HEMOGRAMA MANUALBqco. Gonzalo A OjedaCátedra Hematología ClínicaFa.C.E.N.A-U.N.N.E2011

Definición

ES EL ESTUDIO CUALI Y CUANTITATIVO DE LOS ELEMENTOS

CORPUSCULARES DE LA SANGRECUANTITATIVO : Recuento de GR, GB

Dosaje de HbÍndices Hematimétricos ( VCM, HCM, CHCM )Fórmula Leucocitaria

CUALITATIVO : Fórmula LeucocitariaEstudio Morfológico de la Serie Roja, Serie Blanca y Pq

Determinaciones Adicionales

RECUENTO DE Pq

Reticulocitos

VSG

ETAPA Pre-ANALÍTICA

Condiciones del Paciente

Tipo y Toma de Muestra

Condiciones del Paciente

NO NECESITA ESTAR ESTRICTAMENTE EN AYUNAS (se sugiere al menos 2 h).

NO HABER REALIZADO ACTIVIDAD FÍSICA INTENSA

PERMANECER PREFERENTEMENTE SENTADO DURANTE LA EXTRACCION

DATOS A TENER EN CUENTA

EDAD DX. PRESUNTIVO SEXO

REFERENTE A LA MUESTRA

TIPO DE MUESTRA-VENOSA

-CAPILAR

-ARTERIAL??

PUNCION VENOSA

VENTAJAS-Técnica rápida y segura-Permite obtener volúmenes adecuados para las demás determinaciones.-Permite repetir el análisis en caso de dudas.-Reduce los posibles errores de la punción capilar.

DESVENTAJAS-Resultados erróneos por hemo-concentración (torniquete pro-longado)-Hematomas y dolor (extraccióndificultosa)-No se recomienda en neonatoso pacientes quemados.-Paciente Oncológicos

PUNCION CAPILAR

VENTAJAS-Resulta sencillo para neonatos yniños-Se puede realizar más de una vez en pacientes especiales (que-mados, oncológicos, etc)-Útil en pacientes con patologíasHemorrágicas.

DESVENTAJAS-Recuentos erróneos por hemo-concentración o hemodilución-Dificultad para obtener flujo continuo.-Recuentos de Pq disminuidos, coagulación.-Errores por contaminación-Paciente Oncológicos

ANTICOAGULANTES SALES DE EDTA :Forman complejos con el Ca++, efectivo en

pequeñas cc, no necesita ser evaporado (Posible error por dilución a tener en cuenta) 0.01mL (10 µL) sirven para anticoagular hasta 2,5 mL de sangre LA RELACION NORMALMENTE USADA ES 10 µL más 1 mL de sangre (1:100)PERMITE CONSERVAR EN HELADERA LAS MUESTRAS HASTA 48 SIN ALTERAR LOS VALORES

MEZCLAS DE OXALATOS DE AMONIO Y POTASIO ( MEZCLA DE WINTROBE) Actúa precipitando el Ca²+Proporción 1/10 (0.5 mL ACG EVAPORADO a 37 + 5 mL sangre)

HEPARINA: Actúa neutralizando la trombina. Proporción 10-50 UI/mL sangre.

Obtenida la muestra

HOMOGENEIZAR !!!!! LENTA Y REPETIDAS VECES

ANTES DE PROCESAR : HOMOGENEIZAR LENTA Y REPETIDAS VECES!!!

ETAPA ANALÍTICA

RECUENTOS DE GB , GR y Plq Hematocrito Dosaje de Hb Fórmula Leucocitaria

RECUENTO DE GB

DILUYENTE: LIQUIDO DE TURK-Acido acético glacial (20 mL)-Cristal Violeta 1% (10 mL)-Levar a 1000 mL con agua destilada Dilución : 1/20

380 µL + 20 µL muestra

Muestra

HomogeneizarPor agitación

Secar con papelel dispositivo de

cargado

RECUENTO DE GBCAMARA DENEUBAUER

PIPETAS

CAMARA DE NEUBAUERSe trata de un portaobjetos con una depresión en el centro, en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separación entre dos líneas consecutivas de 0.25 mm. Así pues el área sombreada y marcada L corresponde a 1 mm². La depresión central del cubreobjetos estáhundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos éste dista de la superficie marcada 0.1 mm, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 mm³.

Aumento 10X

Aumento 10x

Consideraciones prácticas PARA CARGAR LA CAMARA : SE COLOCA EL CUBRE

OBJETO Y ACERCANDO LA PUNTA DE LA PIPETA O EL CAPILAR SE LLENA POR CAPILARIDAD

EL LLENADO DEBE HACERCE DE UNA SOLA VEZ SIN QUE QUEDEN BURBUJAS, NI LÍQUIDOS EXEDENTES ALREDEDOR DEL CAMPO

NO BALANCEARLA AL ACERCAR AL MO PARA DISTINGUIR DE BASURAS MOVER EL

TORNILLO MICROMETRICO. NO DEMORARSE

Elementos contados 4 mm²X 1mm²X N / 4

Dado que el espesor de la cámara es 0.1 mm, para expresar el número de elementos por mm³ deberemos multiplicar el valor X por 10.

