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免疫学関連製品ガイド 免疫学

Immunology Sourcebook CS1-3++++ - Thermo …...Figure 1. Invitrogen tools help you pave the way to immunology discoveries. 骨髄性幹細胞 巨核球 血小板 赤芽球 赤血球

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免疫学関連製品ガイド

免疫学

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免疫学

我々はウイルス、細菌や寄生虫のいる厳しい環境で生きています。我々の免疫系はウイルス、細菌、寄生虫の攻撃や新生物形成に対する防御線となり、免疫記憶応答によってその後の暴露に速やかに応答します。免疫応答は高度に制御されていますが、時に免疫応答が我々に病理学的異常をもたらし、アレルギー反応、炎症反応や細胞障害性反応を引き起こす可能性もあります。細胞間相互作用とその絶妙な制御が免疫応答の中心となっています。免疫系がどのように機能するかをよりよく理解するためには、このような無数の相互作用を深く理解することが重要です。リンパ球は自由に循環する細胞であると考えられていますが、分化、循環、移動、抗原応答や最終的な細胞死には他の細胞を必要とします。白血球は、限局環境内における表面タンパク質との直接的な接触やサイトカインとケモカインシグナルを介して、リンパ組織および間質組織と相互作用します。この結果として、造血性前駆細胞から発生したリンパ系細胞は、自己と非自己の区別を学習し、特異的なヘルパー機能およびエフェクター機能に関与し、生体が受けた攻撃を記憶し、変化し続ける一連の攻撃に対する多面的な防御機構を整えます。

免疫系は複雑な生体構造の中で機能しますが、免疫応答に関する我々の理解の多くは単純化(複雑な生体の一部において部分的な免疫系を刺激して、in vivoでの機能を模倣する応答を引き起こすこと)によって得られたものです。このアプローチには、鍵となる細胞のタイプを特定するためのツール、免疫応答の構成細胞を物理的に分離するためのツール、研究またはin vivoへの再導入を目的としてin vitroで細胞機能を維持するためのツールが必要です。このパンフレットでは、実験に役立ついろいろなツールを紹介します。細胞選択ツールの使用により、ポジティブセレクションまたはネガティブセレクションによるリンパ球サブセットの精製が可能となります。最適化された培養系により、機能性細胞群を維持・増殖させることができます。インビトロジェンは技術革新によって、免疫学的研究を迅速かつ再現可能な方法で行なうために必要なツールを提供し続けています(表1)。これらのツールを利用していただくことにより、お客様は技術的な問題点で苦労されることなく、自然の神秘を解明することに専念できるのです(図1)。

免疫学的研究を最適化細胞の分離─ポジティブセレクションまたはネガティブセレクションによってリンパ球サブセットを精製します

最適化された培養系─機能性細胞群を維持・増殖させます。

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3

www.invitrogen.jp

表1 さまざまな細胞の研究用ツール.

T細胞のタイプ

GIBCO® 培地 マーカー Dynabeads® 抗体 生存性

サイトカインOpT

miz

er™

w/ (

0~2%ヒト血

清含有)

AIM

V® (ヒト血清添加)

Stem

Pro®

-34

Mac

roph

age

SFM

マーカー1

マーカー2

Dyn

abea

ds®

Flo

wCo

mp™

Dyn

abea

ds®

Unt

ouch

ed™

分析用抗体

死細胞識別

ポリクローナルT細胞

✓ ✓ CD3 CD2 11365D 11344D MHCD0301 and CD0204

SYTOX® Red S34859

IL-2, IL-7, IL-15

PBL(末梢血リンパ球)

✓ ✓ CD3 CD2 11365D 11344D MHCD0301 and CD0204

SYTOX® Red S34859

IL-2, IL-7, IL-15

Treg(調節T細胞)

✓ ✓ CD4 CD25 11363D 11346D MHCD0401 and MHCD2504

SYTOX® Red S34859

IL-2

CD4細胞(例:HIV患者由来)

✓ ✓ CD3 CD4 11361D 11346D MHCD0301 and MHCD0404

SYTOX® Red S34859

IL-2, IL-7, IL-15

TIL(腫瘍浸潤性リンパ球)

✓ ✓ CD3 CD45RO 11365D MHCD0301 SYTOX® Red S34859

IL-2, IL-7, IL-15

遺伝子改変T細胞 ✓ ✓ CD3 CD2 11061D IL-2, IL-7, IL-15

臍帯血T細胞 ✓ ✓ CD3 CD4 CD45RACD8

IL-2, IL-7, IL-15

γδ T細胞 ✓ ✓ γδ CD3 IL-2

CD3陽性NK T細胞 ✓ ✓ CD3 CD56 11365D 11344D MHCD0301 and CD0204

SYTOX® Red S34859

IL-2

NK細胞 ✓ ✓ CD3 (negative)

CD56 11364D 11349D IL-2

樹状細胞 ✓ CD80 CD83 CD86

HLA-DR 11061D 11308D 11047

MHCD8304 and MHLDR01

SYTOX® Red S34859

IL-4, GM-CrF, TNF-α, IFN-γ

造血幹細胞CD34+ ✓ ✓ CD34 CD117 11301D CD3458101 and CD11704

SYTOX® Red S34859

M-CSF, GM-CSF, IL-1, IL-6, IL-11, IL-12 SCF

単球/マクロファージ

✓ ✓ CD11b CD14 11061D 11350D CD11b01 and MHCD1404

SYTOX® Red S34859

M-CSF, IL3, IL-4, IL-10, IL-13 IFN-γ, TGFβ, TNF-α, GM-CSF

✓ = 推奨

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4

免疫学

CD10CD24CD34

CD79aCD79b

CD19CD20CD23CD24

CD79aCD79b

Pax5

CD28CD38

CD138IL-6R

CD10CD19CD20CD24

CD79aCD79b

Pax5

CD25CD30CD80CD86

CD126

IL-6

Th1

CD3CD4

CD26CXCR3CCR5IL-12RIL-18R

TCR

Th17

CD3CD4TCR

IL-12RIL-23RCD28

NKT

NK1.1CD1dCD16CD56

GranzymeTCRα/β

Treg

CD3CD4

CD25FoxP3

TCR

Th2

CD3CD4

CD30CCR4CCR8

CXCR4TCR

IL-27IFN-αIL-12IL-23

IL-4IL-15IL-25

TGF-βIL-23IL-6

CD2CD3CD4CD5CD6CD7CD8

CD26CD38

CD45RO

IL-2IL-4IL-7

NK cell

CD2CD7CD8

CD11bCD16aCD26CD56CD57CD69CD94IL-2RB

NKG2D

Tc cell

CD8CD28

CD95LGranzyme

TCR

IL-2IFN-γ

IL-3IL-4IL-6IL-7

IL-2IL-15T cell

progenitor

B cell progenitor

IntermediateB cell

ThO Cells

MatureB cell

ActivatedB cell

Plasma cell

CD2CD3CD4CD5CD7CD8

CD38

Self renewal

Lymphoid stem cell

CD10CD34CD38

CD117

IFN-γ

Megakaryocyte

Platelets

Platelets

CD9CD23CD31CD32CD41

CD42BCD61

CD62PCD63CD69

CD102

CD41CD42bCD61

CD103

GM-CSFIL-6EPO

GM-CSFIL-3

IL-11EPOIL-24

Erythroblast

CD36CD235a

E-Cadherin

EPO

Erythrocyte

CD35CD44CD55CD59

CD235a

GM-CSFIL-3EPO

GM-CSFIL-5

CFU-G (myeloblast)

