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HONGOS ENDÓFITICOS COMO ALTERNATIVA PARA EL MANEJO
Dendroctonus frontalis EN Pinus s.p.p. CATACAMAS, OLANCHO,
HONDURAS.
PRESENTADO POR:
KAROL XIOMARA MARTINEZ RAMOS
PREAENTADO A:
CLIFOR- ICF
CATACAMAS OLANCHO
MARZO 2017
INTRODUCCIÓN
De los países centroamericanos, Honduras es el que cuenta con mayor extensión de área
con vocación forestal, totalizando 9,8 millones de hectáreas, equivalente al 87% del
territorio; de éstas, 5,4 millones cuentan con cobertura forestal. La superficie cubierta con
bosques latifolia dos, incluyendo manglares, se estima en 2,9 millones de hectáreas,
concentrándose en los departamentos de Gracias a Dios, Olancho, El Paraíso, Colón y
Atlántida. Los bosques de pino están localizados principalmente en la parte centro oriental
y occidental del país y cubren una extensión de aproximadamente 2,5 millones de
hectáreas (ICF 2000).
El bosque de coníferas en Honduras es aparentemente estable en su cobertura, no
obstante, ha sufrido una reducción en su capacidad productiva y calidad genética de las
especies que lo conforman. (CCAD-UICN 2005).
Esas amenazas han sobrepasado las capacidades institucionales y de todos los actores del
sector forestal. Su grado de agresividad e intensidad, en estos últimos tres años, fue
marcado por la presencia del fenómeno conocido como El Niño (El Niño Oscilación del
Sur -ENOS)que afectó intensamente con eventos prolongados de sequía La magnitud de
estas tres amenazas (gorgojo descortezador, incendios y talas ilegales) ponen en riesgo
los bienes y servicios que producen los bosques y su disfrute por las comunidades
hondureñas para satisfacer sus condiciones básicas de vida y mejorarla progresivamente
(CONADEH 2016)
D. Frontalis es un insecto descortezador que ataca varias especies de pino, iniciando su
ataque en pinos debilitados por fuegos, alta densidad del rodal u otras causas. El efecto
de su ataque se da por la obstrucción al paso de nutrientes y agua dentro del árbol.
Influenciado por la temperatura, su ciclo de vida dura entre 26 a 54 días, llegando a
alcanzar hasta 10 generaciones por año (Payne 1980)
La detección satelital evidencia que el gorgojo descortezador ha afectado más de 390,000
hectáreas de bosque de pino en fase III, a la cual se llega cuando los arboles ya están
muertos. Pero no expresa las fases iniciales del ataque por no ser detectadas por este
sistema, y podría estimarse que en total existe cerca más de 900,000 hectáreas afectadas,
en las tres fases de la plaga. De no detenerse la expansión actual del gorgojo
descortezador, se perderá más bosques sanos; se extenderá a todo el territorio nacional y
a países vecinos; habrá mayores posibilidades de incendios forestales. Disminución de
las fuentes de agua perdida del habita inclusive en lugares en donde no constituían riesgos
significativos; y facilitará el cambio de las condiciones de uso las tierras (ICF 2016).
Son varios factores bióticos y abióticos que explican el desarrollo de brotes de D.
Frontalis. En el caso de la temperatura, esta puede tener amplios efectos en la fisiología
y el comportamiento de este insecto en las diferentes etapas de su desarrollo; influye
desde la actividad diaria, reproducción, nutrición, desarrollo y supervivencia de los
mismos; en zonas templadas por ejemplo, con una temperatura promedio de 10 °C el ciclo
de vida tardaría alrededor de 82 días mientras que en el verano con temperaturas promedio
de 30 °C el ciclo de vida se acorta a tan solo 31 días (Payne 1980, Ray y Hicks 1980).
En los tres últimos años, el gorgojo descortezador del pino ha causado un considerable
daño sobre el principal capital natural del país (ICF 2016)
.El objetivo de esta investigación es encontrar una alternativa para el manejo de D.
Frontalis haciendo uso de hongos endófiticos estimando la evolución e impacto de
colonización en la raíz de Pinus spp, donde se pretende establecer un ensayo a largo plazo
en áreas plagadas como la comunidad Cerro vigia donde la UNA le estará dando
seguimiento con pasantías.
OBJETIVOS
General
Evaluación de hongos endofíticos como alternativa para el manejo de Dendroctonus
frontalis en Pinus oocarapa
Específicos
Determinar la capacidad de colonización de hongos endófiticos en el sistema radicular de
P. oocarpa.
Valorar el efecto de hongos endófiticos colonizados en el sistema radicular sobre
promoción de crecimiento de P. oocarpa.
Identificar el sitio donde se establecerán dos lotes demostrativos de P. oocarpa
colonizados por hongos endófitos en dos zonas diferenciadas para sus respectivas
evaluaciones en el tiempo.
Evaluar el comportamiento fotosistetico de P oocarpa. Como posible parámetro de
inductores de resistencia.
Martínez Ramos, K.X.2017. Hongos Endófiticos como Alternativa para el Manejo de
Dendroctonus frontalis en Pinusoocarpa.Tesis Lic. Recursos Naturales y Ambiente.
Universidad Nacional de Agricultura. Catacamas, Olancho, Honduras. C.A. 61 P.
