до разделения либо

непосредственно в хроматографической колонке [169].

Первый подход основан на получении производных испытуемого образца с

помощью оптически чистых реагентов. В газовой хроматографии такими

реагентами могут быть метилхлорформиат (анализ аминов и аминокислот), 2-

фенилпропионилхлорид (анализ спиртов и оксикислот), (-)-ментол (анализ

аминокислот, α-оксикислот и других кислот) и др. В жидкостной хроматографии

– ангидриды и хлорангидридыN-трифторацетил-L-пролина (анализ аминоспиртов

и др.), l-фенилэтиламин (анализ карбоновых кислот), ангидриды и хлорангидриды

(-)-ментилмуравьиной кислоты, производные оптически активной винной

кислоты, аминокислот и др [169, 189].

35

Согласно второму подходу, распознавание оптически активных изомеров

происходит непосредственно в колонке за счет образования ими лабильных

комплексных соединений с расщепляющим агентом.

В первом случае с центральным ионом металла-комплексообразователя

одновременно координирована молекула расщепляющего асимметрического

реагента и один из энантиомеров. Для реализации этого способа в ВЭЖХ в

качестве сорбента можно использовать алкилсилкагель, а ионы

комплексообразователя и расщепляющий агент вводить в подвижную фазу.

Расщепляющий агент также может химически связываться с поверхностью

силикагеля или полистирола, а ионы комплексообразователя вводятся в

подвижную фазу [169]. (В газовой хроматографии используют хиральную

неподвижную фазу, содержащую закрепленный хиральный лиганд, образующий

координационные соединения с ионами переходных металлов [75, 169]).

Стабильность комплексов зависит от их стереохимии, а также от металла,

включенного в их структуру. В жидкостной хроматографии предпочтительнее

использование меди (II), а в газовой – никеля (II), кобальта (II) или цинка (II).

Как уже было отмечено, при разделении энантиомеров методом ВЭЖХ

хиральныелиганды можно вводить в подвижную фазу, и в таком случае в качестве

неподвижной фазы можно использовать сорбенты, применяемые в обращено-

фазной ВЭЖХ – силикагели с привитыми углеводородами С8 – С18. Помимо уже

описанного выше способа образования комплексов с металлами и расщепляющим

агентом, используют также добавление к подвижной фазе β-циклодекстрина

[183].

Третий подход основан на взаимодействии оптических изомеров с

неподвижными фазами, содержащими асимметрические фрагменты (хиральные

неподвижные фазы).

С помощью метода ВЭЖХ хиральное разделение на хиральных

неподвижных фазах может проводиться в режимах нормально-фазовой,

обращено-фазовой и гидрофильной хроматографии.

36

Неподвижные фазы для хиральной ВЭЖХ классифицируют по типу

хирального селектора: натуральные (протеины, олигосахариды, антибиотики,

алкалоиды), полусинтетические (модифицированные олигосахариды,

модифицированные полисахариды и модифицированные низкомолекулярные

природные соединения, например, производные пролина и других аминокислот) и

синтетические (низкомолекулярные синтетические соединения (фазы браш-типа)

и синтетические полимеры) [169].

Самыми универсальными и популярными фазами являются фазы с

хиральными селекторами, представляющими собой модифицированные

полисахариды (карбаматы и эфиры, привитые на силикагельную основу

(например, неподвижные фазы Chiralcel). Для нормально-фазового режима

выпускают серии ChiralcelOD, ChiralcelAD, ChiralcelAS и др, для обращено-

фазового режима – ChiralcelOD-R, ChiralcelAD-R, ChiralcelAS-R и др.

Для разделения энантиомеров водорастворимых соединений чаще всего

применяются неподвижные фазы с привитыми антибиотиками (например, серия

Chirobiotic (Astek) или Диасфер-Сhirasel (БиоХимМакСТ)), но могут быть

использованы и фазы с привитыми протеинами, однако они менее универсальны,

эффективны и стабильны.

Для нормально-фазовых разделений используют фазы браш-типа, например,

Whelk-O,1 (Regis), фазы на основе синтетических полимеров (KromasilChiralDMB,

KromasilChiralTBB (EkaChemicals)).

Разделение энантиомеров можно также проводить на фазах на основе

циклодекстринов (например, Cyclobond) и модификациях этих фаз с

дериватизированнымициклодекстринами [116, 169], а также на основе

хиральныхкраун-эфиров [104, 169].

Для газовой хроматографии используют хиральные неподвижные фазы на

основе производных аминокислот и олигопептидов, привитые фазы

полисилоксанового типа, фазы на основе хиральных комплексов металлов

37

(например, β-дикарбонильныйхелат родия (I)) и на основе комплексов включения

(например, фазы с циклодекстринами на цеолитах).

Согласно данным изученной литературы, разделение

энантиомеровфторхинолонов проводят с помощью ВЭЖХ (на хиральных

колонках, а также с помощью модифицирования подвижной фазы) [92, 183] и

капиллярного электрофореза [51].

Так, для разделения энантиомеровфторхинолонов методом ВЭЖХ была

использована хиральная неподвижная фаза CrownpakCR (+) [119], хиральные

неподвижные фазы на основе (дифенилзамещенного 1,1-бинафтил) краун эфира,

привитого на силикагельную основу [92], и на основе (3,3-дифенил-1,1-

бинафтил)-20-краун-6 [68, 102].

Разделение энантиомеровфторхинолонов было также проведено методом

обращено-фазовой ВЭЖХ на колонке, заполненной сорбентом С18 с применением

хиральной подвижной фазы с добавлением β-циклодекстрина, детектирование

спектрофотометрическое. Методика позволяла получить фактор разделения

между энантиомерами более 2,0 и фактор асимметрии менее 1,5 [183].

1.5. Методы анализа левофлоксацина

Публикаций, посвященных методам анализа левофлоксацина, в литературе

нашлось немного, и все они касались разработки методик количественного

определения препарата в биологических объектах и лекарственных препаратах. В

Британской, Европейской Фармакопеях, Фармакопее США и Государственной

Фармакопее РФ XII издания во время проведения наших исследований

левофлоксацин не был описан. Однако в нашем распоряжении имелись

материалы, представленные в сети Интернет на официальном сайте

USPhttp://www.usp.org в разделе «AuthorizedUSPPendingMonograph»

(http://www.usp.org/pdf/EN/pendingStandards/levofloxacin.pdf), содержащие

описания разделов монографии и методов анализа субстанции левофлоксацина.

38

Согласно данным литературы, для качественного и количественного

анализа левофлоксацина были применены методы ИК-спектроскопии [99, 104],

фотометрии и флюориметрии [45, 50, 109, 125, 136, 158], обращено-фазной ВЭЖХ

[45, 49, 139, 151, 180], газо-жидкостной хроматографии [45], неводного

титрования [45], ВЭТСХ [70, 111].

Метод ИК-спектроскопии был применен для

идентицикациилевофлоксацина в субстанции [45, 139].

Описаны способы количественного определения левофлоксацина в

субстанции и лекарственных препаратах методом экстракционной

спектрофотометрии [50, 158]. Методики заключаются в получении хлороформных

экстрактов окрашенных комплексов левофлоксацина с бромфеноловым синим,

бромкрезоловым зеленым и эриохромом черным Т. Хлороформные экстракты,

содержащие указанные комплексы, поглощают электромагнитное излучение при

424, 428, [50] и 490 [158] нм соответственно. Прямолинейная зависимость

оптической плотности от концентрации наблюдается в интервалах от 2 до 25

мг/мл и более.

В литературе описаны способы количественного определения

левофлоксацина и ряда других препаратов из группы фторхинолонов с помощью

метода флюориметрии по флюоресценции препаратов в 0,1н растворах серной

кислоты (длина волны флюоресценции 450 нм, длина волны возбуждения 290 нм),

с помощью метода атомно-абсорбционной спектроскопии (косвенно, по

содержанию ионов кобальта в фильтрате после осаждения сульфатом кобальта в

спиртовых растворах при рН 8,1), и спектрофотометрическим методом в видимой

области спектра после окисления препаратов ванадатом аммония в сернокислой

среде (до появления зеленовато-синей окраски, 766 нм) [119, 139].

Количественное определение левофлоксацина в препарате Таваник было

проведено с помощью метода флюориметрии по люминисценциикомплекса

левофлоксацина и тербия (III) в мицеллярном 0,01М растворе натрия

додецилсульфата, содержащего 0,04М/л ацетатного буфера с рН 6 и 0,0075 М/л

39

Na2SO3. Длина волны возбуждающего излучения – 292 нм, длина волны

люминисценции – 546 нм. Чувствительность разработанной методики в 100 раз

превышала чувствительность методики спектрофотометрии и почти в 2 раза –

прямой флюориметрии [125, 135].

Для количественного анализа левофлоксацина в лекарственных препаратах

была разработана методика ВЭТСХ, в качестве неподвижной фазы применяли

силикагель 60F254, в качестве подвижной – смесь вода – метанол – н-бутанол –

раствор аммиака (5:5:5:0,4 о/о/о/о), детектировали в УФ-свете при 298 нм,

количественно левофлоксацин определяли с помощью денситометрии [70].

Однако, как уже было замечено, большая часть публикаций посвящена

применению метода обращено-фазной ВЭЖХ и для качественного, и для

количественного анализа левофлоксацина. Все методики были разработаны на

колонках, заполненных сорбентом С-18.

Для количественного определения левофлоксацина в субстанции,

лекарственных формах и сыворотке крови человека была разработана методика

ВЭЖХ на жидкостном хроматографе со спектрофотометрическим детектором, в

изократическом режиме элюирования, на колонке NucleosilC18 длиной 250 мм и

внутренним диаметром 4,6 мм (размер частиц сорбента 10 мкм). В качестве

подвижной фазы была использована смесь вода – ацетонитрил (6:5), смесь

доводилась до значения рН 2,9 с помощью фосфорной кислоты [49]. Калибровку

и анализ проводили при пяти длинах волн (260, 265, 270, 275 и 280 нм) – в

интервале, где наблюдалось максимальное поглощение раствора левофлоксацина.

В приведенных условиях анализировали субстанцию, таблетки левофлоксацина и

образцы плазмы крови. Линейная зависимость отклика детектора от

концентрации левофлоксацина наблюдалась в интервале от 40 до 10000 нг/мл

(коэффициент корреляции 0,9999), предел обнаружения составлял от 0,04 нг/мл и

выше (в различных объектах исследования), предел количественного

обнаружения – от 0,2 нг/мл и выше.

40

С помощью метода обращено-фазной ВЭЖХ был также проведен

количественный анализ левофлоксацина в комбинированной таблетированной

лекарственной форме с амброксола гидрохлоридом. Разделение проводили на

жидкостном хроматографе со спектрофотометрическим детектором, на колонке

HypersilBDSC18 длиной 250 мм и внутренним лиаметром 4,6 мм (размер частиц 5

мкм), подвижная фаза – 0,05М фосфатный буфер – ацетонитрил – метанол (650:

250: 100) с добавлением триэтиламина (доведенная до рН 5,2 с помощью

фосфорной кислоты), скорость потока подвижной фазы 1мл/мин, температура

колонки 30 ºС, длина волны детектирования 220 нм. Прямолинейная зависимость

отклика детектора от концентрации наблюдалась в интервале от 7 до 22 мкг/мл,

коэффициент корреляции 0,99, методика валидирована [63, 102].

Еще одна методика обращено фазной ВЭЖХ для количественного анализа

таблеток левофлоксацина и других фторхинолонов включала следующие условия:

жидкостной хроматограф со спектрофотометрическим детектором, колонка

LiChrospher 100 RP-18 (длина 125 мм, внутренний диаметр 4 мм, размер частиц 5

мкм), подвижная фаза вода – ацетонитрил (80:20) с 0,3% добавкой триэтиламина

(рН подвижной фазы доводили до 3,3 фосфорной кислотой), скорость потока – 1

мл/мин, температура колонки комнатная, аналитическая длина волны – 295 нм.

Линейная зависимость отклика детектора от концентрации (коэффициент

корреляции 0,9999) наблюдалась в интервале от 4 до 24 мкг/мл, относительное

стандартное отклонение не превышало 1,0% [63, 175].

Количественное определение, а также определение примесей (родственных

соединений) в субстанции левофлоксацина также было предложено проводить на

колонке 150 мм, а внутренний диаметр 4,0 мм, колонка заполнена сорбентом L1

(C18) с размером частиц 3 мкм, температура колонки 38 °С, режим элюирования –

градиентный, длина волны спектрофотометрического детектора – 280 нм. Слабая

подвижная фаза (раствор А) состоит из смеси буферного раствора, содержащего в

1000 мл 3,08 г ацетата аммония и 8,43 г перхлората натрия (рН буферного

раствора доводят до значения 2,2 фосфорной кислотой), и ацетонитрила (84:16).

41

Сильная фаза (раствор В) состоит из смеси того же буферного раствора,

ацетонитрила и метанола (50: 30: 20) [104].

Отдельно следует выделить методики определения энантиомерной чистоты

субстанции левофлоксацина (определения R-офлоксацина).

В монографии (AuthorizedUSPPendingMonograph) на субстанцию

левофлоксацина предложена методика ВЭЖХ на колонке длиной 250 и

внутренним диаметром 4,6 мм, заполненной сорбентом L1 (С18) с размером частиц

3,5 мкм, в подвижной фазе: буферный раствор, содержащий 1,32 г R-

фенилаланина и 0,75 г меди (II) сульфата пятиводного в 1000 мл воды – метанол

(85:15). Скорость потока подвижной фазы – 0,7 мл/мин, температура колонки 40

°С, детектирование спектрофотометрическое при длине волны 294 нм.

Коэффициент разделения между пиками энантиомеров в этих условиях не менее

2,0 [65-68, 104].

В изученной литературе для разделения левофлоксацина и его R-

энантиомера была найдена еще одна методика обращено-фазной ВЭЖХ, на

колонке с сорбентом С18, в качестве подвижной фазы была использована смесь

метанол – водный раствор, содержащий l-лейцин (0,01 М/л) и меди сульфат (0,005

М/л) (88:12), скорость потока подвижной фазы 1 мл/мин. Разделение происходило

с коэффициентом 2,4, менее чем за 20 мин [180].

1.6. Технологические подходы к разработке лекарственных препаратов

группы фторхинолонов

В настоящее время актуален вопрос производства лекарственных форм с

модифицированным высвобождением действующего вещества[3].

Лекарственная форма как «таблетка» - является одной из самых

распространенных и известных лекарственных форм. Благодаря достижениям

отечественной и зарубежной фармацевтической науки и промышленности

появляются новые технологии получения таблеток и создаются такие их

модификации, которые по своим характеристикам сравнимы с техническими

42

устройствами, при этом сами таблетки по-прежнему сохраняют привычный

облик[3, 6].

Основные свойства таблеток такие как: механическая прочность, время

распадаемости и скорость высвобождения действующего вещества -

определяются выбором вспомогательных веществ и производственным

процессом[1, 2, 4].

Предсказать физические характеристики таблеток невозможно без изучения

и оценки факторов, влияющих на структуру уплотненного материала, а также их

связи с прочностью, распадаемостью и другим требованиями фармакопеи. Эти

характеристики, в первую очередь, определяются составом действующих и

вспомогательных веществ, способностью прессуемого материала

противодействовать внутренним и внешним физико-механическим

воздействиям[4, 5, 24].

Существует три технологические схемы получения таблеток: с

применением влажного или сухого гранулирования и прямое прессование.

43

1.6.1 Роль вспомогательных веществ в производстве таблеток

фторхинолонов

Вспомогательные вещества придают таблетируемым порошкам

необходимые технологические свойства. Они влияют не только на качество

таблеток, но и на биологическую доступность лекарственного вещества, поэтому

выбор вспомогательных веществ для каждого таблетированного лекарственного

препарата должен быть научно обоснован.

В качестве вспомогательных веществ могут применяться: сахарная пудра,

лактоза, крахмал картофельный, целлюлоза микрокристаллическая, магний

углекислый основной, кальция фосфат двузамещенный, магния карбонат

основной, магния стеарат и др. вещества[2, 8, 11].

Вспомогательные вещества должны способствовать быстрому

проникновению среды растворения в таблетку.Такими качествами обладает

крахмал, за счет его способности вызывать образование в таблетке пористой

структуры.Так же крахмал обладает антифрикационными свойствами,

препятствует налипанию таблетируемой массы на пресс-инструмент и слипанию

ее частиц друг с другом. Это приводит к увеличению скорости таблетирования и

уменьшает износ пресс-инструмента. Крахмал, введенный в сухом виде,

способствует гарантированной распадаемости лекарственной формы и быстрому

высвобождению из нее лекарственного вещества.

В отсутствии крахмала давление прессования и влажность среды могут

привести к уплотнению таблетируемой массы и цементации получаемой из нее

лекарственной формы, следствием этого может стать снижение биодоступности

или полная ее потеря[2, 8, 9, 28].

Причем для повышения указанных выше положительных свойств крахмал

может быть частично или полностью заменен модифицированным крахмалом или

кроскармеллозой. В качестве модифицированного крахмала целесообразно

использовать натрий карбоксиметилкрахмал.

44

Поэтому в ряде исследования исследований по разработке состава и

технологии таблеток левофлоксацина, для усиления сильного разрыхляющего

эффекта использовались синергично действующую смесь крахмала и

нерастворимых дезинтегрантов: капиллярный эффект крахмала усиливается

расклинивающим действием частиц набухающего вещества.

Твердую лекарственную форму антимикробного средства в виде таблеток,

покрытых пленочной оболочкой, получают по следующей технологической схеме

с использованием стандартных технологических операций: подготовка исходного

сырья; увлажнение массы; влажное гранулирование; сушка влажного гранулята;

сухое гранулирование; опудривание гранулята; таблетирование; подготовка

состава для покрытия; нанесение покрытия на таблетки.

В большинстве случаев технология метода влажного гранулирования

предусматривает использование в качестве увлажнителей растворов

высокомолекулярных соединений или сахара. Для этой цели используют 5% и

7,5% крахмальный клейстер, 2 % и 3% раствор натрия карбоксиметилцеллюлозы,

сахарный сироп и 3% раствор метилцеллюлозы.

Так же одним из технологических приемов при производстве таблеток

левофлоксацина, является смешивание субстанции левофлоксацина с

микрокристаллической целлюлозой, затем полученную смесь увлажняют водным

раствором поливинилпирролидона. Добавленный в состав поливинилпирролидон

увеличивает механическую прочность таблетки, вследствие чего оптимизируется

процесс нанесения оболочки, упаковки. После этого последовательно

осуществляют влажное гранулирование, сушку, сухое гранулирование и

опудривание смесью кросповидона, магния стеарата и натрия лаурилсульфата.

Включение в состав натрия лаурилсульфата позволяет значительно повысить

биодоступность лекарственного средства, вследствие чего увеличивается

антибактериальный эффект препарата без увеличения терапевтической дозы.

Вспомогательные компоненты данной лекарственной формы подобраны таким

образом, чтобы, с одной стороны, исключить применение дорогостоящих

45

компонентов и сделать лекарственное средство более дешевым и доступным для

потребителя. Применение данных вспомогательных веществ улучшает показатели

качества лекарственного средства, такие как распадаемость, растворение, а

следовательно, и биодоступность препарата, снижено содержание родственных

примесей [2, 5].

1.6.2. Роль пленочных покрытий в технологии таблеток

фторхинолонов

Принимая во внимание неудовлетворительные органолептические свойства

(горький вкус) фторхинолонов (левофлоксацина, офлоксацина, гидрата

ситафлоксацина) готовые лекарственные формы покрывают пленочными

оболочками, что требует дополнительного дорогостоящего оборудования.

Таблетки с пленочным покрытием –это таблетки, покрытые тонкой

оболочкой (пленочной), составляющей менее 10% от массы таблетки. Покрытия

пленочные могут быть растворимыми в воде (из растворов производных

целлюлозы, полиэтиленгликолей, желатина и гуммиарабика и др.) и

нерастворимыми в воде, или лаками (из некоторых высокомолекулярных

соединений) [3, 6].

Цели нанесения оболочек. Покрытие таблеток оболочками имеет

многостороннее целевое назначение и позволяет решать следующие основные

задачи:

- Улучшение товарного вида таблеток.

- Для обозначения терапевтических групп.

- Улучшение удобства в применении, имеющие для больного важное

психологическое значение.

- Маскировку неприятных органолептических свойств: вкуса, запаха, цвета

и окрашивающей способности лекарственных веществ, содержащихся в таблетке.

- Защиту слизистой верхних отделов желудочно-кишечного тракта от

раздражающего действия лекарственного вещества.

- Предотвращение нарушений процесса пищеварения.

46

- Защиту лекарственного вещества, содержащегося в таблетке, от кислой

реакции желудочного сока.

- Пролонгирование действия лекарственных веществ.

- Регулирование последовательности высвобождения из многослойной

таблеток с многофункциональным терапевтическим действием.

- Сочетание в одной форме лекарственных веществ, несовместимых по

физико-химическим свойствам.

- Возможность снижения или полное устранение летучести лекарственных

веществ, содержащихся в таблетке.

- Возможность снижения или полное устранение взрывоопасности

лекарственных веществ, содержащихся в таблетке.

- Защиту таблеток от механического воздействия (вибрационные,

линейные, транспортные и другие перегрузки).

- Защиту таблеток от экстремальных факторов внешней среды

климатического характера: свет, влажность, кислород и углекислота воздуха, УФ-

лучи, давление, температура [2, 4, 24].

Пленкообразующие вещества, используемые для покрытия таблеток, по их

растворимости делят на четыре группы:

- растворимые в воде и в желудочном соке;

- не растворимые в воде, но растворимые в желудочном соке;

- не растворимые ни в воде, ни в физиологических жидкостях;

- растворимые в кишечных жидкостях.

Водорастворимые покрытия защищают от механических повреждений, но

не от воздействия влаги воздуха.

Водорастворимые оболочки образуют ПВП, МЦ,

оксипропиленметилцеллюлоза, Na КМЦ и др. наносимые в виде водноэтанольных

или водных растворов [4].

47

Заключение

На основании проведенного анализа литературы можно заключить, что

левофлоксацин является перспективным химиотерапевтическим препаратом,

обладающим широким спектром антимикробного действия, и разработка

фармацевтической композиции на его основе с целью внедрения в отечественное

производство является актуальной.

В современной фармацевтической технологии данной лекарственной формы

(с учетом терапевтической группы и массо-процентных характеристик) для

оптимизации технологической схемы изготовления на этапе получения гранулята

используется метод влажной грануляции, а в качестве вспомогательных веществ

(наполнителей, дезинтегрантов, связывающих, скользящих) свое применение

нашли прежде всего такие вещества, как метилгидроксипропилцеллюлоза

(гипромелоза), лактоза, кросповидон, целлюлоза микрокристаллическая,

поливинилпирролидон, кроскармелоза, соли стеариновой кислоты.

Для качественного и количественного фармацевтического анализа

фторхинолонов применяют методы ИК-, УФ-спектроскопии, хроматографии

(высокоэффективная жидкостная хроматография, тонкослойная хроматография),

фотометрии в УФ- и видимой области спектра, флюориметрии, химические

методы (качественные химические реакции и титриметрия). Однако ведущую

роль в фармацевтическом анализе фторхинолонов и левофлоксацина играет метод

высокоэффективной жидкостной хроматографии, как универсальный метод,

позволяющий провести идентификацию, определение примесного состава и

оценку количественного содержания примесей, а также количественное

определение фторхинолонов, как в лекарственных формах, так и в субстанциях.

48

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты исследований

Объектами исследований являлись образцы субстанции левофлоксацина,

синтезированные по оригинальному способу (патент № 2420304 от 10.06.2011 г.),

предоставленные Институтом органического синтеза имени И.Я. Постовского

Уральского отделения РАН.

При разработке методик анализа был использован стандартный образец

левофлоксацина (USPRS).

Также в нашем распоряжении имелись образцы соединений, которые

могут присутствовать в субстанции левофлоксацина в виде примесей

(предоставлены Институтом органического синтеза имени И.Я. Постовского

Уральского отделения РАН):

-(S)-9-фтор-3-метил-10(пиперазин-1-ил)-7-оксо-2,3-дигидро-7Н-

пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота (примесь А);

-(S)-9,10-дифтор-3-метил-7-оксо-2,3-дигидро-7Н-пиридо[1,2,3-de]

[1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота (примесь В);

-этиловый эфир (3S)-9,10-дифтор-3-метил-7-оксо-2,3-дигидро-7Н-[1,2,3-de]

[1,4]бензоксазин-6-карбоновой кислоты (эфир примеси В).

При разработке технологии таблеток использовали вспомогательные

вещества, разрешенные к медицинскому применению и отвечающие требованиям

соответствующих НДприведены в Таблице 2.1 [34].

49

Таблица 2.1

Характеристика сырья, вспомогательных материалов и полупродуктов

Наименование Обозначение

НД

Сорт или

артикул

Показатели, обязательные для проверки Примечание

1 2 3 4 5

А. Основное сырье:

Левофлоксацин ФСП 42- По всем показателям ФСП ВР. 2.1. Просев

порошков, ТП 3.

Получение массы для

таблетирования

Микрокристаллическая целлюлоза (Avicel 102

(Merck); Microcel® MC 102 (Blanver)

ВР 2004, USP30/NF25,

ФС 42-3728-99 или ТУ

22331-10705742755-96

По всем показателям НД.

Кальция карбонат ФСП 42-0550-7545-06 По всем показателям НД.

Гидроксипропилцеллюлоза (Клуцель EXF Pharm) USP, JP, Ph. Eur. По всем показателям НД.

Магния стеарат (магний стеариновокислый) ТУ 6-09-16-1533-90 Марка «ч». Порошок белого цвета, труднорастворимый в

воде. Массовая доля стеарата магния: 98 –

101%. Массовая доля сульфатов: не более

0,15%.

Массовая доля хлоридов: не более 0,15%.

Кислотность (в пересчете на С17Н35СООН):не

более 0,8 %. Содержание воды: не более 1,5 %.

Скользящее,

опудривающая

смесь.ТП. 3.3. Сухое

гранулирование и

опудривание гранулята

Крахмал натрия гликолят (Эксплозоль, Blanver) USP, JP, Ph. Eur. По всем показателям НД. Дезинтегрант

ТП. 3.3. Сухое

гранулирование и

опудривание гранулята

50

Продолжение Таблицы 2.1

Кроскармеллоза натрия (Эксплоцель/солютаб,

Blanver)

USP, JP, Ph. Eur. По всем показателям НД. Дезинтегрант

ТП. 3.3. Сухое

гранулирование и

опудривание гранулята

Опадрай НД 42–114219–06 серия 85 По всем показателям НД. ТП.5. Покрытие

таблеток оболочкой

Б. Вспомогательное сырье:

Бумага лабораторная фильтровальная ГОСТ 12026 Сорт 1,

марка ФНС

Для проведения анализа

Банки полимерные с винтовой горловиной и

навинчиваемой крышкой для лекарст-венных

средств и витаминов типа БП-10

ТУ 9467-001-50770708-99 УМО. 6. Фасовка,

упаковка

Вата гигроскопическая

Вода питьевая ГОСТ 5556-81 Для обработки рук дез.