Neutrophil

CD10CD15CD16CD35

CD62LCD95

LactoferrinTLR2

Eosinophil

CD9CD23CD33CD35CD50CD69

Basophil

CD11aCD33

GM-CSFIL-3 GM-CSF

G-CSF

GM-CSFIL-3

CD13CD15CD33

CD116CD123

GM-CSFIL-4

Mast cell

CD13CD33CD68

CD117Monocyte

MacrophageMyeloid dendritic cell

GM-CSFIL-6

CFU-M(monoblast)

CD11cCD13CD15CD33

CD115CD116CD123

CD11aCD13CD14CD32CD33

CD62LCD63CD64CD68CD95TLR2

CSFR1

CD11aCD11cCD14CD16CD26CD32CD36CD38

CD45bCD63CD64CD68CD80

HLA Class II (DR/DP)CD23 (activated)CD69 (activated)

CD105 (activated)

CD1aCD11bCD11cCD68CD80CD83

IL-9

GM-CSFM-CSF

GM-CSFIL-4

Self renewal

Myeloid stem cell

CD33CD34CD68

CD117

GM-CSFIL-3

Hematopoietic stem cell

CD34CD45CD90

CD105CD117

IL-3

IL-3SCF

Self renewal

Figure 1. Invitrogen tools help you pave the way to immunology discoveries.

骨髄性幹細胞

  巨核球

  血小板

  赤芽球

   赤血球

 (骨髄芽球)

  好塩基球   好酸球   好中球

  肥満細胞   (単芽球)

  骨髄性  樹状細胞 マクロファージ

HLAクラス II(DR/DP)

  単球

図1 インビトロジェンのツールが免疫学的研究の道を切り開きます。

   自己複製

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CD10CD24CD34

CD79aCD79b

CD19CD20CD23CD24

CD79aCD79b

Pax5

CD28CD38

CD138IL-6R

CD10CD19CD20CD24

CD79aCD79b

Pax5

CD25CD30CD80CD86

CD126

IL-6

Th1

CD3CD4

CD26CXCR3CCR5IL-12RIL-18R

TCR

Th17

CD3CD4TCR

IL-12RIL-23RCD28

NKT

NK1.1CD1dCD16CD56

GranzymeTCRα/β

Treg

CD3CD4

CD25FoxP3

TCR

TregTh2

CD3CD4

CD30CCR4CCR8

CXCR4TCR

IL-27IFN-αIL-12IL-23

IL-4IL-15IL-25

TGF-βIL-23IL-6

CD2CD3CD4CD5CD6CD7CD8

CD26CD38

CD45RO

IL-2IL-4IL-7

NK cell

CD2CD7CD8

CD11bCD16aCD26CD56CD57CD69CD94IL-2RB

NKG2D

Tc cell

CD8CD28

CD95LGranzyme

TCR

IL-2IFN-γ

IL-3IL-4IL-6IL-7

IL-2IL-15T cell

progenitor

B cell progenitor

IntermediateB cell

ThO Cells

MatureB cell

ActivatedB cell

Plasma cell

CD2CD3CD4CD5CD7CD8

CD38

Self renewal

Lymphoid stem cell

CD10CD34CD38

CD117

IFN-γ

Megakaryocyte

Platelets

Platelets

CD9CD23CD31CD32CD41

CD42BCD61

CD62PCD63CD69

CD102

CD41CD42bCD61

CD103

GM-CSFIL-6EPO

GM-CSFIL-3

IL-11EPOIL-24

Erythroblast

CD36CD235a

E-Cadherin

EPO

Erythrocyte

CD35CD44CD55CD59

CD235a

GM-CSFIL-3EPO

GM-CSFIL-5

CFU-G (myeloblast)

Neutrophil

CD10CD15CD16CD35

CD62LCD95

LactoferrinTLR2

Eosinophil

CD9CD23CD33CD35CD50CD69

Basophil

CD11aCD33

GM-CSFIL-3 GM-CSF

G-CSF

GM-CSFIL-3

CD13CD15CD33

CD116CD123

GM-CSFIL-4

Mast cell

CD13CD33CD68

CD117Monocyte

MacrophageMyeloid dendritic cell

GM-CSFIL-6

CFU-M(monoblast)

CD11cCD13CD15CD33

CD115CD116CD123

CD11aCD13CD14CD32CD33

CD62LCD63CD64CD68CD95TLR2

CSFR1

CD11aCD11cCD14CD16CD26CD32CD36CD38

CD45bCD63CD64CD68CD80

HLA Class II (DR/DP)CD23 (activated)CD69 (activated)

CD105 (activated)

CD1aCD11bCD11cCD68CD80CD83

IL-9

GM-CSFM-CSF

GM-CSFIL-4

Self renewal

Myeloid stem cell

CD33CD34CD68

CD117

GM-CSFIL-3

Hematopoietic stem cell

CD34CD45CD90

CD105CD117

IL-3

IL-3SCF

Self renewal

 造血幹細胞

 自己複製

   自己複製

 リンパ球系幹細胞

   B細胞  前駆細胞

 中間B細胞

 成熟B細胞

活性化B細胞

  形質細胞

T細胞前駆細胞

  ThO細胞

 Tc細胞

 NK細胞

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免疫学

図2 新製品のマグネットにより、細胞を効率的に分離できます。 DynaMag™ -15(A)およびDynaMag™ -50(B)マグネットは、強力な磁力と柔軟でスマートな人間工学的デザインを兼ね備えています。傾斜しているのでピペッティング時にひじを動かさずに済み、見やすく高い操作性が得られます。

図3 チューブベースの細胞分離法により、カラムを通るストレスが細胞にかかりません。Dynabeads®はマグネットで固定可能な懸濁性固体担体として働きます。ポジティブセレクション法またはネガティブセレクション法をお選びいただけば、分離を簡単かつ効率的に行なうことができ、スケール変更も容易です。