RESUMEN
La finalidad de la presente investigación fue, buscar una alternativa para el manejo de D.
frontalis en Pinus oocarpa, haciendo uso de hongos endófiticos no patogénicos del
genero Trichoderma spp y Fusarium spp, los cuales son capaces de colonizar y estar
restrictos al sistema radicular de la planta y promover cambios en promoción de
crecimiento y posible inducción natural de resistencia o tolerancia, se evaluaron 5 cepas
del genero Fusarium spp y 10 de Trichoderma spp y un testigo absoluto. Con un total de
336 plantas evaluadas las cuales fueron inoculadas a los cuatro meses de edad con una
suspensión de concentración 1×106ufc/g de suelo, estudiando las variables de diámetro
del tallo, altura de planta, porcentaje de colonización, largo de raíz, volumen de raíz, peso
de raíz, porcentaje de clorofila. Los endofiticos demostraron ser capaces de colonizar e
incidir a favor de las variables evaluadas siendo la sepa (FTD) el tratamiento que tuvo
mayor porcentaje de colonización, con 86.67%, seguido del (T2AT3) en peso de raíz el
tratamiento que alcanzo un 1.92g fue (FTD) siguiéndole el (TV2A) volumen de raíz 1.90
ml por el (FTD) seguido del (FC2). En cuanto a las variable largo de raíz alcanzó 33.96
cm, y altura 15.70cm, ambos por el tratamiento (FC2) seguido de los tratamientos (FB1),
(FCH2) Y (TH2) en la variable largo de raíz mientras que en la varible Altura los
tratamientos que le siguen son (TV3), (T2AT3) los cuales tuvieron mayor respuesta al
mometo de superar al testigo que alcanzo un largo de raíz de16.30 cm y una una altura
de 2.65 cm. El tratamiento (TH1) fue el tratamiento que más incidió en la variable
Diámetro de tallo con 1.93 mm, seguido del (TH5) y el (T2AT3) mientras que en la
variable porcentaje de clorofila los tratamientos que más incidieron fueron (TH1), (FTR)
y (FCH2) quedando en evidencia que los endófiticos inciden promoción de crecimiento
y resistencia en P oocarpa .
Palabras claves: Fusarium, Trichoderma, Inducción, colonizar, Pinos, crecimiento,
resistencia.
INTRODUCCIÓN
De los países centroamericanos, Honduras es el que cuenta con mayor extensión de área
con vocación forestal, totalizando 9,8 millones de hectáreas, equivalente al 87% del
territorio; de éstas, 5,4 millones cuentan con cobertura forestal. La superficie cubierta con
bosques latifolia dos, incluyendo manglares, se estima en 2,9 millones de hectáreas,
concentrándose en los departamentos de Gracias a Dios, Olancho, El Paraíso, Colón y
Atlántida. Los bosques de pino están localizados principalmente en la parte centro oriental
y occidental del país y cubren una extensión de aproximadamente 2,5 millones de
hectáreas (ICF 2000).
El bosque de coníferas en Honduras es aparentemente estable en su cobertura, no
obstante, ha sufrido una reducción en su capacidad productiva y calidad genética de las
especies que lo conforman. Debido al mal manejo que se les da alos bosques, la tala
incontrolada, los incendios forestales el cambio severo del clima y las plagas como ser la
del gorgojo Descortezador D frontalis (CCAD-UICN 2005).
Esas amenazas han sobrepasado las capacidades institucionales y de todos los actores del
sector forestal. Su grado de agresividad e intensidad, en estos últimos tres años, fue
marcado por la presencia del fenómeno conocido como El Niño (El Niño Oscilación del
Sur -ENOS)que afectó intensamente con eventos prolongados de sequía La magnitud de
estas tres amenazas (gorgojo descortezador, incendios y talas ilegales) ponen en riesgo
los bienes y servicios que producen los bosques y su disfrute por las comunidades
hondureñas para satisfacer sus condiciones básicas de vida y mejorarla progresivamente
(CONADEH 2016)
D. Frontalis es un insecto descortezador que ataca varias especies de pino, iniciando su
ataque en pinos debilitados por fuegos, alta densidad del rodal u otras causas. El efecto
de su ataque se da por la obstrucción al paso de nutrientes y agua dentro del árbol.
Influenciado por la temperatura, su ciclo de vida dura entre 26 a 54 días, llegando a
alcanzar hasta 10 generaciones por año (Payne 1980)
En los tres últimos años, el gorgojo descortezador del pino ha causado un considerable
daño sobre el principal capital natural del país (ICF 2016)
.El objetivo de la presente investigación, fue encontrar una alternativa para el manejo de
D. Frontalis en invernadero y campo , a través del principio de suelos supresivos, en
donde haciendo uso de hongos endófiticos capaces de colonizar y estar restrictos al
sistema radicular de las plantas, han demostrado en diferentes cultivos, ser capaces de
inducir una promoción de crecimiento, mejorar la disponibilidad y absorción de nutrientes
e inducir para la activación del sistema natural de defensa de las plantas, mejorando la
capacidad de reacción a cambios bióticos y abióticos de la planta y pudiera en Pinus spp,
obtenerse similar respuesta e incidir en la prevención de ataques de D. frontalis. Los lotes
demostrativos serán establecidos en ensayo a largo plazo, el primero en el campo
experimental del Departamento de Recursos Naturales y Ambiente de la Universidad
Nacional de Agricultura y otro en una zona que fue afectada y a la vez devastada por el
gorgojo descortezador ubicada en la comunidad Cerro vigia, Catacamas. Donde la UNA
le estará dando seguimiento con pasantías.
MATERIALES Y MÉTODO
Localización geográfica de la investigación
El experimento se realizó en las instalaciones del laboratorio de hongos Entomopatógenos
(LHE) y el vivero Forestal de Recursos Naturales de la Universidad Nacional de
Agricultura (UNA), ubicada en el kilómetro seis carretera que conduce a Dulce Nombre
de Culmí, Catacamas, Olancho, a una altitud de 350 msnm, con una precipitación
promedio anual de 1350 mm y una temperatura promedio de 28ºC (Urbina, 2015)
Origen de las muestras de P. oocarpa
Se obtuvieron de un vivero forestal manejado por ICF ubicado en la 115 Juticalpa
Olancho, con tres meses de edad.