растворами

Перчатки хирургические медицинские СанПиН

2.1.4.559-96 .>

Санитарная обработка

помещений. Подготовка

аппаратуры и

оборудования.

Спирт этиловый 96 ГОСТ 3-75 Тип 1.1

Средства моющие синтетические

порошкообразные («Сульфанол», «Лотос», «Эра»,

Вихрь», «Био-С», «Юкка», «Бриз», «Прогресс»,

«Лотос-автомат»)

ГФ Х, стр. 644

Ткань техническая капроновая МРТУ 18-31-69, ТУ 6-01-

1001-75, ТУ 38-10719-77,

ТУ 36-10719-77, ТУ 6-15-

01-277-87, ТУ 6-15-01-

277-87, ТУ 6-39-1-89

51

Продолжение Таблицы 2.1

Лента с липким слоем или лента-скотч ОСТ 17-232-80 или ТУ 17

РСФСР 18-83-40-91

Арт.56003,

56020,56326

Упаковка, маркировка, внешний вид Санитарная обработка

помещений.

«Септабик» ГОСТ 18251-72

импорт.

Марки Б и В Упаковка, маркировка, внешнийвид. На УМО. 4. Фасовка,

упаковка, маркировка.

Ткань полотенчатая вафельная Фирма “Абик ЛТД”

(Израиль)

Содержание дидецилдиметиламмония бромид

карбамидклатрата не менее 99 %

Для приготовления дез.

растворов

Ткань капроновая Арт. 8029 Для полотенец

Ткань х/б смешанная платяная Арт. 56020 Для обработки

оборудования

Хлорамин Б ГОСТ 12087-77 Арт. 14021

401

ТУ 6-09-3021-81 Для приготовления дез.

растворов

52

2.2. Методы исследования

2.2.1. Методы контроля качества субстанции и лекарственной

формы левофлоксацина

Исследования проводили при помощи методов ИК-, УФ-, ЯМР1Н-

спектроскопии, высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ),

газовой хроматографии (ГХ), поляриметрии, потенциометрии,

титриметрических методов.

Для изучения спектральных характеристик субстанции использовано

следующее оборудование:УФ-спектрофотометрShimadzuUV-1700 (Япония),

ИК-спектрометр BrukerVertex 70 (Германия), ЯМР-спектрометр Bruker АС –

250 (Германия).

Хроматографический анализ методом ВЭЖХ проведен на жидкостных

хроматографах:LC-10AT («Shimadzu», Япония), со спектрофотометрическим

детектором UV-VIS SPD-10A и SystemGold («BeckmanCoulter», США) с

градиентным насосом solventmodule 127 и спектрофотометрическим

детектором UVdetector 166; программное обеспечение – «Мультихром 1.5».

Для разделения исследуемых соединений использовали стальные колонки

внутренним диаметром 4,6 мм и длиной 250 мм, сорбент С18 с размером

частиц 5 мкм.

Анализ с помощью ГЖХ проводили на газовом хроматографе с

пламенно-ионизационным детектором Chrom-5 («Лабораторные приборы»,

ЧССР); программное обеспечение – «Экохром» («ООО Прибор», Россия),

стеклянная колонка, длиной 2,4 м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная

сорбентом 15% Carbowax 1500 на ChromatonW-AW-DMCS (0,200 – 0,250

мм).

Значения угла вращения определены на автоматическом поляриметре

ADP 410 (Bellingham + Stanley, Великобритания).

53

Определение температуры плавления проведено на приборах ПТП

Клинского стекольного завода иOptiMeltMPA 100 (StanfordResearchSystems,

США).

Определение значений рН испытуемых растворов, а также

потенциометрическое титрование,проведенона иономере ЭВ-74 (Гомель,

СССР) и рН-метреSeven-easyS20 (MettlerToledo, Швейцария).

Определение воды в субстанции по методу К. Фишера выполнено в

ФГУ «Центр контроля качества лекарственных средств и медицинских

измерений» Управления делами Президента Российской Федерации.

Разработку теста «Растворение» проводили на приборе PharmaTestDT

70 («Vitek», Германия), тип «лопастная мешалка».

Изучение фармакопейных показателей качества лекарственных форм

препаратов и разработка методик анализа проведена в соответствии с

требованиями Государственной фармакопеи СССР XI издания вып. 1 и 2,

Государственной фармакопеи РФ XII издания, часть 1, и в соответствии с

ОСТ 91500.05.001-00 [17].

При проведении анализа методом ВЭЖХ были использованы

следующие химические вещества и растворители: вода бидистиллированная,

и «для ВЭЖХ» (Lab-Scan), ацетонитрил (для ВЭЖХ, «сорт 0» (Криохром)),

ортофосфорная кислота (хч), аммония ацетат 99,99+ (Aldrich), натрия

перхлорат моногидрат 99+ (AcrosOrganics), метанол (для ВЭЖХ, Lab-

Scananalyticalsciences), калия гидрофосфат (99+ (AcrosOrganics) или чда),

калия дигидрофосфат (≥99,0% (Sigma) или чда), меди сульфат пятиводный

(чда), L-фенилаланин (USP 28, Xiamenfine).

Количественное определение субстанциилевофлоксацина методом

неводного титрования проведено с использованием следующих реактивов:

кислота ледяная уксусная (хч), уксусный ангидрид (хч), кислота муравьиная

(хч), кислота хлорная 65% (хч), кристаллический фиолетовый (чда).

54

Изучение стабильностьсубстанции и лекарственной формы

левофлоксацина при хранении и определение их сроков годности проведено

в соответствии с требованиями документа «Временная инструкция по

проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных

средств на основе метода «ускоренного старения» при повышенной

температуре» (И 42-8-82, Минздрав СССР, 1982 г)

Статистическая обработкапроведена в соответствии с требованиями

Государственной Фармакопеи XI издания, вып. 1. стр.199 [17].

2.2.2. Методики определения технологических характеристик

порошков и гранулятов

На выбор методов изготовления таблеток и подборе вспомогательных

веществв значительной степени влияют технологические свойства

порошкообразных лекарственных субстанций, зависящие от физико-

химических свойств этих субстанций [16, 24]. К таким свойствам относятся:

сыпучесть, угол естественного откоса, насыпная плотность, форма и размер

частиц, удельная поверхность, прессуемость и др. [12, 25, 40].

Нами использованы различные физико-химические методы

исследования, результаты экспериментов обрабатывались статистически

[13].

Степень сыпучести порошков (ОФС 42-0137-09)

Степень сыпучести порошков характеризуется следующими

критериями:

– сыпучесть (скорость протекания порошка через отверстие);

– насыпной объем;

– угол естественного откоса.

На практике оценка степени сыпучести порошков определяется по

одному, реже двум критериям. Наиболее распространенными испытаниями

55

являются определение сыпучести (скорости протекания порошка через

отверстие) и определение насыпного объема [24, 111].

Сыпучесть определяется как время, в течение которого определенная

масса вещества проходит (протекает) через отверстие определенного

размера.

Оборудование. В зависимости от сыпучести испытуемых материалов

используют воронки различных конструкций:

– без выходного ствола (типа «бункер»), с различными размерами

внутреннего угла и диаметрами выходных отверстий;

– с выходным стволом.

Воронка поддерживается в вертикальном положении при помощи

специального устройства. Вся конструкция должна быть защищена от

вибраций.

Методика. В сухую воронку с закрытым выходным отверстием

помещают без уплотнения навеску испытуемого материала, взятую с

точностью ±0,5 %. Количество испытуемого материала зависит от его

насыпного объема и от используемого оборудования, но должно занимать не

менее 80–90 % от объема воронки.

Открывают выходное отверстие воронки и определяют время, за которое

через отверстие пройдет весь образец. Проводят не менее трех определений.

Если при использовании воронки без выходного ствола, скорость

высыпания 100 г порошка через насадку 1 менее 25 с, рекомендуется

использовать воронку с выходным стволом.

Если при использовании воронки без выходного ствола, навеска

испытуемого материала неравномерно высыпается из воронки с насадкой 1,

последовательно определяют сыпучесть, используя воронку с насадкой 2 или

3.

В Таблице 2.2 представлены типовые размеры диаметров выходных

отверстий сменных насадок.

56

Таблица 2.2

Типовые размеры диаметров выходных отверстий сменных насадок

Насадка Диаметр (d) выходного отверстия, мм

1 10 0,01

2 15 0,01

3 25 0,01

Сыпучесть выражают в секундах с точностью до 0,1 с, отнесенных к

100 г образца, с указанием типа использованного оборудования, номера

насадки.

Определение угла естественного откоса

Определение угла откоса проводят по методике определения

сыпучести с использованием того же оборудования, в тех же условиях.

Истечение порошка из отверстия воронки производят на ровную

горизонтальную поверхность. Диаметр основания (базы) конуса порошка

может быть фиксированный или диаметр может меняться в процессе

образования конуса.

Измерение значения угла естественного откоса проводят не менее,

чем в трех повторностях при помощи угломера в трех плоскостях и

выражают в угловых градусах. Угол естественного откоса выражают в

градусах, как вычисленное среднее значение, с указанием типа

использованного оборудования, номера насадки, условий эксперимента.

Определение насыпного объема

Испытание позволяет определить при заданных условиях насыпные

объемы, до и после уплотнения, способность к уплотнению, а также

насыпную плотность отдельных материалов (например, порошков, гранул).

В сухой цилиндр помещают без уплотнения навеску испытуемого

материала, имеющего насыпной объем в диапазоне от 50 мл до 250 мл.

Аккуратно закрепляют цилиндр на подставке и фиксируют насыпной объем

57

до уплотнения V0 с точностью до ближайшего деления. Производят 10, 500 и

1250 соскоков цилиндра и фиксируют объемы V10, V500, V1250 с точностью до

ближайшего деления. Если разность между V500 и V1250 превышает 2 мл,

производят еще 1250 соскоков цилиндра.

По полученным результатам можно вычислить следующие

параметры:

1. Насыпной объем:

– насыпной объем до уплотнения: V0, мл;

– насыпной объем после уплотнения: V1250, мл или V2500, мл.

2. Способность порошка к уплотнению:

– разность объемов (V10 – V500) мл.

3. Насыпная плотность:

– насыпная плотность до уплотнения: m/V0, г/мл;

– насыпная плотность после уплотнения: m/V1250 или m/V2500, г/мл.

Полученные результаты можно использовать для вычисления

коэффициента прессуемости по формуле:

Коэффициент прессуемости = ,

где: V0 – начальный объем порошка;

V1 – объем порошка после уплотнения.

Ситовой анализ проводили по стандартной методике, описанной в

ОФС 42-0136-09

Потеря в массе при высушивании (ОФС 42-0087-08)

Точную навеску испытуемого вещества, указанную в частной

фармакопейной статье, помещают в предварительно высушенный в условиях,

описанных для испытуемого вещества, и взвешенный бюкс. Вещество сушат

до постоянной массы или в течение времени, указанного в частной

0 1

0

100V V

V

58

фармакопейной статье. Определение потери в массе при высушивании

выражают в виде массовой доли в процентах.

Определение плотности. Материал измельчают, высушивают при

105°С, просеивают через сито с диаметром отверстий 0,2 мм (900 отверстий в

см2).

Определение сводится к нахождению V жидкости, вытесненной

известной m порошка из сосуда определенного объема (пикнометр). [17, 46,

116]

m1 – масса порошка (примерно 3,0г);

m2 – масса пикнометра с жидкостью (о-ксилолом), залитой до риски;

m3 – масса пикнометра с навеской определяемого порошка и о-

ксилолом, заполненного до риски;

m4 – масса вытесненного навеской ксилола;

ρж – плотность о-ксилола (0,880 г/см3).

Пористость.В свободно насыпанной массе порошкообразного

лекарственного препарата частицы соприкасаются между собой только

отдельными (контактными) участками поверхности. Поры в порошке могут

составлятьот 50% до 80% занимаемого им объема.

Расчет пористости был нами проведен, исходя из значений плотности и

насыпной плотности. Пористость определена по формуле: П = (1-P/ ρ)*

100%, где П - пористость в %, Р- насыпная масса в г/см 3, ρ- плотность в г/см

3 [17, 50].Форма и размер частиц.Определение размеров и морфологии

59

частицсубстанции левофлоксацина проводили на оптическом микроскопе

NikonH550S (Япония).

2.2.3. Методики оценки технологических показателей таблеток

левофлоксацина

Средняя масса таблеток.Определяют взвешиванием 20 таблеток с

точностью до 0,001 г. Массу отдельных таблеток определяют взвешиванием

порознь 20 таблеток с точностью до 0,001. Масса отдельных покрытых

таблеток, полученных методом наращивания, не должна отличаться от

средней массы более чем на ±15 %.

Только две таблетки могут иметь отклонения от средней массы,

превышающие указанные пределы, но не более чем вдвое [17].

Распадаемость.Определение распадаемости таблеток проводили на

лабораторном идентификаторе процесса распадаемости. Для проведения

испытаний отбирали 18 образцов исследуемой лекарственной формы,

помещали по одному в каждую трубку, прикрепляли к верхнему диску сетку

из нержавеющей стали с размером отверстий 2 мм и помещали в сосуд с

водой при температуре (37 ± 2) °С. Включали прибор и проводили

определение в течение времени, описанного в статье для данной ле-

карственной формы.

Все образцы должны полностью распадаться, о чем судили по

отсутствию частиц на сетке диска. Если 1 или 2 образца не распались,

повторяют испытание на оставшихся 12 образцах. Не менее 16 из 18

образцов должны полностью распасться [17, 18].

Истираемость и прочность таблеток на сжатие определяли согласно

стандартной методике, описанной в ОФС 42-0132-09.

60

ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ И

РАЗРАБОТКА МЕТОДИК АНАЛИЗА СУБСТАНЦИИ

ЛЕВОФЛОКСАЦИНА

3.1. Изучение физико-химических свойств субстанции

левофлоксацина

В рамках исследования физико-химических свойств субстанции

левовлоксацина был изучен внешний вид образцов субстанции, температура

плавления, растворимость в различных растворителях, удельное вращение,

потеря в массе при высушивании.

3.1.1. Внешний вид и температура плавления субстанции

левофлоксацина

По внешнему виду образцы субстанции представляли собой

мелкокристаллический порошок светло-желтого цвета. Плавление

субстанции наблюдалось в интервале от 205 до 255 °С, плавление

происходило с разложением, поэтому было принято решение не включать

этот показатель в проект ФСП.

3.1.2. Растворимость субстанции левофлоксацина

Определение растворимости проводили по методике ГФ XII, вып. 1,

стр. 92.

Растворимость определяли в следующих растворителях: вода, 0,1 М

хлористоводородная кислота, ледяная уксусная кислота, метанол, этанол.

Субстанция умеренно или мало растворима в воде, мало растворима в

этиловом спирте 95%, растворима или умеренно растворима в 0,1М

хлористоводородной кислоте, легко растворима в ледяной уксусной кислоте

(Таблица 3.1).

61

Таблица 3.1

Растворимость образцов субстанции левофлоксацина в различных

растворителях

Растворитель IOS

003

IOS

004

IOS

005

IOS

006

IOS

007

IOS

008

IOS

009

IOS

010

IOS

011

IOS

012

IOS

018

Вода 1:81 1:76 1:81 1:91 1:60 1:109 1:80 1:140 1:80 1:110 1:109

Этанол 95% 1:450 1:400 1:480 1:305 1:400 1:280 1:276 1:280 1:250 1:280 1:300

Метанол 1:150 1:120 1:120 1:100 1:130 1:100 1:140 1:300 1:120 1:125 1:120

0,1М HCl 1:14 1:15 1:15 1:14 1:14 1:70 1:30 1:70 1:40 1:70 1:25

Ледяная

уксусная

кислота

1:2 1:3 1:3 1:3 1:3 1:3 1:4 1:4 1:3 1:4 1:4

3.1.3. Определение удельного вращения субстанции

левофлоксацина

Левофлоксацин представляет собой левовращающий изомер

рацемической смеси офлоксацина, поэтому в перечень показателей проекта

ФСП включен показатель «Удельное вращение». В качестве растворителя

был выбран метанол.

Удельное вращение растворов образцов субстанции левофлоксацина в

метаноле (концентрация 5 мг/мл) в пересчете на сухое вещество составляло

от - 96,6 до - 101,6 ° данные приведены в Таблице 3.2.

Таблица 3.2

Удельное вращение образцов субстанции левофлоксацина

Номер серии IOS

003

IOS

004

IOS

005

IOS

006

IOS

007

IOS

008

IOS

009

IOS

010

IOS

011

IOS

012

IOS

018

Удельное

вращение,

(º)мл/(дм х г)

-98,7 -100,4 -101,6 -98,7 -98,7 -98,8 -98,5 -97,3 -96,9 -96,6 -97,2

62

3.1.4. Определение потери в массе при высушивании образцов

субстанции левофлоксацина.

Показатель «Потеря в массе при высушивании» определяли в

соответствии с ГФ XI, вып. 1, с. 176. Для определения показателя около 0,5 г

(точная навеска) субстанции сушили при температуре 105 оС до постоянной

массы. Потеря в массе при высушивании, определенная при температуре 105

С составляла от 2,3 до 2,7% (Таблица 3.3).

Таблица 3.3

Потеря в массе при высушивании образцов субстанции левофлоксацина

Номерсер

ии

IOS

003

IOS

004

IOS

005

IOS

006

IOS

007

IOS

008

IOS

009

IOS

010

IOS

011

IOS

012

IOS

018

Потеря в

массе, % 2,41 2,56 2,35 2,39 2,32 2,60 2,63 2,48 2,48 2,61 2,31

Дополнительно в образцах субстанции содержание воды определяли

по методу К. Фишера (ГФ XI, вып. 1, с. 176) [17]. Как показано в Таблице

3.4, результаты определения по двум методам сопоставимы.

Таблица 3.4

Значения потери в массе при высушивании и содержания воды по методу К.

Фишера образцов субстанции левофлоксацина

Номер серии IOS 007 IOS 009 IOS 018

Потеря в массе при высушивании, % 2,32 2,63 2,31

Вода, % (м. К. Фишера) 2,5 2,5 2,5

Поскольку субстанция левофлоксацина представляет собой

гемигидрат, необходимо нормировать интервал потери в массе при

высушивании, который по фактическим данным составляет от 2,3 до 2,7 %.

63

3.1.5. Изучение спектральных характеристик левофлоксацина

3.1.5.1. УФ-спектроскопия

УФ-спектры растворов левофлоксацина были сняты на УФ-

спектрофотометре UV-1700 (“Shimadzu”, Япония) в 0,1М растворе

хлористоводородной кислоты в диапазоне длин волн от 200 до 350 нм.

УФ-спектры растворов субстанции левофлоксацина 0,006 мг/мл

(0,0006%) в 0,1М хлористоводородной кислоте в диапазоне длин волн от 200

до 350 нм содержали три максимума поглощения: при 227 нм, 294 нм и 327

нм (Рисунок3.1). В диапазоне длин волн от 260 до 320 нм находился один

максимум поглощения – при 294 нм. Отклонения положения максимума,

определенные на пяти навесках каждой серии разными исполнителями в

разные дни анализа, составляли 293,5 ± 0,2.

Рисунок 3.1.УФ-спектр раствора субстанции левофлоксацина (0,006

мг/мл) в 0,1М хлористоводородной кислоте

Величина удельного показателя поглощения растворов левофлоксацина

в 0,1М хлористоводородной кислоте при 294 нм составляет около 875,

величина молярного показателя поглощения – около 31620. Отклонения

64

положения максимума, определенные на пяти навесках одной серии в разные

дни анализа, составляли 293,6 ± 0,2.

Наличие в УФ-спектрах характерных максимумов поглощения

позволяют использовать метод УФ-спектроскопии для определения

подлинности левофлоксацина в субстанции и лекарственных формах.

3.1.5.2. ИК-спектроскопия

ИК-спектры исследуемых образцов получены на ИК-спектрометре

BrukerVertex 70 (Германия). Пробыготовили методом прессования

анализируемого вещества с инертным наполнителем (калия бромидом).

В ИК-спектре левофлоксацина наблюдаются следующие

характеристические полосы (см -1): 3420, 3264 – валентные колебания связи

О-Н воды и карбоксильной группы, 1724, 1621 – валентные колебания

карбонильных групп, серия полос в области 1540 – 1450 принадлежат

колебаниям С=С связей, при 1414 и 1360 – колебаниям N-CH3 и C-CH3 групп,

валентные колебания С-О и С-F наблюдаются при 1090 и 1005 (Рисунок 3.2).

ИК-спектры различных образцов субстанции были практически

идентичны.

65

Рисунок 3.2. ИК-спектр субстанции левофлоксацина (KBr)

3.1.5.3. ПМР-спектроскопия

ПМР-спектр левофлоксацина получен на ЯМР-спектрометре АС-250 с

рабочей частотой 250 Мгц при температуре 20°С, в ДМСО d6. Эталон

измерений химических сдвигов – тетраметилсилан (ТМС).

В ПМР-спектре левофлоксацина, снятом в ДМСО d6 (м.д.)

наблюдаются следующие сигналы: 1,44 (3Н, д., СН3); 2,23 (3Н, с., N-CH3);

2,43 и 3,29 (8Н, два м., >N-CH3); 4,35 и 4,58 (2Н, два д.д., СН2*); 4,90 (1Н, м.,

Н*); 7,53 (1Н, д., ArH); 8,94 (1Н, с., С=Н). ПМР-спектр представлен на

Рисунке 3.3.

66

Рисунок 3.3. ПМР-спектр субстанции левофлоксацина (ДМСО d6)

3.2. Хроматографические методы в анализе субстанции

левофлоксацина

Хроматографическая подвижность левофлоксацина и свидетелей его

технологических примесей, было изучена методом ВЭЖХ, определение

содержания R-офлоксацина в субстанции левофлоксацина также было

проведено методом ВЭЖХ. Определение содержания остаточных

растворителей в образцах субстанции левофлоксацина проведено методом

ГЖХ.

67

3.2.1. Разработка методики определения посторонних примесей в

субстанции левофлоксацина

Разработка методики определения посторонних примесей была

проведена с помощью ВЭЖХ, на жидкостном хроматографе со

спектрофотометрическим детектором.

В нашем распоряжении имелись образцы технологических примесей

субстанции левофлоксацина:

- (S)-9,10-дифтор-3-метил-7-оксо-2,3-дигидро-7Н-пиридо[1,2,3-

de] [1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота (примесь В)

- этиловый эфир (3S)-9,10-дифтор-3-метил-7-оксо-2,3-дигидро-

7Н-[1,2,3-de] [1,4]бензоксазин-6-карбоновой кислоты (эфир

примеси В)

- (S)-9-фтор-3-метил-10(пиперазин-1-ил)-7-оксо-2,3-дигидро-

7Н-пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота

(примесь А)

Для разделения левофлоксацина и примесей были использованы

условия, описанные в монографии на субстанцию левофлоксацина [165].

Хроматографирование проводили в следующих условиях:

- Жидкостной хроматограф со спектрофотометрическим детектором с

переменной длиной волны

- Стальная колонка длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм,

заполненная сорбентом С18 с размером частиц 5 мкм (LunaC18(2), 5

мкм, 250 х 4,6мм)

- Температура колонки 38 ºС

- Скорость потока подвижной фазы – 1,5 мл/мин

- Аналитическая длина волны 280 нм

- Объем пробы – 20 мкл

- Режим элюирования градиентный (Таблица 3.5)

68

Таблица 3.5

Режим элюирования

Время, мин Раствор А Раствор Б

0 100 0

0-5 100 0

5-10 100 → 82 0 → 18

10-15 82 → 40 18 → 60

15-35 40 60

35-37 40 → 100 60 → 0

37-45 100 0

Приготовление подвижной фазы проводили так, как описано ниже.

Для приготовления буферного раствора 3,08 г аммония ацетата и 8,43 г

натрия перхлората моногидрата переносили в мерную колбу вместимостью

1000 мл, растворяли в 990 мл воды очищенной, доводили рН раствора до 2,2

фосфорной кислотой, доводили объем раствора до метки водой,

перемешивали, фильтровали.

Приготовление Раствора А: смешивали 840 мл буферного раствора и

160 мл ацетонитрила, фильтровали через фильтр «Миллипор» с диаметром

пор 0,45 мкм, дегазировали.

Приготовление раствора Б: смешивали 500 мл буферного раствора, 300

мл ацетонитрила и 200 мл метанола, фильтровали через фильтр «Миллипор»

с диаметром пор 0,45 мкм, дегазировали.

Времена удерживания левофлоксацина и технологических примесей в

указанных условиях представлены в Таблице 3.6.

Таблица 3.6

Времена удерживания левофлоксацина и технологических примесей

Наименование соединения Относительное время удерживания

Левофлоксацин 1,00

Примесь А 0,95 ± 0,01

Примесь В 2,52 ± 0,02

Эфир примеси В 2,14 ± 0,01

69

Детектирование проводили при длине волны 280 нм, поскольку эта

длина волны позволяла обнаружить левофлоксацин и все технологические

примеси субстанции левофлоксацина.

Прямолинейная зависимость площадей примесей пиков

левофлоксацина и вероятных примесей была подтверждена в пределах

интервала от 0,0002 до 0,05 мг/мл (Рисунок 3.4). Коэффициенты корреляции

составляли не менее 0,999.

Пределы обнаружения левофлоксацина и примесей были определены

экспериментально и для примеси В и ее эфира составляли около 0,003 мкг

(20 мкл раствора с концентрацией 0,00015 мг/мл), для левофлоксацина и

примеси А – около 0,0006 мкг (20 мкл раствора с концентрацией 0,00003

мг/мл).

Рисунок 3.4.Зависимость площадей пиков левофлоксацина и свидетелей

примесей от концентрации их растворов

y = 3515.7x - 0.2006R² = 0.9999

y = 870.77x + 0.1382R² = 0.9998

y = 3614x + 0.5018R² = 0.9999

y = 762.89x + 0.0402R² = 1

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

200

0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06

Пл

ощ

ад

ь п

ика

, е

д

Концентрация, мг/мл

Примесь А Примесь В Левофлоксацин Эфир В

70

На Рисунке 3.5 представлена хроматограмма модельной смеси

левофлоксацина в концентрации 0,4 мг/мл и технологических примесей в

концентрации около 0,0004 мг/мл (1% от концентрации левофлоксацина)

Рисунок 3.5. Хроматограмма модельной смеси левофлоксацина и

примесей (1 –примесь А, 3 – эфир примеси В, 4 – примесь В)

Как это видно на рисунке 3.4, поглощение электромагнитного

излучения при 280 нм растворами примеси В и ее эфира значительно меньше

поглощения растворами левофлоксацина и примеси А. Поэтому для более

точной оценки содержания примеси В и ее эфира необходимо либо

использование свидетелей, либо коэффициентов. Содержание примеси А

можно оценивать по внешнему стандарту левофлоксацина.

