Upload
javier-solis-martel
View
231
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
1/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 1
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
2/22
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
3/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 3
OBJETIVOS
Determinar las caractersticas morfolgicas externas de la Drosophila Melanogaster.
Comprobar las proporciones mendelianas. Comparar las diferencias anatmicas entre hembras y machos de la Drosophila
Melanogaster.
Identificar presencia de mutaciones en las muestras recogidas.
MARCO TERICO
Biologa de drosophila melanogaster
Fuente: http://explorerbiogen.blogspot.com/2011/06/drosophila-melanogaster-como-
modelo.html
Ciclo de vida
El desarrollo de la mosca de fruta presenta 2 fases:
la embrionaria y la post embrionaria. La secuencia
de duracin de los diferentes estadios en el ciclo
de vida es:
Huevo (1 da), larva de primer, segundo y tercer
estadio (1 da), pupa (4 a 5 das). As la duracin delciclo de vida completo es de 9 a 10 das en
condiciones controladas de temperatura y
humedad relativa. En su hbitat natural la duracin
del ciclo es ms variable como resultado de los
cambios climticos y la adversidad del ambiente.
http://explorerbiogen.blogspot.com/2011/06/drosophila-melanogaster-como-%20%20modelo.htmlhttp://explorerbiogen.blogspot.com/2011/06/drosophila-melanogaster-como-%20%20modelo.htmlhttp://explorerbiogen.blogspot.com/2011/06/drosophila-melanogaster-como-%20%20modelo.htmlhttp://explorerbiogen.blogspot.com/2011/06/drosophila-melanogaster-como-%20%20modelo.html8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
4/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 4
Morfologa externa
Cabeza
En la estructura general de los insectos la cabeza se forma por 6 segmentos: 1)
labrum, 2) clipeus, 3) antenal-ocular, 4) mandibular, 5) maxilar y 6) labial.
En la cabeza se encuentran sobre todo los rganos de los sentidos.
Los ojos compuestos son relativamente grandes, estn separados con amplitud y
son del mismo tamao y forma en los dos sexos, presentan setas pequeas y
rgidas que surgen de cada ngulo de unin de los aproximadamente 750
omatidios.
Los tres ocelos se encuentran juntos en un arreglo triangular en la parte superiorde la cabeza.
Entre los ojos estn las antenas, que se encuentran muy cercanas entre s.
En la regin ventral de la cabeza se encuentran las partes bucales: el labrumy el
clipeus, que estn altamente modificadas con respecto al plan general de los
insectos ya que forman un aparato chupador o proboscis.
Trax
El trax se forma de tres segmentos: el protrax o segmento anterior, el
mesotrax o segmento medio y el metatrax o segmento posterior. Todos los
segmentos del trax de Drosophilase encuentran fusionados formando una caja
casi slida.
El protrax por s mismo es muy reducido y slo sirve de soporte para el primer
para de patas.
Se presenta un marcado alargamiento del mesotrax y una reduccin del
metatrax, por los que las alas mesotorcicas tienen la funcin total del vuelo,mientras que las alas metatorcicas se han reducido a los halterios (balancines)
que funcionan como rganos de equilibrio.
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
5/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 5
Abdomen
La hembra muestra ser ms generalizada; el 8 segmento no tiene espirculos ni
esternito definido. Despus de ste slo se encuentra un pequeo segmento
donde aparece el ano, este segmento presenta una placa dorsal y una ventral; la
abertura genital se encuentra entre los segmentos 8 y 9.
En el macho la situacin es ms complicada. El 7 segmento desaparece
aparentemente y queda representado slo por su espirculo y el 8 slo por una
placa pequea en cada lado, el 9 est fuertemente modificado, muestra un
terguito muy grande y un esternito muy pequeo y el 10 se representa por un par
de placas situadas al lado del ano.
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
6/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 6
Especies mutantes en Drosophila melanogaster
MUTANTE NOMENCLATURAPARTE DEL CUERPO
AFECTADA
Yellow Y Cuerpo amarillo
White eyes W Ojos blancosCarmine eyes Cm Ojos carmn
Vermillion wing V Ojos bermellnMiniatura wing M Alas miniatura
Forked bristies F Quetas en forma de tenedorBar eyes B Ojos en forma de barra
Helout Ho Alas extendidas en 45
Dumpy wing Dp Alas regordetasCinnabar eyes Cu Ojos color cinabrio
Vestigial wing Vg Alas vestigiales
Brown eyes Bw Ojos pardosSepia eyes Se Ojos color sepia
Hairless H Sin quetas o pelosEbony body E Cuerpo color bano
Eyeless Ey Ojos reducidos a la mitad
Jaunti JAlas con extremos doblados
hacia arriba
A continuacin presentaremos algunas caractersticas de las mutaciones con las que hemos
trabajado:
White w (I, 1.5): de origen espontneo. Descubierto por Morgan. Fenotipo: ojos color
blanco puro. Los ocelos, la cubierta de los testculos del adulto y los tubos de Malpighi de
las larvas son incoloros.