Materiales y Equipo
Placas Petri de 90 mm x 15mm, papel toalla, papel filtro, medio de cultivo (Sabouraud
Dextrose Agar), agua destilada, papel parafilm, alcohol al 70%, masking tape. cubre y
porta objeto, beaker, bisturí, jeringas, marcador permanente, pinzas, probeta, guantes,
libreta de campo, regla milimetrada, lápiz, microscopio (Mejí TECHNO), computadora
portátil, grapadora, calentador y agitador (Fisher scientific), balanza digital marca Scout-
Pro modelo SP2001, memoria usb, machete, azadón , gasas ,auto clave(all américa
modelo 25x-1), cámara USB (motib 350), cámara de flujo laminar (biosafety
class II labconco), Gentamicina,cuerda. Pie de rey digital, bolsas plásticas de diferentes
medidas, placas Petri (cristal) tubo de ensayo.
Manejo del experimento a nivel de laboratorio
Asepsia del laboratorio
El laboratorio de entomopatógenos fue sometido a procesos de limpieza general y
desinfección, desde equipo e infraestructura; para lo cual se utilizó como agente
desinfectante el hipoclorito de sodio al 3.62 % concentración comercial, y este se disolvió
hasta una concentración del 2%. Se lavaron todos los materiales con agua destilada y
detergente para remover cualquier residuo de materia orgánica, y luego se sometieron a
abundante agua para remover partículas del detergente que quedaron en los materiales.
Los materiales y cristalería después de lavado y secado se procedió a esterilizar por calor
húmedo o presión de vapor de agua, se llevó a cabo con la ayuda de una autoclave, el cual
se manejó a una presión de 1 atmósferas o 15 libras de presión hasta alcanzar a una
temperatura de 121.6 ºC a 124 ºC, la cual se debe mantener durante un tiempo de 20
minutos; se esterilizaron los medios de cultivo, platos Petri (Cristal), tubos de ensayo,
papel toalla y probetas.
Desinfección de la cámara de aislamiento
Se desinfectó antes de cada aislamiento con alcohol al 70%, por dentro y afuera de la
misma manera, se encendió el mechero y se mantuvo cerrada por dos minutos, el mechero
se mantuvo encendido en todo el proceso, luego se procedió a realizar los aislamientos;
la desinfección personal se llevó a cabo antes y después de realizar los aislamientos.
Desinfección de la cámara de aislamiento
Se desinfectó antes de cada aislamiento con alcohol al 70%, por dentro y afuera de la
misma manera, se encendió el mechero y se mantuvo cerrada por dos minutos, el mechero
se mantuvo encendido en todo el proceso, luego se procedió a realizar los aislamientos;
la desinfección personal se llevó a cabo antes y después de realizar los aislamientos.
Como último paso para la desinfección se utilizó luz ultravioleta tipo C, por una hora con
el objetivo de eliminar cualquier contaminante que ingrese momentos antes de realizar
el aislamiento.
Preparación de la suspensión de esporas
Los hongos endófiticos obtenidos se dejaron crecer en SDA durante 15 dias. Bajo
condiciones asépticas, se procedió a remover las esporas aplicando la cantidad de 10 ml
de agua estéril. Se efectuó un rayado con una espátula de aluminio, que facilito el
desprendimiento de las esporas del hongo. La solución resultante fue filtrada por medio
de una gasa y decantada en un beaker de 500 ml. Esta fue la solución madre de la cual se
tomó un ml a un tubo de ensayo conteniendo 9ml de agua estéril, el cual fue 1x101 así
continuaremos con el proceso para obtener una solución de esporas hasta tener una
concentración de 1x106
De cada solución resultante se efectuó conteos para medir la concentración de esporas
mediante un hematocímetro de New waber. La suspensión de esporas se deberá ajustar a
una concentración de 1x106ufc/ml. Una vez que se tiene el biopreparado se procedió a la
inoculación de las plantas.
Las inoculaciones se llevaron a cabo a los cuatro meses de edad de la planta de P.
oocarpa, a una concentración de 1x106ufc/g de suelo, tres semanas después se realizó una
segunda inoculación.
Manejo del experimento a nivel de campo
Preparación de los tratamientos estos se realizaron en el vivero forestal del Departamento
de Recursos Naturales de la UNA donde cada tratamiento se compuso de 21 plantas de
Poocarpaa las cuales se mantuvieron bajo micro túnel y suelo cubierto con arena para
mantener la humedad.
Fertilización de las plantas de P oocarpa
Se hicieron 5 fertilizaciones con bokashi disuelto en agua dos fertilizaciones antes de la
inoculación y tres después de la inoculación.
Descripción de los tratamientos
Los tratamientos evaluados (cuadro 1) fueron cinco del genero Fusarium spp diez de
género Tricodermaspp los cuales fueron obtenidos dela Micoteca del laboratorio de
entomopatogenos de la Universidad Nacional de Agricultura contando con un testigo
absoluto para un total de16.