В качестве рабочей нами была выбрана концентрация растворов

левофлоксацина 0,4 мг/мл. Эта концентрация позволяла обнаружить

технологические примеси в образцах субстанции левофлоксацина в

содержании 0,05% и менее. Однако концентрация 0,4 мг/мл лежала за

пределами линейной зависимости площади пика левофлоксацина от

концентрации, поэтому необходимо было использовать внешний стандарт.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 мин

2.69 mV

ch1

1

3 4

71

В качестве внешнего стандарта мы использовали растворы

левофлоксацина и примеси В в концентрации 0,004 мг/мл (1% от рабочей

концентрации). В этой концентрации относительное стандартное отклонение

площадей пиков было минимальным (около 1,4%), при снижении

концентрации оно возрастало.

На основании полученных результатов была разработана следующая

методика:

Приготовление испытуемого раствора: около 0,01 г препарата (точная

навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 2 мл

ацетонитрила, доводят объем раствора до метки смесью ацетонитрил – вода

(1:10), перемешивают (испытуемый раствор).

Приготовление раствора СО левофлоксацина и примеси В:

Около 0,01 г стандартного образца (СО) левофлоксацина USPRS

(точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют

в 2 мл ацетонитрила, доводят объем раствора до метки смесью ацетонитрил –

вода (1:10), перемешивают (раствор В).

Около 0,01 г свидетеля примеси В левофлоксацина помещают в

мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в ацетонитриле, доводят

объем раствора до метки тем же растворителем, перемешивают (раствор Г).

По 1 мл растворов В и Г помещают в мерную колбу вместимостью 100

мл, доводят объем раствора до метки смесью ацетонитрил – вода (1:10),

перемешивают (раствор РСО).

Приготовление раствора для проверки пригодности

хроматографической системы:

Около 0,005 г свидетеля примеси А левофлоксацина помещают в

мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 5 мл 0,2% раствора

аммония гидроксида в метаноле, доводят объем раствора смесью

ацетонитрил – вода (1:10) до метки, перемешивают (раствор Д).

72

1 мл раствора В и 2 мл раствора Д помещают в мерную колбу

вместимостью 10 мл, доводят объем раствора до метки смесью ацетонитрил –

вода (1:10), перемешивают.

По 20 мкл испытуемого раствора, раствора РСО и раствора для

проверки пригодности хроматографической системы вводят в хроматограф и

хроматографируют по указанной выше программе.

Регистрируют не менее 3 хроматограмм испытуемого раствора и

раствора для проверки пригодности хроматографической системы и не менее

5 хроматограмм раствора РСО.

Содержание примеси В левофлоксацина и ее эфира рассчитывают по

следующей формуле:

Sисп х mstBх 25 х 1 Sисп х mstB

Х = -------------------------- х 100 = -----------------, где

SstBх mисп х 25 х 100 SstBх mисп

Sисп – площадь примеси B левофлоксацина (или ее эфира) на

хроматограмме испытуемого раствора;

mисп – масса навески левофлоксацина, г;

SstB– площадь примеси В левофлоксацина на хроматограмме раствора

РСО;

mstB – масса навески РСО примеси В левофлоксацина

Содержание любой другой примеси рассчитывают по следующей

формуле:

Sисп х mstLх 25 х 1 Sисп х mstB

Х = -------------------------- х 100 = -----------------, где

SstLх mисп х 25 х 100 SstBх mисп

Sисп – площадь примеси на хроматограмме испытуемого раствора;

mисп – масса навески левофлоксацина, г;

SstL– площадь левофлоксацина на хроматограмме раствора РСО;

mstL – масса навески РСО левофлоксацина, г,

73

Проверка пригодности хроматографической системы:

Хроматографическая система считается пригодной, если:

- относительное время удерживания примеси А в растворе для проверки

пригодности хроматографической системы не превышает 0,95

- относительное стандартное отклонение величин площадей пика

левофлоксацина не превышает 2%

- Эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по

приведенной ниже формуле, должна быть не менее 3000 теоретических

тарелок.

lRN = 5,545 x -------

W0,5

2

, где

lR- время удерживания основного пика, в мин;

W0,5 – ширина пика левофлоксацина на половине высоты, в мин,

По разработанной методике было определено содержание посторонних

примесей в серийных образцах субстанции левофлоксацина (Таблица 3.7).

Таблица 3.7

Содержание посторонних примесей в образцах субстанции левофлоксацина

Относительное время

удерживания

Содержание посторонних примесей, %

006.03.10 007.03.10 008.04.10 009.04.10 018.05.10

0,36 0,01 0,01 0,03 0,03 0,01

0,48 0,03 0,02 0,01 0,01 ---

0,61 0,03 0,02 0,03 0,03 ---

0,68 0,03 0,03 0,04 0,06 0,02

0,83 0,01 --- --- 0,01 ---

0,89 0,01 0,01 0,04 0,03 0,02

0,95 (примесь А) 0,07 0,05 0,11 0,10 0,07

1,22 --- --- 0,01 --- 0,01

2,14 (эфир примеси В) --- --- --- --- ---

2,52 (примесь В) --- --- --- --- ---

Сумма примесей 0,19 0,14 0,28 0,27 0,13

Содержание индивидуальной примеси во всех образцах составляло не

более 0,15%, а сумма примесей – не более 0,40%.

74

Как видно из Таблицы 3.7, ни в одном из образцов субстанции примеси

В и ее эфира обнаружено не было, однако в образцах присутствовала

примесь, относительное время удерживания которой (0,95) совпадало с

относительным временем удерживания свидетеля примеси А. С помощью

метода добавок было показано, что разделения этих двух примесей в

условиях анализа не происходит.

Поскольку ни в одном из образцов субстанции левофлоксацина

примеси В обнаружено не было, нами было принято решение исключить из

методики приготовление стандартного раствора примеси В и использование

коэффициентов. Содержание примеси А оценивали по внешнему стандарту

левофлоксацина.

Определение правильности и прецизионности было проведено на

модельных смесях левофлоксацина (концентрация 0,4 мг/мл) и примеси А

(концентрация 0,004 и 0,002 мг/мл) методом добавок. Результаты

представлены в Таблице 3.8.

Таблица 3.8

Результаты определения содержания примеси А левофлоксацина в

модельных смесях

Типичная хроматограмма субстанции левофлоксацина представлена на

Рисунке 3.6.

№

п/п

Заданная

концентрация

примеси, мг/мл

Обнаружено

примеси,

мг/мл

Обнаружено примеси

(в % от заданной

концентрации)

Метрологические

характеристики,

Р=95%

Примесь А

1 0,00408 0,00403 98,77 Хср = 100,70

S = 2,01

SХср = 0,82

ΔХср = 2,13

ε = 2,12%

2 0,00448 0,00455 101,56

3 0,00428 0,00438 102,33

4 0,00204 0,00206 100,98

5 0,00224 0,00219 97,77

6 0,00214 0,00220 102,80

75

Рисунок 3.6. Типичная хроматограмма субстанции левофлоксацина

Нами также было показано, что при хранении испытуемых растворов

на свету происходит деградация левофлоксацина, и образовавшиеся в

результате деградации примеси можно обнаружить с помощью выбранной

методики. На Рисунке 3.7 представлена хроматограмма раствора после

хранения в условиях прямого доступа солнечного света в течение

суток.Суммарное значение содержания примесей составило около 8%.

Рисунок 3.7. Хроматограмма раствора левофлоксацина после хранения

на свету в течение 1 суток

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 мин

0.338 mV

ch1

1

2

3

4

5

6

8

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 мин

2.7 mV

ch1

1

234 56 7

8

9

10 1112

13

16

17

1819

20

21

2223 24

76

3.2.2. Определение содержания R-офлоксацина в субстанции

левофлоксацина

Поскольку левофлоксацин представляет собой S-изомер офлоксацина,

и при его синтезе был использован новый способ получения левофлоксацина

высокой энантиомерной чистоты, нами было определено содержание

примеси R-офлоксацина в серийных образцах субстанции.

При разработке методики определения содержания R-офлоксацина в

субстанции левофлоксацина мы использовали материалы монографии USP

на субстанцию левофлоксацина [165] с некоторыми изменениями.

Разделение R- и S- офлоксацина проведено в следующих условиях:

- Жидкостной хроматограф со спектрофотометрическим детектором с

переменной длиной волны

- Стальная колонка длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм,

заполненная сорбентом С18 с размером частиц 5 мкм (LunaC18(2), 5

мкм, 250 х 4,6мм; Phenomenex)

- Температура колонки комнатная

- Скорость потока подвижной фазы – 1,2 мл/мин

- Аналитическая длина волны 293 нм

- Объем пробы – 20 мкл

- Режим элюирования изократический

- Подвижная фаза – смесь буферного раствора и метанола.

Приготовление буферного раствора: 1,32 г L-фенилаланина и 0,75 г

меди сульфата пятиводного помещают в мерную колбу вместимостью 1000

мл, растворяют в 700 мл воды, доводят объем раствора до метки водой,

перемешивают, фильтруют.

Приготовление подвижной фазы: Смешивают 850 мл буферного

раствора и 150 мл метанола, фильтруют, дегазируют.

77

В качестве растворителя для испытуемых образцов использовали воду

для ВЭЖХ. Аналитическая длина волны (293 нм) соответствовала наиболее

выраженному максимуму спектров левофлоксацина в воде.

В указанных условиях относительное удерживание R-офлоксацина

составляло 1,20 ± 0,02. Хроматограмма раствора офлоксацина в воде с

концентрацией офлоксацина 0,01 мг/мл представлена на Рисунке 3.8.

Рисунок 3.8. Хроматограмма раствора офлоксацина (0,01 мг/мл)

Хроматограмма модельной смеси левофлоксацина и офлоксацина

представлена на Рисунке 3.9. Концентрация левофлоксацина 0,08 мг/мл,

концентрация офлоксацина – 0,00032 мг/мл, концентрация R-офлоксацина –

около 0,00016 мг/мл (0,2% от рабочей концентрации левофлоксацина).

Прямолинейная зависимость площади пика от концентрации растворов

левофлоксацина была подтверждена в пределах от 0,0008 до 0,1 мг/мл

(Рисунок 3.10). Коэффициент корреляции +1.

В качестве рабочей была выбрана концентрация левофлоксацина 0,08

мг/мл. Поскольку эта концентрация находится в пределах линейной

зависимости площади пика от концентрации, содержание примеси R-

78

офлоксацина можно оценивать методом нормализации, без применения

внешнего стандарта.

Рисунок 3.9. Хроматограмма модельной смеси левофлоксацина и

офлоксацина

Рисунок 3.10. Зависимость площади пика от концентрации растворов

левофлоксацина

y = 133407x + 16,787

R2 = 1

0

2000

4000

6000

8000

10000

12000

14000

16000

0 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1 0,12

Концентрация, мг/мл

Пл

ощ

ад

ь п

ика,

ед

х 1

0 -

3

79

Результатом исследований стала следующая методика:

Приготовление испытуемого раствора: около 0,02 г препарата (точная

навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 30 мл

воды, доводят объем раствора до метки водой, перемешивают. 2 мл

полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл,

доводят раствор до метки водой, перемешивают (испытуемый раствор,

концентрация 0,08 мг/мл).

Приготовление раствора для проверки пригодности

хроматографической системы: около 0,01 г офлоксацина помещают в мерную

колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде, доводят объем раствора

водой до метки, перемешивают. 1 мл полученного раствора помещают в

мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят раствор до метки водой,

перемешивают.

По 20 мкл испытуемого раствора и раствора для проверки пригодности

хроматографической системы хроматографируют в указанных выше

условиях, получая не менее 5 хроматограмм каждого раствора.

Содержание R-офлоксацина рассчитывают по следующей формуле:

Sпр* 100

W = --------------- , где

Sобщ

Sпр - площадь пика, по относительному времени

удерживаниясовпадающего с пиком R-офлоксацина;

Sобщ - сумма площадей всех пиков на хроматограмме испытуемого

раствора.

Проверка пригодности хроматографической системы:

Хроматографическая система считается пригодной, если:

- относительное время удерживания R-офлоксацина (относительно

левофлоксацина) в растворе для проверки пригодности

хроматографической системы не менее 1,18;

80

- относительное стандартное отклонение величин площадей пика

левофлоксацина на хроматограммах испытуемого раствора не

превышает 2%

С помощью указанной методики был проведен анализ всех образцов

субстанции левофлоксацина. Результаты представлены в Таблице 3.9.

Типичная хроматограмма субстанции левофлоксацина представлена на

Рисунке 3.11.

Таблица 3.9

Результаты определения содержания R-офлоксацина в образцах

субстанции левофлоксацина

Содержание R-офлоксацина, %

IOS

006.03.10

IOS

007.03.10

IOS

008.04.10

IOS

009.04.10

IOS

018.05.10

0,10 0,08 0,07 0,03 не обнаружен

Рисунок 3.11. Хроматограмма образца субстанции левофлоксацина IOS

003

81

Как показали результаты анализа, содержание R-офлоксацина в

образцах субстанции левофлоксацина не превышало 0,1%.

3.2.3. Газо-жидкостная хроматография в анализе субстанции

левофлоксацина

Согласно технологии синтеза и очистки субстанции левофлоксацина, в

ее серийных образцах может присутствовать спирт этиловый в качестве

остаточного органического растворителя.

Определение остаточных растворителей было проведено методом ГЖХ

по ОФС 42-0004-01 «Остаточные органические растворители».

Исследования были проведены на приборе Chrom-5 (ЧССР) с

пламенно-ионизационным детектором.

Анализ был проведен в условиях, разработанных ранее для

определения содержания в фармацевтических субстанциях остаточных

органических растворителей: этилацетата, этилового спирта, изопропилового

спирта, ацетона и н-бутанола при совместном присутствии в водном растворе

[28].

Условия хроматографирования:

- газожидкостной хроматограф с пламенно-ионизационным

детектором (Хром-5)

- колонка стеклянная, длиной 2,4 м и внутренним диаметром 3

мм, заполненная сорбентом 15% Carbowax 1500 на

ChromatonW-AW-DMCS (0,200 – 0,250 мм) или аналогичная

- газ-носитель – азот

- скорость подачи газа-носителя – 40 мл/мин

- скорость водорода – 40 мл/мин

- скорость воздуха – 400 мл/мин

- температура испарителя – 250 ºС

- температура детектора – 170 ºС

82

- температура термостата программируемая:

- 70 °С в течение 4 мин

- подъем до 100 °С со скоростью 20 °С/мин

- подъем до 120 °С со скоростью 20 °С/мин

- 120 °С в течение 6 мин

- объем пробы 1 мкл

Хроматограма модельнойсмесиэтанола 95%, этилацетата, ацетона,

изопропилового спирта и н-бутанола в воде (концентрациякаждого

компонента около 0,04 мг/мл)представлена на Рисунке 3.12.

Рисунок 3.12. Хроматограмма модельного раствора ацетона (1),

изопропилового спирта (2), этилацетата (3), этилового спирта 95% (4) и н-

бутанола (5) в воде

Времена удерживания и относительные времена удерживания (указаны

в скобках) составляли: ацетон около 3 мин (0,37 ± 0,02), изопропиловый

83

спирт – около 4,5 мин (0,52 ± 0,03), этилацетат – около 4,9 мин (0,56 ± 0,02),

этиловый спирт – около 5,5 мин (0,66 ± 0,04) и бутанол – около 8 мин (1,0).

Количество теоретических тарелок, рассчитанных по пику н-бутанола

составляло 15000 ± 1100.

Линейная зависимость площадей пиков от концентрации всех

указанных растворителей наблюдалась в диапазоне от 0,004 до 0,08 мг/мл

(коэффициент корреляции не менее 0,998, Рисунок 3.13).

Рисунок 3.13. Зависимости откликов пиков от концентрации растворов н-

бутанола, ацетона, изопропилового спирта, этанола и этилацетата

Пределы обнаружения для н-бутанола составили 0,0015 мкг, для

этанола и этилацетата – 0,003 мкг, для изопропилового спирта и ацетона –

0,002 мкг.

Количественная оценка содержания остаточных растворителей

проведена методом внутреннего стандарта, внутренний стандарт: н-бутанол.

y = 4283.1x + 0.8875R² = 0.9985

y = 4958.6x - 1.959R² = 0.9995

y = 5255.3x - 4.4895R² = 0.9996

y = 5603.2x + 2.3127R² = 0.9998

y = 7047.5x + 1.4728R² = 0.9996

0

100

200

300

400

500

600

700

0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 0.09

Пл

ощ

ад

ь п

ика

, е

д

Концентрация, мг/мл

Этилацетат Этанол Изопропанол Ацетон н-бутанол

84

Отклик детектора для различных растворителей отличается, поэтому

для более точного расчета их содержания в испытуемых образцах применяли

поправочные коэффициенты, которые рассчитывали по следующей формуле:

Sст х Сх

Кх = -------------, где

Sх х Сст

Сх, Сст - концентрации определяемого растворителя и стандарта (н-

бутанола), в г/мл;

Sх, Sст – площади пиков определяемого растворителя и стандарта (н-

бутанола) в единицах интегратора.

Этанол относится к растворителям третьего класса токсичности.

Согласно требованиям ОФС «Остаточные органические растворители» ГФ

XII издания содержание такого растворителя в препаратах не должно

превышать 0,5% (5000 ррм).

Испытуемые растворы готовили следующим образом:

Приготовление раствора внутреннего стандарта: около 0,5 г (точная

навеска) н-бутанола (хч, для хроматографии) помещали в мерную колбу

вместимостью 100,0 мл и доводили объем содержимого колбы водой

очищенной до метки, перемешивали. 1 мл полученного раствора переносили

в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводили объем колбы водой

очищенной до метки, перемешивали (концентрация около 0,05 мг/мл).

Испытуемый раствор: около 0,1 г (точная навеска) препарата помещали

в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяли в растворе внутреннего

стандарта, доводили до метки тем же растворителем, тщательно

перемешивали.

Приготовление калибровочных растворов н-бутанола и этанола: по 0,5

г (точные навески) н-бутанола (хч, для хроматографии) и этанола 95%

помещали в мерную колбу вместимостью 100,0 мл и доводили объем колбы

водой очищенной до метки, перемешивали. 1 мл полученного раствора

85

переносили в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводили объем колбы

водой очищенной до метки, перемешивали (калибровочный раствор,

концентрация каждого компонента около 0,05 мг/мл).

Полученные растворы хроматографировали, получая не менее 5

хроматограмм испытуемого раствора и не менее 7 хроматограмм

калибровочного раствора.

Поправочный коэффициент рассчитывали по результатам

хроматографирования калибровочного раствора по приведенной выше

формуле.

Содержание этилового спирта в образцах субстанции рассчитывали

следующей формуле:

Sх х CстxKхx 100

X = ------------------------- , где

Sст х Спр

Cст - концентрация н-бутанола в растворе внутреннего стандарта, %;

Спр – концентрация препарата в испытуемом растворе, %;

Кх – поправочный коэффициент чувствительности детектора к

этиловому спирту относительно внутреннего стандарта (н-бутанола);

Sх – площадь пика этилового спирта;

Sст – площадь пика н-бутанола.

Для проверки пригодности хроматографический системы

использовалиследующе критерии:

- относительные стандартные отклонения результатов отдельных

измерений времен удерживания и площадей пиков (не более 2%);

- относительное время удерживания этилового спирта должно

составлять 0,65 ± 0,05(относительно времени удерживания н-бутанола);

- эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику

н-бутанола (должна быть не менее 10000 тт);

86

- фактор асимметрии пика н-бутанола (не более 2).

Содержание этанола в образцах составляло от 0 до 0,17% (Таблица

3.10).

Таблица 3.10

Содержание остаточных растворителей в субстанции левофлоксацина

Номер серии IOS 001 002 003 004 005 006 007

Содержание этанола, % 0 0 0,06 0,17 0 0 0,02

Номер серии IOS 008 009 010 011 012 018 019

Содержание этанола, % 0,01 0,01 0,01 0 0 0,02 0

Как видно из таблицы, содержание этилового спирта ни в одном из

образцов не превышало 0,5%.

3.3. Разработка методики количественного определения

субстанции левофлоксацина

Нами была проведена оценка возможности определения

количественного содержания левофлоксацина в субстанции с помощью

методов неводного титрования и ВЭЖХ.

3.3.1. Метод неводного титрования

Количественное определение субстанции левофлоксацина методом

неводного титрования было проведено в среде ледяной уксусной кислоты с

потенциометрическим определением точки эквивалентности, титрант – 0,1М

раствор кислоты хлорной.

В указанных условиях в конечной точке титрования наблюдался четкий

скачок потенциала (около 120 мВ).

Кривые потенциометрического титрования трех навесок одной серии

субстанции левофлоксацина представлены на Рисунке 3.14.

87

350

400

450

500

550

600

650

4 4,2 4,4 4,6 4,8 5 5,2 5,4 5,6

Объем титранта (V), мл

По

те

нц

иа

л (

E),

мВ

количественное содержание 98,83

количественное содержание 99,47

количественное содержание 99,09

Рисунок 3.14 (а) Интегральная форма Рисунок 3.14 (б) Дифференциальная

форма

Рисунок 3.14. Кривые потенциометрического титрования трех навесок

субстанции левофлоксацина

Около 0,2 г (точная навеска) субстанции левофлоксацина растворяли в

50 мл ледяной уксусной кислоты и титровали 0,1М раствором кислоты

хлорной. Конечную точку титрования определяли потенциометрически.

Параллельно проводили контрольный опыт.

1 мл 0,1М раствора кислоты хлорной соответствуют 0,03614 г

левофлоксацина (С18Н20FN3O4).

Содержание левофлоксацина в субстанции определяли в пересчете на

сухое безводное вещество.

По указанной методике было определено количественное содержание

субстанции левофлоксацина в образцах субстанции (Таблица 3.11).

0

200

400

600

800

1000

1200

1400

4 4.2 4.4 4.6 4.8 5 5.2 5.4 5.6

dE

/dV

Объем титранта (V), мл

количественное содержание 98,83

количественное содержание 99,47

количественное содержание 99,09

88

Как видно из таблицы, количественное содержание составляло от 99,04

до 99,89% при относительной ошибке среднего результата, не превышающей

0,5%.

Таблица 3.11

Результаты количественного определения субстанции левофлоксацина

методом неводного титрования

Количественное определение, %

№серии IOS005 IOS006 IOS007 IOS008 IOS009 IOS010 IOS011 IOS 018

Х1

Х2

Х3

Х4

Х5

98,76

99,18

99,27

99,03

98,94

99,17

99,06

99,43

98,88

99,28

99,42

99,49

98,79

99,25

99,09

99,35

99,64

99,69

98,86

99,14

99,66

99,68

99,53

99,29

99,34

99,62

99,43

99,25

99,54

99,68

99,76

100,04

99,57

100,13

99,95

99,74

99,26

99,69

99,13

99,52

Метрологические характеристики

X 99,04 99,16 99,21 99,34 99,50 99,50 99,89 99,47

S

S x

X

0,20

0,09

0,25

0,25

0,21

0,09

0,26

0,26

0,28

0,13

0,35

0,35

0,35

0,16

0,44

0,44

0,18

0,08

0,22

0,22

0,17

0,08

0,21

0,21

0,23

0,10

0,29

0,29

0,27

0,12

0,36

0,36

3.3.2. Метод ВЭЖХ

Для количественного определения субстанции левофлоксацина

методом ВЭЖХ была использована модифицированная методика анализа

посторонних примесей. Условия хроматографирования мы сохранили, за

исключением режима элюирования. Поскольку все присутствующие в

образцах субстанции примеси подвергаются элюированию в течение 15 мин,

мы сократили время анализа за счет увеличения содержания раствора А в

элюенте до 100 % уже с 15 минуты анализа (Таблица 3.12). На селективность

методики анализа изменение режима элюирования не повлияло.

89

Таблица 3.12

Режим элюирования

Время, мин Раствор А Раствор Б

0 100 0

0-5 100 0

5-10 100 → 82 0 → 18

10-15 82 → 40 18 → 60

15-18 40 → 100 60 → 0

18-28 100 0

Приготовление подвижной фазы проводили так же, как и при

определении посторонних примесей.

Как уже было показано, прямолинейная зависимость площадей

примесей пиков левофлоксацина наблюдалась в пределах интервала от

0,0002 до 0,05 мг/мл. Коэффициент корреляции 0,999. В качестве рабочей

была выбрана концентрация 0,02 мг/мл.

В качестве стандарта нами был использован стандартный образец

левофлоксацина USPRS.

Испытуемые растворы и раствор стандарта готовили следующим

образом: около 0,02 г (точная навеска) левофлоксацина помещали в мерную

колбу вместимостью 100 мл, растворяли в 2 мл ацетонитрила и доводили

объем раствора до метки смесью ацетонитрил – вода (1:10), перемешивали.

1 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью

10 мл, доводили объем раствора до метки смесью ацетонитрил – вода (1:10),

перемешивали.По 20 мкл испытуемого раствора и раствора стандарта

хроматографировали, получая не менее 5 хроматограмм каждого раствора.

Проверку пригодности хроматографической системы проводили так

же, как и при определении посторонних примесей.

Количественное содержание левофлоксацина в субстанции

рассчитывали по следующей формуле:

90

Sисп х mст х 100 х 100 х 1 х 100 х С х 100 Sисп х mст х С х 100

Х = --------------------------------------------------------------- = ---------------------------------- , где

Sст х mисп х 1 х 100 х 100 х 100 х (100 – Wисп) Sст х mисп х (100 – Wисп) Sисп – площадь основного пика на хроматограмме испытуемого

раствора;

Sст – площадь основного пика на хроматограмме стандарта;

mст – масса навески стандарта;

mисп – масса навески испытуемого образца;

С – чистота стандарта;

Wисп – потеря в массе испытуемого образца.

Точность и сходимость, а также диапазон применения методики

оценивали путем анализа модельных растворов стандартного образца

субстанции левофлоксацина (USPRS) с известной концентрацией.

Концентрация левофлоксацина составляла 0,02 мг/мл ± 20%. В качестве

внешнего стандарта использовали раствор стандартного образца

левофлоксацина (USPRS) в концентрации 0,02 мг/мл.

Результаты анализа модельных растворов стандартного образца

левофлоксацина (USPRS) представлены в Таблице 3.13.

Таблица3.13

Результаты анализа модельных растворов стандартного образца

субстанции левофлоксацина

Взято

левофлок

сацина, г

(m1)

Найдено

левофлок

сацина, г

(m2)

Найдено

левофлокса-

цина, %

(X=m2х100/m1)

Абсолютная

ошибка, г

(d=m2 - m1)

Относитель-

ная ошибка,

%

(Y=dх100/m1)

Метрологические

характеристики

(P=95%, n=5)

0,0243 0,0240 98,76 - 0,0003 1,24

X =99,47%

S=1,32

S x =0,44

X =1,01

=1,04%

0,0236 0,0235 99,58 - 0,0001 0,42

0,0223 0,0218 97,76 - 0,0005 2,24

0,0210 0,0211 100,48 + 0,0001 0,48

0,0205 0,0208 101,46 + 0,0003 1,46

0,0191 0,0187 97,91 - 0,0004 2,09

0,0179 0,0181 101,12 + 0,0002 1,12

0,0172 0,0170 98,84 - 0,0002 1,16

0,0157 0,0156 99,36 - 0,0001 0,64

91

Как видно из результатов, представленных в таблице, относительная

ошибка единичного определения не превышала 2,5%.