Incubate Dynabeads®

with the cells in yourstarting sample

Untouched cells

Bead-free cellsRelease cells

Transfer supernatantto a new tube

Use magnet to separatebead-bound cells

Negative isolation

�����������®

Untouched™ products�����������®

negative isolation kits

�����������®

FlowComp™ products�����������®

positive isolation kits

Positive isolation

A

B

サンプル調製および分離のステップが最終的な結果を極めて大きく左右することは周知のとおりです。実験からリスクを排除し、細胞集団を健康・純粋に保ち生存させられるような方法を採用しなければなりません。Dynabeads®と DynaMag™マグネットならすべてが解決します(図 2)。1本のチューブ内で分離でき、操作ステップが少なく(図 3)、カラムを使用する必要はありません。Dynabeads®テクノロジーによって変動性が低下し、確かな再現性が得られます。

チューブベースの細胞分離細胞分離をこれよりも簡単に行なうことは不可能でしょう。Dynabeads®を出発サンプルに添加してインキュベートし、マグネットを近づけるだけで、細胞がチューブの壁へ引き寄せられます。細胞はカラムを通るストレスにさらされることがないため、分離方法によって結果が変動または変化するリスクを排除できます。

ヒトおよびマウス細胞分離用Dynabeads®

Dynabeads®を出発サンプル中の細胞と一緒にインキュベートします

ビーズに結合した細胞をマグネットで分離します

上清を新しいチューブに移します

ビーズに結合しなかった細胞

・Dynabeads ® Untouched™ 製品・Dynabeads® ネガティブセレクションキット

・Dynabeads® FlowComp™ ・製品・Dynabeads®・ポジティブセレクションキット

ポジティブセレクション 細胞の離脱 ビーズフリーの細胞

ネガティブセレクション

Dynabeads®は日本国内では株式会社ベリタスからの販売になります。www.veritastk.com/

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図4 Dynabeads®を用いるポジティブ分離法およびネガティブ分離法によって純度の高い細胞が得られます。Dynabeads® FlowComp™ Human CD4を用いると、高純度のヒトCD4+T細胞をポジティブ分離できます(A)。また、Dynabeads® Untouched™ Human CD4 T Cellsを用いると、ネガティブ分離法によって高純度のヒトCD4+ T細胞を分離できます(B)。

図5 一貫した信頼性の高いT細胞の増殖。Dynabeads®T細胞増殖用製品はin vivoにおけるT細胞と抗原提示細胞(APC)の相互作用を模倣するための簡単なソリューションで、APC上に存在するCD3およびCD28という2種類の活性化シグナルをAPCと同じサイズの三次元ビーズに結合して利用しています。

P2

Cou

nt

102 103 104 1050

500

750

250

1,000

CD4 FITC-A

CD4104103102 105

Cou

nt

100

200

300

400

500

600

700

0

A

B

細胞分離法を選択するアプリケーションに基づき、ポジティブ細胞分離用製品、ネガティブ細胞分離用製品、細胞除去用製品のいずれかを選択してください。

ポジティブ細胞分離ポジティブ細胞分離では Dynabeads®がターゲット細胞に結合し、ビーズと細胞の複合体がマグネットに引き寄せられます(図3、図 4A)。上清を捨てると、サンプル中には純粋なターゲット細胞が残ります。ビーズは革新的な FlowComp ™テクノロジーや従来の DETACHa-BEAD ™離脱メカニズムにより簡単に除去できます。ポジティブ分離されたビーズフリーの T細胞はフローサイトメトリーや細胞ベースのアッセイに適しています。

ネガティブ細胞分離ネガティブ細胞分離では Dynabeads®が不要細胞をすべて追い出します(図 3)。結合しなかったビーズフリーのターゲット細胞がサンプル中に残るため、フローサイトメーターによる直接分析やあらゆる機能アッセイにそのまま利用することができます(図 4B)。

細胞除去細胞除去では、Dynabeads®が約 99%の効率で混合細胞サンプルから特定の種類の不要細胞を除去します。不要細胞が除去された上清(ターゲット細胞が含まれています)を回収して、その後のアッセイに使用します。ビーズに結合しているポジティブ分離されたターゲット細胞は、ビーズから離脱させる必要のない分子アプリケーションに使用することも可能です。

細胞の活性化と増殖Dynabeads®細胞増殖用製品は CD3/TCRと CD28に同時にシグナルをもたらすことにより、抗原提示細胞(APC)からの in

vivoにおける細胞の活性化を模倣しています(図 5)。この効率的なテクノロジーにより、ヒトやマウス T細胞の特異的な活性化と増殖が可能になります。増殖後のビーズフリーの細胞は機能特性を維持し、APCやフィーダー細胞の培養を維持する必要なしに再刺激できます。この他にも、刺激時間および強度に対する馴化が容易である、たった 14日間で最大 3,000倍まで増殖する、刺激後の細胞の機能、サイトカインプロファイルや細胞のレパートリーが in vivoの環境を反映するなどといった利点があります。

細胞数

細胞数

樹状細胞

増殖プラットフォーム

休止 T細胞 活性化T細胞

生体内(in vivo)

  ビーズ  抗CD28 休止 T細胞

抗CD3

活性化 T細胞

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免疫学

Ordering information製品名 Methodology サイズ カタログ番号Human cells

Dynabeads® Human DC Enrichment Kit Negative selection (only enrichment) 1 kit 113-08D

Dynabeads® Untouched™ Human NK Cells Negative selection 1 kit 113-49D

Dynabeads® Untouched™ Human Monocytes Negative selection 1 kit 113-50D

Dynal® CD34 Progenitor Cell Selection System Positive isolation with removal of beads and antibody (DETACHaBEAD®) 5 mL 113-01D

Dynabeads® Biotin Binder Depletion/negative selection 5 mL 110-47

Dynabeads® FlowComp™ Flexi Positive isolation with removal of beads + antibody-conjugation kit 1 kit 110-61D

Dynabeads® Untouched™ Human B Cells Negative isolation 1 kit 113-51D

Dynabeads® Untouched™ Human T Cells Negative isolation 2 x 5 mL 113-44D

Dynabeads® CD2 Pan T Depletion 5 mL 111-59D

Dynabeads® CD3 Depletion 5 mL 111-51D

Dynabeads® FlowComp™ Human CD3 Positive isolation 3 mL 113-65D

Dynabeads® CD25 Depletion 5 mL 111-57D

Dynabeads® FlowComp™ Human CD4 Positive isolation 3 mL 113-61D

Dynal® CD4 Positive Isolation Kit Positive isolation 5 mL 113-31D

Dynabeads® Untouched™ Human CD4 T Cells Negative isolation 2 x 5 mL 113-46D

Dynabeads® CD4 Depletion 5 mL 111-45D

Dynal® T4 Quant Positive isolation 2 mL 113-21D

Dynabeads® Regulatory CD4+CD25+ T Cell Kit Positive isolation 2 x 5 mL 113-63D

Dynabeads® FlowComp™ Human CD8 Positive isolation 3 mL 113-62D

Dynal® CD8 Positive Isolation Kit Positive isolation 5 mL 113-33D

Dynabeads® Untouched™ Human CD8 T Cells Negative isolation 2 x 5 mL 113-48D

Dynabeads® CD8 Depletion 5 mL 111-47D

Dynabeads®CD3/CD28 Human T-Activator T cell expansion 0.4 mL 111-61D

Dynabeads® CD3/CD28 Human T-Activator T cell expansion 2 mL 111-31D

Dynabeads® CD3/CD28 Human T-Activator T cell expansion 10 mL 111-32D

Dynabeads® Human Treg Expander Treg cell expansion 2 mL 111-29D

Dynabeads® CD3/CD28 Preclinical T cell expansion 10 mL 111-41D

Dynabeads® ClinExVivo™ CD3/CD28 (formerly Xcyte™ Dynabeads®) Clinical-grade T cell expansion 10 mL 402-03D