Cuadro 1. Descripción de los tratamientos usados
Tratamiento Concentración
T1-(TV3) 1×106
T2-(T2AT3) 1×106
T3-(TH5) 1×106
T4-(TT2) 1×106
T5-(TH1) 1×106
T6-(TH3) 1×106
T7-(TH4) 1×106
T8-(TV6) 1×106
T9-(TH2) 1×106
T10-(TV2ª) 1×106
T11-(FCH2) 1×106
T12-(FTR) 1×106
T13-(FC2) 1×106
T14- (FTD) 1×106
T15-(FB1) 1×106
T16 -Testigo
Diseñó Experimental
Los tratamientos fueron evaluados a través de un diseño de bloques completamente al
azar, con 16 tratamientos, utilizando 21 repeticiones en donde cada planta representaba
la unidad experimental, obteniendo como resultado un total de 336plantas de P oocarpael
modelo lineal experimental es el siguiente:
𝑌𝑖𝑗 = 𝜇 + 𝑡𝑖 + 𝐸𝑖𝑗
Donde:
Yij = observación del tratamiento
Ti = efecto del tratamiento
Eij = termino de error aleatorio asociado a la observación Yij
Variables estudiadas
Porcentaje de colonización
El porcentaje de colonización se midió dos meses después de la segunda inoculación
tomando cinco plantas seleccionadas de cada tratamiento cortando la raíz de la parte
aérea se procedió a desinfectar cada una de las raíces posteriormente se dividió en tres
partes o zonas (alta, media y baja),con el fin de encontrar la capacidad de colonización
que presento cada aislado, cada zona se dividió en tres pedazos los cuales se sembraron
en medio de cultivo (SDA) Sabouraud Dextrose Agar observando por dos semanas el
nivel de colonización determinando el porcentaje de colonización según el número de
tejidos con presencia de micelio (Zabulón, 2013).
X=𝑵𝑻𝑪
𝑵𝑻𝑻 x 100
Donde:
X=% porcentaje de colonización
NTC = Número de tejidos colonizados
NTT= Número de tejidos totales
pruebas de colonización
Se llevó acabó pruebas de colonización en plantas de P oocarpa con cuatro meses de
edad. El tejido interno se cortó en pequeños trozos de aproximadamente 1-1.5 cm de
largo; posteriormente, estos pedazos se colocaron en medio de cultivo Sabouraud-
dextrosa-agar al 100% (SDA 100%), conteniendo un cc de gentamicina A-40, y se
incubaron a temperatura ambiente en la oscuridad, una semana después, éstos aislados
fueron transferidos a medio de cultivo Sabouraud-dextrosa-agar al 100% (SDA 100%) en
placas esterilizadas de cristal para su purificación hasta su identificación clasificación.
Mediante el uso de microscopio.
Imagen1 Muestra el orden en el cual se evaluó el porcentaje de colonización por arte de
los hongos Endófittico en el sistema Radicular de P oocarpa.
Diámetro del tallo
La medición de esta variable se hizo en milímetros haciendo uso de un pie de rey digital
a una altura de dos cm de la base del suelo realizándose cinco repeticiones la primera a
los tres meses y medio de edad luego cada quince días hasta los ocho meses de edad.
Peso fresco de raíz:
Para la evaluación de esta variable se tomó cinco plantas de cada tratamiento se lavó la
raíz bajo caudal para evitar el daño de las mismas con la ayuda de un bisturí se separó la
parte foliar de la radicular. Después se procedió a desinfectar la raíz con hipoclorito al
(10), alcohol al (10%)y agua al (100%) una por una realizado este procedimiento se
coloraron las raíces en papel toalla para extraer la humedad luego se procedió a pesarla
en(g) haciendo uso de una balanza digital.
Volumen de raíz:
Para la medición de esta variable se usaron las mismas cinco plantas sacrificadas en la
variable Peso de Raíz, luego se procedió a lavarla para quitar residuos de suelo
posteriormente se introdujo en una probeta con un volumen de agua conocido luego se
tomó el diferencial de volumen en ml.
Altura de la planta
Esta variable se obtuvo utilizando una regla milimetrada tomando 5 veces la altura de la
planta desde la base del tallo hasta donde nace la acícula más joven, realizando la primera
medición a los tres meses y medio de edad de la plantas aun no inoculadas, a los 10 días
después de la segunda inoculación se tomó la segunda, y las con un intervalo de 15 días
entre cada toma de datos hasta los ocho meses de edad.
Largo de Raíz
La toma de esta variable se realizó con las mismas cinco plantas sacrificadas para la
pruebas de colonización volumen y peso, haciendo uso de una regla milimetrada tomada
de la base del tallo hasta donde termina la raíz principal.
Análisis Estadístico
A cada una de las variables se les realizo el estudio del ANAVA aplicándole a cada una
de ellas la prueba de LSD FISHER a través de la cual se identificó el grado de diferencia
estadística de cada tratamiento
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Porcentaje de colonización de P. oocarpa
Los resultados de esta variable manifiestan que todos los endófiticos fueron capaces de
colonizar el sistema radícula de P. oocarpa (figura1).
Figura 1. Porcentaje de colonización
El tratamiento con mayor capacidad para colonizar P oocarpa fue el (T14-FTD) con un
86.67 % seguido el (T2-2AT3). Los resultados Obtenidos de esta variable nos presentan
una semejanza en uno de los tratamientos, en investigaciones anteriores realizadas en
plantas de Zea maíz donde 2A Tomate D, fue el mejor tratamiento en la variable de
colonización (Castro, 2016).
AAB AB
AB AB ABAB AB AB AB AB AB
ABB B
0102030405060708090
100
Po
rcen
taje
de
colo
niz
acio
n
TratamientosR2: 0.27 C.V: 35.06 P-Valor: 0.6604
Cuadro 2. Porcentajes de colonización por zonas
Zona 1= parte baja de la raíz, zona 2= parte media de la raíz, zona 3=parte alta de la raíz.
El tratamiento T14 (FTD), mostro un 100% de colonización en la zona, al igual que el
T7, T6 y T11, mientras que en la zona 2 el T15 (FB1) fue el único que presento esta
tendencia, en la zona tres el tratamiento T10 (TV2A), en promedio la zona uno tuvo un
mayor porcentaje, seguido de la zona dos y tres respectivamente estos es porque estos
endofiticos son exclusivos de raíces comenzando a colonizar las raíces superficiales ya
que tienen un mayor acceso a ellas luego se distribullen por toda la raíz hasta alcanzar
una colonización de un 100% de toda la raíz.