С помощью разработанной методики были проанализированы образцы

субстанции левофлоксацина, результаты представлены в Таблице 3.14.

Таблица 3.14

Результаты количественного определения субстанции левофлоксацина

Номер серии IOS 006 IOS 007 IOS 008 IOS 009 IOS 010 IOS 011 IOS 018

Х1 100,36 100,41 100,44 101,09 102,39 100,51 100,57

Х2 101,78 102,38 101,99 99,72 100,84 98,13 101,88

Х3 100,52 100,72 99,72 100,54 101,78 98,83 100,99

Х4 99,91 99,60 100,24 99,95 101,15 100,92 102,28

Х5 98,94 99,99 100,78 100,61 100,67 99,22 101,59

Метрологические характеристики (Р=95%, n=5)

X (%)

S

S x

X

100,30

1,03

0,46

1,28

1,28

100,62

1,07

0,48

1,33

1,32

100,63

0,85

0,38

1,06

1,05

100,38

0,55

0,25

0,68

0,68

101,37

0,71

0,32

0,88

0,87

99,52

1,17

0,53

1,47

1,48

101,46

0,69

0,31

0,86

0,86

Содержание левофлоксацина в серийных образцах субстанции, определенное

методом ВЭЖХ составляло от 99,52 до 101,46% при относительной ошибке

среднего результата не более 1,5%.

Таким образом, нами было проведено количественное определение

субстанции левофлоксацина с помощью метода неводного титрования и

метода ВЭЖХ. Разработанная методика ВЭЖХ обладает большей

селективностью, однако относительная ошибка среднего результата,

полученного по этой методике, значительно превышает относительную

ошибку, полученную при использовании методики неводного титрования.

Кроме того, методика ВЭЖХ является более дорогостоящей и трудоемкой,

требует от исполнителя значительных временных затрат.

Учитывая все вышеперечисленное, в проект ФС на субстанцию

левофлоксацина мы включили методику неводного титрования.

92

3.4. Определение стабильности субстанции левофлоксацина и

определение сроков годности

Образцы субстанции левофлоксацина были помещены на хранение

методом «ускоренного старения» при 40 °С. Образцы хранились в

полимерных банках с винтовой горловиной с навинчиваемыми полимерными

крышками, в защищенном от света месте.

Получены результаты контроля качества субстанции левофлоксацина

после срока, эквивалентного 1 и 2 годам хранения в естественных условиях.

Результаты представлены в Таблице 3.15.

3.5. Установление норм качества субстанции левофлоксацина

По внешнему виду образцы субстанции представляли собой

мелкокристаллический порошок светло-желтого цвета, умеренно или мало

растворимый в воде, мало растворимый в этиловом спирте 95%,

растворимый или умеренно растворимый в 0,1М хлористоводородной

кислоте, легко растворимый в ледяной уксусной кислоте.

Идентификацию субстанции левофлоксацина предлагаем проводить с

помощью метода ИК- спектроскопии по соответствию спектров субстанции

прилагаемым рисункам и УФ-спектроскопии по наличию в области от 260 до

320 нм максимума поглощения при (2942) нм.

Плавление субстанции наблюдалось в интервале от 205 до 255 °С,

плавление происходило с разложением, поэтому было принято решение не

включать этот показатель в проект ФС.

93

Таблица 3.15

Результаты анализа субстанции левофлоксацина после хранения методом «ускоренного старения» при 40 °С

№ серии

(IOS)

Эквивален-

тный срок

хранения в

годах

Показатели качества

Соответ-

ствие проекту

ФСП Описание

Растворимость Подлин-

ность

Удельное

вращение

R-офлок-

сацин,%

Потеря в

массе при

высушиван

ии, %

Посторонние

примеси, % (ВЭЖХ)

Количест-

венное

определение, % вода спирт

этил

0,1М

НСl

ЛУК

006.03.10

на момент

выпуска

Мелкокристалличес-

кий порошок светло-

желтого цвета

1:91 1:305 1:14 1:3 Соответств - 98,7 0,1 2,39 Единичной примеси:

менее 0,1 %, сумма

примесей - 0,19 %

99,16 соответствует

1 год -//- 1:90 1:308 1:15 1:3 -//- - 101,2 0,1 2,57 Единичной примеси:

менее 0,1 %, сумма

примесей – 0,24 %

99,33 -//-

2 года -//- 1:110 1:343 1:15 1:3 -//- - 98,4 0,1 2,53 Единичной примеси:

менее 0,11 %, сумма

примесей – 0,27 %

99,29 -//-

007.03.10

на момент

выпуска

Мелкокристалличес-

кий порошок светло-

желтого цвета

1:60 1:400 1:14 1:3 Соответств - 98,7 0,08 2,32 Единичной примеси:

менее 0,1 %, сумма

примесей –0,14 %

99,21 соответствует

1 год -//- 1:60 1:390 1:17 1:3 -//- - 99,8 0,09 2,54 Единичной примеси:

менее 0,1 %, сумма

примесей –0,15 %

99,13 -//-

2 года -//- 1:56 1:375 1:15 1:3 -//- - 95,4 0,09 2,46 Единичной примеси:

менее 0,1 %, сумма

примесей –0,18%

99,35 -//-

008.03.10

на момент

выпуска

Мелкокристалличес-

кий порошок светло-

желтого цвета

1:109 1:280 1:70 1:3 Соответств - 98,8 0,07 2,60 Единичной примеси:

менее 0,12 %, сумма

примесей –0,28 %

99,34 соответствует

1 год -//- 1:108 1:271 1:60 1:3 -//- -101,9 0,06 2,54 Единичной примеси:

менее 0,13 %, сумма

примесей –0,31 %

99,68 -//-

2 года -//- 1:129 1:256 1:60 1:3 -//- - 96,8 не

обнаружен

2,42 Единичной примеси:

менее 0,15 %, сумма

примесей – 0,35 %

99,47 -//-

94

Продолжение Таблицы 3.15

009.03.10

на момент

выпуска

Мелкокристалличес-

кий порошок светло-

желтого цвета

1:80 1:276 1:30 1:4 Соответств - 98,5 0,03 2,63 Единичной примеси:

менее 0,11 %, сумма

примесей –0,27 %

99,50 соответствует

1 год -//- 1:80 1:274 1:26 1:3 -//- - 100,4 0,04 2,56 Единичной примеси:

менее 0,12 %, сумма

примесей –0,29 %

99,64 -//-

2 года -//- 1:93 1:285 1:25 1:3 -//- - 96,8 не

обнаружен

2,55 Единичной примеси:

менее 0,14 %, сумма

примесей –0,34 %

99,35 -//-

018.03.10

на момент

выпуска

Мелкокристалличес-

кий порошок светло-

желтого цвета

1:109 1:300 1:25 1:4 Соответств - 97,2 не

обнаружен

2,31 Единичной примеси:

менее 0,08%, сумма

примесей –0,13 %

99,47 соответствует

1 год -//- 1:117 1:300 1:30 1:4 -//- - 97,2 не

обнаружен

2,65 Единичной примеси:

менее 0,10%, сумма

примесей –0,15 %

99,32 -//-

2 года -//- 1:118 1:320 1:25 1:4 -//- - 97,8 0,03 2,48 Единичной примеси:

менее 0,11%, сумма

примесей –0,17 %

99,14 -//-

95

Удельное вращение растворов образцов субстанции левофлоксацина в

метаноле (концентрация 5 мг/мл) в пересчете на сухое вещество составляло

от -95,4 до -101,9(º)мл/(дм х г). В проект ФС включена следующая норма: «от

-95 до -103(º)мл/(дм х г)в пересчете на сухое вещество».

Потеря в массе при высушивании образцов не превышала 0,5%.

Содержание единичной примеси в субстанции левофлоксацина не

превышало 0,15%, а сумма примесей – 0,35%, как при выпуске, так и после

хранения методом «ускоренного старения» в течение срока, эквивалентного 2

годам. В проект ФС включена норма: «содержание единичной примеси – не

более 0,2%, суммарное содержание примесей – не более 0,5%».

Содержение R-офлоксацина во всех образцах не превышало 0,1%, в

проект ФС влючена норма «не более 0,2%».

Содержание сульфатной золы в субстанции не превышало 0,1%,

тяжелых металлов – 0,001%.

Содержание этанола в субстанции в качестве остаточного

органического растворителя во всех образцах не превышало 0,5%.

Количественное определение образцов субстанции находилось в

пределах интервала от 99 до 100%, как при выпуске, так и после хранения. В

проект ФС включаем норму «не менее 98,5 % и не более 101,5 % в пересчете

на сухое вещество».

Хранение образцов субстанции в течение срока, эквивалентного 2

годам хранения в естественных условиях показало, что качество субстанции

в течение всего срока хранения практически не изменяется. На основании

полученных результатов установлен срок годности субстанции – 2 года.

В Таблице 3.16 представлены показатели, методы анализа, а также

нормы качества субстанции левофлоксацина.

96

Таблица 3.16

Показатели качества, методы анализа и нормы качества субстанции

левофлоксацина

ПОКАЗАТЕЛИ МЕТОДЫ НОРМЫ

Описание Визуальный Мелкокристаллический порошок от почти

белого до светло-желтого цвета

Растворимость ГФ ХII, часть 1, с. 92 Легко растворим в ледяной уксусной кислоте,

растворим или умеренно растворим в 0,1М

хлористоводородной кислоте, умеренно или

мало растворим в воде, мало растворим в

этаноле

Подлинность ИК-спектроскопия ИК-спектр субстанции по положению и

интенсивности полос поглощения должен

соответствовать прилагаемому рисунку

спектра

УФ-спектроскопия В УФ-спектре 0,0006 % раствора субстанции в

0,1М растворе HCl в области от 200 до 350 нм

должны присутствовать три максимума

поглощения при 227±0,2 нм, 294±0,2 нм и

327±0,2 нм

Удельное вращение ГФ XII, часть 1, с. 54 От -95° до -103° в пересчете на сухое

вещество

Посторонние

примеси

ВЭЖХ Содержание единичной примеси – не

более 0,2%;

Суммарное содержание примесей – не

более 0,5%

R-офлоксацин ВЭЖХ Не более 0,2%

Потеря в массе при

высушивании

ГФ ХI, вып. 1, с. 176 От 2,0 до 3,0%

Сульфатная зола ГФ XII, часть 1, с. 115 Не более 0,1%

Тяжелые металлы ГФ XII, часть 1, с. 121 Не более 0,001%

Остаточные

органические

растворители

ГЖХ

ГФ XII, часть 1, с. 115

Этанол – не более 0,5%

Микробиологическая

чистота

ГФ ХII, часть 1, с.160 Категория 2.2

Количественное

определение

Кислотно-основное

титрование в неводных

средах

От 98,5 до 101,5%

Хранение В защищенном от света месте при температуре не выше 25ºС

Срок годности 2 года

97

ВЫВОДЫ:

1. Изучены физико-химические свойства и определены основные

фармакопейные показатели качества (растворимость, температура

плавления, потеря в массе при высушивании, удельное вращение)

субстанции левофлоксацина, синтезированной по оригинальному

способу.

2. Изучены спектральные характеристики субстанции левофлоксацина

методами ИК-, УФ- и ЯМР 1Н-спектроскопии. Показана возможность

применения методов ИК- и УФ-спектроскопии при определении

подлинности субстанции.

3. Разработана методика определения посторонних примесей в

субстанции левофлоксацина, а также определения примеси R-

офлоксацина с помощью метода ВЭЖХ. Определено содержание

остаточных органических растворителей в субстанции методом ГЖХ.

4. Изучена возможность применения методов ВЭЖХ и неводного

титрования для количественного определения субстанции

левофлоксацина. Разработана методика количественного определения

субстанции левофлоксацина с помощью неводного титрования.

5. Изучена стабильность субстанции левофлоксацина при хранении

методом «ускоренного старения». Установлены сроки годности

субстанции – 2 года.

6. Установлены нормы качества субстанции левофлоксацина. Оформлен

проект Фармакопейной статьи на субстанцию.

98

4. РАЗРАБОТКА И СОЗДАНИЕ ТВЕРДОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ

ФОРМЫ ЛЕВОФЛОКСАЦИНА И ЕЕ СТАНДАРТИЗАЦИЯ

4.1. Изучение технологических характеристик субстанции

левофлоксацина

Разработка оптимального состава и технологии таблеток

левофлоксацина требует анализа физико-химических и технологических

свойств субстанции левофлоксацина, прежде всего таких как сыпучесть,

насыпная плотность, прессуемость и др. Эти параметры определены согласно

методам, указанным главе «Материалы и методы».

Объектами исследований являлись: субстанция левофлоксацина,

синтезированная в Институте органического синтеза имени И.Я. Постовского

Уральского отделения РАН.

Технологические характеристики субстанции левофлоксацина

представлены в Таблице 4.1.

Таблица 4.1

Основные технологические характеристики субстанции

левофлоксацина

Показатель Значение показателя

Цвет Светло-желтый

Сыпучесть, г/с 0,5

Насыпная плотность до

уплотнения, г/см3 0,2930,015

Насыпная плотность после

уплотнения, г/см3 0,5290,008

Коэффициент прессуемости, Н 67,035,34

Влагосодержание, % 2,57

Эквивалентный диаметр, мкм 86,15± 0,9

Субстанция левофлоксацина практически не высыпалась из воронки,

следовательно, она обладает неудовлетворительной сыпучестью. Результат

эксперимента можно объяснить тем, что наименьшей сыпучестью обладают

99

порошки с частицами небольшого размера, субстанция левофлоксацина

является мелкокристаллической.

Порошок левофлоксацина легко прессовался с помощью ручного

гидравлического пресса. Коэффициент прессуемости 1,645. При испытании

на прочность подпрессовки разрушались при 5,75 Н, что говорит о их

недостаточной прочности.

Для определения размера и формы частиц использовали оптическую

микроскопию (Рисунок 4.1).

Рисунок 4.1. Оптическая микроскопия субстанции левофлоксацина

Поскольку субстанция левофлоксацина обладает хорошей

прессуемостью и неудовлетворительной сыпучестью, в выборе твердой

лекарственной формы приоритет исследований был отдан получению

таблеток.

4.2. Разработка состава и технологии таблеток

С целью разработки технологии и подбора оптимального состава

таблеток левофлоксацина нами была рассмотрена возможность применения

различных способов таблетирования, а также целесообразность применения

вспомогательных веществ.

100

4.2.1. Подбор оптимальной технологии для получения таблеток

левофлоксацина

При разработке технологии получения таблетированной

лекарственной формы левофлоксацина были рассмотрены и использованы

три наиболее широко распространенные, в области технологии

таблетированных лекарственных форм, метода:

метод прямого прессования;

метод сухой грануляции (брикетирование);

метод влажного гранулирования.

Полученные в ходе экспериментального изучения подбора

оптимального состава и технологии данные позволили сделать

промежуточный вывод о нецелесообразности применения метода прямого

прессования из-за большого содержания левофлоксацина в таблетке.

При изучении метода сухой грануляции опытным путем были

получены следующие составы, представлены в Таблице 4.2, таблеток

левофлоксацина (в мг).

Таблица 4.2

Составы таблеток левофлоксцина, полученные методом сухой грануляции

Состав 1 Левофлоксацинагемигидрат 512,46

МКЦ 67,6

Фуджикалин 33,7

Магния стеарат 6,2

Масса таблетки составляла 620 мг.

Состав 2 Левофлоксацинагемигидрата 512,46

Эксплозоль 15,0

Эксплоцель 15,0

МКЦ 50,0

Фуджикалин 21,3

Магния стеарат 6,2

Масса таблетки составляла 620 мг.

Состав 3 Левофлоксацинагемигидрата 512,46

Клуцель 6,2

Экспозоль 18,6

Эксплоцель 18,6

МКЦ 29,0

Формакс 29,0

Магния стеарат 6,2

101

Технология получения данных составов заключалась в смешении

компонентов, брикетирования (таблетирования) для получения таблеток с

использованием пуансонов диаметром 14 мм, при давлении 100 – 150 Н, их

дробления и протирания через сито № 2.

Полученный гранулят состава № 1 имел недостаточную сыпучесть

(3,23 г/с). Кроме того, таблетки практически не распадались.

Это свидетельствует о необходимости введения в состав таблеток

дезинтеграторов, в качестве которых мы использовали экспозоль и

экспоцель/солютаб( в мг).

Распадаемость таблеток состава 2 составляла 3 минуты. Таблетки

получались достаточно прочными (Р>150 Н), выдерживали испытание на

истираемость (99,68%). Однако, гранулят недостаточно хорошо высыпался

из воронки, сыпучесть его составляла 3,75 г/с.

Использование в составе таблеток вместо формакс, кальция карбоната

и клуцеля (состав 3) также недостаточно увеличивало сыпучесть гранулята

(5,5 г/с), при хороших значениях распадаемости (5 мин) и прочности (Р=147

Н ).

Таким образом, применение метода сухой грануляции не позволило

получить таблетки левофлоксацина без значительного увеличения массы

таблетки за счет вспомогательных веществ.

В связи с этим для получения таблеток левофлоксацина был выбран

метод влажного гранулирования.

4.2.2. Разработка состава таблетированной формы левофлоксацина

Для получения таблеток левофлоксацинабыло изученовлияние

вспомогательных веществ на технологические характеристики таблеточной

массы и готовых таблеток.

Вспомогательные вещества, в комплексе с левофлоксацином, должны

были обеспечивать необходимые показатели качества таблеток, такие

102

какраспадаемость в течение регламентированного времени, достаточную

механическую прочность и полноту всасывания действующего вещества из

желудочно-кишечного тракта.

Излишняя прочность таблетки приводит к росту времени

распадаемости, что отрицательно сказывается на качестве таблетки.

При достаточной механической прочности необходимо обеспечить

хорошую распадаемость таблетки, которая зависит: от количества

связывающих веществ (их должно быть столько, сколько необходимо для

достижения требуемой прочности); от давления прессования (чрезмерное

давление ухудшает распадаемость таблетки); от качества разрыхляющих

веществ, способствующих распадаемости таблеток.

Таблетки, по физической структуре, представляют собой пористое

тело, при погружении их в жидкость, она проникает в поры, пронизывающие

толщу таблетки. Если таблетка будут содержать растворимые добавки, то

они будут способствовать быстрой ее распадаемости. В связи с этим было

изучено влияние вспомогательных веществ на технологические

характеристики таблеточной массы модельных смесей и показателей

качества готовых таблеток с применением дисперсионного анализа [10, 16,

24, 25].

4.2.3 Изучение влияния вспомогательных веществ на

технологические характеристики модельных смесей и таблеток

левофлоксацина с применением дисперсионного анализа

Прочность, сыпучесть, распадаемость в течение определенного

времени – данные показатели качества, необходимо учитывать при введении

вспомогательных веществ и дезинтегрантов в твердую лекарственную форму

[37].

Нами было изучено влияние вспомогательных веществ на

технологические характеристики таблеток левофлоксацина.

103

В Таблице 4.3 приведены модельные смеси. Данные смеси подвергали

прессованию с помощью гидравлического пресса. Влияние факторов на

технологические характеристики таблеток оценивалось по следующим

показателям прочность на сжатие (кг/см3), распадаемость (сек.), прочность на

истирание (%) (Таблица 4.4).

Таблица 4.3

Состав модельных смесей

Ингредиент, мг 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Левофлоксацин 500 50

0

50

0

50

0

50

0

500 500 500 50

0

500 500 500

МКЦ 29 35 42,

8

26,6

7

26.6

7

29 29 26,6

7

26,6

7

Лактоза 30,

5

29 35 26,6

7

26,6

7

Повидон XL 12 30 30 19,

5

12

Кальция

карбонат

30,

5

29 29 35 35 42,

7

26,6

8

29 29 26,6

8

26,6

8

Klucel EXF 24 6 6 6 6 6,5 6,15 6,15 6 6,2 6,15 6,15

Магния стеарат 3 6 6 6 6 6,5 6,15 6,15 6 6,2 6,15 6,15

Explosole 18 18 13 18,4

5

18.4

5

18,

6

18,4

5

18,4

5

Кроскамерлоза

1 %

(Эксплоцель

3%)

6,5 18,4

5

18.4

5

18,

6

13,4

5

18,4

5

Formaxx 26,6

7

104

Таблица 4.4

Технологические характеристики таблеток левофлоксацина

В Таблице 4.5 представлены факторы, влияющие на технологические

характеристики таблеточной массы и таблеток: А- вспомогательное

вещество: а1 - МКЦ, а2 – лактоза; В – дезинтегранты: b1 – повидон, b2 –

Explosole, b3 - кроскамерлоза; С – количество дезинтегранта: с1 – 0-15 мг, с2

– 16-50 мг.

Таблица 4.5

Дисперсионный анализ результатов испытаний модельных смесей и таблеток

левофлоксацина

Показате-

ли

качества

источник

дисперсии

число

степеней

свободы

сумма

квадра-

тов (SS)

средний

квадрат

(MS)

Fэксп Fтабл

модельные

смеси

сыпучесть,

г/сек.

Фактор А 1 0,064533 0,064533 2,433257 12,7

Фактор В 2 0,931017 0,465508 17,55219 4,3

Фактор С 1 0,997633 0,997633 37,61619 12,7

Остаток 11 0,291735 0,026521 - -

насыпная

плотность,

г/см3

Фактор А 1 0,001564 0,001564 6,788418 12,7

Фактор В 2 0,031454 0,015727 68,25816 4,3

Фактор С 1 0,00304 0,00304 13,19454 12,7

Остаток 11 0,002534 0,00023 - -

№

модель

ной

смеси

модельные смеси Таблетки

сыпучесть,

г/сек

насыпная

плотность,

г/с м3

прочность,

кг/см3

истираемость,

%

распадаемость,

сек

1 5,44±0,05 0,471±0,002 11,75±0,05 100,00±0,01 960±5

2 7,52±0,08 0,481±0,003 9,75±0,03 99,05±0,01 540±6

3 8,33±0,04 0,75±0,005 15,50±0,05 98,8±0,02 720±7

4 7,98±0,07 0,531±0,001 11,75±0,04 99,04±0,01 900±2

5 8,52±0,10 0,598±0,003 10,75±0,02 99,95±0,02 1080±8

6 6,67±0,04 0,45±0,004 12,75±0,07 98,04±0,01 540±5

7 8,02±0,10 0,498±0,004 15,0±0,05 99,74±0,01 900±3

8 7,44±0,05 0,507±0,005 12,75±0,05 99,03±0,01 600±2

9 7,32±0,06 0,578±0,002 9,75±0,06 99,08±0,01 660±5

10 6,68±0,07 0,588±0,001 12,5±0,05 96,7±0,02 900±8

11 9,0±0,09 0,55±0,004 19,5±0,04 99,07±0,01 1020±9

12 6,88±0,04 0,697±0,003 15,25±0,03 98,45±0,03 780±5

105

Продолжение Таблицы 4.5

таблетки

прочность,

кг/см3

Фактор А 1 13,0208 13,0208 59,1539 12,7

Фактор В 2 13,1354 6,56771 29,8372 4,3

Фактор С 1 4,6875 4,6875 21,2954 12,7

Остаток 11 2,4213 0,22012 - -

истира-

емость, %

Фактор А 1 0,49208 0,49208 88,9989 12.7

Фактор В 2 0,098 0,049 8,86233 4,3

Фактор С 1 0,31687 0,31687 57,3112 12,7

Остаток 11 0,06082 0,00553 - -

распада-

емость,

сек.

Фактор А 1 1200 1200 1,2375 12,7

Фактор В 2 22200 11100 11,4469 4,3

Фактор С 1 129700 129700 133,753 12,7

остаток 11 10666,7 969,697 - -

Полученные данные подвергали дисперсионному анализу.

Критерий Фишера (F) показывает однородность дисперсии и позволяет

оценить степень влияния фактора на технологические характеристики

таблеточной массы и таблеток. (p<0,05,Fэксп >Fтабл) [13,14].

При анализе сыпучести, значения SS1, SS2 и SS составляли 1,993183,

0,291735 и 2,284919. Исходя из полученных значений было выявлено, что

наименьшее влияние оказывает наполнитель, фактор А – 2,82%, выбор же

дезинтегранта и количество дезинтегранта оказывает приблизительно равное

влияние В – 40,45%, С – 43,66%. Ошибка 12,77% связана с погрешностью

измерения.

Изучение насыпной плотности показало, что значения SS1, SS2 и

SSсоставили 0,036058; 0,002534 и 0,036058 соответственно. Степень влияния

факторов на объемную плотность составила: 81,50% для фактора В, 4,05%

для фактора А, 7,88% для фактора С, на долю неконтролируемых случайных

ошибок пришлось 6,57%. Анализируя полученные данные, можно отметить,

что наибольшее влияние оказывает группа вспомогательные вещества.

При анализе прочности на сжатие значения SS1, SS2 и SS составляли –

30,8438, 2,4213, 33,265. Наименьшее значение у фактора С – 14,0914%

(количество дезинтегранта). Остальные факторы показали следующие

значения, фактор А – 39,1427%; фактор В – 39,4871%. На долю

106

неконтролируемых ошибок приходится – 7,28%. Исходя из полученных

данных можно сделать вывод о том, что наибольшее влияние на прочность на

сжатие оказывает наполнитель и вид дезинтегранта.

Изучение распадаемости показало следующие значения: SS1 –

153100, SS2 – 10666,7 и SS - 163767, а степень влияния факторов на

распадаемость составила: 0,73% для фактора А, 13,55% для фактора В,

79,12% для фактора С. На долю неконтролируемых, случайных ошибок

приходилось 6,51%. Наибольшее влияние на распадаемость оказывал фактор

С - количество дезинтегранта, в меньшей степени фактор В – выбор

дезинтегранта, фактор же А показал низкое значение воздействия на

распадаемость, и его влияние на скорость дезинтеграции таблетки

незначительно.

При изучении прочности на истирание

значения SS1, SS2 и SS составили соответственно 0,90695 0,06082, 0,96777.

Наименьшее значение у фактора В – дезинтегранты (10,13%), фактор А –

50,85%; фактор С – 32,74%. На долю неконтролируемых ошибок приходится

6,28 %.

Таким образом, опираясь на результаты исследования, можно сделать

вывод о том, что на прочность на сжатие наибольшее влияние оказывает

наполнитель и вид дезинтегранта. МКЦ значительно повышает данный

показатель,а в отличие от лактозы, кроскамерлоза натрия значительно

увеличивает прочность на сжатие по сравнению с другими видами

дезинтегранта.