Mouse T cells

Dynal® Mouse T Cell Negative Isolation Kit Negative isolation 2 x 10 mL 114-13D

Dynabeads® Mouse Pan T (Thy1.2) Depletion 5 mL 114-43D

Dynabeads® FlowComp™ Mouse Pan T (CD90.2) Positive isolation 3 mL 114-65D

Dynabeads® FlowComp™ Mouse CD4 Positive isolation 3 mL 114-61D

Dynal® Mouse CD4 Negative Isolation Kit Negative isolation 2 x 10 mL 114-15D

Dynabeads® Mouse CD4 (L3T4) Depletion 5 mL 114-45D

Dynabeads® FlowComp™ Mouse CD4+CD25+ Treg Cells Positive isolation 2 x 10 mL 114-63D

Dynabeads® FlowComp™ Mouse CD8 Positive isolation 3 mL 114-62D

Dynal® Mouse CD8 Negative Isolation Kit Negative isolation 2 x 10 mL 114-17D

Dynabeads® Mouse CD8 (Lyt 2) Depletion 5 mL 114-47D

Dynabeads® Mouse CD3/CD28 Mouse T-Activator T cell expansion 0.4 mL 114-56D

Dynabeads® Mouse CD3/CD28 Mouse T-Activator T cell expansion 2 mL 114-52D

Dynabeads® Mouse CD3/CD28 Mouse T-Activator T cell expansion 10 mL 114-53D

Magnets

DynaMag™-15 Magnet—Holds 4 standard 15 mL tubes or 4 x 5 mL tubes Magnetic separation 1 unit 123-01D

DynaMag™-50 Magnet—Holds 2 x 50 mL tubes (5–50 mL) Magnetic separation 1 unit 123-02D

Dynabeads®は日本国内では株式会社ベリタスからの販売になります。www.veritastk.com/本カタログ記載のカタログ番号は、株式会社ベリタスのカタログ番号とは異なりますのでご注意ください。

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www.invitrogen.jp

Kohjin

551

Stem

line

Ther

apeu

tics,

Inc.

Lonz

a X-V

IVO™

Kohjin

561

Cellgr

OpTmize

r™

T ce

ll vi

abili

ty (%

)

T ce

ll d

ensi

ty (×

106

cells

/ml)

100

95

90

85

80

75

7

6

5

4

3

2

1

0

Viability Density

Lonza X-VIVO™ + 5% serum

OpTmizer™StemlineTherapeutics, Inc.

OpTmizer™ +2% serum

Via

ble

cel

l den

sity

(xt

106

cells

/mL)

30

25

20

15

10

5

0

Day 0Day 7Day 10

図6 いろいろな培地中における無血清下でのT細胞の増殖性と生存率の比較。T細胞を活性化および増殖させるためにDynabeads® ClinExVivo™ CD3/CD28ビーズを使用し、6ウェルのプレート中で培養しました。細胞密度が1×10⁶/ml以上に達したときに培養液を分け、T細胞の密度が0.5~1×10⁶cell/mlとなるように希釈しました。細胞の生存率はVi-CELL™細胞生存率分析装置を用いて評価しました。

図 7 Wave Bioreactor®(ウェーブバイオリアクター)システム内におけるいろいろな培地中での T細胞の増殖(血清添加または非添加条件下)。PBMCを解凍し、ClinExVivo™CD3/CD28 T細胞増殖ビーズとCD3+ T細胞の比率が 3:1となるように混合しました。ビーズに結合した T細胞をマグネットによって濃縮し、IL-2含有培地および 2%ヒト血清含有培地、5%ヒト血清含有培地または血清不含培地中に懸濁して、5日目に細胞をWave Bioreactor®培養バッグに移しました。細胞の表現型(CD3、CD4、CD8)と活性化マーカーの発現(CD25、CD154)を分析しました。また、上清を回収してサイトカイン(IFN-γ)の分析を行ないました。生細胞数が細胞増殖のカイネティクスおよび培養細胞密度に影響しました。

OpTm

izer™

OpTm

izer™

+

2% se

rum

Con

cent

ratio

n (p

g/m

L)

80,000

70,000

60,000

50,000

40,000

30,000

20,000

10,000

0

GM-CSF

IFN-γ

Stem

line

Ther

apeu

tics,

Inc. +

2% se

rum

Lonz

a X-V

IVO™

+

5% se

rum

Kohjin

561

+

5% se

rum

Cellgr

o® +

5% se

rum

図8 いろいろな培地中でのT細胞によるサイトカインの発現(血清添加または非添加条件下)。T細胞を活性化および増殖させるためにDynabeads® ClinExVivo™ CD3/CD28ビーズを使用しました。細胞密度が1×10⁶/ml以上に達したときに培養液を分け、T細胞の密度が0.5~1×10⁶cell/mlとなるように希釈しました。0、4、7および10日目の培養上清を用いてサイトカインの機能プロファイルを評価しました(4日目のデータを表示しています)。

GMPガイドライン下で製造された T細胞培養専用の無血清培地である OpTmizer ™ SFMを使用すれば、より健康な T細胞を迅速かつ簡単に培養できます。OpTmizer ™培地はヒト血清アルブミン以外のタンパク質を含有しないケミカリー・ディファインド培地で、in vitroにおけるさまざまな活性化・増殖条件下(遺伝子改変を伴うプロトコールを含みます)でのヒトT細胞の増殖・培養用培地として特別に調製されています。他社の T細胞用培地は、希望する結果を得るために 5~10%のヒト血清を添加する必要があります。これに対し、OpTmizer ™培地はヒト血清非存在下(図 6)や低血清濃度下(図7)でも速やかな増殖、高い生存率や細胞収率といった最適な培養結果が得られます。その上、最大で 5%のヒト血清を加えた無血清 OpTmizer ™培地と同等の効率性を示し、わずか 2%のヒト血清を添加するとさらなるパフォーマンスを示します。OpTmizer ™ SFMはWave Bioreactor®(ウェーブバイオリアクター)システム内で非常に優れたパフォーマンスを示します(図 7)。研究者が同様に重視する点として、OpTmizer ™培地を使用すると細胞が希望する機能を維持します(図 8)。

