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わが国におけるヒトのプリオン病の発症状況：最近9年間のサーベイランスデータ

○野崎一朗1、浜口毅1、篠原もえ子1、中村好一2・6、北本哲之3・6、・佐藤猛4・6、水澤

英酎・6、森若文雄6、志賀裕正6二三條伸夫研、黒岩義孝6、西澤正塾8、武田雅俊6、

葛原茂樹6、黒田重利6、村井弘之6、村山繁雄8、立石潤6、山田正仁L6

1金沢大学大学院脳老化・神経病態学（神経内科）、相治医科大学公衆衛生学、嗜北

大学大学院プリオン蛋白研究部門、4東大和病院、5東京医科歯科本学大学院脳神経病 態学（神産内科）、6「プリオン病及び遅発性ウイルス感染症に関する調査研究軌・ CJDサーベイランス委員会

【背景・目的】わが国では）通常の孤発性Crcutzfbldt・Jakob病（ロD）、硬膜移植後qJD

に加え、ウシ海綿状脳症からの感染が疑われる変異型UDも確認されている。プリ

オン病の病如多彩であり、その発症動向を把握することは重要な課題と考えられる。 【方準】「プリオン病及び遅発性ウイルス感染率に関する調査研究軌・CJDサーベ

イランス委員会による現行のサーベイランスシ不テネは19卯年4月より開始され、

2PO8年2月皇での9年間にプリオン病の疑いとしセ情報収集された1339例が検和さ

れた。むカサエペイランス委員会での検討の結果、プリオン病と判定された症例につ いて、その内釈、．東庄状況などを検討した。

【結果】ノ1甲9い例がプり・オン病と判定された。プリオン病の発症故については、2007 年はま渾構報収集不足や少ないが、それ以外は牢即20例前後で推移していた。病型

別では惑襲呟申Dが吻朝（76・叫遣伝性プリオン野卑ミ171例肌6．0％）、硬疲移甲

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次に叩が良質乳癌庚型掛ぎ同数あり・、啄米のデータと比較すると多い結果とな ったこM壇、Wl二は掴も確恕されなからた。遺伝性プリオン病の変異別頻度はV180Ⅰ、

PlO2L、色08K、M232R他の順であった。1欧来諸国のデータと比較する．と、日本で4

割を占めるY180Ⅰは欧米諸国ではまれで、4番目に多いM232Rについては欧米では1 例も艶められなかった。十方欧米で2番目に多いV210Ⅰはわが国では確認されなかっ た，硬膜移植後C皿の発生は2002年以′降減少傾向．にあり、現在までに132例が確認 された。変異型CJDに関しては、2001年に尭痘した1例のみであった。 【結副わが国ゐプリオン碑剖検牢は啄準韓国に比較し著明に低率であった。孤発性

ロDについては、わが国では欧米に鱒較・して血瓜型が多かったがそこ剖検畢自体が低

く非典型例が多く剖検されている可能性が考えられた。硬膜移植後仁JDが多発してい るが、2002年以降はその発生は減少傾向であった。遺伝性プリオン病の変異別頻度は

V180Ⅰ、PlO2L、E罰OK、M232R他の順で、これは欧米諸国の割合と著しく異なって いた。

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演題名ウイルス除去膜浪過による異常型プリオン蛋白質（Pr戸）の除去

演者名○前野英毅l）、村井活史l）、武田芳於l）、室卯怯‖、脇坂明莫‖、 沼田芳彰1）、堀内基広2ト

所属機閑名1）・日本赤十字社血祭分画センター、2）北海道大学大学院獣医学 研究科プリオン病学講座

【目的と意義】血祭分画製剤のvCJDに対する安全性を評価するために、プリオン痛 感染動物の脳乳剤を工程液に添加して、PrP虫の除去効果を検証することが一般的に行 われている。しかし、血莱中甲PrP立が脳内のPrP鎚と同掛こ凝集しているのかは不明 であり、血痕中の匪Pおが小さなも・のであった場合には、池過工撃におけるPrP鎚除去 効果を過大に評価してしまう可能性があるoSil■ヤeiraらはスクレイピー263K株に感

染したハムスターの脳乳剤をSodiuLnUndecylSulfate（SUS）で処理し、最も感染性が ぁるPr戸は17－27n皿セあると報告したが、この様な小さなPrPを用いれば沈過工程 の汁控除去効果をワ「ストケースとして評価できると考えた。そこで、日本赤十字 社血祭分画センターで製造．しているウイルス除去嘆濾過工程を含んでいる2つの製剤 （血扱凝周第YIII因子製剤［FⅧ】：プラノバ20豆