Наибольшее время распадаемости показывали модельные смеси, в

которых дезинтегрант содержался в меньшей концентрации, увеличение

содержание дезинтегранта в прописи (более 15 мг) позволило достичь

наименьшего времени распадаемости. Из исследуемых дезинтегрантов

лучшее время распадаемости показала кроскамерлоза натрия, влияние

наполнителя незначительно.

107

На результат анализа «прочность на истирание» наибольшее влияние

оказывал выбор вспомогательных веществ, в меньшей степени выбор

дезинтегранта. Но следует отметить, что наименьшую истираемость

показывали таблетки, содержащие в своем составе МКЦ.

Такимобразом, проведенный дисперсионный анализ показал, что на

технологические характеристики (прочность на сжатие, прочность на

истирание, распадаемость) модельных смесей и таблеток главным образом

влияет наполнитель и вид дезинтегранта. Исходя из полученных данных,

наиболее оптимальным признан состав под № 10, где в качестве наполнителя

выбрана МКЦ, применение которого показывает оптимальное соотношение

таких показателей как: сыпучесть, прочность на истирание и прочность на

сжатие. Ввиду отсутствия выраженного влияния типа дезитегранта нами

принято решение о дополнительном исследовании зависимости времени

распадемости таблеток левофлоксацина от типа и количества дезинтегрантов.

4.2.4. Определение зависимости времени распадаемости таблеток

левофлоксацина от типа и количества дезинтегрантов, влияние

увлажняющего агента на распадаемость таблеток

левофлоксацина, полученных методом влажной грануляции

Одной из важных характеристик таблеток является распадаемость. На

время распадаемости влияет введение в рецептуру дезинтегрантов [12, 17].

Для данного исследования были получены различные модельные смеси

левофлоксацина. Получали их по следующей технологии: приготовление

водных растворов связующих веществ; отвешивание необходимого

количества левофлоксацина и вспомогательных веществ по

соответствующим прописям; перемешивание всех компонентов, увлажнение

смеси раствором гранулирующей жидкости; влажное гранулирование и

сушка гранулята; сухое гранулирование; опудривание полученного

гранулята.

108

Гранулят модельных смесей был исследован по показателю –

сыпучесть, а полученные из этого гранулята модельные таблетки были

исследованы нами по показателям: прочность и распадаемость (Таблица 4.6).

Таблица 4.6

Состав таблеточной массы

(на 1 таб), мг

Связующий

раствор

Сыпучесть

г/с

Прочность таблеток, Н Распадае-

мость, мин

1. Левофлоксацин

Лактоза

Кальция

карбонат

KlucelEXF

ПовидонXL

Магния стеарат

500

30,5

30,5

24

12

3

5,44 ±0,3 >150 >30 мин

2. Левофлоксацин

МКЦ

ПовидонXL

Кальция

карбонат

KlucelEXF

Магниястеарат

500

29

30

29

6

6

8,33±0,01 >150 >30 мин

3. Левофлоксацин

Лактоза

ПовидонXL

Кальция

карбонат

KlucelEXF

Магния стеарат

500

29

30

29

6

6

7,52 ±0,3 Давление прессования

20 – 97,5Н;

Давление прессования

40 – 135Н;

Давление прессования

60 – 150Н;

20 -10 мин;

40 - 8 мин;

60 - 9 мин;

4. Левофлоксацин

МКЦ

Кальция

карбонат

KlucelEXF

Магния стеарат

Explosole

500

35

35

6

6

18

9,00±0,02 Давление прессования

20 – 127,5Н;

Давление прессования

40 – 147.5Н;

Давление прессования

60 – >150Н;

20 - 9 мин;

40 -10мин;

60 -10 мин;

5. Левофлоксацин

Лактоза

Кальция

карбонат

KlucelEXF

Магния стеарат

Explosole

500

35

35

6

6

18

6,67 ± 0,04 Давление прессования

20 – 100 Н;

Давление прессования

40 – 135Н;

Давление прессования

60 – >150Н;

10 + 1,0 мин

10 + 1,0 мин

10 + 1,0 мин

109

Продолжение Таблицы 4.6

6. Левофлоксацин

МКЦ

ПовидонXL

Кальция

карбонат

KlucelEXF

Магния стеарат

Explosole

Кроскамерлоза

1% (Эксплоцель 3%)

500

42,8

19,5

42,7

6,5

6,5

13

6,5

7,14 ±0,3 Давление прессования

20 – 110 Н;

Давление прессования

40 – 142,5Н;

Давление прессования

60 – >150Н;

8 + 1,0 мин

8 + 1,0 мин

8 + 1,0 мин

7. Левофлоксацин

МКЦ

Кальция

карбонат

KlucelEXF

Магния стеарат

Explosole

Кроскамерлоза

1% (Эксплоцель 3%)

500

26,67

26,68

6,15

6,15

18,45

18,45

6,94±0,45 >150Н >30 мин

8. Левофлоксацин

МКЦ

KlucelEXF

Магния стеарат

Explosole

Кроскамерлоза

1%(Эксплоцель

3%)

500

26,67

6,15

6,15

18,45

18,45

26,67

6,94 ± 0,45 >150Н >30 мин

9. Левофлоксацин

МКЦ

ПовидонXL

Кальция

карбонат

KlucelEXF

Магния стеарат

500

29

12

29

6

6

7,98 ±0,2 Давление прессования

20 – 137,5Н;

Давление прессования

60 – >150Н;

>30 мин

>30 мин

10. Левофлоксацин

МКЦ

Кальция

карбонат

KlucelEXF

Магния стеарат

Explosole

Кроскамерлоза

1% (Эксплоцель 3%)

500

29

29

6,2

6,2

18,6

18,6

8,52 ±0,6 Давление прессования

20 – 125Н;

>30 мин

110

Продолжение Таблицы 4.6

11. Левофлоксацин

МКЦ

Лактоза

Кальция

карбонат

KlucelEXF

Магния стеарат

Explosole

Кроскамерлоза

1% (Эксплоцель 3%)

500

26,67

26,67

26,68

6,15

6,15

18,4

13,45

8,52 ±0,6 Давление прессования

20 – 125Н;

>30 мин

12. Левофлоксацин

МКЦ

Лактоза

Кальция

карбонат

KlucelEXF

Магния стеарат

Explosole

Кроскамерлоза

1% (Эксплоцель 3%)

500

26,67

26,67

26,68

6,15

6,15

18,45

18,45

вода

7,85± 0,3

Давление прессования

20 – 118Н;

Давление прессования

40 – 150Н;

20 –7мин;

40>15 мин;

13. Левофлоксацин

МКЦ

Formaxx

KlucelEXF

Explosole

Explocel/Solutab

ПовидонXL

Магниястеарат

512,45(500)

42,8

42,8

6,5

13

6,5

19,5

6,5

вода 7,85±0,3 Давление прессования

20 – 107,5Н;

Давление прессования

40 >150Н;

20 –14мин;

40 >15 мин;

14. Левофлоксацин

МКЦ

Кальция

карбонат

KlucelEXF

Explosole

Explocel/Solutab

Магниястеарат

512,45(500)

29

29

6,2

18,6

18,6

6,2

вода

10.20± 0,3 Давление прессования

20 – 70Н;

Давление прессования

40 – 150Н;

20 –8мин;

40 –8 мин;

15. Левофлоксацин

МКЦ

Formaxx

KlucelEXF

Explosole

Explocel/Solutab

Магниястеарат

512,45(500)

29

29

6,2

18,58

18,58

6,2

вода

8,62± 0,3 Давление прессования

20 –90Н;

Давление прессования

40 – 150Н;

20 –13мин;

40 –15 мин;

16. Левофлоксацин

МКЦ

Маннитол

Klucel EXF

Explosole

Explocel/Solutab

Магниястеарат

512,45(500)

29

29

6,2

18,58

18,58

6,2

вода

7,77±0,3 Давление прессования

20 – 72,5Н;

Давление прессования

40 – 150Н;

20 –7мин;

40 –9 мин;

111

При использованиив составе магния карбоната основного в количестве

15%, а также кальция фосфата двузамещенного при влажности гранулята 2-4

% и добавлении в качестве гранулирующей жидкости 2% раствора МЦ-100 и

10% раствора ПВП не позволило добиться достаточной механической

прочности таблеток (47,81 3,23 Н) и высокой сыпучести (10,06 0,64 г/с)

гранулята. В таблетках, где присутствовали крахмал и сахароза или лактоза,

обладали меньшей прочностью (30,0 2,0 Н), чем таблетки из гранулятов, в

состав которых дополнительно вводили МКЦ, время распадаемости

полученных таблеток так же превышало регламентированное и составляло от

17минут до 20 минут.

Для снижения времени распадаемости и повышения прочности

таблеток в состав была введена МКЦ Avicel РН-102, это позволило получить

приемлимые результаты при увлажнении смеси порошков 10% водным

раствором ПВП с последующим опудриванием сухого гранулята 1% магния

стеарата при средней массе таблеток 0,650 г. Прочность и время

распадаемости полученных таблеток составили 47,81 3,23 Н и 3,810,55

мин, соответственно.

Ввиду того, что таблетки левофлоксацина должны быстро распадаться,

вспомогательные вещества должны создать условия для достаточно быстрого

проникновения растворяющей среды в таблетку. Этими качествами обладает

клуцель, вызывающий образование в таблетке пористой структуры, которая

способствует быстрому проникновению воды в её массу.

Как видно из Таблицы4.6, нами установлено, что в качестве

связующего в таблетках левофлоксацина целесообразно использовать

клуцель, причем вводить его в сухом виде, а затем добавлять в качестве

гранулирующего агента воду очищенную.

Установлено, что в составах, где имеется высокая концентрация

лекарственного вещества, небольшие количества клуцеля обеспечивают

значительное повышение прочности таблеток. Так, введение клуцеля

112

повышает прочность таблетки по сравнению с таблетками без него почти в 3

раза. Таблетки имели хороший внешний вид и удовлетворительные

показатели качества и были рекомендованы к дальнейшему изучению в

качестве оптимального состава получения таблеток методом влажного

гранулирования.

С целью улучшения распадаемости таблеток нами были изучены

возможности введения в состав модельных таблеток вспомогательных

веществ, применяемых на современном фармацевтическом рынке в качестве

супердезинтегрантов: натрия гликолят крахмал (Solutab -

BlanverFarmoquimicaLtda), кроскармеллоза натрия (Explosol -

BlanverFarmoquimicaLtda), частично модифицированный кукурузный

крахмал (Starch 1500 - Сolorcon).

Использование в качестве дезинтегранта повидона XL независимо от

способа его введения оказывало негативное влияние на внешний вид

таблеток - они получались шероховатые, при хранении на их поверхности

появлялись многочисленные вздутия и неровности. Исключив повидон XL

из состава таблеток (составы 7-8) мы добились улучшения внешнего вида и

стабильности таблеток, но введение дезинтегрантов необходимо для

улучшения распадаемости.

Вследствие своей эффективности при низких концентрациях,

эксплоцель/солютаб идеально подходит для рецептур, в которых

лекарственные вещества и другие ингредиенты исключают добавление

дезинтегрантов в большом количестве. Нами использовался эксплоцель

/солютаб марки EDP, который является особой разновидностью

кроскармеллозы натрия с более мелким размером частиц (45 микрон) для

лучшего растворения и дезинтегрирования. Обычно используется в

концентрациях от 0,5 до 2%, при необходимости его количество может быть

увеличено или уменьшено.

113

В модельные смеси были введены различные дезинтегранты в разных

количествах (Таблица 4.7). Результаты изучения представлены на Рисунке

4.2.

Таблица 4.7

Зависимость времени распадаемости таблеток левофлоксацина от типа и

количества дезинтегрантов

№ п/п Дезинтегранты Процентное

содержание, %

Распадаемость,

мин

1. повидон XL 4 30

2. повидон XL 5 9

3. повидонXL 8,3 10

4. Explosol 3 45

5. Explosol 10 45

6. Explosol

Solutab

повидон XL

2

1

3

16

7. Explosol

Solutab

3,72

3,72

8

Рисунок 4.2. Зависимость времени распадаемости таблеток левофлоксацина

от количества и вида дезинтегрантов

Установлено, что наилучшие результаты дает сочетание

дезинтегрантов эксплозоля и эксплоцеля/солютаб, причем эксплозоль

30

9 10

45 45

168

0

10

20

30

40

50

вр

ем

я

расп

ад

аем

ости

.

ми

н

1 2 3 4 5 6 7

тип дезинтегранта

114

вводится до влажного гранулирования, что усиливает дезинтеграцию гранул,

а эксплоцель - после сухого гранулирования вместе с антифрикционным

агентом магния стеаратом.

Для дальнейшего изучения нами был выбран состав №14, обладающий

наилучшими технологическими характеристиками, таблетки данного состава

имеют хорошую прочность, за счет введения в него небольшого количества

клуцеля, в то же время данный состав обладает хорошей распадаемостью, за

счет сочетания дезинтегрантов эксплозоля и эксплоцеля/солютаб.

Таблица 4.8

Левофлоксацин, таблетки, 500 мг

Наименование компонентов таблетки по 500 мг

Мг

Левофлоксацина 512,45

Вспомогательные вещества:

Клуцель

Эксплозоль

Эксплоцель/солютаб

МКЦ 102

Кальция карбонат

Магния стеарат

6,2

18,6

18,6

29,0

29,0

6,2

Средняя масса таблетки: 620

При дальнейших исследованиях нами использован данный состав

таблеток (Таблица 4.8), имеющий оптимальные технологические

характеристики, за счет введения синергично действующей смеси клуцеля и

дезинтегрантов эксплозоля, вызывающего разбухание частиц за счет

абсорбции воды, и эксплоцеля/солютаб с высокой поглощающей

способностью, вследствие этого явления образуется более сильный

разрыхляющий эффект.

115

4.2.5. Влияние влажности гранулята и давления прессования на

качество таблеток левофлоксацина, полученных методом влажной

грануляции

При процессе прессования таблеток необходимо уделять наибольшее

внимание таким факторам, как: фракционный состав и форм частиц

прессуемого материала, остаточная влажность гранулята. От давления

прессования в наибольшей степени зависит прочность таблеток, их

пористость, а значит, косвенно, и скорость растворения. Для выбора наиболее

оптимального интервала давления прессования былапроведена серия опытов

по изучению зависимости силы выталкивания, прочности таблеток и

распадаемости от давления прессования.Характеризует трение и сцепление

между боковой поверхностью таблетки и стенкой матрицы. Для

выталкивания запрессованной таблетки из матрицы требуется затратить

силу, чтобы преодолеть трение и сцепление между боковой

поверхностью таблетки и стенкой матрицы. Выталкивание

запрессованной таблетки производят нижним пуансоном [7, 17,40].

Гранулят прессовали на ручном гидравлическом прессе в таблетки

массой 600 мг с рабочей частью диаметром 11 мм при давлении прессования

от 60 до 250 МПа.

Результаты исследований зависимости прочности таблеток и

распадаемости от давления прессования представлены на Рисунке 4.3 и 4.4.

При увеличении давления прессования увеличивается так же и

механическая прочность на сжатие и время распадаемости. Но во всём

рассмотренном диапазоне, время распадаемости не превышает

установленные пределы.

116

Рисунок 4.3. Зависимость прочности таблеток от давления прессования.

Рисунок 4.4. Зависимостивремени распадаемости таблеток от давления

прессования

Давление до 120 МПа не обеспечивает необходимую прочность

таблеток, а при давлении выше 180 МПа возрастает сила выталкивания

таблеток, что приводит к износу пресс-инструмента и затруднению процесса

таблетирования. В результате исследований оптимальным рекомендован

интервал давления от 120 до 180 МПа.

Остаточная влажность значительно влияет на все технологические

характеристики гранулятов и таблеток. При повышении влажности гранул

0

150

98,5

7067,55042,5

0

50

100

150

200

250

300

0 50 100 150 200 250 300

Давление прессования, МПа

Пр

оч

но

сть

, Н

Ряд1

10

88

5

0

5

10

15

20

50 100 150 200 250

Давление прессования, МПа

Вр

ем

я р

асп

ад

аем

ости

, м

ин

Ряд1

117

ухудшается сыпучесть и точность дозирования. Однако уменьшение

влажности может снизить прессуемость [10, 30].

Получены данные по изучению влияния остаточной влажности

гранулята на механическую прочность. При значении влажности гранулята

менее 3 % таблетки обладают недостаточной механической прочностью.

Оптимальной следует считать интервал влажности от 3 до 5 %, гранулят при

данных значениях влажности имеет хорошую сыпучесть.

4.2.6. Аргументирование выбора пленочных покрытий

Таблетки с покрытием пленочным - таблетки, покрытые тонкой

оболочкой (толщина покрытия 0,05 - 0,2 мм), составляющей от 3 до 20% от

массы таблетки из мембранообразующих полимеров. Пленочные покрытия

получают нанесением на таблетки раствора пленкообразующего вещества в

водном или неводном растворителе. Обычно покрывают пленочными

оболочками таблетки в условиях псевдоожижения. После испарения

растворителя остается тонкая пленка, прилипающая к таблетке и

позволяющая сохранить ее первоначальную форму, включая риску и

идентификационную маркировку [33, 38].

В зависимости от характера растворимости различают:

- покрытия пленочные водорастворимые - получают из водно-

этанольных или водных растворов природной и модифицированной

целлюлозы, ПЭГ, желатина, гуммиарабика и других камедей;

- покрытия пленочные гастросолюбильные - предназначены для

защиты таблеток от действия влаги - состоят из таких ВВ, как шеллак или

ацетилцеллюлозы фталат, однако они не препятствуют быстрому

разрушению их в желудке (в течение 10-30 мин);

- покрытия пленочные кишечнорастворимые - предназначены для

защиты таблеток от действия влаги, локализации действия ЛВ в кишечнике с

пролонгацией его эффекта;

118

- покрытия пленочные лаковые - таблетки применяются в производстве

таблеток с регулируемой скоростью высвобождения ЛВ;

- покрытия осмотические – предназначены для осмотического

регулирования высвобождения [17, 27].

Для покрытия модельных таблеток левофлоксацина пленочными

покрытиями нами выбран Опадрай представляющий собой тонкую

порошкообразную смесь вспомогательных веществ готовую к употреблению,

для нанесения пленочной оболочки на таблетки с использованием в качестве

растворителя воды, в виде водной дисперсии (Таблица 4.9).

Таблица.4.9

Прирост массы модельных таблеток

Время нанесения

покрытия, мин

Покрытие Опадрай (серия 85). Приростмассы, %

Опыт 1 Опыт 2

10 3 3

20 6 5

30 8 8

Таблетки с покрытием Опадрай, обладают определенными свойствами:

твердость, улучшенное сопротивление истиранию, равномерность окраски,

хорошие вкусовые качества, течение при фасовке. Покрытие Опадрай в

отличие от рН зависимых пленкообразующих полимеров, таких как

акриловые и виниловые полимеры не имеет четких растворяющих

характеристик.

Нами изучены профили высвобождения левофлоксацина из модельных

таблеток с покрытием Опадрайв условиях теста «Растворение»,

разработанного нами для включения в проект НД на таблетки

левофлоксацина 500 мг, покрытые оболочкой (см. п. 4.4.7).

Анализ кинетики высвобождения левофлоксацина из модельных

таблеток показал незначительное влияние времени нанесения покрытия

119

(толщина пленочного покрытия) на снижение скорости высвобождения. Так,

по прошествии 30 мин растворения в кислой среде высвободилось около 88%

левофлоксацина из таблеток с оболочкой, наносимой в течение 10 минут, 95%

из таблеток с нанесением покрытия в течение 20 минут, 91% из таблеток,

подвергшихся 30-минутному нанесению оболочки.

Профиль высвобождения левофлоксацина характеризуется

значительным (около 90%) переходом левофлоксацина из таблетированной

лекарственной формы в раствор уже в течение 30 мин растворения в кислой

среде.

4.2.7. Определение эквивалентности профилей высвобождения

разработанных таблеток левофлоксацина и препарата сравнения

«Таваник»

Определение эквивалентности кинетики растворения разработанных

таблеток левофлоксацина и препарата сравнения проводили в соответствии с

тебованиями Методических указаний «Оценка биоэквивалентности

лекарственных средств» Министерства Здравоохранения и Социального

развития Российской Федерации от 2008 г (Приложение 4).

Исследования проводили в условиях теста «Растворение»,

разработанного нами для включения в проект ФСП на таблетки

левофлоксацина 500 мг, покрытые оболочкой (см. п. 4.4.7)

Изучение профилей теста «Растворения» разработанных таблеток

левофлоксацина и препарата сравнения «Таваник» свидетельствует

обэквивалентности кинетики растворения препаратов. Фактор сходимости –

52,5.

R T Ri-Ti (Ri-Ti)2

1 16 20 4 16

2 35 40 5 25

3 78 60 18 324

4 85 80 5 25

5 95 94 1 1

391

120

f2F2=50*log((1+(1/n))*∑(RiTi)2)-0,5*100)

Даннаяформула преобразуется:

50*lg*100/ √1+1/5*391=50*lg*100/ √79,2=50 *lg*100/8,9=50 *lg 11,2=52,5

4.3. Технологическая схема производства таблеток

левофлоксацина

ВР.1.1.Санитарная обработка

помещений

ВР.1.2.Подготовка персонала

к работе

ВР.1.3.Подготовка аппаратуры

и оборудования

ВР.1.4.Получение воды

очищенной

ВР.1.Санитарная обработка

производства

Сточные воды

ВР.2.1. Просев порошков

ВР.2.2.

Определение

остаточной влажности

компонентов

ВР.2.3.Приготовление

увлажнителя

ВР.2. Подготовка сырья

Влага Потери

ТП.3.1 Получение гранулята

ТП.3.2 Сушка гранулята

ТП.3.3

Сухое гранулирование

и

опудривание

гранулята

ТП.3.

Кт, Кх

Получение массы

для таблетирования

Влага Потери

ТП.4.1Таблетирование и

обеспыливание

ТП.4.2

Переработка

некондиционных

таблеток

ТП.4.

Кт, Кх

Таблетирование и

обеспыливание

ТП.5.1

Приготовление

раствора для покрытия

оболочкой

ТП.5

Кт, Кх

Покрытие таблеток

оболочкой

Влага Потери

УМО. 6.1. Фасовка в полимерные

банки

Потери

УМО. 6.

Кт, КхФасовка и упаковка

На стадию ТП.3.ПО.7.

Кт, Кх

Переработка

используемых отходов

На склад готовой

продукции Потери

Рисунок 4.5. Технологическая схема производства таблеток

левофлоксацина 500 мг

Процесс получения таблеток состоит из 4 стадий:

121

1. Подготовка сырья.

2. Получение массы для таблетирования.

3. Таблетирование и отбраковка.

4. Расфасовка и упаковка.

1. На стадии подготовки сырья левофлоксацина, клуцеля, эксплозоля,

микрокристаллическую целлюлозу - 102, эксплоцеля, кальция карбоната,

магния стеарата просеивают через сито Nо 38 с размером отверстий 0,15мм

(ГОСТ 4403-77), в вытяжном шкафу, при включенной приточно-вытяжной

вентиляции. Готовим гранулирующую жидкость – вода очищенная.

2.1. Подготовленные компоненты массы для таблетирования:

Левофлоксацин (512,46 г), Микрокристаллическая целлюлоза (29 г), Кальция

карбонат (29 г), Гидроксипропилцеллюлоза (6,2 г), Крахмал натрия гликолят

(18,6 г); отвешивают на электронных весах (В-6) и загружают в смеситель

лопастной (СЛ-7) для смешения. Смесь перемешивают в течение 10 минут

при скорости вращения лопастей 110 оборотов в минуту. По истечении этого

времени массу увлажняют ~135 г воды очищенной и перемешивают для

равномерного распределения увлажнителя с той же скоростью вращения

лопастей (увлажнитель приливают по частям: ~ по 33,75 г через каждые 2,5

минуты перемешивания).

2.2. Влажную массу с помощью совка переносят в гранулятор

лопастной (ГЛ-8) с диаметром отверстий цилиндрической сетки 1 мм.

Полученные гранулы рассыпают ровным слоем 1,5 - 2 см на поддоны.

2.3. Сушка гранулята производится в сушильном шкафу (СШ-5) при

температуре 45° ± 5°С до остаточной влажности 1,5 - 3 %.

2.4. Сухое гранулирование осуществляют в лопастном грануляторе

(ГЛ-8) с диаметром отверстий цилиндрической сетки 1 мм. Полученный

сухой гранулят взвешивают на тарирных весах (В-10) и передают на

опудривание. Масса сухого гранулята - 591,14 г.

122

2.5. Операцию опудривания осуществляют в предварительно

оттарированной стеклянной банке для смешения (ОП-11), куда загружают

сухие гранулы (591,14 г), Кроскармелоза натрия (17,73 г), Магния стеарат

(5,91 г). Процесс длится около 5 минут. От каждой серии гранулята отбирают

среднюю пробу (10,0 г) для определения количественного содержания

Левофлоксацина. После получения положительных результатов

опудренныйгранулят передают на таблетирование.

3.1. Массу для таблетирования прессуют в таблетки по 0,620 г в

соответствии с ОСТ 64-072-89 на таблеточном прессе "Korsch" (ТП-12),

пуансоны сферические, диаметр 11 мм.

Опудренный гранулят переносят в загрузочный бункер машины и

заполняют её по мере расходования гранулята.

Вручную проводят установку массы, измеряют массу таблеток

наторсионныхвесах. Затем устанавливают давление, проверяют прочность

таблеток. После 3-4 оборотов пресса проверяют качество первых таблеток.

Проводят внешний осмотр, поверхность таблеток должна быть ровной и

однородной, таблетки не должны крошиться. Если таблетки не

удовлетворяют требованиям по массе, прочности на сжатие и распадаемости,

проводят регуляцию массы (по глубине заполнения матрицы), давления.

Убедившись в удовлетворительном качестве таблеток, приступают к

прессованию.

Полученные кондиционные таблетки обеспыливают на металлическом

сите с размером отверстий 3-4 мм. Взвешивают полученные обеспыленные

таблетки и помещают в сухую, чистую, заранее взвешенную, стеклянную

емкость с наклеенной этикеткой, на которой указывают: наименование

препарата, серию, дату, техническую массу.Полученные таблетки передают

на анализ в количестве 20 штук.

По окончании таблетирования, таблетки отсеивают от пыли и

возможного брака. Некондиционные таблетки передают на операцию сухого

123

гранулирования.

3.2. Нанесение пленочного покрытия

Нанесение пленочного покрытия проводили в лабораторной установке

псевдоожиженного слоя Uni-glatt (производства Германия) следующим

образом: на обеспыленные, прогретые ядра таблеток наносили покрытие до

требуемого прироста массы (5 - 8%).

Режим нанесения оболочки 20% суспензии Опадрай:

температура воздуха на входе – 60 ±1 0С;

на выходе – 38 ±1 0С;

заслонка на входе – в положении 90;

на выходе – в положении 90;

давление – 0,25 ± 0,05 МПа;

время распыления суспензии –30 мин;

предварительный прогрев ядер – 10 мин;

масса ядер – 500 г;

окончательная сушка ядер – 10 мин;

скорость поступления суспензии в форсунку – 8 ± 1 мл/мин.