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
7/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 7
Vestigial vg (II, 67.0): de origen espontneo. Descubierto por Morgan. Fenotipo: alas
reducidas a vestigios; por lo general dispuestas en ngulo recto respecto al cuerpo. Las
venas de las alas ligeramente visibles.
Miniatura m (I, 36.1): de origen espontneo, descubierto por Morgan. Su fenotipo: el
tamao de las alas est reducido. Alas de color gris oscuro y menos transparente que lo
normal.
Yellow y (I, 0.0): de origen espontneo. Descubierto por E.M Wallace. Fenotipo: cuerpo
color amarillo; pelos y cerdas cafs con puntas amarillas. Venas y pelos de las alas color
amarillo.
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
8/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 8
PARTE EXPERIMENTAL
Preparacin de los tapones de algodn
Corte la gasa de tal manera que la abertura del frasco sea ms chica que el pedazo cortado.
Formar una bola de algodn un poco dura que abarque el dimetro de la boca del frasco; quedeber colocar sobre la gasa para luego recoger los extremos y envolver con la misma, probar
nuevamente en la boca del frasco de tal manera que ajuste perfectamente. Amarrar la gasa con
pabilo, cortar los sobrantes, tapar el frasco para su posterior esterilizacin.
Los frascos con sus respectivos tapones deben ser esterilizados. Para ello, lleve los frascos a la
estufa por 30 minutos a 100C. Dejar enfriar para agregar el medio de cultivo.
Preparacin del medio de cultivo
Existen diversas frmulas de preparar el medio de cultivo deDrosophila melanogaster nosotros
emplearemos las siguientes proporciones:
Agar (20 gr) Levadura (20 gr) Azcar (30 gr) Ac. Propinico (5 ml)
Para la preparacin se disuelve el azcar en 800 ml de agua corriente y se hace hervir, luego
agregar poco a poco el agar en tiras. La levadura se disuelve en restantes 200ml de agua tibia.
Cuando todo el agar esta disuelto agregue la solucin que contiene levadura lentamente y dejar
hervir por unos minutos, a esta solucin final agregue los 5ml de cido propinico. Agregue en los
frascos esterilizados de 1 a 1,5 cm de medio de cultivo. Dejar enfriar durante 24 horas.
Preparacin del eterizador
El eterizador es un frasco que deber tener el mismo dimetro de abertura que los que contienen
el medio de cultivo y cuyo tapn deber estar limpio y esterilizado. En este frasco se narcotizan a
las moscas con cloroformo para el recuento.
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
9/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 9
Recomendaciones en general
En todo momento los frascos con medio, solamente se destapan para el recuento de las moscas,
no halar sobre ellos para evitar la contaminacin con las bacterias. Los frascos con medio de
cultivo no pueden ser expuestos directamente al sol. Todo frasco con medio de cultivo viejo o
contaminado debe ser inmediatamente separado y luego lavado. Al utilizar el eterizador no se
debe embeber el tapn en demasa.
CLCULOS
(1)MONOHIBRIDISMO
Frasco 1:
P: vg vg x ++
F1: todas heterocigotos de fenotipo silvestre +/vg
vg vg
+ +vg +vg
+ +vg +vg
En segundo frasco cruzamos la F1, es decir F1XF1, para obtener la F2, esquematizando tenemos:
+ vg+ ++ +vg
vg +vg vg vg
Obteniendo la siguiente proporcin genotpica 1(++):2(+vg):1(vg vg) y como consecuencia de esto
la siguiente proporcin fenotpica 3/4 silvestre(15) y (4) vestigial.
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
10/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 10
Frasco 2:
P: ++ x vg vg
F1: todas heterocigotos de fenotipo silvestre +/vg (19)
+ +
vg +vg +vg
vg +vg +vg
En segundo frasco cruzamos la F1, es decir F1XF1, para obtener la F2, esquematizando tenemos:
+ vg
+ ++ +vg
vg +vg vg vg
Obteniendo la siguiente proporcin genotpica 1(++):2(+vg):1(vg vg) y como consecuencia de esto
la siguiente proporcin fenotpica 3/4 silvestre(25) y vestigial(10).