Tratamientos % de colonización
Zona 1 Zona 2 Zona 3
T1 (TV3) 80% 80% 40%
T2 (T2AT3) 80% 80% 80%
T3 (TH5) 60% 40% 40%
T4 (TT2) 80% 80% 30%
T5 (TH1) 60% 80% 40%
T6 (TH3) 100% 60% 40%
T7 (TH4) 100% 40% 80%
T8 (TV6) 40% 20% 80%
T9 (TH2) 80% 60% 40%
T10 (TV2ª) 40% 80% 100%
T11 (FCH2) 100% 60% 80%
T12 (FTR) 80% 60% 40%
T13 (FC2) 80% 40% 40%
T14 (FTD) 100%% 80% 80%
T15 (FB1) 60% 100% 60%
Diámetro de P oocarpa
Como se muestra en la figura 2, el género Trichoderma spp (T5H1) con 1.93 mm mostrò
diferencia estadística entre los demás tratamientos, destacándose sobre los del género
Fusarium spp esta variable presento un.
Figura 2. Diámetro (mm) de P oocarpa inoculados con hongos endófiticos del género
Fusarium y Trichoderma.
Superando al testigo de (0.43mm) con una diferencia de (1.5mm) todos los demás
tratamientos muestran una diferencia con respecto al testigo. Coincidiendo con los
resultados obtenidos por (Cortes, 2015) en plantas de Chile y Melón donde encontró para
el género Tricoderma spp un mayor diámetro de tallo. Resultados similares fueron
encontrados por Urbina (2015) en Licophersicum sculentum y Zea maíz.
A AB ABC ABCD ABCDE ABCDE BCDE CDE CDEF DEF DEF EF EF F F
G
0
0.5
1
1.5
2
2.5
Dia
met
ro (
mm
)
Tratamientos EvaluadosR2: 0.34 CV:31.56 P- Valor: 0.0001.
Peso fresco de la Raíz de P oocarpa
Los análisis obtenidos de esta variable nos reflejan que los Endófiticos tuvieron una
diferencia altamente significativa en el peso de raíz comparado al testigo. En el cual el
género Fusarium spp tuvo mayor superioridad en peso de raíz que los Endófiticos del
genero Tricoderma lo cual se puede observar en la Figura 3
Figura 3. Peso fresco de la raíz en gramos de P oocarpa
La figura 2 muestra que los mejor tratamiento es del género Fusarium spp (T14-FTD)
con (1.92g) y el segundo mejor tratamiento del género Trichoderma spp (T10-V2A) con
(1.62), donde el T14 y T10 superan al testigo con 0.92 g y 0.64g respectivamente, donde
el testigo presento un peso total de 0.9 g. los resultados encontrados tienen una
concordancia con datos encontrados en plantas de Melón donde los mejores tratamientos
fueron Hogge1 del género Tricoderma con(11.06g) y TD del genero Fusarium con 8.46
AAB ABC ABCD
BCD BCD BCDCD CD CD D D D D D D
0
0.5
1
1.5
2
2.5
Pes
o d
e R
aiz
(gm
)
Tratamientos EvaluadosR2: 0.36 CV: 48.15 P- Valor: 0.0084
g (Cortes, 2015. También encontró que los generos Trichoderma spp tuvieron mayor
influencia de peso de raíz en plantas de chile. (Castro, 2015) en plantas de Tomate y Maíz
concluyo que el género Tricoderma es el que mayor incidencia mostró en cuanto a esta
variable, investigaciones las encierran plantas con raíces menos lignificacion que la del
Punus.
Volumen de Raíz de P oocarpa
Los análisis demostraron que los endófiticos tuvieron un efecto favorable en la variable
con un superando de una manera significativa al testigo.Siendo los del genero Fusarium
spp los que más se reflejaron tal como se muestra en la siguiente Figura 4
A
AB AB AB AB AB ABAB BC BC BC BC BC BC BC
C
0.000.200.400.600.801.001.201.401.601.802.00
Vo
lum
en d
e R
aiz
(ml)
Tratamientos EvaluadosR2: 0.30 CV: 36.40 P- Valor: 0.0473
Figura 4. Volumen (ml) de P oocarpa inoculados con endófiticos del género Fusarium
y Tricoderma
El T14 (FTD) con 1.90 ml demostró ser el mejor tratamiento en cuanto a volumen de raíz
en P oocarpa. Los tratamientos T11 (FCh2) 1.58ml, T13 (FC2) 1.58ml, T4 (TT2) 1.54
ml, T7 (TH4) 1.58ml son estadísticamente iguales, el resto de los tratamientos superan al
testigo con una significativa diferencia estadística el cual tuvo un volumen de raíz de
0.70ml. Urbina (2015 en plantas de Maíz demostró que los tratamientos a base de
Tricoderma spp fueron los que mayor volumen de raíz indujeron.
Altura de P ocarpa
Los tratamientos demuestran tener una superioridad respecto al testigo siendo el mejor
tratamiento a base de Tricoderma, tal como se muestra en la figura 5.
A
B B B B B B B B B B B B B B B
02468
1012141618
Alt
ura
(cm
)
Traramientos Evaluados
R2: 0.05 CV: 221.47 P-Valor 0.2527
Figura 5. Altura (cm) de P oocarpa.
Los diferentes tratamientos tuvieron rango de 2,65 cm a 15.70 cm, El tratamiento que
muestra mayor significancia en cuanto promoción de altura es el género Fusarium spp
T13 (FC2) con 15,70 cm, siendo diferentes el resultado encontrado por (Urbina, 2015)
en plantas de Maíz donde expresas que el mejor tratamiento inductor de altura es a base
Endofificos del genero Tricoderma.