X= (N/4) X 10 Como se ha efectuado una dilución de 1/20, debemos multiplicar por

la dilución, es decir:X= Nx10x20= N x 50= Nº de GB/mm³

4

Según el ICSH, debe expresarse este resultado en Nº de GB. 10x9/l

Cálculos

Valores de Referencia

ADULTOS : 5000 a 10.000 GB / mm³ NIÑOS- RN : 12.000 a 25.000 GB / mm³- Hasta 1 año : 6000 a 18.000 GB / mm³- 3 a 6 años : 5000 a 15.000 GB / mm³- 6 a 12 años: 4500 a 13.500 GB / mm³

CAUSAS DE ERROR DEL MATERIAL CUBREOBJETOS MAL COLOCADO SUCIEDAD ,LEVADURAS EN EL LIQUDO DE DILUCION RESTOS DE G.R. APELOTAMIENTO DE LEUCOCITOS DESGASTE

DE TECNICA EXTRACCION DE SANGRE DILUCION (PIPETA MAL ENRASADA) LLENADO DE CAMARA EN FORMA DESIGUAL AUTOAGLUTINACION

DEL OPERADOR DIFERENCIAS DE UN INDIVIDUO A OTRO FATIGA OCULAR

LEUCOCITOSIS

FISIOLÓGICAS- Embarazo, Lactancia, Puerperio, Período

menstrual- Ejercicio violento, Stress.

LEUCOCITOSIS PATOLOGICASCAUSAS INFECCIOSAS

-Bacterias piógenas : Strepto, Staphylo , Meningo y gonococo.-Tos convulsa (Bordetella)Leucocitosis con Linfocitosis

-Sarampión (Inc)-Cuadros septicos : Peritonitis, Neumonía

CAUSAS NO INFECCIOSAS-Cuadros inflamatorios-Post hemorragias-Vómitos, convulsiones, crisis eclámp-sicas, epilepsia, taquicardias-Hipertemias no infecciosas-Quemaduras extensas-Sock traumático-IMC, necrosis de tejido tumoral, pan-creatitis.-Leucemias-Enfermedades metabólicas : DBT, Coma diabético, Acidosis-IRC-Endócrinopatias : Cushing- Corticoterapia

Leucopenias-Constitucional (Rara) tener presente resultados previos-Digestiva (post prandial)-Infecciosa: fiebre tifoidea y paratifoidea-Sepsis de mala evolución-Casi todas las virosis (Sarampión, Varicela, Gripe, Neumonía )-Intoxicación por benzoles o sulfas-Hemopatías: Leucemias leucopénicas, aplasia medular, etc-Afecciones hepatoesplénicas-Cirrosis hepática, trombosis de la vena porta o esplénica-Leucopenias alérgicas, shock anafiláctico-Afecciones reumáticas-Quimioterapia-Leucopenias carenciales-Colagenopatías: LES, Esclerodermia-AINES

DOSAJE DE Hb

Método de la Cianmetahemoglobina Fue recomendado por el Comité

Internacional para la Estandarización de Hematología (ICSH) en 1966, modificado en 1977 y sigue siendo hasta hoy el más recomendado.

REACTIVO DE DRABKIN

Fe(CN)6K3---------------200 mg KCN---------------------------- 50 mg K3HPO3--------------------140 mg Sterox Se o Triton X-100-------1 mL Llevar a 1L con agua destilada y ajustar el pH

a 7,2 con H3PO4 0.1 N o con KOH 0.1N. Guardar en frasco color caramelo, a T amb,

estable 6 meses.

Fundamento del MétodoHb ( Fe II )

Meta Hb ( Fe III)

Fe(CN)6K3

CIANMETAHEMOGLOBINA

KCN

MAXIMO DE ABSA 540 nm

Técnica5 mL Rvo Drabkin + 20 µL sangre entera anticoagulada

5 minutos

Leer a 540 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro confiltro verde

Curva de calibración

Se realiza cada vez que se prepara o adquiere reactivo.

Kits comerciales : 3 niveles ( bajo, normal, alto )

Muestra testigo de cc conocida (trabajo con dilución al ½ y con el doble )

Curva de Calibración

A=Ɛ.b.C

g/dL

Abs

VENTAJAS DE LOS METODOS

KIT COMERCIAL-Controla la

linealidad del equipo-Estado del rvo

MUESTRA TESTIGO-Controla la linealidad del equipo-Controla la manipulación del material de medición volumétrico(en forma indirecta) pues elpatrón se procesacomo si fuese una muestra-Posible deterioro del reactivo-Variaciones de tensión, Int de la -Lampara,etc.

Para tener en cuenta

La determinación de un patrón diario nos permite:

-Controlar que el reactivo no ha sufrido deterioro

-Controlar el factor humano-Cambios en la tensión eléctrica o

funcionamiento del equipo de lectura.