4. Фасуют по 10 штук в полимерные банки с винтовой горловиной и

навинчиваемой крышкой для лекарственных средств и витаминов

4.4. Разработка методик анализа и установление норм качества

таблеток левофлоксацина

4.4.1. Внешний вид

Таблетки по внешнему виду были круглыми, двояковыпуклыми,

покрытыми оболочкой светло-оранжевого цвета. По внешнему виду

соответствовали требованиям ГФ XI, вып.2, с.154.

4.4.2.Подлинность

124

Определение подлинности таблеток левофлоксацина мы предложили

проводить методами УФ-спектроскопии, ВЭЖХ и поляриметрии.

Для выбора условий определения подлинности таблеток с помощью

УФ-спектроскопии нами были использованы данные, полученные при

анализе субстанции этим методом.Извлечения левофлоксацина из растертых

таблеток проводили 0,1М раствором хлористоводородной кислоты, рабочая

концентрация левофлоксацина – 0,0006%.

Нами были получены УФ-спектры извлечений из плацебо

левофлоксацина (таблетки, покрытые оболочкой), таблеточной массы

левофлоксацина (без оболочки) и таблеток левофлоксацина (покрытых

оболочкой) в 0,1 М хлористоводородной кислоте. Извлечения из таблеточной

массы и таблеток левофлоксацина готовили так, чтобы концентрация

левофлоксацина в растворах составляла около 0,006 мг/мл, извлечение из

плацебо готовили аналогично извлечениям из таблеточной массы и таблеток.

УФ-спектры извлеченийпредставлены на Рисунке 4.6. Также на

рисунке представлен УФ-спектр раствора субстанции левофлоксацина для

сравнения.

4.6.а 4.6.б

125

4.6.в 4.6.г

Рисунок 4.6 УФ-спектры извлечений из плацебо (4.1.а), таблеточной

массы (4.6.б), таблеток (4.6.в) и раствора субстанции левофлоксацина (4.6.г)

в 0,1М хлористоводородной кислоте

Положение максимумов УФ-спектров извлечений из таблеточной

массы и таблеток левофлоксацина совпадали с положением максимумов УФ-

спектров раствора субстанции левофлоксацина. Наиболее выраженный

максимум находился в пределах 294 ± 1 нм.

Извлечение из плацебо, приготовленное так же, как и извлечения из

таблеточной массы и таблеток, в УФ-области спектра электромагнитное

излучение практически не поглощало (Рисунок 4.6 а), следовательно,

плацебо качественному и количественному анализу левофлоксацина в

таблетках не мешает.

УФ-спектры извлечений из всех серийных образцов таблеток в области

длин волн от 260 до 350 нм имели один максимум при 294 ± 2 нм

(фактически 294 ± 1 нм).

При определении удельного вращения для извлечения левофлоксацина

из таблеток использовали метанол, как и при анализе субстанции.

Для определения удельного вращения 10 таблеток измельчали до

получения однородной массы. Около 0,640 г порошка таблеток переносили в

мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляли около 70 мл метанола и

подвергали действию ультразвука в течение 10 мин, доводили содержимое

126

мерной колбы до метки метанолом, перемешивали. Затем отбирали около 15

мл, фильтровали через фильтр «Миллипор» с диаметром пор 0,45 мкм.

Измеряли угол вращения полученного раствора при длине волны линии

D спектра натрия (589,3 нм). Толщина слоя – 10 см. Угол вращения раствора

левофлоксацина корректировали по углу вращения растворителя (метанола).

Величину удельного вращения рассчитывали по следующей формуле:

(α – α0) х 100 х mср

[α] = --------------------------- , где

а1 х A

α – угол вращения испытуемого раствора, град;

α0 – угол вращения растворителя, град;

mср – средняя масса таблетки, г;

а1 – масса навески порошка таблеток, г;

А – содержание левофлоксацина в одной таблетке, г

Удельное вращение таблеток левофлоксацина составило - 99°.

Извлечение из плацебо, приготовленное так же, как и извлечение из

таблеточной массы, оптической активностью не обладало. Вспомогательные

вещества не мешали определению угла вращения левофлоксацина в

таблетках.

Удельное вращение всех образцов таблеток составляло от -90 до -111

(º)мл/(дм х г).

Идентификацию левофлоксацина методом ВЭЖХ мы проводили в

условиях определения посторонних примесей по соответствию времени

удерживания пика левофлоксацина на хроматограмме испытуемого раствора

времени удерживания пика левофлоксацина на хроматограмме раствора

стандарта.

Приготовление испытуемого раствора: 1 мл испытуемого раствора,

приготовленного для определения посторонних примесей (концентрация

левофлоксацина 0,4 мг/мл) помещали в мерную колбу вместимостью 20 мл и

127

доводили объем раствора в колбе до метки смесью ацетонитрил – вода (1:10),

тщательно перемешивали (концентрация левофлоксацина 0,02 мг/мл).

Приготовление раствора сравнения: 1 мл раствора А СО

левофлоксацина (концентрация левофлоксацина 0,4 мг/мл) помещали в

мерную колбу вместимостью 20 мл и доводили объем раствора в колбе до

метки смесью ацетонитрил – вода (1:10), тщательно перемешивали

(концентрация левофлоксацина 0,02 мг/мл).

Испытуемый раствор и раствор сравнения хроматографировали в

условиях определения посторонних примесей, получая по 5 хроматограмм

каждого раствора.

4.4.3. Средняя масса и отклонения от средней масссы

Средняя масса и отклонения от средней массы всех образцов таблеток

составлялиот 0,613 г до 0,678 г (0,645 г ± 5%).

Отклонения от средней массы соответствовали требованиям

Государственной фармакопеи.

4.4.4. Распадаемость.

Определение распадаемости проводили на лабораторном

идентификаторе процесса распадаемости согласно требованиям ГФ СССР XI

издания, том 2.

Время рападаемости всех образцов таблеток не превышало 30 мин и

фактически составляло не более 20 мин.

4.4.5.Посторонние примеси.

Определение посторонних примесей в таблетках левофлоксацина было

проведено методом ВЭЖХ в условиях, выбранных для субстанции

левофлоксацина (см. главу 3, п. 3.2.1).

128

Для извлечения левофлоксацина и примесей из таблеток использовали

смесь ацетонитрил – вода (1:10), рабочая концентрация левофлоксацина в

растворе – 0,4 мг/мл, аналитическая длина волны – 280 нм.

Ранее нами было показано, что в выбранных хроматографических

условиях наблюдается разделение левофлоксацина и его основных

технологических, а также некоторых неидентифицированных примесей (см.

главу 3, п.3.2.1). Были определены диапазоны линейности и пределы

обнаружения идентифицированных примесей и левофлоксацина.

Также нами показано, что в выбранных условиях плацебо не мешает

определению левофлоксацина, поскольку его компоненты практически не

поглощают УФ-излучение при 280 нм (Рисунок 4.8).

Хроматограмма извлечения из таблеток левофоксацина представлена

на Рисунке 4.9.

Рисунок 4.8.Хроматограма плацебо левофлоксацина

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 мин

0.8 09 mV

ch1

12

3

129

Рис. 4.9. Хроматограмма извлечения из таблеток левофлоксацина

Нами была проведена оценка правильности и прецизионности

методики на модельных смесях свидетелей технологических примесей,

плацебо и субстанции левофлоксацина. Поскольку единственной

технологической примесью, обнаруженной в субстанции, является примесь

А, модельные смеси были приготовлены только с этой примесью.

Концентрация левофлоксацина в модельных смесях составляла около 0,4

мг/мл, примеси А - 0,004 и 0,002 мг/мл, плацебо прибавляли в количестве,

эквивалентном содержанию в таблетке.

Результаты анализа представлены в Таблице 4.10.

Таблица 4.10

Результаты определения содержания примеси А левофлоксацина в

модельных смесях с плацебо таблеток

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 мин

0.656 mV

ch1

1 2

3

4

5

7

№

п/п

Заданная

концентрация

примеси, мг/мл

Обнаружено

примеси,

мг/мл

Обнаружено примеси

(в % от заданной

концентрации)

Метрологические

характеристики,

Р=95%

1 0,00412 0,00405 98,30 Хср = 100,70

S = 2,01

SХср = 0,82

ΔХср = 2,13

ε = 2,12%

2 0,00402 0,00398 99,00

3 0,00424 0,00414 97,64

4 0,00198 0,00203 102,53

5 0,00232 0,00234 100,86

6 0,00206 0,00200 97,09

130

Как видно из таблицы, относительная ошибка определения содержания

примеси А в модельных смесях не превышает 3%.

С помощью разработанной методики нами было определено

содержание посторонних примесей в серийных образцах таблеток

левофлоксацина.

Приготовление испытуемого раствора проводили следующим образом:

около 0,026 г (точная навеска) растертых таблеток левофлоксацина

помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют около 30 мл

смеси ацетонитрил – вода (1:10), помещают на ультразвуковую баню на 10

мин, доводят до метки тем же растворителем, перемешивают, фильтруют

через фильтр «Миллипор» с диаметром пор 0,45 мкм (концентрация

левофлоксацина около 0,4 мг/мл).

Приготовление раствора сравнения: около 0,01 г стандартного образца

(СО) левофлоксацина (точная навеска) помещают в мерную колбу

вместимостью 25 мл, растворяют в 2 мл ацетонитрила, доводят объем

раствора до метки смесью ацетонитрил – вода (1:10), перемешивают (раствор

А СО). 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью

100 мл, доводят объем раствора до метки смесью ацетонитрил – вода (1:10),

перемешивают (раствор Б СО).

Проверку пригодности хроматографической системы проводили так

же, как и при анализе субстанции.

Содержание единичной примеси (Х, %) рассчитывали по следующей

формуле:

S1 х а0 х 50 х 1 х mср S1 х а0 х mср х 2

Х = -------------------------------- х 100 = ---------------------------, где

S0 х а1 х С х 25 х 100 S0 х а1 х С

S1 – площадь единичной примеси на хроматограмме испытуемого

раствора;

а1 – масса навески растертых таблеток левофлоксацина, г;

S0 – площадь левофлоксацина на хроматограмме раствора СО;

131

а0 – масса навески СО левофлоксацина, г

mср – средняя масса таблетки, г;

С – содержание левофлоксацина в одной таблетке, г.

Содержание посторонних примесей в образцах таблеток представлено

в Таблице 4.11.

Таблица 4.11

Результаты определения содержания посторонних примесей в таблетках

левофлоксацина

Номер

серии

Относительные времена удерживания примесей и их содержание, %

0,36 0,48 0,61 0,68 0,83 0,89 0,95

(примесь

А)

1,22 2,14

(эфир

B)

2,52

(примесь

В)

Сумма

примесей

04.10.10 0,02 0,01 --- 0,06 --- 0,02 0,05 0,05 --- --- 0,21

05.10.10 0,01 0,01 --- 0,05 --- --- 0,09 0,02 --- --- 0,18

06.10.10 0,02 0,01 0,02 0,04 --- 0,01 0,08 0,02 -- --- 0,20

Как видно из данных, представленных в таблице, содержание

единичной примеси во всех серийных образцах таблеток не превышало 0,1%,

суммарное содержание примесей было не более 0,3%. Примеси В и ее эфира

в таблетках, как и в субстанции, обнаружено не было, содержание примеси А

не превышало 0,1%.

4.4.6. Количественное определение

Для количественного определения левофлоксацина в таблетках был

выбран метод УФ-спектрофотометрии. Разработанная нами методика УФ-

спектрофотометрии менее специфична, чем методика ВЭЖХ, однако ее

преимущество заключается в том, что она не требует значительных затрат

времени и материальных средств. Поскольку содержание посторонних

примесей в образцах таблеток было очень незначительно, мы посчитали

возможным проведение количественного анализа с помощью метода УФ-

спектрофотометрии.

132

Извлечение левофлоксацина из таблеток проводили так же, как и при

определении подлинности: в качестве экстрагента использовали 0,1М

раствор хлористоводородной кислоты, рабочая длина волны соответствовала

наиболее выраженному максимуму УФ-спектров левофлоксацина – 294 нм.

Ранее нами было показано, что вспомогательные вещества,

содержащиеся в таблетке, количественному определению левофлоксацина не

мешают (см. п.4.3.2).

На модельных смесях левофлоксацина и плацебо в 0,1М

хлористоводородной кислоте было показано, что линейная зависимость

оптической плотности от концентрации находится в интервале от 0,003 до

0,01 мг/мл, коэффициент корреляции 0,999 (Рисунок 4.10).

В качестве рабочей была выбрана концентрация 0,0075 мг/мл,

оптическая плотность растворов при этой концентрации составляла около

0,64.

Рисунок 4.10. Зависимость оптической плотности от концентрации растворов

левофлоксацина в 0,1 М хлористоводородной кислоте

Для оценки правильности и прецизионности были приготовлены

модельные смеси левофлоксацина и плацебо в том соотношении, в котором

они содержатся в таблетке.

y = 84.735x + 0.0046R² = 0.9992

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

1

0 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012

Оп

ти

че

ска

я п

ло

тн

ость

, е

д

Концентрация, мг/мл

133

Для этого около 0,05 г левофлоксацина (точная навеска) и около 0,014 г

плацебо помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляли около

80 мл 0,1М раствора хлористоводородной кислоты, встряхивали в течение 10

мин, доводили объем до метки тем же растворителем, перемешивали,

фильтровали через фильтр «Миллипор» с диаметром пор 0,45 мкм.

Полученный раствор (15 мл) помещали в мерную колбу вместимостью

100 мл и доводили объем раствора до метки 0,1М хлористоводородной

кислотой. Затем 1 мл полученного раствора помещали в мерную колбу

вместимостью 10 мл, доводили объем раствора до метки 0,1М

хлористоводородной кислотой, перемешивали (концентрация раствора около

0,0075 мг/мл).

Параллельно готовили раствор СО левофлоксацина с той же

концентрацией (0,0075 мг/мл).

Измеряли оптическую плотность растворов при 294 нм, массу

левофлоксацина в испытуемых растворах рассчитывали по следующей

формуле:

А1 х а0

m = ------------- , где

А0

А1 – оптическая плотность испытуемого раствора;

А0 – оптическая плотность раствора СО;

а0 – масса навески СО, г

В Таблице 4.12 представлены результаты количественного анализа

модельных смесей.

134

Таблица 4.12

Результаты анализа модельных смесей левофлоксацина и плацебо

Взято

левофлок-

сацина, г

(m1)

Найдено

левофлок

сацина, г

(m2)

Найдено

левофлок-

сацина, %

(X=m2х100/m1)

Абсолютная

ошибка, г

(d=m2 - m1)

Относительная

ошибка, %

(Y=dх100/m1)

Метрологические

характеристики

(P=95%, n=9)

0,0493 0,0498 101,01 + 0,0005 1,01

Хср=100,20%

S=1,21

Sxcp=0,46

ΔX=1,08

ε=1,08%

0,0491 0,0496 101,02 + 0,0005 1,02

0,0502 0,0498 99,20 - 0,0004 0,80

0,0517 0,0527 101,93 + 0,0010 1,93

0,0498 0,0496 99,60 - 0,0002 0,40

0,0506 0,0498 98,42 - 0,0008 1,58

0,0526 0,0527 100,19 + 0,0001 0,19

Как видно из результатов, представленных в таблице, относительная

ошибка однократного определения не превышала 2%.

На основании проведенных исследований была методика

количественного определения левофлоксацина в таблетках.

Приготовление испытуемых растворов: около 0,645 г (точная навеска)

порошка растертых таблеток левофлоксацина помещают в мерную колбу

вместимостью 100 мл, прибавляют около 80 мл 0,1М раствора кислоты

хлористоводородной и помещают на ультразвуковую баню на 20 мин. Затем

доводят объем содержимого колбы до метки, перемешивают и фильтруют

через фильтр «Миллипор» с диаметром пор 0,45 мкм.

15 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью

100 мл, доводят объем раствора до метки 0,1М раствором кислоты

хлористоводородной, перемешивают.

1 полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100

мл, доводят объем раствора до метки 0,1М раствором кислоты

хлористоводородной, перемешивают.

135

Приготовления раствора СО левофлоксацина: около 0,075 г (точная

навеска) стандартного образца левофлоксацина гемигидрата помещают в

мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 80 мл 0,1М раствора

кислоты хлористоводородной, перемешивают.

1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью

100 мл, доводят объем раствора до метки 0,1М раствором кислоты

хлористоводородной, перемешивают (концентрация раствора СО около

0,0075 мг/мл).

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора и раствора СО

при 294 нм.

Расчет количественного содержания левофлоксацина безводного на

одну таблетку левофлоксацина проводят по следующей формуле:

А1 х а0 х mср х Px 0,9757 х 1 х 100 х 100 х 100

Х = -------------------------------------------------------------- =

А0 х а1 х 100 х 100 х 15 х 1 х 100

А1 х а0 х Р х 0,9757 х mср

= ---------------------------------------, где

А0 х а1 х 15

А1 – оптическая плотность испытуемого раствора;

А0 – оптическая плотность раствора СО;

а1 – масса навески растертых таблеток;

а0 – масса навески СО;

mср – средняя масса таблетки;

P – содержание левофлоксацина гемигидрата в стандартном образце, %

0,9757 – коэффициент пересчета массы левофлоксацина гемигидрата на

массу левофлоксацина безводного.

Содержание левофлоксацина в одной таблетке должно соответствовать

требованиям Государственной фармакопеи и составлять от 0,475 г до 0,525 г

(0,500 г ± 5%).

136

С помощью разработанной методики был проведен анализ серийных

образцов таблеток левофлоксацина.

Значения количественного содержания левофлоксацина во всех

образцах таблеток лежало в пределах интервала от 0,499 до 0,507 г/т

(Таблица 4.13), что соответствовало требованиям Государственной

фармакопеи.

Таблица 4.13

Результаты количественного определения таблеток левофлоксацина

Номер серии 04.10.10 05.10.10 06.10.10

Содержание, г/т 0,499 0,501 0,507

Метрологические

характеристики

(Р = 95%, n = 5)

S = 0,007 X =0,009 =1,74%

S = 0,004 X =0,005 =0,98%

S = 0,005 X =0,006 =1,24 %

4.4.7. Разработка методики определения показателя «Растворение»

Поскольку определение показателя «Растворение» подразумевает

анализ большого количества проб, в качестве метода количественного

определения нами был выбран метод УФ-спектрофотометрии [31, 36].

Исследования проводили в соответствии с требованиями ОФС 42 0003-

04 на приборе «Лопастная мешалка», скорость вращения – 50 об/мин,

температура – 37 ± 1°С. В качестве среды растворения был выбран 0,1М

раствор хлористоводородной кислоты, объем среды растворения 900 мл.

Определение степени высвобождения левофлоксацина из таблеток

проводили при длине волны 294 нм, как и при количественном определении.

На Рисунке 4.11 показана зависимость степени высвобождения

левофлоксацина из таблеток от времени анализа.

Как видно из представленного рисунка, уже через 20 мин степень

высвобождения составила более 90%.

137

Рисунок 4.11. Зависимость степени высвобождения левофлоксацина из

таблеток от времени отбора пробы

На основании полученных данных нами была разработана следующая

методика:

В каждый из сосудов прибора «Лопастная мешалка» помещают по

одной таблетке.

Через 30 минут из каждого сосуда отбирают по 15 мл раствора,

фильтруют через фильтр «Миллипор» с диаметром пор 0,45 мкм, отбрасывая

первые 5 мл фильтрата.

Приготовление испытуемого раствора: 1 мл фильтрата переносят в

мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора до метки 0,1М

раствором хлористоводородной кислоты, перемешивают.

Приготовление раствора СО левофлоксацина: 0,056 мг стандартного

образца левофлоксацина гемигидрата (USPRS) (точная навеска) помещают в

мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 70 мл 0,1М раствора

хлористоводородной кислоты, доводят объем раствора до метки тем же

растворителем, перемешивают. 1 мл полученного раствора переносят в

мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора до метки 0,1М

хлористоводородной кислотой, перемешивают.

0

20

40

60

80

100

120

0 5 10 15 20 25 30 35

Время, мин

Вы

св

об

ож

ден

ие, %

Таблетка 1 Таблетка 2

138

Измеряют оптическую плотность испытуемых растворов и раствора СО

на спектрофотометре при длине волны 294 нм в кювете с толщиной слоя 10

мм, используя в качестве раствора сравнения 0,1М раствор

хлористоводородной кислоты.

Содержание левофлоксацина, перешедшее в раствор (%), определяли

по следующей формуле:

А1 х а0 х 0,9757 х 900 х 100 х 1 А1 х а0 х 0,9757 х 900

Х = --------------------------------------------х 100% = ------------------------------, где:

А0 х С х 1 х 100 х 100 А0 х С

А1 – оптическая плотность испытуемого раствора;

А0 – оптическая плотность раствора СО;

а0 – масса навески СО, г;

С – содержание безводного левофлоксацина в одной таблетке, г

0,9757 - коэффициент пересчета массы левофлоксацина гемигидрата на

массу левофлоксацина безводного.

Через 30 мин в раствор должно перейти не менее 80% левофлоксацина.

По разработанной методике был проведен анализ серийных образцов

таблеток левофлоксацина. Для всех серийных образцов таблеток через 30

мин степень высвобождения составила более 80% (от 92 до 103%).

4.4.8. Установление сроков годности таблеток левофлоксацина

Изучение стабильности таблеток левофлоксацина при хранении

проводили методом «ускоренного старения» при температуре 40 ºС.

Препарат хранили в полимерных банках с навинчиваемыми

полимерными крышками.

Качество таблеток по истечении срока, эквивалентного 2 годам

хранения в естественных условиях не изменилось (Таблица 4.14).

139

Таблица 4.14

Результаты исследований стабильности таблеток левофлоксацина 500 мг, покрытых оболочкой, при выпуске и после

хранения методом «ускоренного старения» при 40 0С

№ серии

Срок

хранения

Показатели качества

Описание

Средняя масса

(г), отклонение

от средней

массы (%)

Подлинность

1. СФМ

2. ВЭЖХ

3. удельное вращение

Распада

-емость,

мин

Раство-

рение,

%

Посторонние примеси, % (ВЭЖХ)

Количествен-

ное определе-

ние, г (СФМ)

04.10.10

на момент

выпуска

Круглые двояковыпуклые

таблетки, покрытые оболочкой

светло-оранжевого цвета

0,642

± 3,3 %

1. Соответствует

2. Соответствует

3. -99,0

18 102,8 Единичной примеси – менее 0,2 %,

сумма примесей – менее 0,5 % 0,499

1 год -//- 0,642

± 5,1 %

1. и 2. Соответствует

3. -99,2 13 101,5

-//- 0,502

2 года -//- 0,642

± 3,7 %

1. и 2. Соответствует 3. -

94,0 15

101,5

-//- 0,498

05.10.10

на момент

выпуска

Круглые двояковыпуклые

таблетки, покрытые оболочкой

светло-оранжевого цвета

0,634

± 4,3 %

1. Соответствует

2. Соответствует

3. -100,1

15

100,3

Единичной примеси – менее 0,2 %,

сумма примесей – менее 0,5 % 0,501

1 год -//- 0,635

± 2,7 %

1. и 2. Соответствует

3. -99,6 16

100,9

-//- 0,498

2 года -//- 0,635

± 2,5 %

1. и 2. Соответствует

3. – 95,4 16

101,6

-//- 0,502

06.10.10

на момент

выпуска

Круглые двояковыпуклые

таблетки, покрытые оболочкой

светло-оранжевого цвета

0,654

± 2,7 %

1. Соответствует

2. Соответствует

3.-99,4

13

99,5

Единичной примеси – менее 0,2 %,

сумма примесей – менее 0,5 % 0,507

1 год -//- 0,654

± 4,1 %

1. и 2. Соответствует

3. -99,8 13

100,6

-//-

0,509

2 года -//- 0,654

± 4,3 %

1. и 2. Соответствует

3. – 99,3 15

100,1

-//-

0,505

140

4.4.9 Установление норм качества таблеток левофлоксацина

На основании результатов проведенных исследований нами были

установлены нормы качества таблеток левофлоксацина 500 мг, покрытых

оболочкой (Таблица 4.15).

Таблица 4.15

Методы анализа и нормы качества таблеток левофлоксацина 500 мг,

покрытых оболочкой

Показатели Метод испытания Нормы

Описание Визуально Круглые двояковыпуклые таблетки,

покрытые оболочкой светло-оранжевого

цвета

Подлинность УФ-спектроскопия В УФ-спектре извлечения из таблеток в 0,1М

растворе HCl в области от 200 до 350 нм

должны присутствовать три максимума

поглощения при 227±0,2 нм, 294±0,2 нм и

327±0,2 нм

ВЭЖХ Времена удерживания пиков левофлоксацина на

хроматограммах испытуемого и стандартного

растворов должны совпадать

Удельное вращение От – 85 до – 115 °

Средняя масса ГФ ХI, вып.2, с.154 От 0,613 г до 0,678 г(0,645 г ± 5%)

Отклонение от

средней массы

ГФ ХI, вып.2, с.154

18/20: 5%; 2/20: 15%

Распадаемость ГФ ХI, вып.2, с.154 Не более 30 мин

Посторонние

примеси

ВЭЖХ Единичной примеси: не более 0,2%;

Сумма примесей: не более 0,5%

Микробиологичес-

кая чистота

ГФ ХII, часть 1, с. 160 Категория 3А

Растворение ГФ ХI, вып.2, с.154 и

ОФС 42-0003-04,

УФ-

спектрофотометрия

Не менее 80% за 30 минут

Количественное

определение

УФ-

спектрофотометрия

от 0,475 г до 0,525 г(0,500 г ± 5%)

Хранение В защищенном от света месте при температуре не выше 25 °С

Срок годности 2 года

141

ВЫВОДЫ:

1. Подобраны вспомагательные вещества для приготовления

таблеток левофлоксацина методом влажного гранулирования, с помощью

оценки их влияния на технологические характеристики таблеточной массы и

таблеток: сыпучесть, насыпную плотность, прочность на сжатие и истирание,

распадаемость. Оптимизацию состава проводили с использованием

дисперсионного анализа. Исходя из полученных данных, наиболее

оптимальным признан состав, где в качестве наполнителя выбрана МКЦ,

применение которого в качестве наполнителя показывает оптимальное

соотношение таких показателей как: сыпучесть, прочность на истирание и

прочность на сжатие.

2. Определены фармакопейные показатели качества, изучены

спектральные и хроматографические характеристики таблеток

левофлоксацина. На основании проведенных исследований разработаны

методики определения подлинности (методами УФ-спектроскопии, ВЭЖХ и

поляриметрии), посторонних примесей (методом ВЭЖХ) и количественного

определения (методом УФ-спектрофотометрии).

3. Разработана методика определения показателя «Растворение» для

таблеток левофлоксацина. Показано, что за 30 мин в среду растворения

переходит более 80% действующего вещества. Определена кинетика

растворения разработанных таблеток левофлоксацина и препарата сравнения

«Таваник». Показано, что профили растворения этих препаратов

эквивалентны

4. Изучена стабильность таблеток левофлоксацина при хранении

методом «ускоренного старения». Показано, что в течение срока,

эквивалентного 2 годам хранения в естественных условиях качество

препарата не изменяется.