Largo de la Raíz de P oocarpa
Endófiticos inoculados en P oocarpa demuestran que tuvieron una respuesta favorable
los cuales superaron al testigo con una diferencia Figura 6.
AAB AB
ABC ABC ABC ABC ABC ABC BC BC BC BC BC BC C
05
10152025303540
Larg
o d
e R
aiz
Tratamientos EvauadosR2: 0.23 CV: 41.02 P- Valor 0.2324
Figura 6. Largo de la raíz (cm) de P oocarpa inoculados con endófiticos del género
Fusarium y Tricoderma
En la variable largo de raíz el tratamiento que tuvo mayor diferencia estadística fue el
T13 (FC2) con (33.96cm) inoculados con Fusarium, y T15 ((FB1) con (29.30cm)
mientras que el T11 (FC2) con (28.80cm) son significativamente iguales siendo estos
Inoculados con Fusarium el resto de los tratamientos son similares los cuales superan al
testigo el cual tuvo un largó de (16.30cm)
Porcentaje de Clorofila de P oocarpa
Podemos ver la respuesta que tuvieron los endófitos en cuanto al porcentaje de Clorofila
AAB ABC ABC ABC ABC ABC ABC ABC ABC BC
BC BC BCBC C
0
5
10
15
20
25
30
35
% d
e cl
oro
fila
Tratamientos EvaluadosR2: 0.09 CV: 83.52 p- valor 0.3613
Figura 7. Porcentaje de clorofila P oocarpa
Los resultados de esta variable demuestra que los endófiticos ayudan al proceso
fotosintético de las plantas de P. oocarpa, ayudándola a captar mayor porcentaje de de
luz por lo tanto la planta tendrá mayor energía y así mismo una mejor asimilación los
nutrientes y procesos metabólicos que requiere una planta y que esta pueda responder a
condiciones ambientales como ser la Temperatura, concentración de CO2 y
disponibilidad de agua ya que son los factores limitantes para que una planta pueda tener
una buena promoción de crecimiento y resistencia.
VI CONCLUSIONES
Tratamientos del genero Fusarium demostraron tener mayor capacidad de colonizar el
sistema radicular de P oocarpa.
El género Fusarium mostro mayor inducción en la promoción de altura, largo de raíz,
volumen de raíz y peso de raíz, siendo superado por el género Tricoderma en cuanto al
diámetro de tallo.
Los Endófiticos da mejor vigor y resistencia a las plantas de Pinus oocarpa, esto se pudo
observar en el ensayo que se estableció, donde plantas no inoculadas tuvieron más muerte
por falta de riego que las plantas inoculadas con Endófiticos, ambas expuestas en el
mismo ambiente.
Se concluyó Con la ayuda de la oficina local ICF Catacamas y el proyecto CLIFOR
establecer 2 parcelas Demostrativas una en el cerro El Vigia ubicada en el departamento
de Olancho la cual tendrá cubrirá una área de 0.23 mz y la otra será ubicada en la
universidad Nacional de Agricultura en área perteneciente al departamento de Recursos
Naturales.
ANEXOS
Anexo 1.ANAVA Variable Altura (cm) de P oocarpa
Karol Martinez: 23/02/2017 - 08:24:18 p.m. - [Versión: 17/11/2016]
Análisis de la varianza
ALTURA
Variable N R² R² Aj CV
ALTURA DIFERENCIADA 335 0.05 0.01 221.47
Cuadro de Análisis de la Varianza (SC tipo III)
F.V. SC gl CM F p-valor
Modelo. 2734.83 15 182.32 1.22 0.2527
TRATAMIENTO 2734.83 15 182.32 1.22 0.2527
Error 47571.25 319 149.13
Total 50306.09 334
Test:LSD Fisher Alfa=0.05 DMS=7.42606
Error: 149.1262 gl: 319
TRATAMIENTO Medias n E.E.
T13 Fusarium Cunde 2 15.70 21 2.66 A
T1 Trichoderma Vernon 3.7.36 21 2.66 B
T2Trichoderma 2ATomate 3 6.64 21 2.66 B
T4 Tricoderma Tomate 2 5.72 21 2.66 B
T7 Tricoderma Hogge 4 5.65 21 2.66 B
T3 Tricoderma Hogge 5 5.44 21 2.66 B
T5 Tricoderma Hogge 1 5.06 21 2.66 B
T14 Fusarium Tomate D 4.63 21 2.66 B
T11 Fusarium Chile 2 4.46 21 2.66 B
T8 Tricoderma vernon 6 4.36 21 2.66 B
T10 Tricoderma Vernon 2ª 4.33 20 2.73 B
T15 Fusarium Berenjena 1 4.18 21 2.66 B
T6 Tricoderma Hogge 3 4.17 21 2.66 B
T12 Fusarium Tabaco R 4.14 21 2.66 B
T9 Tricoderma Hogge 2 3.68 21 2.66 B
T16 Testigo 2.65 21 2.66 B
Medias con una letra común no son significativamente diferentes (p > 0.05)
Anexo 2.ANAV Variable Diámetro de P oocarpa
Variable N R² R² Aj CV
DIAMETRO DIFERENCIADO 335 0.34 0.31 31.56
Cuadro de Análisis de la Varianza (SC tipo III)
F.V. SC gl CM F p-valor
Modelo. 36.65 15 2.44 11.01 <0.0001
TRATAMIENTO 36.65 15 2.44 11.01 <0.0001
Error 70.77 319 0.22
Total 107.42 334
Test:LSD Fisher Alfa=0.05 DMS=0.28642
Error: 0.2218 gl: 319
TRATAMIENTO Medias n E.E.