VALORES DE REFERENCIA

13 – 17 g%13,5 – 17 g%Varones

12 – 15 g%11,5 - 14 g%Mujeres

LaboratorioBibliografía

HEMATOCRITO O VOLUMEN GLOBULAR

Definición

ES EL VOLUMEN DE MASA GLOBULAR EXPRESADO COMO UN % EN EL VOLUMEN DE SANGRE TOTAL

Técnica

1-SE CARGAN TUBOS CAPILARES: Sangre venosa : Sin heparina Punción digital: Con heparina2-LLENAR HASTA 2/3 EL CAPILAR Y CERRAR

EN UN EXTREMO CON PLASTILINA3-CENTRIFUGAR EN CENTRIFUGA ESPECIAL:

15000 rpm 5 a 6 min4-LEER EN ABACO ESPECIAL

VENTAJAS

RÁPIDO < VOLÚMEN DE SANGRE TUBOS CAPILARES DESCARTABLES MAS EXACTO YA QUE AL CENTRIFUGAR

LA SANGRE A MAYOR VELOCIDAD EL VOLUMEN DE PLASMA ATRAPADO POR LOS G.R. EN DICHA CAPA ES <

Valores de referencia

Recién Nacido 52 – 65 % Varones 40 – 48 % Mujeres 37 – 47 %

VALORES BAJOS -ANEMIAS-FASE DE

RECUPERACIÓN DE PERDIDA DE

SANGRE-EMBARAZADAS

VALORES ALTOS

POLIGLOBULIA REAL

HEMOCONCENTRACION : QUEMADURAS , ECLAMPSIAS,

SHOCK QUIRURGICO O TRAUMATICO

ESTADOS DE DESHHIDRATACION (VOM. DIARREAS, DIABETICOS)

HIPOXIA DE LAS ALTURAS

FUMADORES

RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS EL CONTAJE HA ADQUIRIDO MUCHA

PRESICION CON LOS METODOS AUTOMATIZADOS

EL RECUENTO EN CAMARA ES OBSOLETO Y SUJETO AGRAVES ERRORES TANTO QUE CUANDO NO SE DISPONE DE VALORES POR AUTOMATIZACION ES MEJOR PRESCINDIR DE ESTE DATO Y GUIARSE POR LOS VALORES DE HTO Y HB.

VALORES DE REFERENCIA

Mujeres 4 – 4.8 millones/mm³ Varones : 4.5 -5.5 millones / mm³ RN : 5.6 millones / mm³ 4 semanas: 4 millones/ mm³ 6 semanas: 3.6 millones/ mm³ 12 semanas : 3.8 millones/mm³ 6 a 12 años : 4.5 millones / mm³

INDICES HEMATIMÉTRICOS

32 – 35 %29 ± 3 pg90 ± 5 fL

% de Hbcontenida en la masa globular total

Cantidad de Hbcontenida en un hematie

Expresa el volumen medio del GR

CHCMHCMVCM

Hto x 10GR

Hb x 10GR

Hb x 100Hto

ANÁLISIS DE FROTIS SANGUÍNEOS

Coloración May Grüwald - Giemsa

May Grüwald-Eosinato – Azul de Metileno-Metanol Giemsa-Eosinato de Azur II-Azur II-Glicerina y Metanol

TÉCNICA1-Realizar el extendido – Dejar secar- Rotular2- Cubrir 3 minutos con MG (FIJACIÓN)3-Agregar en igual proporción al colorante

buffer o agua común : agua destilada (1:1) con movimientos sin eliminar todo el colorante anterior (ACTIVACION)

4-Volcar la mezcla anterior y (enjuagar) cubrir con Giemsa al 10% durante 15 minutos. PREPARAR EN EL MOMENTO

5-Dejar secar – Observar con Aceite de Inmersión

MG

Metanol : Agente Fijador Eosinato : colorea partes básicas del

citoplasma (rosado) : hematíes, gránulos de Eos, citoplasma de granulocitos.

Azul de Metileno: granulaciones específicas de granulocitos, nucleolos, citoplasmas basófilos, hematíes policromatófilos, colorea levemente el núcleo.

Giemsa

Colorea fuertemente las granulaciones inespecíficas (azurófilas), colorea además fuertemente los núcleos diferenciando la cromatina.

Tiñe también cuerpos de Howell Jolly, anillos de Cabot y Bastones de Auer

RESUMIENDO… NÚCLEOS: En violeta rojizo CITOPLASMA DE LAS CELULAS

LINFOIDEAS :en azul -celeste luminoso. Los gránulos linfoideos en rojo purpúreo

LOS GRANULOS NEUTRÓFILOS .en rosado pardusco

LOS GRANULOS EOSINÓFILOS: en naranja pardo o rojo ladrillo

LOS GRANULOS BASÓFILOS: En azul marino con tonalidad violácea

ERITROCITOS en rosado rojizo

NEUTROFILO

BASOFILO

LINFOCITO

EOSINOFILO MONOCITO

Fórmula Leucocitaria

Cayados…………0 - 2% Neutrófilos……….50 - 70% Eosinófilos……….0 – 8 % Basófilos…………0 – 1% Linfocitos…………20- 40 % Monocitos……….. 4 – 6 %

OCULARES

OBJETIVOS

PLATINAMACRO

CONDENSADOR

MICRO

FIN