坤IG】：プラノ′く35N濾過）について、SUSで処直した畔を用いてその藤凄効果を 検証した。

【材料と方法】263K殊に感染したノぺムチターの1P纏乳如こS車OSylを－1陀なるよ

うに添加し、

．

、

で浪過してスパイクマテリアル中に含まれる1台血■より小さいアrPお丑を練乳埴。ス ′くイクマテリアル山．・をFⅧ濾過前液頓当す細液20山こ河口し、・30分壬軽後、 製造と同じ条件にてプラノ／く20Nで滅適し◆た．また、肥Iqにつtiでは、・濾過前校20血 にヰ2血のスパイクマテリアルを添卸し、■30分汝拝復、プラノ′く3畠Nで浪過した。濾 過前後の液を10旺常ハムスタ÷の脳乳如政階希釈し、Prot去inM．isfoldingCycli云 血1i加tion（P肛A）でPr戸を増幅■した。増幅後√プロテアーゼK墟抗性プリオン蛋 白質をウェスタンプロットで検出した。各棟体を3回測定し、5p％甲確率で検出で草 る希釈倍率からPrPk濃度（このPrP鮎濃度を甲C材血と牢萄）を革出した；

1結果・考察】スパイクマテリアルの液卵≧1011J】pMCÅJ止であd’、この料・19n皿 以下のPr戸飢0＝叩扉叫であった。‘スバわマテリーアルをF叫こ添加し年波過前 液のPrp虫量は1咋PM鳴こプラノバ20N●洩過後液では検出限東イ≦IOS一ユpMCも。） 以下とな町村数減少率（LRV）は≧5・3セあらた。一方こ・由IGで鱒濾過前液のPrPS‘ 真如01。・4pMCA部、プラ）バ・＝35N浪過後液は10L19pMCA50であり、LRVは1・七であった。 濾過膜の孔径より小さな材料をス′くイクマテリルとしているに甘かかわらず、Pipむ かプラノ／く35Nやプラノ′く20Nで除去されたのは、PrP鮎が凝集や膜云吸着したためと 考えられるが、現在、その除去の機構を明らかにしているところである。

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スクレイピー実験感染による血中PrPre8経時的変化の追跡

津久井和夫1）湯川眞嘉2）小野寺節3）

日本赤十字社中央血液研究所 日本大学生物資渡学部動物医科学研究センター 東京大学農学生命科学応用免疫学教室

．U幻．封二日

的 スクレイピー263Ⅹ珠美験感染による血中PrPresの感染後発現感態の解析

背景：

Ⅴ∽の血液による二次感染が起こることがほぼ確定した現在、感染者の発病前診 断をすることにより、血液を介した感染拡大を阻止することが必要である。このため、 発病前キャリアー状態の感染者を検出するために、血液検査システ阜の確立がプリオ ン研究の緊急課題として強く求められている。我々は、昨年本シンポジウムにおいて 酸性SDS沈降法1仮称）により血萩中PrPr¢Sと思われる蚤白の検出を報告した。こ の蛋白は、PE抵抗性で且つ血祭中で糖鎖を介して凝集していると思われた。 方法：

1、8適齢ゴールデンハムスター5匹に263Ⅹ感染ハムスター脳乳剤を脳内接種により 投与し感染群とした。開通齢？ハムスター6匹を非感染群として対照とした。感染群・ 非感染対周群各ハムスターは、眼裔静脈叢穿刺により2週に一度の割合で経時的に採 血し、血祭を分離した。

2、血祭検体を直ちに37℃で1時間のPE処理をし、次いでペファアワツクでPK反 応を止めた後、SDSを繹澹虔3％及びD甲を終濃度60mM加え100℃10如加熱 処理により不活化してニ80℃に保存した。保存した血祭検体私室痕で溶解し、酸性 SDS沈降法（昨年本シンポジウムで報告）により灘分精製十準補し、⊥次抗体を3F4 として、イムノブロットたよる反応性褒白を化学発光で検出した。 結果：

1、pE抵抗性3F4反応性蛋白′くンドは∴感染後4：退から6一週で認められ、10退では ほぼ消宍した。 2、検出され車窓白バンド軋prPre8に特有と思われる26Ⅲ）aバンドはピーク時の みで認められ，後に低分子量フラグメント！こ移行す琴様相卑見せたふ 3、発症末期で軋如re盲‥と見られる血煤中茸白′くシドは認められなかった。

察：

血中PrPre8と思われる分子私感染後定常的に蓄鱒するのセはなく、発琴と同時 に暫時分解されて行くど思われた。・このちめ、■血痕中PrPresの検出は一時的な検出 陽性期間（4過～8過？うで可能であり

れは、井上らの報告（Jpn．才．Ⅰ曲ct．Di8り58，78・82主2¢05）に．よ早P肋e5の牌卿こよ る動態と近似しており、孤中PrPm＄が昭病変に由来するので鱒なく束梢組戯（脾臓 等）病変に由申していることを示唆している∴この結果から、PrPr した血液検査は、感染後発症前～発症中期までiこ限定されるという可能性が示唆され た。

謝辞：

実験を行うに当たり、日本大学生物資源学部動物医科学研究センターの佐藤雪太先 生及び豊島亮子・高野樹星野氏による潅時的眼寓静脈叢採血と採血後のPK処卦熱

不活化処理を実行していただきました。豊島∴高野申氏に深く感謝いたします。

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