T5 Tricoderma Hogge 1 1.93 21 0.10 A
T3 Tricoderma Hogge 5 1.86 21 0.10 A B
T2Trichoderma 2ATomate 3 1.79 21 0.10 A B C
T1 Trichoderma Vernon 3... 1.69 21 0.10 A B C D
T12 Fusarium Tabaco R 1.62 21 0.10 B C D E
T10 Tricoderma Vernon 2ª 1.62 20 0.11 B C D E
T6 Tricoderma Hogge 3 1.58 21 0.10 B C D E
T7 Tricoderma Hogge 4 1.57 21 0.10 C D E
T11 Fusarium Chile 2 1.53 21 0.10 C D E F
T9 Tricoderma Hogge 2 1.50 21 0.10 D E F
T8 Tricoderma vernon 6 1.48 21 0.10 D E F
T14 Fusarium Tomate D 1.37 21 0.10 E F
T13 Fusarium Cunde 2 1.36 21 0.10 E F
T15 Fusarium Berenjena 1 1.28 21 0.10 F
T4 Tricoderma Tomate 2 1.28 21 0.10 F
T16 Testigo 0.43 21 0.10 G
Medias con una letra común no son significativamente diferentes (p > 0.05)
Anexo 3.ANAVA Variable Peso de Raíz de P oocarpa
Karol Martinez: 23/02/2017 - 03:30:23 p.m. - [Versión: 17/11/2016]
Análisis de la varianza
Variable N R² R² Aj CV
P DE RAIZ 80 0.36 0.21 48.15
Cuadro de Análisis de la Varianza (SC tipo III)
F.V. SC gl CM F p-valor
Modelo. 10.51 15 0.70 2.38 0.0084
TRATAMIENTO 10.51 15 0.70 2.38 0.0084
Error 18.82 64 0.29
Total 29.33 79
Test:LSD Fisher Alfa=0.05 DMS=0.68515
Error: 0.2941 gl: 64
TRATAMIENTO Medias n E.E.
T14 Fusarium Tomate D 1.92 5 0.24 A
T10 Tricoderma Vernon 2ª 1.68 5 0.24 A B
T15 Fusarium Berenjena 1 1.54 5 0.24 A B C
T13 Fusarium Cunde 2 1.54 5 0.24 A B C
T11 Fusarium Chile 2 1.28 5 0.24 A B C D
T12 Fusarium Tabaco R 1.28 5 0.24 A B C D
T8 Tricoderma vernon 6 1.18 5 0.24 B C D
T1 TrichodermaVernon 3 1.00 5 0.24 B C D
T16 Testigo 0.96 5 0.24 C D
T9 Tricoderma Hogge 2 0.86 5 0.24 C D
T6 Tricoderma Hogge 3 0.84 5 0.24 D
T2Trichoderma 2ATomate 3 0.82 5 0.24 D
T4 Tricoderma Tomate 2 0.82 5 0.24 D
T7 Tricoderma Hogge 4 0.80 5 0.24 D
T3 Tricoderma Hogge 5 0.76 5 0.24 D
T5 Tricoderma Hogge 1 0.74 5 0.24 D
Medias con una letra común no son significativamente diferentes (p > 0.05)
Anexo 4.ANAVA Volumen de Raíz de P oocarpa
Variable N R² R² Aj CV
V DE RAIZ 80 0.30 0.14 36.40
Cuadro de Análisis de la Varianza (SC tipo III)
F.V. SC gl CM F p-valor
Modelo. 6.39 15 0.43 1.84 0.0473
TRATAMIENTO 6.39 15 0.43 1.84 0.0473
Error 14.80 64 0.23
Total 21.19 79
Test:LSD Fisher Alfa=0.05 DMS=0.60759
Error: 0.2312 gl: 64
TRATAMIENTO Medias n E.E.
T14 Fusarium Tomate D 1.90 5 0.22 A
T13 Fusarium Cunde 2 1.58 5 0.22 A B
T11 Fusarium Chile 2 1.58 5 0.22 A B
T7 Tricoderma Hogge 4 1.54 5 0.22 A B
T4 Tricoderma Tomate 2 1.54 5 0.22 A B
T2Trichoderma 2ATomate 3 1.52 5 0.22 A B
T12 Fusarium Tabaco R 1.46 5 0.22 A B
T8 Tricoderma vernon 6 1.34 5 0.22 A B
T10 Tricoderma Vernon 2ª 1.26 5 0.22 B C
T15 Fusarium Berenjena 1 1.18 5 0.22 B C
T6 Tricoderma Hogge 3 1.18 5 0.22 B C
T9 Tricoderma Hogge 2 1.16 5 0.22 B C
T1 TrichodermaVernon 3 1.12 5 0.22 B C
T5 Tricoderma Hogge 1 1.06 5 0.22 B C
T3 Tricoderma Hogge 5 1.02 5 0.22 B C
T16 Testigo 0.70 5 0.22 C
Medias con una letra común no son significativamente diferentes (p > 0.05)
Anexo 5.ANAVA de Largo de Raiz de P oocarpa
Variable N R² R² Aj CV
L RAIZ 80 0.23 0.05 41.02
Cuadro de Análisis de la Varianza (SC tipo III)
F.V. SC gl CM F p-valor
Modelo. 1767.03 15 117.80 1.29 0.2324
TRATAMIENTO 1767.03 15 117.80 1.29 0.2324
Error 5826.78 64 91.04
Total 7593.81 79
Test:LSD Fisher Alfa=0.05 DMS=12.05566
Error: 91.0434 gl: 64
TRATAMIENTO Medias n E.E.