T細胞生存率(%)

濃度(pg/m

l

A社̶2

生存率 密度

0日目7日目10日目

生存細胞密度(×10⁶ cell/m

l

) L社  + 5%血清  

S社   2%血清

S社

2%血清

2%血清

GIBCO® OpTmizer™ T Cell Expansion SFM

A社̶1 S社 L社 C社

A社̶2

5%血清 L社

5%血清 C社

5%血清

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10

免疫学 R

elat

ive

lysi

s (%

)

16:18:14:12:1

20

10

30

40

50

60

80

70AIM V® Medium

RPMI 1640 with 2% human serum

Effector target

図9 AIM V®培地およびヒト血清含有培地によるLAK細胞溶解活性の比較。1,000 unit/mlのIL-2と2%ヒト血清(AB型)を添加したRMPI 1640中でヒト末梢血リンパ球(PBL)を1×10⁶ cell/mlで培養しました。また、600 unit/mlのIL-2を添加した無血清AIM V®培地中でもヒトPBLを2×10⁶ cell/mlで培養しました。Daudi細胞をターゲットとして、フラスコ2本を用いて3反複で行なった測定結果の平均値を示しています。

GIBCO® 無血清 AIM V® 培地

OpTmizer ™培地は無血清条件下や低血清条件下で優れたパ

フォーマンスを示します。動物由来成分不含(ヒト血清アルブ

ミンを除く)ですので、研究から前臨床開発への移行が容易に

なります。血清不含培地なので、規制要件の一部が簡略化でき

る可能性もあります。OpTmizer ™培地の使用により、操作効

率の改善、サイクル回数の減少、生産性の向上、細胞製品の製

造コスト削減が可能になります。

OpTmizer ™ T Cell Expansion SFMおよび関連製品のご注文や

詳細情報については、www.invitrogen.com/optmizerをご覧

ください。

AIM V™培地は、養子免疫療法でヒト血清添加培地の代わり

にご使用いただけます*。ex vivoにおけるインターロイキン 2

(IL-2)添加後のリンホカイン活性化キラー細胞(LAK細胞)の

活性化に AIM V™培地が有効であることが証明されています。

ヒト血清不含の AIM V™培地中で培養した T細胞は、血清含有

RMPI 1640中で培養したリンパ球と同等の LAK細胞溶解活性

を示しました(図 9)。

AIM V™培地は現在 T細胞を取り扱う科学者や臨床研究者、臨

床医に最も広く使用されている無血清培地です。AIM V™培地

の用途は、最初の目的であった LAK細胞の研究から、ほとん

どすべての主要なヒトリンパ球の培養のほか、形質転換リンパ

球系(ヒトおよびマウス)、接着細胞(ヒト繊維芽細胞など)、

ヒト単核球、樹状細胞などのヒトリンパ球関連細胞、ヒト食細

胞(マクロファージ、肥満細胞など)に広がっています。

AIM V™培地および関連製品のご注文や詳細情報については、

www.invitrogen.com/aimvをご覧ください。

AIM V™培地は最初に市販された T細胞増殖用の無血清ケミカ

リー・ディファインド培地で、cGMPに準拠して製造されてい

ます。AIM V™培地は FDA承認(510(K))を受けた唯一の治療

グレードの T細胞用培地で、米国では臨床診断や養子免疫療法

に使用されています*。

Ordering information製品名 サイズ カタログ番号OpTmizer™ T Cell Expansion SFM Kit (Bottle) 1 L A1048501

OpTmizer™ T Cell Expansion SFM Kit (Bottle) 500 mL 0080022SA

OpTmizer™ T Cell Expansion SFM Kit (Bag) 1 L 0080022SC

OpTmizer™ T Cell Expansion SFM Kit (Bag) 5 L 0080022SD

エフェクター/ターゲット比

相対溶解率(%)

AIM V ®培地2%ヒト血清含有 RPMI 1640

* AIM™培地は米国 FDA承認の基、米国内では診断に利用できますが、日本においては薬事法に基づく承認は得ておりません。 よって診断を目的として利用することはできません。

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www.invitrogen.jp

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Ordering information製品名 サイズ カタログ番号Therapeutic grade

AIM V® Medium, liquid (bottle) 1 L 0870112DK

AIM V® Medium, liquid (bag) 10 L 0870112BK

Research grade

AIM V® Medium, liquid 500 mL 12055091

AIM V® Medium, liquid, contains AlbuMAX® (BSA) substituted for HSA

500 mL 31035025

AIM V® Medium, liquid 1 L 12055083

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12

免疫学

図10 末梢血単球増殖の経時的変化。10%FBS含有RPMI 1640およびMacrophage-SFM(MAC-SFM)に組換えヒトGM-CSFを添加して末梢血単球を1~6日間培養し、増殖性をGM-CSF不含培地で培養した場合と比較しました。単球を分離し、MTT(3-[4,5-ジメチルチアゾール-2-イル]-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロマイド)アッセイにより活性を測定しました。GM-CSFを添加した培地中でインキュベートした単球は6日間にわたり増殖しましたが、GM-CSF不含培地中では細胞の生存率が低下しました。

図11 GM-CSFがMacrophage-SFM中でマクロファージの増殖に及ぼす影響。マクロファージをrhGM-CSF(10U/ml)存在下で45日間インキュベートしました。GIBCO® Macrophage-SFMにGM-CSFを添加すると、マクロファージの増殖が長期間にわたり促進されました。

図12 GIBCO®Macrophage-SFM存在下でインキュベートしたFITC標識ラテックスビーズのヒト末梢血単球(PBMC)による食作用。Macrophage-SFM中で培養スライドガラスにPBMCを1時間かけて付着させた後で、付着しなかった細胞を除去しました。新しい培地中にFITC標識ビーズを添加して37℃で30分間インキュベートした後、スライドガラスをPBS中ですすぎ、蛍光顕微鏡下で観察しました。Macrophage-SFM中でインキュベートした単球/マクロファージは、ヒト血清含有培地中でインキュベートした細胞と同等の食細胞作用を示します。

図13 GIBCO®Macrophage-SFM中でインキュベートし、ライト染色したヒト単球。Macrophage-SFM中でヒトPBMCを培養スライドガラスに1~2時間かけて付着させた後、細胞をCa²+/Mg²+不含D-PBSで洗浄し、ライト染色液を添加しました。接着細胞の大部分がPBMCの形態を示しました。