ANLISIS DEL CHI CUADRADO
Para el frasco 1:
Proporcinesperada
fenotipos Observado(o)
Esperado(e)
Desviacin(o-e)
Desviacin2(d2)
Desviacin2/esperado
(d2/e)
3/4 silvestre
1/4 vestigial
total X2=
Grados de libertad (gl)=1 P=%-%
Para el frasco 2:
Proporcinesperada
fenotipos Observado(o)
Esperado(e)
Desviacin(o-e)
Desviacin2(d2)
Desviacin2/esperado
(d2/e)
3/4 silvestre
1/4 vestigial
total X2=
Grados de libertad (gl)=1 P=%-%
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
11/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 11
CHI CUADRADO DE HOMOGENEIDAD PARA FRASCO 1 DE MONOHIBRIDISMO (GRUPO: MARTES 4-
8 PM)
Fenotipos Silvestres Vestigiales Grado de libertad X2
1
Observado
Esperado
O-E
D2/E
53 18
14,69 x 10-3
53,25 17,75
-0,25 0,25
1,17 x 10-3 3,52 x 10-3
2
Observado
Esperado
O-E
D2/E
79 29
1 0,19781 27
-2 2
0,049 0,148
3
Observado
EsperadoO-E
D2/E
107 37
1 0,037108 36-1 1
9,26 x 10-3 0,028
Total 239 84 3 0,239
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
12/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 12
DATOS ACUMULADOS
Observado 239 84
1 0,175Esperado 242,25 80,75
OE -3,25 3,25
D2/E 0,044 0,131
En la tabla anterior se han obtenido los resultados para el total de los individuales para el X 2
acumulado.
El X2de homogeneidad se determina entonces de la siguiente manera:
X2 Grados de libertad
X2total 0,239 3
X2ac 0,175 1
X2h 0,064 2
El X2h obtenido es 0,064, mayor del 5% (entre 90 95 %), entonces s pueden sumarse.
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
13/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 13
CHI CUADRADO DE HOMOGENEIDAD PARA FRASCO 2 DE MONOHIBRIDISMO (GRUPO: MARTES 4-
8 PM)
Fenotipos Silvestres Vestigiales Grado de libertad X2
1
Observado
Esperado
O-E
D2/E
134 43
10,047
132,75 44,25
1,25 -1,25
0,012 0,035
2
Observado
Esperado
O-E
D2/E
99 28
1 0,59195,25 31,75
3,75 -3,75
0,148 0,443
3
Observado
EsperadoO-E
D2/E
122 48
1 0,749127,5 42,5-5,5 5,5
0,237 0,712
Total 355 119 3 1,387
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
14/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 14
DATOS ACUMULADOS
Observado 355 119
1 2,81 x 10-3Esperado 355,5 118,5
OE -0,5 0,5
D2/E 7,03 x 10-4 2,11 x 10-3
En la tabla anterior se han obtenido los resultados para el total de los individuales para el X 2
acumulado.
El X2de homogeneidad se determina entonces de la siguiente manera:
X2 Grados de libertad
X2total 1,387 3
X2ac 2,81 x 10-3 1
X2h 1,384 2
El X2h obtenido es 1,384, mayor del 5% (entre el 30 50 %), entonces s pueden sumarse.
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
15/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 15
(2) HERENCIA LIGADA AL SEXO
Frasco 1: P: XY x XWXW
F1: 1/2White, 1/2silvestres. Es la proporcin de los fenotipos esperados.
De acuerdo a esto, los datos fueron:
fenotipo totalSilvestre 16 16
White 10 10
Para F2, F1XF1, tenemos lo siguiente: F1: XWY x XXW
F2: 1/4White, 1/4 Silvestre, 1/4White y 1/4 silvestres. Estas son las proporciones
esperada de los cuatro fenotipos del frasco I.
En efecto, los datos de laboratorio fueron los siguientes:
fenotipo total
Silvestre 11 13 24
White 9 8 17
XW
(1/2)XW
(1/2)
X (1/2) XXW
(1/4)XXW
(1/4)
Y (1/2) XWY
(1/4)XWY
(1/4)
X
(1/2)
XW
(1/2)
XW
(1/2)XXW
(1/4)XWXW
(1/4)
Y
(1/2)XY
(1/4)XWY
(1/4)
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
16/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 16
Frasco 2: P: XWY x XX (gametos)
F1: 1/2sivestres, 1/2silvestres. Luego, los datos de laboratorio fueron los siguientes:
fenotipo total
silvestre 23 15 38
Para F2: F1XF1, tenemos lo siguiente: F1: XY x X Xw
F2:1/4White, 1/4silvestres, 1/2silvestres; esto es la proporcin esperada de los dos
fenotipos del frasco II.