T13 Fusarium Cunde 2 33.96 5 4.27 A
T15 Fusarium Berenjena 1 29.30 5 4.27 A B
T11 Fusarium Chile 2 28.80 5 4.27 A B
T9 Tricoderma Hogge 2 26.60 5 4.27 A B C
T3 Tricoderma Hogge 5 25.40 5 4.27 A B C
T8 Tricoderma vernon 6 24.40 5 4.27 A B C
T10 Tricoderma Vernon 2ª 24.38 5 4.27 A B C
T12 Fusarium Tabaco R 24.04 5 4.27 A B C
T5 Tricoderma Hogge 1 22.20 5 4.27 A B C
T1 TrichodermaVernon 3 21.80 5 4.27 B C
T14 Fusarium Tomate D 20.98 5 4.27 B C
T7 Tricoderma Hogge 4 20.40 5 4.27 B C
T4 Tricoderma Tomate 2 18.40 5 4.27 B C
T6 Tricoderma Hogge 3 17.80 5 4.27 B C
T2Trichoderma 2ATomate 3 17.40 5 4.27 B C
T16 Testigo 16.30 5 4.27 C
Medias con una letra común no son significativamente diferentes (p > 0.05)
Anexo 6.ANAVA Variable Porcentaje de Colonización de P oocarpa
Karol Martinez: 26/02/2017 - 04:27:29 p.m. - [Versión: 17/11/2016]
Análisis de la varianza
Variable N R² R² Aj CV
% COLONIZACION 45 0.27 0.00 35.06
Cuadro de Análisis de la Varianza (SC tipo III)
F.V. SC gl CM F p-valor
Modelo. 6013.33 14 429.52 0.80 0.6604
TRATAMIENTOS 6013.33 14 429.52 0.80 0.6604
Error 16066.67 30 535.56
Total 22080.00 44
Test:LSD Fisher Alfa=0.05 DMS=38.58960
Error: 535.5556 gl: 30
TRATAMIENTOS Medias n E.E.
T14 Fusarium Tomate D 86.67 3 13.36 A
T2Trichoderma 2ATomate 3 80.00 3 13.36 A B
T11 Fusarium Chile 2 80.00 3 13.36 A B
T10 Tricoderma Vernon 2ª 73.33 3 13.36 A B
T15 Fusarium Berenjena 1 73.33 3 13.36 A B
T7 Tricoderma Hogge 4 73.33 3 13.36 A B
T6 Tricoderma Hogge 3 66.67 3 13.36 A B
T1 Trichoderma Vernon 3.. 66.67 3 13.36 A B
T4 Tricoderma Tomate 2 63.33 3 13.36 A B
T12 Fusarium Tabaco R 60.00 3 13.36 A B
T5 Tricoderma Hogge 1 60.00 3 13.36 A B
T9 Tricoderma Hogge 2 60.00 3 13.36 A B
T13 Fusarium Cunde2 53.33 3 13.36 A B
T8 Tricoderma vernon 6 46.67 3 13.36 B
T3 Tricoderma Hogge 5 46.67 3 13.36 B
Medias con una letra común no son significativamente diferentes (p > 0.05)
Anexo 7.ANAVA Variable Porcentaje de Clorofila de P oocarpa
KAROL MARTINEZ: 04/03/2017 - 10:50:47 a.m. - [Versión: 17/11/2016]
Análisis de la varianza
Variable N R² R² Aj CV
PORCENTAJE DE CLOROFILA 176 0.09 0.01 83.52
Cuadro de Análisis de la Varianza (SC tipo III)
F.V. SC gl CM F p-valor
Modelo. 5546.36 15 369.76 1.10 0.3613
TRATAMIENTOS 5546.36 15 369.76 1.10 0.3613
Error 53830.92 160 336.44
Total 59377.28 175
Test:LSD Fisher Alfa=0.05 DMS=15.44614
Error: 336.4433 gl: 160
TRATAMIENTOS Medias n E.E.
T5 Tricoderma Hogge 1 32.59 11 5.53 A
T12 Fusarium Tabaco R 29.51 11 5.53 A B
T11 Fusarium Chile 2 27.76 11 5.53 A B C
T13 Fusarium Cunde2 27.01 11 5.53 A B C
T14 Fusarium Tomate D 25.37 11 5.53 A B C
T8 Tricoderma vernon 6 23.95 11 5.53 A B C
T9 Tricoderma Hogge 2 23.91 11 5.53 A B C
T6 Tricoderma Hogge 3 23.18 11 5.53 A B C
T10 Tricoderma Vernon 2ª 22.58 11 5.53 A B C
T3 Tricoderma Hogge 5 21.21 11 5.53 A B C
Testigo 19.39 11 5.53 A B C
T7 Tricoderma Hogge 4 15.78 11 5.53 B C
T15 Fusarium Berenjena 1 15.68 11 5.53 B C
T4 Tricoderma Tomate 2 15.49 11 5.53 B C
T2Trichoderma 2ATomate 3 14.34 11 5.53 B C
T1 Trichoderma Vernon 3.. 13.65 11 5.53 C Medias con una letra común no son significativamente diferentes (p > 0.05)
Anexo 8. Georreferenciación del Cerro el VigiaÁrea en que se Plantaron las plantas
Inoculadas para futuros Monitoreo.
Anexo 9. Identificaciones del área donde se estableció la parcela demostrativa
Anexo 10. Reproducción de Hongos Endófito del genero Fusarium
Anexo 11.Reproducción de Hongos eneolíticos del genero Trichoderma
Anexo 12. Ensayo establecido en Campo
Anexo 13. Comparación de raíz testigo con plantas inoculada con endófitos
Fusarium
Testigo
Trichoderma Fusarium Fusarium