RPMI-1640+10%500 U/mL

MAC-SFM500 U/mL

RPMI-1640+10%0 U/mL

MAC-SFM0 U/mL

OD

595

nm

1.0

0.8

0.6

0.4

0.2

0

Day 1

Day 3

Day 6

ヒト末梢血マクロファージおよび単球の無血清培養ではGIBCO®

Macrophage-SFMの使用によって、細胞の増殖を妨げること

なく、より多くの細胞が得られます。

GIBCO® Macrophage-SFMは成分が明らかでエンドトキシン濃

度が非常に低い(1.0 E.U./ml未満)ため、比較的ディファイン

ドな低バックグラウンド環境におけるマクロファージ/単球の

研究が可能となり、添加したアクチベーターの「純粋な作用」

を確実に観察できるほか、マクロファージ分泌産物の分離や特

性評価が容易となる可能性もあります。

GIBCO®Macrophage-SFMGIBCO® Macrophage-SFMは無血清培地なので、適切な生体

応答修飾因子の存在下におけるマクロファージの維持と機能の

一貫性が改善されます。図 10および図 11に示すように、単

球を顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)含有

培地中でインキュベートすると、不含培地使用時よりも単球の

生存性が長期間維持されます。GIBCO® Macrophage-SFMに

GM-CSFやリポ多糖類などの生体応答修飾因子を添加すると、

<次ページに続く>

1日目3日目6日目

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13

www.invitrogen.jp

<前ページ続き>

FBSやヒト血清を添加した RPMI 1640の代わりとして単球/

マクロファージの培養に使用していただけます(図 12、図

13)。GIBCO® Macrophage-SFM は GM-CSF存在下で血清添加

培地と同等のパフォーマンスを示し(図 13)、成分が明らかで

ない血清を添加する必要はありません。

GIBCO® Macrophage-SFMおよび関連製品のご注文や詳細情報

については、www.invitrogen.com/macrophagesfmをご覧く

ださい。

造血幹細胞培養用無血清培地StemPro®-34 SFM

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Ordering information製品名 サイズ カタログ番号Macrophage-SFM, (1X), Liquid (Bottle) 500 mL 12065074

造血幹細胞(HSC)は自己複製と造血系の再構築が可能であり、

強力な化学療法を受けているまたは移植を必要としている特定

疾患の患者にとって非常に高い治療価値があります。

培養系に 1つ以上の動物血清を添加しなければならないことが

HSC研究の主な障害となっていました。血清の細胞特異的増殖

促進能はロット間で大きく変動します。

StemPro®-34 SFMは、培地中でのヒト造血細胞の成長を促進

するように開発された無血清培地(SFM)です。StemPro®-34

SFMは厳密な cGMPガイドライン下でヒト由来成分、ヒト組

換え体または合成成分を用いて製造されており、骨髄、末梢血

または新生児臍帯血由来造血細胞の研究に使用できます。無血

清培地であるため、培地中に添加する造血成長因子やその他の

サイトカインの組み合わせによって細胞の増殖と分化を制御で

きます。

  StemPro®-34 SFMの主な用途は以下の通りです。

→ HSCの加工と処理(骨髄、末梢血または新生児臍帯血由来)

→ サイトカインによる増殖と分化

→ 細胞遺伝学的分析

→ 遺伝子治療

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免疫学

Cel

l num

ber

(x 1

04 )

IMDM medium + 20% FBS

Day 6–8(n = 10)

StemPro®-34 SFMDay 6–8(n = 18)

Day 0(n = 10)

0

25

50

75

100Total cells

CD34+ cells

図15 StemPro®-34 SFMの使用により、サイトカインによるCD34+細胞の増殖性が 20%FBS含有 IMDM使用時と比べて 282%増加。10名のドナーから採取した CD34+骨髄細胞を 24ウェルの平底プレートに細胞密度 2 × 10⁴/mlでそれぞれ播種し、6~ 8時間培養しました。StemPro®-34 SFMまたは 20% FBS含有 IMDM培地には同じ増殖因子(SCF[100 ng/ml]、IL-3[50 ng/ml]および GM-CSF[25 ng/ml])を添加しました。総細胞数を計測し、CD34+細胞数は 0および 6~ 8日目に FACS分析によって決定しました。

図 14 StemPro®-34 SFMの使用により、CD34+細胞を多く含む集団からのサイトカインによる正常骨髄細胞の増殖性が 20% FBS含有 IMDM使用時と比べて 2倍近く増加。24ウェルプレートに CD34+骨髄細胞を初期密度 2 × 10⁴ cell/wellとなるよう播種しました。ヒト組換え SCF(100 ng/ml)、IL-3(50 ng/ml)および GM-CSF(25 ng/ml)を StemPro ® -34 SFMまたは 20% FBS含有 IMDMをセットアップ時に添加しました。培養 0、1、2、3、5、6、7、10日目に細胞を回収し、血球計数器とトリパンブルー染色を用いて生細胞数を計測しました。

Cel

ls p

er m

L (x

105 )

121086420

4

2

0

6

10

8

12

14

16

StemPro®-34

IMDM + 20% FBS

Days in culture

StemPro® -34 SFMはヒト HSC(CD34+)の増殖性を改善します培地中で増殖した HSCは臨床および研究目的で利用されます。

図 14は、StemPro®-34 SFM使用時の細胞増殖性が従来の培地

(20% FBS含有 IMDM)よりも優れていることを示しています。

StemPro®-34 SFM中では細胞の倍加時間が 43時間でしたが、

20% FBS含有 IMDM中では倍加時間が 72時間でした。

細胞増殖中の CD34+細胞群の変化についても検討しました。図

15では、StemPro®-34 SFMの使用によって CD34+細胞群が 3倍

に増加し、総細胞数が 22倍近くまで増加することが示されてい

ます。20% FBS含有 IMDMを使用した場合には、CD34+細胞数

が 3%減少し、総細胞数は 13倍近くまで増加しました。StemPro®

-34 SFMはマウス精原幹細胞の長期培養にも使用されています。

HSCの細胞密度を増加させるため無血清培地をご使用くださいStemPro®-34 SFMおよび関連製品のご注文や詳細情報につい

ては、www.invitrogen.com/stempro34をご覧ください。

StemPro®-34 SFMは、基礎液体培地と凍結サプリメント

(StemPro Nutrient Supplement、使用時に添加)のセットです。

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1.