Los datos de laboratorio fueron los siguientes:
fenotipo total
Silvestre 21 45 66White 25 25
X
(1/2)
X
(1/2)
XW
(1/2)XXW
(1/4)XXW
(1/4)
Y
(1/2)XY
(1/4)XY
(1/4)
X
(1/2)XW
(1/2)
X(1/2)
XX(1/4)
XXW
(1/4)
Y
(1/2)X Y
(1/4)XWY
(1/4)
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
17/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 17
ANLISIS DEL CHI CUADRADO:
Frasco 1:
Proporcinesperada
fenotipos Observado(o)
Esperado(e)
Desviacin(o-e)
Desviacin2(d2)
Desviacin2/esperado
(d2/e)
1/4 White 9 10,25 -1,25 1,56 0,15
1/4 Silvestre 11 10,25 0,75 0,56 0,05
1/4 White 8 10,25 -2,25 5,06 0,49
1/4 silvestres 13 10,25 2,75 7,56 0,74
Total 41 41 X2=1,43
Grado de libertad (gl)=3 P=50%-70%
Frasco 2:
Proporcinesperada
fenotipos Observado(o)
Esperado(e)
Desviacin(o-e)
Desviacin2(d2)
Desviacin2/esperado
(d2/e)
1/4 White 25 22,75 2,25 5,06 0,22
1/4 Silvestre 21 22,75 -1,75 3,06 0,13
1/2 silvestre 45 45,50 -0,50 0,25 0,01
total 91 91 X2=0,36
Grado de libertad (gl)=2 P=70%-90%
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
18/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 18
(3) LIGAMIENTO
Se usarn moscas con las mutaciones Yellow y ( I, 0.0), White w (I,1.5) y Miniatura m (I, 36.1).
Pero por indicaciones del profesor, solo tomaremos en cuenta las mutaciones White (ojos) y
miniatura (alas).
Frasco I:
Macho silvestre x hembra white- miniatura
P: ++/++ x ww/mm
F1: silvestres (18) y white miniatura (12)
F2:
wm Y
Gametos parentaleswm wm / wm (2) wm / Y (1)
++ ++ / wm (11) ++ / Y (8)
Gametosrecombinantes
w+ w+ / wm (7) w+ / Y (5)
+m +m / wm (6) +m / Y (4)Hembras (26) Machos (18)
Frasco 2:
Macho white-miniatura x hembra silvestre
P: ww/mm x ++/++
F1: silvestres (15) y silvestre (24)
F2:
++ Y
Gametos parentales++ ++ / ++ (17) ++ / Y (26)
wm wm / ++ (21) wm / Y (14)
Gametosrecombinantes
+w +w / ++ (1) +w / Y (4)
m+ m+ / ++ (1) m+ / Y (3)Hembras (40) Machos (47)
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
19/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 19
ANALISIS DEL CHI CUADRADO
Frasco 1
Proporcinesperada
fenotipos Observado(o)
Esperado(e)
Desviacin(o-e)
Desviacin2(d2)
Desviacin2/esperado
(d2/e)
1/8 Whiteminiatura
1
1/8 silvestre 8
1/8 white 5
1/8 miniatura
4
1/8 whiteminiatura
2
1/8 silvestre 11
1/8 white 7
1/8 miniatura 6
Total X2=
Grado de libertad (gl)=7 P=%-%
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
20/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 20
Frasco 2
% de Recombinacin a partir de la F2
% R frasco 1: (5+4) x100/18= 50
%R frasco 2: (4+3) x100/47= 14,89
Proporcinesperada
fenotipos Observado(o)
Esperado(e)
Desviacin(o-e)
Desviacin2(d2)
Desviacin2/esperado
(d2/e)
1/8 silvestre 26
1/8 whiteminiatura
14
1/8 white 4
1/8 miniatura 3
1/2 silvestre 40
Total 87 X2=
Grado de libertad (gl)=4 P=%-%
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
21/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 21
Distancia entre los genes white (w) y miniatura (m)
Observando los datos de la F2: FRASCO 1 LIGAMIENTO.
MACHOS HEMBRAS
Parentales 1 28 11
Recombinantes 5 74 6
Distancia (ym) = # recombinantes/ total de moscas = 22/44 = 0,5
Observando los datos de la F2: FRASCO 2 LIGAMIENTO.
MACHOS HEMBRAS
Parentales 26 17
14 21
Recombinantes 4 1
3 1
Distancia (ym) = # recombinantes/ total de moscas = 9/87 = 0,103
8/11/2019 Informe de Genetica (1) de Jesus
22/22
Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster
Pgina 22
RESULTADOS
CONCLUSIONES