5. Установлены нормы качества таблеток левофлоксацина 500 мг,

покрытых оболочкой. Разработан проект НД на лекарственную форму.

142

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Изучены физико-химические свойства и спектральные характеристики

субстанции левофлоксацина, синтезированной по оригинальному способу,

методами ИК-, УФ- и ПМР-спектроскопии. Показана возможность

применения методов ИК-спектроскопии и УФ-спектроскопии для контроля

качества субстанции.

2. Изучена хроматографическая подвижность левофлоксацина и

свидетелей его технологических примесей, разработаны методики

определения посторонних примесей и R-офлоксацина в субстанции методом

ВЭЖХ. Определено содержание остаточных органических растворителей в

субстанции методом ГЖХ. Показано, что содержание единичной примеси и

R-офлоксацина в субстанции не превышает 0,2 %, а сумма примесей – 0,5 %.

В качестве остаточного органического растворителя в серийных образцах

субстанции присутствовал этиловый спирт в содержании не более 0,2%.

3. Разработаны методики количественного определения субстанции

левофлоксацина с помощью методов титрования в неводных средах и ВЭЖХ

с применением стандартного образца левофлоксацина (USPRS). Показано,

что применение методики титрования позволяет снизить относительную

ошибку количественного определения по сравнению с методикой ВЭЖХ.

4. Изучены технологические характеристики субстанции,

синтезированной по оригинальному способу, определена форма и размер

частиц субстанции левофлоксацина методом оптической микроскопии,

проведен выбор вспомогательных веществ с использованием

многофакторного дисперсионного анализа, обоснован состав таблеток,

полученных влажным гранулированием.

Разработана рациональная технология получения таблеток на основе

левофлоксацина.

143

5. Определена кинетика растворения разработанных таблеток

левофлоксацина и препарата сравнения «Таваник». Показано, что профили

растворения этих препаратов эквивалентны.

6. Определены основные фармакопейные показатели качества таблеток

левофлоксацина. Разработаны методики определения подлинности

(методами УФ-спектроскопии и ВЭЖХ), посторонних примесей (методом

ВЭЖХ), количественного определения таблеток левоклоксацина (методом

УФ-спектрофотометрии). Показано, что содержание единичной примеси в

таблетках не превышает 0,2%, а суммарное содержание примесей – 0,5%.

Содержание левофлоксацина в таблетках соответствовало требованиям ГФ

СССР XI издания.

7. Изучена стабильность субстанции и таблеток левофлоксацина при

хранении методом «ускоренного старения» и показано, что качество

субстанции и таблеток практически не изменяется в течение срока,

эквивалентного 2 годам хранения в естественных условиях. Установлены

нормы качества субстанции и таблеток левофлоксацина, разработаны

проекты фармакопейных статей предприятия на субстанцию и таблетки.

Разработан лабораторный технологический регламент на производство

таблеток левофлоксацина 500 мг, покрытых оболочкой.

144

Список литературы:

1. Адлер, Ю. П. Планирование эксперимента при поиске оптимальных

условий [Текст] / Ю. П. Адлер, Е. В. Марков, Ю. В. Грановский. – М. :

Наука, 1976. – 279 с.

2. Алексеев, К. В. Вспомогательные вещества в технологии таблеток с

модифицированным высвобождением [Текст] / К. В. Алексеев, Е. В.

Блынская, С. А. Сизяков [и др.] // Фармация, 2009. - №6. - С. 49–55.

3. Алексеев, К. В. Лекарственные формы с модифицированным

высвобождением на основе пеллет [Текст] / К. В. Алексеев [и др.] //

Фармация. – 2012, № 4. - С. 54

4. Алексеев, К. В. Обоснование выбора пленочных покрытий для

таблеток с модифицированным высвобождением [Текст] / К. В.

Алексеев, Е. В. Блынская, А. Б. Машутин [и др.] // Человек и

лекарство : материалы конференции «Стратегия развития российской

фармации» в рамках ХV Российского национального конгресса. М. -

2008. - С. 134–136.

5. Алексеев, К. В. Полимеры в технологии создания лекарственных форм

с модифицированным высвобождением [Текст] / К. В. Алексеев, Е. В.

Блынская, В. К. Алексеев [и др.] // Российский химический журнал,

2010. – Т. 54, № 6. – С. 87–93.

6. Алексеев, К. В. Современные пленочные покрытия в технологии

таблеток [Текст] / К. В. Алексеев, С. А. Сизяков, Е. В. Блынская [и

др.] // Фармация. – 2009. – № 8. – С. 45–49.

7. Алексеев, К. В. Технологические аспекты производства современных

твердых лекарственных форм [Текст] / К. В. Алексеев [и др.] //

145

Фармацевтические технологии и упаковка. – М. : «Медицинский

бизнес», 2005. – С. 165–176.

8. Алексеев, К. В. Технология повышения абсорбции лекарственных

веществ пептидной и протеиновой природы при оральном применении

[Текст] / К. В. Алексеев, Н. В. Тихонова, Е. В. Блынская, К. Г.

Турчинская, Н. А. Уваров, Е. Е. Лазарева // Вестник новых

медицинских технологий. – 2011. – Т. XVIII, № 4. – С. 123–127.

9. Алексеев, К. В. Технология повышения биологической и

фармацевтической доступности лекарственных веществ [Текст] / К. В.

Алексеев, Н. В. Тихонова, Е. В. Блынская, Е. Ю. Карбушева, К. Г.

Турчинская, А. С. Михеева, В. К. Алексеев, Н. А. Уваров // Вестник

новых медицинских технологий. – 2012. – Т. 19, №4 – С. 43–47.

10. Алексеев, К. В. Технология самоэмульгирующихся систем доставки

лекарственных веществ [Текст] / К. В. Алексеев, К. Г. Турчинская, Е.

В. Блынская, Н. В. Тихонова // Вестник новых медицинских

технологий. – 2014. – Т. 21, №1. – С. 128–133.

11. Алексеев, К. В. Технология повышения биологической и

фармацевтической доступности лекарственных веществ [Текст] / К. В.

Алексеев, Н. В. Тихонова, Е. В. Блынская, Е. Ю. Карбушева, К. Г.

Турчинская, А. С. Михеева, В. К. Алексеев, Н.А. Уваров [Текст] //

Вестник новых медицинских технологий, 2012. – Т. 19, № 4 – С. 43–

47.

12. Бардаков, А. И. Биофармацевтические подходы в разработке и оценке

готовых лекарственных форм : учебное пособие [Текст] / А. И.

Бардаков, А. А. Литвин, А. И. Сливкин ; под ред. И. И. Краснюка. –

Воронеж : ИПЦ ВГУ, 2010. – 128 с.

13. Беликов, В. Г. Применение математического планирования и

обработка результатов эксперимента в фармации [Текст] / В. Г.

146

Беликов, В. Д. Пономарев, Н. И. Коковкин-Щербак. – М. : Медицина,

1973. – С. 232–233.

14. Бекчанов, Х. К. Оптимизация состава и разработка технологии

таблеток «Мумифер» с применением метода математического

планирования эксперимента [Текст] / Х. К. Бекчанок, А. М. Усоббаев,

М. У. Усоббаев // Химико-фармацевтический журнал. – 2005. – Т. 39,

№ 5. – С. 46–48.

15. Буданов, С. В. Первый «дыхательный» фторхинолон в терапии

бактериальных инфекций. Принцип фармакодинамики и оптимизация

режимов применения [Текст] / С. В. Буданов, А. Н. Васильев, Л. Б.

Смирнова // Антибиотики и химиотерапия, 2001. – Т. 46, № 7. – С. 38–

46.

16. Воскобойникова, И. В. Современные вспомогательные вещества в

производстве таблеток. Использование высокомолекулярных

соединений для совершенствования лекарственных форм и

оптимизации технологического процесса [Текст] / И. В.

Воскобойникова [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. – 2005.

– Т.39, № 1. – С. 22–27.

17. Государственная фармакопея Российской Федерации XI издание

18. Государственная фармакопея Российской Федерации XII издание /

«Научный центр экспертизы средств медицинского применения», М.:

2008. – 704 с.

19. Демина, Н.Б. Использование современных технологий в создании

пероральных пролонгированных препаратов изосорбида динитрата и

ацилпроизводных фенотиазина [Текст] / Н.Б. Демина, В.А.

Кеменова, Е.В. Великая, В.Л. Багирова // Хим. фарм. Ж, 2003. - Т. З 7

- №5 - С. 13-19.

20. Дорофеев, В. Л. Использование метода УФ-спектрофотометрии для

количественного определения лекарственных средств группы

147

фторхинолонов [Текст] / В. Л. Дорофеев, И. В. Титов, А. П.

Арзамасцев // Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. –

2004. – № 2. – C. 205–209.

21. Дорофеев В. Л. Бетаиноподобная структура и инфракрасные спектры

лекарственных веществ группы фторхинолонов [Текст] / В. Л.

Дорофеев // Химико-фармацевтический журнал. – 2004. – Т. 38, № 12.

– C. 50–53.

22. Дорофеев В.Л. Инфракрасные спектры и строение молекул

лекарственных веществ группы фторхинолонов [Текст] / В.Л.

Дорофеев // Химико-фармацевтический журнал. - 2004. - Т. 38. -

№12. - C.45-49.

23. Дорофеев, В. Л. Выявление фальсифицированных лекарственных

препаратов, содержащих фторхинолоны, с использованием метода ИК

- спектроскопии [Текст] / В. Л. Дорофеев, А. А. Коновалов, В. Ю.

Кочин, А. П. Арзамасцев // Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология.

Фармация. – 2004. – № 2. – C. 183–187.

24. Егошина, Ю. А. Современные вспомогательные вещества в

таблеточном производстве [Текст] / Ю. А. Егошина, Л. А. Поцелуева //

Успехи современного естествознания. – 2009. – № 10. – С. 30–33.

25. Емшанова, С. В. О контроле размера и формы частиц лекарственных

веществ [Текст] / С. В. Емшанова, Н. П. Садчикова, А. П. Зуев //

Химико-фармацевтический журнал. – 2007. – Т. 41, № 1. – С. 41–49.

26. Карбушева, Е. Ю. Оценка реологических свойств фармацевтических

субстанций [Текст] / Е. Ю. Карбушева, А. С. Михеева, К. Г.

Турчинская, Н. В. Тихонова, Е. В. Блынская, К. В. Алексеев //

Материалы XIX Российского национального конгресса «Человек и

лекарство». Сборник тезисов. М. : 2012 – С. 384.

27. Коржавых, Э. А. Номенклатура лекарственных форм : справочное

пособие [Текст] / Э.А. Коржавых // М., 2004. – С. 126.

148

28. Коночкина (Дуденкова), М.Е. Разработка методики определения

остаточных растворителей (ОР) в субстанции тропоксина [Текст] /

М.Е. Коночкина (Дуденкова), Л.Н. Грушевская, Н.И. Авдюнина, Б.М

Пятин // 5-я Международная конференция «Биологические основы

индивидуальной чувствительности к психотропным средствам».

Москва. 2010. - С. 53.

29. Ноников, В. Е. Дифференциальная диагностика и антибактериальная

терапия пневмоний [Текст] / В. Е. Ноников // Consilium Medicum. –

2001. – Т. 3, № 12. – С. 569–574.

30. ОСТ 91500.05.001-00. Стандарты качества лекарственных

средств.Основные положения [Текст]. – Введ. 2001–11–1. – М. : Изд-

во Минздрав РФ, 2001. – 8 с.

31. ОФС 42-0003-04 "Растворение".

32. Падейская, Е.Н. Левофлоксацин (Таваник®) - препарат группы

фторхинолонов для лечения инфекционных заболеваний с широкими

показаниями к применению [Текст] / Е.Н. Падейская // Качественная

клиническая практика. – 2002. – № 2. – С. 80–95.

33. Рощин, Н. И. Псевдоожижение в производстве лекарств. [Текст] / Н.

И. Рощин // М. : Медицина, 1981. – 184 с.

34. Терешкина, О. И. Информация о безопасности вспомогательных

веществ, входящих в лекарственные препараты [Текст] / О. И.

Терешкина, Т. А. Гуськова // Фармация. – 2007. – №6. – С. 6 –9.

35. Титов, И. В. Использование метода УФ-спектрофотометрии для

установления подлинности лекарственных средств группы

фторхинолонов [Текст] / И. В. Титов, В. Л. Дорофеев, А. П.

Арзамасцев // Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. –

2004. – №2. – C. 264–269.

36. Титов, И. В. Использование теста «Растворение» для оценки

препаратов-дженериков ципрофлоксацина [Текст] / И. В. Титов, В. Л.

149

Дорофеев, А. П. Арзамасцев // Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология.

Фармация. – 2004. – № 2. – C. 270–275.

37. Тихонова, Н. В. Дисперсионный анализ в подборе вспомогательных

веществ для таблеток «дилепт» [Текст] / Н. В. Тихонова, К. В.

Алексеев, Е. В. Блынская // Фармация. – 2011. – № 8. – С. 11–14.

38. Турчинская, К. Г. Изучение технологических свойств субстанции ГБ-

115 [Текст] / К. Г. Турчинская, Н. В. Тихонова, Е. В. Блынская //

Материалы Всероссийской научно-практической Интернет-

конференции с международным участием ГОУ ВПО КГМУ

Минздравсоцразвития России. – Курск : 2011. – С. 203–205.

39. Чарушин, В. Н. Новые методологии органического синтеза [Текст] / В.

Н. Чарушин, О. Н. Чупахин // Вестник Российской Академии наук. –

2007. – Т. 77, № 5 – С. 403.

40. Чуешов, В. И. Промышленная технология лекарств [Текст] / В. И.

Чуешов [и др.]. – Харьков : «МКТ-Книга», 2002. – 2 т. – 715 с.

41. Яковлев, В. П. Левофлоксацин - новый антимикробный препарат

группы фторхинолонов / В. П. Яковлев, К. В. Литовченко // Инфекция

и антимикробная терапия. 2001. – Т.3, №5. – С. 132–140.

42. Abulkibash, A.M., Sultan, S.M., Al-Olyan, A.M., Al-Ghannam, S.M.

Differential electrolytic titration method for the determination of

ciprofloxacin in drug formulations // Talanta. – 2003. – V. 61, № 2. –

P. 239–244.

43. Al-Deeb, O.A., Abdel-Moety, E.M., Abounassif, M.A., Alzaben, S.R.

Stability-indicating high-performance liquid chromatographic method for

determination of norfloxacin in bulk form and tablets // Boll. Chim. Farm. –

1995. – V. 134, № 9. – P. 497–502.

44. Adegbolagun, O. A., Olalade, O.A., Osumah, S.E. Comparative evaluation

of the biopharmaceutical and chemical equivalence of some commercially

150

available brands of ciprofloxacin hydrochloride tablets // Tropical Journal

of Pharmaceutical Research. – 2007. – V. 6, № 3. – P. 737–745.

45. Adelglas, J., Abate, C.A de., McElevaine, P. et al. Comparison of

levofloxacin qd and amoxicillin-clavulonate tid for the treatment of acute

bacterial sinusitis // Clin. Infect. Dis. – 1996. – №23. – P. 913

46. Amin, A. S., El-Fetouh Gouda, A. A., El-Sheikh, R., Zahran, F.

Spectrophotometric determination of gatifloxacin in pure form and

pharmaceutical formulation // Spectrochim. Acta. Part A. Mol. Biomol.

Spectrosc. – 2007. – V. 67, № 5. – P. 1306-1312.

47. Al-Ghannam, S.M. Atomic absorption spectroscopic, conductometric and

colorimetric methods for determination of some fluoroquinolone

antibacterials using ammonium reineckate // Spectrochim. Acta, Part A.

Mol. Biomol. Spectrosc. – 2008. – V. 69, №4. – P. 1188–1194.

48. Alnajjara, A, AbuSeadaa, H. H., Idris, A. M. Capillary electrophoresis for

the determination of norfloxacin and tinidazole in pharmaceuticals with

multi-response optimization // Talanta. – 2007. – V. 72, № 2. – P. 842–846.

49. Arayne, M. S., Sultana N., Siddiqui F. A. Optimization of levofloxacin

analysis by RP-HPLC using multivariate calibration technique // Pak. J.

Pharm. Sci. – 2007. – V. 20, №2. – P. 100–106.

50. Ashour, S., Al-Khalil, R. Simple extractive colorimetric determination of

levofloxacin by acid-dye complexation methods in pharmaceutical

preparations. // Il Farmaco. – 2005. – V. 60, № 9. – P. 771–775.

51. Awadallah, B., Schmidt, P. C., Wahl, M. A. Quantitation of the

enantiomers of ofloxacin by capillary electrophoresis in the parts per billion

concentration range for in vitro drug absorption studies // J. Chromatogr. A.

– 2003. – V. 988, № 1. – P. 135–143.

52. Bergan, T. Pharmacokinetics of fluoroquinolones. // The Quinolones ; ed.

2nd . / T. Bergan ; Ed. Andriole V.T. – London, New-York : Academic

Press, 1998. – P. 144–182.

151

53. Ball, P., Mandel, L., Niki, Y. et al.Comparative tolerability of new

fluoroquinolone antibacterials // Drugs Safety. – 1999. – V. 21, № 5. – P.

407–421.

54. Ballesteros O., Toro I., Sanz-Nebot V., Navalon A., Vilchez J.L., Barbosa

J. Determination of fluoroquinolones in human urine by liquid

chromatography coupled to pneumatically assisted electrospray ionization

mass spectrometry // J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci.

– 2003. – V. 798, № 1. – P. 137–144.

55. Baquero, F. Antibacterial resistance: focus on respiratory tract pathogens.

Levofloxacin. // Symp. 19th Intern. Congr. Chemother. – Montreal: 1995. –

P. 6–11.

56. British Pharmacopoeia 2005. London: H.M. Stationary Office, 2005.

57. Cynammon, M. H., Klemens, S. P., Grossi, M. A. Comparative activities

of levofloxacin, ofloxacin, and sparfloxacin in a murine tuberculosis model.

// 18th Intern. Congr. Chemother. – Stockholm : 1993. – № 18.

58. Chien, S. C., Rogge, M. C., Gisclon, L. G. et al. Phamacokinetic profile of

levofloxacin following once-daily 500 milligram oral or intravenous doses

// Antimicrob. Agents Chemother. – 1997. – V.41, №10. – P. 2256–2260.

59. Chien, S. C., Chow A. T., Natarajan, J. et al . Absence of age and gender

effects on the pharmacokinetics of a single 500-milligram oral dose of

levofloxacin in healthy subjects // Anrimicrob. Agents Chemother. – 1997.

– V.41, №7. – P. 1562–1565.

60. Chien, S. C., Wrong, F. A., Fowler, C. A. et al . Double-blind evaluation of

the safety and pharmacokinetics of multiple oral once-daily 750-milligram

and 1-gram doses of healthy volunteers // Antimicrob. Agents Chemother. –

1998. – V.42, №4. – P. 885 – 888.

61. Child, J., Mortibay, D., Andrews, J. M. et al. Open-label crossover study to

determine pharmacokinetics and penetration of two dose regimens of

152

levofloxacin into inflammatory fluid // Antimicrob. Agents Chemother. –

1995. – V. 39, № 12. – P. 2749–2751.

62. Comez-Lus, R., Adrian, F., Comez-Lus, P. et al . In vitro postantibiotic

effect of trovafloxacin, moxifloxacin, and levofloxacin against clinical

isolates of Legionella pneumophila Serogroup 1. // 39th Intersc. Conf.

Antimicrob. Agents Chemother. – San-Francisco: 1999. – № 366.

63. Canada-Canada, F., Espinosa-Mansilla, A., Munoz, P. A de la. Separation

of fifteen quinolones by high performance liquid chromatography :

application to pharmaceuticals and ofloxacin determination in urine // J.

Sep. Sci. – 2007. – Vol. 30. – № 9. – P. 1242–1249.

64. Chen, Shi-I., Fen, D., Yu, L., Hui-Chun, Zh. Electrochemiluminescence of

terbium (III)-two fluoroquinolones-sodium sulfite system in aqueous

solution // Spectrochim. Acta, Part A. Mol. Biomol. Spectrosc. – 2006. –

V.64, № 1. – P. 130–135.

65. Curman, D., Zivec, P., Leban, I., Turel, I., Polishchuk, A., Klika, K.D.,

Karaseva, E., Karasev, V. Spectral properties of EU (III) compound with

antibacterial agent ciprofloxacin (cfqH). Crystal structure of

[Eu(cfqH)(cfq)(H2O)4Cl2 [ 4,55 H2O] // Polyhedron. – 2008. – V. 27, №5.

– P. 1489–1496.

66. Chromatography 6th edition. Fundamentals and applications of

chromatography and related differential migration methods, part B :

applications// Journal of chromatography library. – 2004. – Vol. 69 B.

67. Chromatographic analisys of pharmaceuticals. / Ed. by J.A. Adamovics ;

ed. 2nd, revised and expanded. –: Marcel Dekker, Inc., 1997 – 509 p.

68. Choi H. J., Cho, H. S., Han, S. C., Hyun, M. H. HPLC of fluoroquinolone

antibacterials using chiral stationary phase based on enantiomeric (3,3’-

diphenyl-1,1’-binaphthyl)-20-crown-6 // J. Sep. Sci. – 2009. – V. 32, № 4.

– P. 536–541.

153

69. Cheng, F. C., Tsai, T. R., Chen, Y. F. et al. Pharmacokinetic study of

levofloxacin in rat blood and bile by microdialysis and high-performance

liquid chromatography // J Chromatogr A. – 2002. – V. 961, №1. – P. 131–

136.

70. Chepurwar, S. B., Shirkhedkar, A. A., Bari S. B. et al. Validated HPTLC

method for simultaneous estimation of levofloxacin hemihydrate and

ornidazole in pharmaceutical dosage form // J. Chromatogr. Sci. – 2007. –

V. 45, № 8. – P. 531–536.

71. Davis, R., Bryson, H. M. Levofloxacin: a review of its antibacterial

activity, pharmacokinetics and therapeutic efficacy // Drugs. – 1994. – №

33. – P. 685–706.

72. Du, L. M., Yao, H. Y., Fu, M. Spectrofluorimetric study of the charge-

transfer complexation of certain fluoroquinolones with 7,7,8,8-

tetracyanoquinodimethane // Spectrochim. Acta Part A: Mol. and Biomol.

Spectrosc. – 2005. – V. 61, № 1-2. – P. 281–286.

73. Djurdjevica, P., Cirica, A., Djurdjevicb, A., Stankovc, M. J. Optimization

of separation and determination of moxifloxacin and its related substances

by RP-HPLC // J. Pharm. Biomed. Anal. – 2009. – V. 50, № 2. – P. 117–

126.

74. Espinosa-Mansilla, A., Munoz, P. A de la., Gonzalez, G. D., Canada-

Canada, F. HPLC determination of ciprifloxacin, cloxacin, and ibuprofen

drugs in human urine sampes // J. Sep. Sci. – 2006. – V. 29, № 3. – P.

1969–1976.

75. Еuropean Pharmacopeia, 5th edition.

76. Flemingham, D., Robbins, M. J., Ghosh, G. et al. Interpretative criteria for

disk diffusion susceptibility testing with levofloxacin. DR-3355. // 18th

Intern. Congr. Chemother. – Stockholm : 1993. – № 400.

154

77. Fuб K. P., Lafaredo, S. C., Foleno, B. O. et al. In vitro and in vivo

antimicrobial activities of levofloxacin L-ofloxacin), an optically active

ofloxacin // Antimicrob. Agents Chemother. – 1992. – №36. – P. 860–866.

78. Flemingham, D., Harding, I. Continued low prevalence of levofloxacin

resistance amongst Streptococcus pneumoniae, Haemophillus influenzae

and Moraxella catarrhalis. // 22nd Intern. Congr. Chemother. – Amsterdam:

2001, P. 27–62.

79. Fish, D. N., Chow, A. T. The clinical pharmacokinetics of levofloxacin //

Clin. Pharmacokinet. – 1997. – V. 32, № 2. – P. 101–119.

80. File, T. M., Segreti, J., Dunbar, L. et al. A multi-center randomized study

comparing the efficacy and safety of intravenous and/or oral levofloxacin

versus ceftriaxone and/or cefuroxime axetil in the treatment of adults with

community-acquired pneumonia // Antimicrob. Agents Chemother. – 1997.

– V. 41, № 9. – P. 1065–1072.

81. Furlanetto, S., Gratteri, P., Pinzauti, S. et al. Design and optimization of the

variables in the adsorptive stripping voltammetric determination of

rufloxacin in tablets, human plasma and urine // J. Pharm. Biomed. Anal. –

1995. – V. 13, № 4–5. – P. 431– 438.

82. Faria, A. F., Souza, M. V. N. de., Almeida M. V. de., de Oliveira M. A. L.

Simultaneous deparation of five fluoroquinolone antibiotics by capillary

zone electrophoresis // Analytica Chimica Acta. – 2006. – V. 579, № 2. – P.

185–192.

83. Gootz, T. D., Brighty, K. E. Chemistry and mechanism of action of the

quinolone antibacterials. // The Quinolones / ed. Andriole V. T. ; 2nd ed. –

London, New-York : Academic Press, 1988. – P. 29–80.

84. Gillespie, S. H. Pre-clinical microbiology - Mycobacteria. // First Intern.

Moxifloxacin Symposium . – Berlin : “Springer-Verlag”, 2000. – P. 37–42.

155

85. Gotfried, M. H., Danziger, L. H., Rodvold, K. Steady state plasma and

intrapulmonary concentrations of levofloxacin in healthy adult subjects //

Chest. – 2001. – №119. – P. 1114–1122.

86. Garcia, M. S., Albero, M. I., Sanchez-Pedreno, C. et al. Flow-injection

spectrophotometric determination of ofloxacin in pharmaceuticals and urine

// Eur. J. of Pharm. Biopharm. – 2005. – V. 61, №1–2. – P. 87–93.

87. Guo, C., Dong, P., Chu, Z., Wang, L., Jiang, W. Rapid determination of

gatifloxacin in biological samples and pharmaceutical producns using

europium-sensitized fluorescence spectrophotometry // Luminiscence. –

2008. – V. 23, № 1. – P. 7–13.

88. Hayakawa, I., Atarshi, S., Yokohama, S. et al. Synthesis and antibacterial

activities of optically active ofloxacin // Antimicrob. Agents Chemother. –

1986. – № 29. – P. 163–164.

89. Hoffner, S. H., Gezelius, L., Olson-Liljequiste, B. In vitro activity of

fluorinated quinolones and macrolides against drug-resistant

Mycobacterium tuberculosis // J. Antimicrob. Chemother. – 1997. – № 40.

– P. 885–888.