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Ordering information製品名 サイズ カタログ番号StemPro®-34 SFM 500 mL 10639-011

    培養日数

1

mlあたりの細胞数(×10⁵

総細胞数CD34+細胞数

0日目(n= 10)

  細胞数(×10⁴

(6~ 8日目)

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www.invitrogen.jp

Basal

Num

ber

of

mito

ticce

lls/s

lide

GCT-CM

1

GCT-CM

2

Mar

rowM

AX™

20

0

40

100

60

80

120

図16 MarrowMA X™培地の優れた性能。馴化培地不含の基礎培地、MarrowMAX™培地、A社の培地(GCT-CM A)、B社の培地(GCT-CM B)を用いて細胞を培養しました(A社およびB社の培地にはGCT馴化培地が含まれています)。プレーティングから24時間後に有糸分裂細胞数を評価しました。

2.00

1.75

1.50

1.25

1.00

0.75

0.50

0.25

01 2 3 4

Brd

U u

pta

ke

図17 M a r r o w M A X ™培地の一貫性。正常単核細胞をロットの異なる4つのMarrowMAX™培地に細胞密度1×10⁵ cell/mlで播種し、BrdU取り込み量を405 nmの吸光度により測定しました。ドナー10名についての平均標準誤差を示しています。

図18 GIBCO®MarrowMAX™骨髄細胞用培地を使用すると、形態が優れた染色体が得られます。MarrowMAX™培地中で24時間培養した正常骨髄細胞の染色体をばらしてGバンド分染法により分析しました。

GIBCO®のMarrowMAX™、AmnioMAX™、PB-MAX™培地につ

いては独立した研究所で特別に調製および試験を行なってお

り、骨髄細胞、羊水細胞、絨毛膜絨毛標本や末梢血リンパ球の

分析に関する臨床プロトコールにおいて明白で再現可能な結果

を得られます。

MarrowMAX ™骨髄細胞用培地優れた形態と高い分析可能細胞濃度骨髄吸引液など採取が難しいサンプルについては、それらを

最大限に活用する必要があります。MarrowMAX™骨髄細胞

用培地をご使用になれば、これを迅速かつ容易に行なえます。

MarrowMAX™培地は、血清、ヒト間質馴化培地、抗生物質と

L-グルタミンがすべて添加された、そのまま使用可能な調製済

みの完全培地です。他社の骨髄細胞用培地に必要な調製段階と

サプリメント添加を省くことで時間と労力を削減し、汚染リス

クを低下させることができます。MarrowMAX™培地を解凍前

および解凍後の有効期限は長く、凍結状態のMarrowMAX™培

地は 18ヵ月間保証、解凍後は 4℃で 2ヵ月間保証されます。

MarrowMAX™培地は市販の巨細胞腫(GCT)馴化培地よりもは

るかに優れています(図16)。ロット間で性能は一貫しており(図

17)、分裂係数は高く、染色体の形態も優れています(図 18)。

細胞遺伝学用培地─一貫性のある完全培地

基礎培地

スライドあたりの有糸分裂細胞数

MarrowMAX ™

GCT-CM A

GCT-CM B

   BrdU

取り込み量

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16

免疫学

図 19 AmnioMAX ™培地中で培養した羊水細胞の増殖曲線。AmnioMAX ™培地または 20% FBS含有MEM-α中で培養した二世代目羊水細胞の代表的な増殖曲線を示しています。各時点で細胞数を測定しました。2サンプルの平均値を示しています。

図20 羊水細胞のプレーティング密度がAmnioMAX™培地の性能に及ぼす影響。初めて継代したヒト羊水細胞をAmnioMAX™培地中またはChang培地中で細胞密度が1ウェルあたり100個(パネルA)、1,000個(パネルB)、5,000個(パネルC)となるよう培養しました。5日間の培養後に回収された総細胞数の平均(n=6)を示しています。

1

0

2

4

6

8

9

3

5

7

10Chang medium

AmnioMAX™ medium

Tota

l cel

l num

ber

(×10

3 )

0

20

40

50

10

30

60Chang medium

AmnioMAX™ medium

Tota

l cel

l num

ber

(×10

3 )

Tota

l cel

l num

ber

(×10

3 )

0

60

140

180

20

100

80

160

40

120

200Chang medium

AmnioMAX™ medium

A B C

図 21 初代羊水サンプルを用いた AmnioMAX ™培地の性能分析。対応するヒト羊水細胞プールの対を並行培養し(n=10)、AmnioMAX ™培地またはロットの異なる2種類のChang培地中でのin situ 培養開始から 6日後のコロニーの増殖性と細胞遺伝学的分析が可能かどうかを評価しました。(A)得られたコロニーの総数、(B)分析可能なコロニーの総数

100

80

60

40

20

0N

umb

er o

f ob

tain

able

col

onie

s Chang medium (Lot 1)

Chang medium (Lot 2)

AmnioMAX™ medium

50

40

30

20

10

0

Num

ber

of a

naly

zab

le c

olon

ies Chang medium (Lot 1)

Chang medium (Lot 2)

AmnioMAX™ medium

A

B

AmnioMAX ™ C-100培地はヒト羊水検体と絨毛膜絨毛標本の

体外診断用に開発されました。AmnioMAX ™培地の組成は、初

代ヒト羊水細胞を用いたパフォーマンステストにより最適化さ

れています。AmnioMAX ™培地はコロニーの増殖性を最大限に

強化するため診断時間が最短となる一方で、得られるコロニー

の細胞遺伝学的分析も可能です。インビトロジェンではさらに

細胞接着性が高まるように最適化し、pH安定性を向上させた

第二世代の AmnioMAX ™ -II完全培地も提供しています。1本

のボトルで構成される AmnioMAX ™ -II培地は、抗生物質と増

殖促進因子を含む完全培地で、その他のサプリメントを添加す

る必要はありません。

AmnioMAX ™培地は羊水細胞の増殖性を維持し(図 19)、優れ

たプレーティング密度をもたらします(図 20)。初代羊水細胞

に対する AmnioMAX ™培地の性能を図 21に示しています。以

上の結果は、<次ページに続く>

AmnioMAX ™培地羊水細胞培養のためのゴールドスタンダード̶結果が 1日早く得られます

Days in culture0 642 8531 7

Cel

l num

ber

(×10

4 )

1

2

3

4

5

7

6

8

0

AmnioMAX™ medium

MEM-α-20% FBSAmnioMAX ™培地MEM-α+ 20% FBS

   培養日数

  細胞数(×10⁴

Chang培地(ロット 1)Chang培地(ロット 2)AmnioMAX培地

  得られたコロニー数

Chang培地(ロット 1)Chang培地(ロット 2)AmnioMAX培地

  得られたコロニー数

Chang培地AmnioMAX ™培地

  総細胞数(×10³

  総細胞数(×10³

  総細胞数(×10³

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www.invitrogen.jp

180

200

230

220

190

210

240Chang medium

AmnioMAX™ medium

Num

ber

of m

itotic

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per

5,0

00 c

ells

図22 AmnioMAX™培地とChang培地の分裂係数の比較。AmnioMAX™培地またはChang培地中で6日間in situ 培養した初代羊水細胞の相対的な分裂係数を求めました。各培地について、細胞5000個あたりの分裂回数を計数しました。

<前ページの続き>

AmnioMAX ™培地中で培養したヒト羊水細胞は、他社の羊水細

胞用培地使用時と比べて、コロニー数が約 22~ 25%多く、細

胞遺伝学的分析が可能なコロニー数が 44~ 80%多いことを示

しています。さらに、AmnioMAX ™培地中で培養した初代羊水

細胞の分裂係数の平均は Chang培地使用時と比べて有意に増

加しました(図 22)。

PB-MAX ™核型分析用培地およびKaryoMAX®核型分析用試薬迅速な増殖と一貫した結果が得られるように最適化培養時間および回収までの日数を短縮する PB-MAX ™核型分析

用培地と KaryoMAX®核型分析用試薬の使用により、セットアッ

プ時間を最小限に抑え、研究室の効率を最大限に向上させます。

PB-MAX ™核型分析用培地は、末梢血リンパ球の核型分析用に

最適な RPMIベースの完全培地です。PB-MAX ™核型分析用培

地については性能試験および信頼性試験が行なわれており、そ

のまま使用可能です。

KaryoMAX®コルセミド ®溶液は細胞分裂中期で細胞周期を停

止させるブロッキング試薬で、機能性試験が行なわれています。

Hanks平衡塩溶液(HBSS)またはリン酸バッファー塩(PBS)

で調製済みの KaryoMAX®を提供しています。KaryoMAX®ギ

ムザ染色液は染色体のGバンド分染法用に最適です。Gurrバッ

ファー錠剤を使用すると、ギムザ染色用バッファー(pH 6.8)

1 Lを簡便に調製できます。

細胞遺伝学用培地および関連製品のご注文や詳細情報について

は、www.invitrogen.com/cytoをご覧ください。

Chang培地AmnioMAX培地

細胞5000個あたりの分裂回数

Ordering information製品名 サイズ カタログ番号MarrowMAX™ Bone Marrow Medium 100 mL 12260-0141

AmnioMAX™-II Complete Medium 100 mL 11269-0162

AmnioMAX™ C-100 Complete Medium 1 set 12558-0113

AmnioMAX™ C-100 Basal Medium, liquid 90 mL 17001-0824

450 mL 17001-0745

AmnioMAX™ C-100 Supplement, liquid 15 mL 12556-0156

75 mL 12556-0237

PB-MAX™ Karyotyping Medium 100 mL 12557-0138

500 mL 12557-0219

KaryoMAX® Colcemid® Solution, liquid (10 μg/mL), in HBSS

10 mL 15210-040

KaryoMAX® Colcemid® Solution, liquid (10 μg/mL), in PBS

10 mL 15212-01210

KaryoMAX® Giemsa Stain Stock Solution 100 mL 10092-01311

Gurr Buffer Tablets (pH 6.8) 50 x 1 L 10582-013

Phytohemagglutinin (M Form) (PHA), liquid 10 mL 10576-015

Potassium chloride solution, 0.075M 4 x 100 mL 10575-090

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免疫学

イムノアッセイ1種類のタンパク質の測定にも複数のタンパク質の同時測定にも利用できるフレキシビリティをお求めなら

インビトロジェンの ELISAおよび Luminex ™試薬を使用ください

細胞内または細胞外タンパク質を正確に定量するために、抗

体のペアを使用する 1検体用(ELISAおよび phosphoELISA ™

キット)または複数検体用(Luminex®試薬) のイムノアッセ

イを幅広く提供しています。インビトロジェンが提供する高品

質のイムノアッセイは、分泌されたサイトカインやケモカイ

ンから細胞内リン酸化の変化まで、複雑な免疫系の機能分析

に役立ちます。インビトロジェンの ELISAおよび Luminex®試

薬 NIBSCスタンダードまたは公表されているモデル細胞系を

用いてキャリブレーションされており、どのようなプラット

フォームを選択しても正確な測定と一貫した性能が得られま

す。インビトロジェンの ELISAおよび Luminex®試薬は相互に

ベンチマークテストが行なわれているため、高い信頼性を保っ

たままプラットフォームを容易に変更できます。免疫学的研究

用試薬の詳細なポートフォリオについては、www.invitrogen.

com/immunoassaysをご覧ください。

フローサイトメトリー用抗体フローサイトメーターを最大限に活用より多くの色と選択肢を多色フローサイトメトリーは、異種細胞群のサブセット同定か

らまれな事象の検出まで、複雑な細胞生物学的な疑問の解明に

活用できます。多重(higher-plex)多色フローサイトメトリー

によって、各細胞に関するより多くの情報がより少ないサンプ

ルを用いて短時間で明らかになります。機器がハイエンド型で

も卓上型でも、お手持ちの装置を最大限に活用できる蛍光抗体

と試薬を業界で最も幅広く取り扱っています。インビトロジェ

ンはMolecular Probes®蛍光検出テクノロジーをベースとして、

フローサイトメトリーで使用できることを評価済みの極めて特

異的な 1次蛍光抗体標識シリーズを提供しており、抗 CDマー

カー、サイトカイン、ケモカイン、増殖因子抗体のほか、アポトー

シスや細胞分化などの細胞プロセスに関与する主なターゲット

用のマーカーなどがございます。抗体標識シリーズの詳細につ

いては、www.invitrogen.com/flowcytometryをご覧ください。

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www.invitrogen.jp

図23 インビトロジェンのタンパク質は他社製品よりも高い生理活性。MO7e細胞は他社製の幹細胞因子(SCF)にも応答して増殖していますが、インビトロジェンのSCFの生理活性は他社製SCFよりも高いことが示されています。

SCF (pg/ml)1 104 105103101 102 106

OD

0.6

0.5

0.7

0.8

0.9

1.0

1.1

1.2

0.4

ED50 (pg/ml) Invitrogen = 548.8 Competitor = 6593.6

サイトカイン、ケモカインおよび増殖因子より優れた活性、安定性、バリデーションと価値を

実験を開始する前に、使用しているサイトカイン、ケモカイン

や増殖因子の活性がどのくらい高いかについて知っておく必要

があります。使用している試薬の生理活性が低ければ、適切な

反応が得られるために、より多くの試薬を使用しなければなり

ません。その結果として、汚染のリスクは高くなり、得られる

結果は疑わしいものとなってしまいます。活性と純度が非常に

高い GIBCO®サイトカイン、ケモカインおよび増殖因子を使用

すれば、信頼性の高い免疫学的研究を行なうことができます。

生理活性と純度が高いので、得られる結果については高い信頼

性が保証されます(図 23)。GIBCO®サイトカイン、ケモカイ

ンおよび増殖因子は ISO13485の品質規格下で製造されていま

す。また、GIBCO®の培地を用いてバリデーションを行なって

いるため、ばらつきを低下させ、信頼性の高い結果を得ること

ができます。

用途につきましては、www.invitrogen.com/growthfactorsを

ご覧ください。

インビトロジェン製品= 548.8他社製品= 6593.6

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※本誌の記載価格は2010年5月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますので、予めご了承ください。

※一部製品お問い合わせ先:株式会社ベリタス  TEL:03-3593-3211 Web:http://www.veritastk.com/

※研究用にのみ使用できます。掲載製品は日本において薬事法に基づく承認を得ておりません。よって、診断を目的として利用することはできません。記載の社名および製品名は、弊社または各社の商標または登録商標です。©2010, Life Technologies Japan Ltd. All rights reserved. Printed in Japan.