90. Hermo, M. P., Nemutlu, E., Kir, S., Barron, D., Barbosa, J. Improved

determination of quinolones in milk at their MRL levels using LC-UV, LC-

FD, LC-MS and LC-MS/MS and validation in line with regulation

2002/657/EC // Anal. Chim. Acta. – 2008. – V. 613, № 1. – P. 98–107.

91. Herida, M. R. N., Elfrides, Sch. E. S.. Spectrophotometric determination of

sparfloxacin in tablets // Journal of Antumucrobial Chemotherapy. – 1999.

– № 44. –P. 136–137.

92. Hyun, M. H., Han, S. C. Liquid chromatographic separation of the

enentiomers of fluoroquinolone antibacterials on a chiral stationary phase

based on a chiral crown ether // J. Biochem. Bioph. Methods. – 2002. – V.

54, № 1–3. – P. 235–243.

156

93. Iannini, P. B. Levofloxacin delays cardiac repolarization (QT and QTc) in

hospitalized patients. // 22nd Intern. Congr. Chemother. – Amsterdam: 2001

94. Ji, B., Lounis, N., Truffot-Pernot, G. et al . In vitro and in vivo activities of

levofloxacin against Mycobacterium tuberculosis // Antimicrob. Agents

Chemother. –1995. – № 39. – P. 1341–1344.

95. Jones, M. E., Heinze, P., Engler, H. D. et al . In vitro activity of

levofloxacin and comparative agents against recent clinical isolates of

Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae and Legionella

pneumophila from 11 countries. // 7th Intern. Symp. New Quinolones. –

Edinburgh: 2001. – P. 15.

96. Jain, S., Jain, P. K., Pitre, K.S. Electrochemical analysis of sparfloxacin in

pharmaceutical formulation and biochemical screening of its Co (II)

complex // J. Pharm. Biomed. Anal. – 2002. – V. 29, № 5. – P. 795–801.

97. Klemens, S. P., Sharpe, C. A., Rogge, M. C. et al . Activity of levofloxacin

in a murine model of tuberculosis // Antimicrob. Agents Chemother. –

1994. – № 38. – P. 1476–1479.

98. Kurie, M., Hiroyuki, K.. Determination of fluoroquinolones in

environmental waters by in-tube solid-phase microextraction coupled with

liquid chromatography-tandem mass spectrometry // Analytica Chimica

Acta. – 2006. – V. 562, № 1. – P. 16–22.

99. Kassab, N. M., Singh, A. K., Kedor-Hackmam, E. R. M., Santoro, M. I. R.

M. Quantitative determination of ciprofloxacin and norfloxacin in

pharmaceutical preparations by high performance liquid chromatography //

Rev. Bras. Cienc. Farm. – 2005. – V. 41, № 4. – P. 507–513.

100. Kawahara S., Tada A., Nagare H. Clinical evaluation of new quinolones as

antituberculosis drugs // Kekkaku. – 1999. – V. 74, № 1. – P. 71–75.

101. Kumar, A., Kumar, M. A., Kumar, T. D., Singh, B. Gradient HPLC of

antibiotics in urine, ground water, chicken muscle, hospital wastewater and

157

pharmaceutical samples using C-18 and RP-amide columns // J. Sep. Sci. –

2008. – V. 31, № 2. – P. 294–300.

102. Krupa, M. K., Balasandaram, J., Amit, P. K., Rajnish, K. M. Quantitative

determination of levofloxacin and ambroxol hydrochloride in

pharmaceutical dozage form by reverced-phase high-performance liquid

chromatography // Eurasian Journal of Analytical Chemistry – 2007 – V.2,

№ 1. – P. 21–31.

103. Laban-Djurdjevic A., Jelikic-Stankov M., Djurdjevic P. Optimization and

validation of the direct HPLC method for the determination of

moxifloxacin in plasma // J. Chromatogr. B. – 2006. – V. 844, - № 1. – P.

104–111.

104. Levofloxacin [Electronic resourse]. – Electron. dat. [Rockville] : U. S. P.,

cop. 2014. – режимдоступа :

http://www.usp.org/pdf/EN/pendingStandards/levofloxacin.

105. Lian, S., Zhu, W., Xuan, W. Clinical evaluation of levofloxacin in the

treatment of urogenital Chlamydia trachomatis infections // 20th Intern.

Congr. Chemother. – Sydney

106. Lipsky, B. A., Baker, C. A. Fluoroquinolone toxicity profiles : a review

focusing on newer agents // Clin. Infect. Dis. – 1999. – № 28. – P. 352–364.

107. Lounis, N., Ji, B. H., Truffot-Pernot, C. et al. Which aminoglycoside or

fluoroquinolone is more active against Mycobacterium tuberculosis in mice

// Antimicrob. Agents Chemother. – 1997. – V. 41, № 3. – P. 607–610.

108. Lu, Y., Zang, H., Za, Y. et al. Clinical evaluation of levofloxacin vs

ciprofloxacin in the treatment of skin and soft tissue infection // 20th Intern.

Congr. Chemother. – Sydney

109. Marona H. R., Schapoval E. E. Development and validation of nonaqueous

titration with perchloric acid to determine sparfloxacin in tablets // Eur. J.

Pharm. Biopharm. – 2001. – V. 52, № 2. – P. 227–229.

110. Marona H. R., Schapoval E. E. Spectrophotometric determination of

158

sparfloxacin in pharmaceutical formulations using bromothymol blue // J.

Pharm. Biomed. Anal. – 2001. – V. 26, №3. – P. 501–504.

111. Meyyanathan S. N., Ramasarma G. V. S., Suresh B. Analysis of

levofloxacin in pharmaceutical preparations by high performance thin layer

chromatography // Journal of separation science. – 2003. – V. 26, № 18. –

P. 1698–1700.

112. Michaleas S., Antoniadou-Vyza E. A new approach to quantitative NMR:

Fluoroquinolones analysis by evaluating the chemical shift displacements //

J. Pharm. Biomed. Anal. – 2006. – V. 42, №4. – P. 405–410.

113. Mizumoto K., Shimizu S., Eguchi T. et al. Prophylactic use of oral

levofloxacin in patients undergoing laparoscopic cholecystoectomy. // 22nd

Intern. Congr. Chemother. – Amsterdam: 2001. – 17031 p.

114. Mollering B.C. Overview of newer quinolones. Levofloxacin. Montreal:

Symp. 19th Intern. Congr. Chemother. 1995. P 45-58.

115. Mostafa S., El-Sadek M., Alla E. A. Spectrophotometric determinetion of

ciprofloxacin, enrofloxacin and pefloxacin through charge-transfer complex

formation // J. Pharm. Biomed. Anal. – 2002. – V. 27, № 102. – P. 133–

142.

116. Mostafa S., El-Sadek M., Alla E. A. Spectrophotometric determination of

enrofloxacin and pefloxacin through ion-pair complex formation // J.

Pharm. Biomed. Anal. – 2002. – V. 28, № 1. – P. 173–180.

117. Nakagawa K., Kobayashi H., Ishii M. Clinical evaluation of levofloxacin

(LVFX) in the treatment of bacteria disorders. // 20th Intern. Congr.

Chemother. – Sydney.

118. New H. C., Chin N. X. In vitro activity of S-ofloxacin // Antimicrob.

Agents Chemother. – 1989. – V. 33, № 7. – P. 1005–1007.

119. Ni Y., Wang Y., Kokot S. Multicomponent kinetic spectrophotometric

determination of pefloxacin and norfloxacin in pharmaceutical preparations

159

and human plasma samples with aid of chemometrics // Spectrochim. Acta,

Part A. Mol. Biomol. Spectrosc. – 2008. – V. 70, № 5. – P. 1049–1059.

120. Norrby S. R. Clinical utilities of sequential therapy (step-dawn from

intravenous to oral) with levofloxacin for hospitalized patients with lower

respiratory tract infections. Penetration / S. R. Norrby. – Biomedis

International Ltd., 2000 – P. 38–42.

121. Norrby R.S. Petermann W., Wilcox P.A. et al. Levofloxacin versus

ceftriaxone in the treatment of pneumonia in hospitalized patients. // 2nd

Europ. Congr. Chemother. – Hamburg: 1998.

122. O’Donnell J.A. Gelone S. P. Fluoroquinolones // Infect. Dis. Clin. North

Amer. –2000. – V. 14, №2.

123. Ocana J. A., Callejon M., Barragan F. J. Determination of trovafloxacin in

human serum by time resolved terdium-sensitised luminiscence // Eur. J.

Pharm. Sci. – 2001. – V. 13, № 3. – P. 297–301.

124. Ocana J. A., Callejon M., Barragan F. G. et al. Lanthanide sensitised

chemiluminiscence determination of grepafloxacin in tablets and human

urine // Analytica Chimica Acta. – 2003. – V. 482, № 1. – P. 105–113.

125. Ocana J. A., Callejon M., Barragan F. J. Terbium-sensitized luminiscence

determination of levofloxacin in tablets and human urine and serum //

Analyst. – 2000. – № 125. – P. 1851–1854.

126. O’Hara M., Simpson I. Levofloxacin : review of efficacy and tolerability ,

relative to beta-lactams+macrolides, in the treatment of community-

acquired pneumonia. // 22nd Intern. Congr. Chemother. – Amsterdam:

2001.

127. O’Hara M., Harding I. Acute sinusitis: clinical advantages of levofloxacin

over macrolides and beta-lactams. // 22nd Intern. Congr. Chemother. –

Amsterdam: 2001. – 17029 p.

128. Overholser B. R., Kays M. B., Sowinski K. M. Determination of

gatifloxacin in human serum and urine by high-performance liquid

160

chromatography with ultraviolet detection // Journal of Chromatography B.

– 2003. – V. 798, № 1. – P. 167–173.

129. Paladino J. A. Is more than one quinolone needed in clinical practice? //

Ann. Pharmacother. – 2001. – № 35 – P. 1085–1095.

130. Pancuch G. A., Jacobs M. B., Appelbaum P. C. Activity of DU-6859a,

ciprofloxacin, ofloxacin, levofloxacin, sparfloxacin and OPC-17116 against

112 penicillin-susceptible and - resistant Pneumococci // Drugs. – 1995. –

№ 49. – Suppl. 2. P. 235–237.

131. Pascual-Reguera I., Parras G. P., Diaz A. M. Solid-phase UV

spectrophotometric method for determination of ciprofloxacin //

Microchemical Journal. – 2004. – V. 77, № 1. – P. 79–84.

132. Pasztor M., Kovacs G., Ban E. Susceptibility of invasive S. pneumoniae to

levofloxacin. // 7th Intern. Symp. New Quinolones. – Edinburgh : 2001. –

P. 17.

133. Patel S. A., Prajapati A. M., Patel P. U. et al. Development and validation

of column high-performance liquid chromatographic and derivative

spectrophotometric methods for determination of levofloxacin and

ornidazole in combined dosage forms. – AOAC Int., 2008. – V. 91, № 4. –

P. 756–761.

134. Petrovic A., Cvetkovic N., Ibric S., Trajkovic S., Djuric Z., Popadic D.,

Popovic R. Application of mixture experimental design in the formulation

and optimization of matrix tablets containing carbomer and

hydroxypropylmethylcellulose. // Arch Pharm Res. – 2009 – Vol. 32, № 12.

– P. 1767–1774.

135. The Quinolones. // ed. Andriole V. T. ; Ed. 2nd. – London, New-York

:1998. – P. 441.

136. Ragab G. H., Amin A. S. Atomic absorption spectroscopic, conductometric

and colorimetric methods for determination of fluoroquinolone antibiotics

161

using ammonium reinekate ion-pair complex formation // Spectrochim.

Acta, Part A. Mol. Biomol. Spectrosc. – 2004. – V. 60, № 4. – P. 973–978.

137. Rastogi N., Goh K. S., Brysker A. et al . In vitro activities of levofloxacin

used alone and in combination with first- and second-line antituberculosis

drugs against Mycobacterium tuberculosis // Antimicrob. Agents

Chemother. – 1996. – V.40, №7. – P. 1610–1616.

138. Ruiz-Serano M.J., Alactya L., Martinez-Sanchez L. et al . In vitro activity

of six quinolones against clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis

susceptible and resistant to fist-line antituberculosis drugs. // 39th Intersc.

Conf. Antimicrob. Agents Chemother. – San-Francisco: 1999.

139. Richard G. A., Klimberg I. N., Flower C. et al . A combined analysis of two

studies comparing levofloxacin with two other fluoroquinolones for the

treatment of acute pyelonephritis. 36th Intersc. Conf. Antimicrob. Agents

Chemother., // New Orlean: 1996.

140. Rieutord A., Vazquez L., Soursac M., Prognon P., Blais J., Bourjet Ph.,

Mahuzier G. Fluoroquinolones as sensitizers of lanthanide fluorescence:

application to the liquid chromatographic determination of ciprofloxacin

using terbium // Analytica Chimica Acta. – 1994. – V. 290, № 1-2. – P.

215–225.

141. Safwan A., Al-Khalil. R. Simple extractive colorimetric determination of

levofloxacin by acid-dye complexation methods in pharmaceutical

preparations // Farmaco. – 2005. – V. 60, № 9. – P. 771–775.

142. Salem M. Y., El-Guindi N. M., Mikael H. K., Abd-El-Fattah Lel-S.

Stability indicating methods for determination of some fluoroquinolones in

the presence of their decarboxylated degrades // Chem. Pharm. Bull.

(Tokyo). – 2006. – V. 54, №12. – P. 1625 –1632.

143. Salem H. Spectrofluorimetric, atomic absorption spectrometric and

spectrophotometric determination of some fluoroquinolones // Am. J. Appl.

Sci. – 2005. V. 2, № 3. – P. 719–729.

162

144. Salgado H. R., Lopes C. C. Determination of gatifloxacin in bulk and tablet

preparations by high-performance liquid chromatography // Journal of

AOAC International. – 2006. – V. 89, №3. – P. 642–645.

145. Shervington L. A., Abba M., Hussain B., Donnelly J. The simultaneous

separation and determination of five quinolone antibiotics using isocratic

reversed-phase HPLC: Application to stability studies on an ofloxacin

tablet formulation // J. Pharm. Biomed. Anal. – 2005. Vol. 39, № 3-4. – P.

769–775.

146. Salgado H. R., Oliveira C. L. Development and validation of an UV

spectrophotometric method for determination of gatifloxacin in tablets //

Pharmazie. – 2005. – V. 60, № 4. – P. 263–264.

147. Samanidou V. F., Christodoulou E. A., Papadoyannis I. N. Direct

determination of five fluoroquinolones in chicken whole blood and in

veterinary drugs by HPLC // J. Sep. Sci. – 2005. – V. 28, № 4. – P. 325–

331.

148. Samanidou V.F., Christodoulou E.A., Papadoyannis I.N. Validation of a

novel HPLC sorbent materual for the determination of ten quinolones in

human and veterinary pharmaceutical formulations // J. Sep. Sci. – 2005. –

V. 28, № 18. – P. 2444–2453.

149. Samanidou V. F., Demetriou C. E., Papadoyannis I. N. Direct

determination of four fluoroquinolones, enoxacin, norfloxacin, ofloxacin

and ciprofloxacin, in pharmaceuticals and blood serum by HPLC// Anal.

Bioanal. Chem. – 2003. – V. 375, № 5. – P. 623–629

150. Sanjay K. M., Roop K. K., Farhan J. A. et al. Stability indicating high-

performance thin-layer chromatographic determination of gatifloxacin as

bulk drug and from polymeric nanoparticles // Analytica Chimica Acta. –

2006. – V. 576, № 2. – P. 253–260.

151. Santoro M. I. R. M., Kassab N. M., Singh A. K., Kedor-Hackmam E. R. M.

Quantitative determination of gatifloxacin, levofloxacin, lomefloxacin and

163

pefloxacin fluoroquinolonic antibiotics in pharmaceutical preparations by

high-performance liquid chromatography // J. Pharm. Biomed. Anal. –

2006. – V. 40, № 1. – P. 179–184.

152. Sastry C., Rama R. K., Siva P. D. Extractive spectrophotometric

determination of some fluoroquinolone derivatives in pure and dosage

forms // Talanta. – 1995. – V. 42, № 3. – P. 311–316.

153. Sawa T. S., Yoshida T., Sawada M. et al. Prophylactic effect of

levofloxacin (LVFX) on neutropenic fever secondary to the chemotherapy

for lung cancer // 22nd Intern. Congr. Chemother. – Amsterdam: 2001. –

17009 p.

154. Sawa T. S, Yoschida T., Ohno T. et al. Efficacy and safety of levofloxacin

in elderly patients with chronic lower respiratory tract infections. // 20th

Intern. Congr. Chemother Sydney.

155. Sawada M., Onaka Y., Uchinoh K. et al. 3-year PMS data on levofloxacin

in Japan. // 20th Intern. Congr. Chemother. – Sydney: 1997.

156. Segatore B., Setacci D., Perilli M. et al. Italian survey on levofloxacin

susceptibility in clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa compared to

other antibiotics. // 8th Eur. Congr. Clin. Microbiol. Infect. Dis. –

Lausanne: 1997. – P. 409.

157. Siegrist H. H., Nepa M. C., Jacquet A. Susceptibility of levofloxacin of

clinical isolates from intensive care and haematology/oncology patients in

Switzerland: a multicenter study. // 8th Eur. Congr. Clin. Mirobiol. Infect.

Dis. – Lausanne:1997. – P. 406.

158. Sivasubramanian L., Shankar V. K., Sivaraman V. et al. Visible

spectrophotometric determination of levofloxacin in tablet dosage forms//

Indian Journal of Pharmaceutical Sciences. – 2004. – V. 66, № 6. – P. 799–

802.

164

159. Soussy C. J., Leclercq R., Weber P. et al. In vitro activity of levofloxacin

against gram positive cocci isolated in France during 1999-2000. // 7th

Intern. Symp. New Quinolones. – Edinburgh:2001. – P. 14.

160. Soussy C. J., Cluzel M., Ploy M. C. In vitro antibacterial activity of new

fluoroquinolone, levofloxacin, against hospital isolates: a multicenter study.

// 8th Eur. Congr. Clin. Microbiol. Infect. Dis. – Lausanne: 1997. – P. 405.

161. Sowmiya G., Gandhimathi M., Ravi T. K., Sireesaa K. R. HPTLC method

for determination of gatifloxacin in human plasma // Indian journal of

Pharmaceutical sciences. – 2007. – V. 69, № 2. – P. 301–302.

162. Suhagia B. N., Shah S. A., Rathod I. S. et al. Determination of gatifloxacin

and ornidazole in tablet dosage forms by high-performance thin-layer

chromatography // Anal. Sci. – 2006. – V. 22, № 5. – P. 743–745.

163. Sultana N., Arayne M. S. Naz A. Development and validation of an HPLC-

UV method for the determination of gatifloxacin in bulk material,

pharmaceutical formulations, human plasma and metal complexes // Pak. J.

Pharm. Sci. – 2006. – V. 19, № 4. – P. 275–281.

164. The New Generation of Quinolones Eds. Siporin C., Heifetz C.L.,

Domagala J.M. New-York, London, 1990; pp. 422.

165. The United States Pharmacopeia, 29th revision. National formular 24th

edition (USP 29 – NF 24), 2009

166. The Quinolones. Second ed., Ed. Andriole V.T., London, New-York, 1998.

P. 441.

167. Tomioka H., Sato K., Kajitani H. et al . Activity of combination of new

fluoroquinolones or claritromycin with other dugs against extracellular and

intramacrophagial Mycobacteria. // 40th Intersc. Conf. Antimicrob. Agents

Chemother. – Toronto: 2000.

168. Tomioka H., Sato K., Akaki T., et al . Antimicrobial activities of

claritromycin, levofloxacin and KRM-1648 against M. tuberculosis and M.

165

avium-intracellulare in mono Mac-6 macrophage and a-549 lung epithelial

cell. // 21st Intern. Congr. Chemother. – Birmingham: 1999.

169. Tozo G.L., Salgado H.R. Determination of lomefloxacin in tablet

preparations by liquid chromatography // Journal of AOAC International. –

2006. – V. 89, № 5. – P. 1305–1308.

170. Trefia S., Gilarda V., Malet-Martino M, Martinoa R. Generic ciprofloxacin

tablets contain the stated amount of drug and different impurity profiles: A

19F, 1H and DOSY NMR analysis// Journal of Pharmaceutical and

Biomedical Analysis. – 2007. – V. 44, № 3. – P. 743–754.

171. Turnidge J. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of fluoroquinolones

// Drugs. – 1999. – № 58 (Suppl.2). – P. 29–36.

172. Une T., Fujimoto T., Sato K. et al. In vitro activity of DR-3355, an

optically active ofloxacin // Antimicrob. Agents Chemother. – 1988. – №

32. – P. 1336–1340.

173. Ulu S. T. Rapid and sensitive spectrofluorimetric determination of

enrofloxacin, levofloxacin and ofloxacin with 2,3,4,5-tetrachloro-p-

benzoquinone // Spectrochim. Acta Part A: Mol. and Biomol. Spectrosc. –

2009. – V. 72, № 5. – P. 1038–1042.

174. Veiopoulou C.J., Ioannou P.C., Lianidou E.S. Application of terbium

sensitized fluorescebce for the determination of fluoroquinolone antibiotics

pefloxacin, ciprofloxacin and norfloxacin in serum // J. Pharm. Biomed.

Anal. – 1997. – V. 1, № 12. – P. 1839–1844.

175. Venugopal K., Saha R .N. New, simple and validated UV-

spectrophotometric methods for the estimation of gatifloxacin in bulk and

formulations // Farmaco. – 2005. – V. 60, № 11-12. – P. 906–912.

176. Venugopal K, Snehalatha M., Bende G, Saha R. Development and

validation of an ion-pairing RP-HPLC method for the estimation of

gatifloxacin in bulk and formulations // J. Chromatogr. Sci. – 2007. – V. 45,

№ 4. – P. 220–225.

166

177. Wen-Ying L., Xiao-Fang Ch., Chun-Sheng X., Study of fluorescence

characteristics of the charge-transfer resction of quinolone agents with

bromanil // Spectrochim. Acta, Part A: Mol. and Biomol. Spectrosc. –

2009. – V. 71. – № 5. – P. 1769–1775.

178. Yagawa K. Latest industry information on the safety profile of levofloxacin

in Japan. Penetration, Biomedis International Ltd., 200; 15-17.

179. Yamaguchi K., Miyazaki S. Activities of levofloxacin and other

antimicrobial agents against clinical isolates during 2000 in Japan. // 22nd

Intern. Congr. Chemother. – Amsterdam: 2001. – P. 27053.

180. Yan H, Row K. H. Rapid chiral separation and impurity determination of

levofloxacin by ligand-exchange chromatography // Anal. Chim Acta. –

2007. – V. 584, - №1. – P. 160 –165.

181. Yang Z., Wang X., Qin W., Zhao H. Capillary electrophoresis-

chemiluminiscence determination of norfloxacin and prulifloxacin // Anal.

Chim. Acta. – 2008. – V. 623, № 2. – P. 231–237.

182. Yang Z., Qin W. Separation of fluoroquinolones in acidic buffer by

capillary electrophoresis with contactless conductivity detection // Journal

of Chromatography A. – 2009. – V. 1216, № 27. – P. 5327–5332.

183. Yeole R. D., Jadhav A. S., Patil K. R., Rane V. P., Kubal M. L., Singh S.,

Patel M. V., Khorakiwala H. F. Validated chiral high-performance liquid

chromatography method for a novel anti-methicillin-resistant

staphylococcus aureus fluoroquinolone WCK 771 // J. Chromatogr. A. –

2006. – V. 1108, № 1. – P. 38–42.

184. Zhang Y. Z., Zhang Z. Y., Zhou Y. C., Liu L., Zhu Y. Determination of

fluorinated quinolone antibacterials by ion chromatography with

fluorescsncs detection // J. Zhejiang Univ. Sci B. – 2007. – V. 8, № 5. – P.

302–306

185. Zhang Y. Y., Wang F., Zhang J. et al. In vitro antibacterial activity of

levofloxacin // Drugs. – 1995. – № 49. Suppl.2. – P. 274–275.

167

186. Zhang Y, Zhu LQ, Wang N, Zhao X, Yang W, Ji S, Sun L, Population

pharmacokinetics of intravenous levofloxacin 500 mg/day dosage in

infected patients. // Pharmazie. – 2014

187. Zhanel G.C., Ennis K., Vercaigne L. et al. A critical review of

fluoroquinolones. Focus on respiratory tract infectious // Drugs. – 2002. –

V. 62. – № 1. – P. 13–59

188. Zhou Z.L., Yang M., Yu X.Y. et al. A rapid and simple high-performance

liquid chromatography method for the determination of human plasma

levofloxacin concentration and its application to bioequivalence studies //

Biomed Chromatogr. – 2007. – V. 21. – № 10. – P. 1045–1051.

189. Zhu X., Gong A., Yu S. Fluorescence probe enhanced spectrofluorimetric

method for the determination of gatifloxacin in pharmaceutical

formulations and biological fluids // Spectrochim. Acta, Part A: Mol.

Biomol. Spectrosc. – 2008. – V. 69, № 2. – P. 478–482.

168

ПРИЛОЖЕНИЯ

ПРИЛОЖЕНИЕ 1

169

ПРИЛОЖЕНИЕ 1

170

ПРИЛОЖЕНИЕ 1

171

172

ПРИЛОЖЕНИЕ 2

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО

РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Регистрационное удостоверение № ______________

Дата регистрации «____»________________ 20___ г.

__________________________________________________________________

(наименование юридического лица, на имя которого выдано регистрационное

удостоверение, адрес)

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

________________________________________________(номер)

_____________________Левофлоксацин____________________

торговое наименование лекарственного препарата

_____________________Левофлоксацин____________________

международное непатентованное или химическое наименование

____________________субстанция_________________________

лекарственная форма, дозировка

ПРОИЗВОДИТЕЛЬ

ФАСОВЩИК (ПЕРВИЧНАЯ УПАКОВКА)

УПАКОВЩИК (ВТОРИЧНАЯ (ПОТРЕБИТЕЛЬСКАЯ) УПАКОВКА)

ВЫПУСКАЮЩИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

173

174

ННСТИТУ

175

ПРИЛОЖЕНИЕ 4

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО

РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Регистрационное удостоверение № ______________

Дата регистрации «____»________________ 20___ г.

__________________________________________________________________

(наименование юридического лица, на имя которого выдано регистрационное

удостоверение, адрес)

НОРМАТИВНАЯ ДОКУМЕНТАЦИЯ

__________________________________________________(номер)

______________________Левофлоксацин____________________

торговое наименование лекарственного препарата

______________________Левофлоксацин____________________

международное непатентованное или химическое наименование

____________таблетки, покрытые оболочкой 500 мг__________

лекарственная форма, дозировка

ПРОИЗВОДИТЕЛЬ

ФАСОВЩИК (ПЕРВИЧНАЯ УПАКОВКА)

УПАКОВЩИК (ВТОРИЧНАЯ (ПОТРЕБИТЕЛЬСКАЯ) УПАКОВКА)

176

ВЫПУСКАЮЩИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА