INFORME DE TESIS I BIOQUIMICA FARMACIA DE BIBLIOTECA

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

INFORME DE TESIS I

“Efecto del Ácido Sulfhídrico de Agua Residual de Curtiembre en hemoglobina de Rattus

rattus var. albinus y Buffus spinolosus”

AUTORA

ESPINOZA ALVA, HAIDY MILAGROS

ASESOR:

Mg. JOSE LIZARDO CRUZADO RAZCO

TRUJILLO – PERÚ

2012

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

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I

AGRADECIMIENTOS

GRACIAS DIOS POR QUE HASTA AHORA

CON TU VOLUNTAD SIGO CUMPLIENDO

MIS METAS; A PESAR DE LAS PRUEBAS,

TROPIEZOS, ADVERSIDADES SIGO ADELANTE.

SIGUE FORTALECIENDOME EN ESTE LARGO

CAMINAR, PARA ASÍ ASUMIR CUALQUIER RETO.

A MIS PADRES, VITALIA Y TEOFILO, POR SU INFINITO

APOYO, POR SUS CONSEJOS Y POR LA

MOTIVACIÓN CONSTANTE QUE ME LLENA DE

FORTALEZAS PARA SEGUIR ADELANTE.

A MIS HERMANOS, POR SU CARIÑO,

COMPRENSIÓN, POR SUS ANIMOS CONSTANTES Y

POR SU CONFIANZA QUE ME BRINDAN DIA A DIA.



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II

AL MG. Q. F. JOSÉ LIZARDO CRUZADO RAZCO,

MI MÁS PROFUNDO Y SINCERO AGRADECIMIENTO,

RESPETO Y ESTIMA, POR SU ASESORÍA, Y SUS ENSEÑANSAS

POR SER SOPORTE DE CONOCIMIENTO EN

LA REALIZACIÓN DE MI TESIS.

A USTED LE ESTARÉ SIEMPRE AGRADECIDA.

AL MG. ROGER ANTONIO RENGIFO PENADILLOS,

POR SUS CONSEJOS, CONSIDERACIÓN, ENSEÑANZAS,

RESPETO, DEDICACIÓN INCONDICIONAL

SIEMPRE QUE LO REQUERIA.

POR SER COMO UN AMIGO,

Y DEMOSTRARME SER IMPORTANTE PARA ÉL.

MI MÁS SINCERO AGRADECIMIENTO

A MIS SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO,

POR SER PARTE DE LA ELABORACIÓN DE MÍ

TRABAJO DE INVESTIGACIÓN.

HEIDY M.



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III

JURADO DICTAMINADOR

Dr. WILLIAM SAGASTEGUI GUARNIZ (PRESIDENTE)

Mg. JOSÉ LIZARDO CRUZADO RAZCO (MIEMBRO)

Dra. ELENA MANTILLA RODRÍGUEZ (MIEMBRO)



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IV

PRESENTACIÓN

SEÑORES MIEBROS DEL JURADO:

Cumpliendo con el reglamento interno de la Facultad de Farmacia y

Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, para la obtención de

Grados y Títulos, no es grato someter a vuestra consideración y elevado

criterio nuestra Tesis I: “EFECTO DEL ÁCIDO SULFHÍDRICO DE

AGUA RESIDUAL DE CURTIEMBRE EN HEMOGLOBINA DE

Rattus rattus var. albinus Y Buffus spinolosus”, con el cual pretendemos

obtener el Grado Académico de Bachiller en Farmacia y Bioquímica.

Dejamos a vuestra consideración Señores Miembros del Jurado la

calificación del presente trabajo.

Trujillo, Octubre del 2012.

_________________________

HAIDY ESPINOZA ALVA



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V

INDICE

PÁGINA

AGRADECIMIENTO……………………………………………………………….I

JURADO DICTAMINADOR……………………………………………………….III

PRESENTACIÓN…………………………………………………………………...IV

INDICE……………………………………………………………………………...V

RESUMEN………………………………………………………………………….VI

ABSTRACT………………………………………………………………………...VII

I. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………..1

II. MATERIAL Y MÉTODO………………………………………………………7

III. RESULTADOS………………………………………………………………...11

IV. DISCUSIÓN…………………………………………………………………...14

V. CONCLUSIONES……………………………………………………………...17

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………………...18

ANEXOS…………………………………………………………………………..20



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RESUMEN

En el presente trabajo se determinó el efecto de Ácido sulfhídrico en agua residual de

curtiembre en hemoglobina de Rattus rattus var. albinus y Buffus spinolosus. Se obtuvo

la muestra de agua residual de la curtiembre América ubicada en la Curva de Sun –

Distrito de Moche, Trujillo, La Libertad. Se cuantificó el ácido sulfhídrico presente en el

agua residual de curtiembre, obteniendo un resultado de 71.06 ppm. Se formaron dos

grupos: Blanco (7) y Problema (8), de Rattus rattus var. albinus (animales de sangre

caliente) y se formó dos grupos de Buffus spinolosus: Blanco (7) y Problema (8)

(animales de sangre fría). A los dos grupos blancos de animales de experimentación se les

sometió a vapores de agua potable, por un tiempo de cinco minutos y al grupo problema

se le sometió a vapores de agua residual de curtiembre, desprendiendo un olor

característico del ácido sulfhídrico (huevo podrido), por un tiempo de cinco minutos o

hasta que se observó un cambio en el comportamiento del animal. Se les extrajo un mL

de sangre mediante punzo cardiaco, luego utilizando el método de Nicoll y Morrel se

pudo cuantificar la cantidad de H2S en los especímenes. De los resultados obtenidos se

concluye que la cantidad de H2S en ppm encontrados en la muestra de agua de

Curtiembre fueron tóxicas para los animales de experimentación.

Palabras Claves: Ácido sulfhídrico, Agua Residual, Curtiembre, Sangre fría, Sangre

caliente



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VII

ABSTRACT

In this study we investigated the effect of hydrogen sulfide in Tannery Wastewater in

Rattus rattus var. albinus and Buffus spinolosus hemoglobin. Sample was obtained from

the tannery wastewater America located in the Sun Curve - District of Moche, Trujillo,

La Libertad. We quantified the hydrogen sulphide present in the tannery waste water,

obtaining a result of 71.06 ppm. Two groups: White (7) and Problem (8), of Rattus

rattus var. albinus (warm-blooded animals) and formed two groups of Buffus

spinolosus: White (7) and Problem (8) (cold-blooded animals). The two white groups of

experimental animals were subjected to water vapor for a time of five minutes and the

problem group was subjected to vapors of tannery wastewater, giving off a

characteristic odor of hydrogen sulfide (rotten egg), for a time of five minutes or until

there was a change in the animal's behavior. They took a blood mL by cardiac puncture,

then using the method of Nicoll and Morrel could quantify the amount of H2S in the

specimens. The results obtained showed that the amount of H2S in ppm found in the

water sample were toxic to Curtiembre experimental animals.

Key words: Sulfuric acid, Wastewater, Tannery, Cold Blood, Hot Blood



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I. INTRODUCCIÓN

El medio éste entorno se ve afectado por contaminantes que ponen en riesgo la salud

de los ambiente provee el entorno necesario para la vida humana, flora y fauna. Los

recursos naturales, patrimonio de las naciones, constituyen los elementos materiales

necesarios para satisfacer los requerimientos de alimentación, vestido, vivienda, energía

y demás productos de la población, pero también deben de garantizar el bienestar de las

generaciones futuras. Sin embargo habitantes 1, 2

.

Desde hace tiempo los riesgos emergentes, los factores ambientales son la causa

principal de una importante carga de mortalidad, morbilidad y discapacidad a nivel

mundial y particularmente en los países en desarrollo. Éstos, van desde la mala calidad

del agua y el acceso, enfermedades transmitidas por vectores y contaminación del aire a

las exposiciones químicas tóxicas, cambio climático y la degradación del medio

ambiente urbano. Los impactos resultantes se estima que causa más del 25% de

mortalidad y morbilidad a nivel mundial, llegando a casi 35% en regiones como el

África subsahariana 4, 5, 6

.

La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que unos dos millones de

personas mueren prematuramente cada año por culpa de la contaminación ambiental,

cualquiera que sea el tipo y que por esta causa muchas personas sufren trastornos de la

respiración, cardiopatías, infecciones e incluso cáncer 4.

Las fuentes antropogénicas de contaminación atmosférica (o fuentes emisoras) son

básicamente de dos tipos:



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Estáticas: que pueden ser fuentes zonales (producción agrícola, minas y

canteras, zonas industriales), fuentes localizadas (fábricas de productos

químicos, productos minerales no metálicos, industrias básicas de metales,

centrales de generación de energía) y fuentes municipales (p. ej., calefacción

de viviendas y edificios, incineradoras de residuos municipales y fangos

cloacales, chimeneas, cocinas, servicios de lavandería y plantas de

depuración) 4,6

.

Móviles: como los vehículos con motor de combustión (p. ej. vehículos

ligeros con motor de gasolina, vehículos pesados y ligeros con motor diesel,

motocicletas, aviones incluyendo fuentes lineales con emisión de gases y

partículas del conjunto del tráfico de vehículos) 4,6

.

Los contaminantes gaseosos incluyen compuestos azufrados (dióxido de azufre

(SO2) y trióxido de azufre (SO3)), monóxido de carbono, compuestos nitrogenados

(óxido nítrico (NO), dióxido de nitrógeno (NO2), amoníaco), compuestos orgánicos

(hidrocarburos (HC), compuestos orgánicos volátiles (COV), hidrocarburos aromáticos

policíclicos (PAH), aldehídos), compuestos halogenados y haluros (HF y HCl), sulfuro

de hidrógeno, bisulfuro de carbono y mercaptanos 4,5,6

.

La contaminación de los recursos hídricos superficiales es un problema cada vez

más grave, debido a que estos se usan como destino final de residuos domésticos e

industriales (empresas de producción, teniendo a las curtiembres como las principales),

sobre todo en las áreas urbanas e incluso en numerosas ciudades importantes del

continente, siendo el acido sulfhídrico uno de los gases más tóxicos que se forman 4,6, 7

.



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Es el caso del proceso de las curtiembre donde se tiene varias etapas en la

producción, y en cada una hay dos o tres alternativas a las convencionales. Una de las

etapas es la de pelambre, donde se utiliza el sulfuro de sodio en combinación con cal,

esta sal en medio acuoso forma ácido sulfhídrico que es una sustancia tóxica7.

El ácido sulfhídrico es un sustancia muy volátil, que se encuentra entre los

compuestos azufrados más emitidos en el mundo y es el compuesto reducido de azufre

que ejerce el mayor impacto adverso al medio ambiente, debido a que es altamente

reactivo y tóxico. Es uno de los venenos más enérgicos y accionantes 8, 9

.El ácido

sulfhídrico (H2S), formado en las curtiembres también se produce principalmente por la

putrefacción de la materia orgánica, especialmente de los compuestos sulfurados,

producidos por bacterias anaeróbicas sobre los residuos cárnicos de los cueros y pieles.

En pequeñas cantidades se forma sulfuro de hidrógeno por descomposición de sulfuros

alcalinos empleados para la depilación de pieles10

. El olor de huevo podrido

característico del ácido sulfhídrico es perceptible en concentraciones tan bajas como

0,025 mg/L (ppm). A menos de 10mg/L no existen señales de intoxicación, por lo tanto

los efectos sobre la salud varían dependiendo de cuánto tiempo y a qué nivel se tiene la

exposición a este gas. A concentraciones bajas produce irritación de ojos, nariz,

garganta o sistema respiratorio, incluso los efectos pueden tardar en aparecer. A

concentraciones moderadas efectos más severos en los ojos y la respiración, dolor de

cabeza, mareos, nausea, tos, vómitos y dificultad al respirar, mientras que a

concentraciones altas puede producir estado de shock, convulsiones, incapacidad para

respirar, coma y muerte; los efectos pueden ser extremadamente rápidos (en pocas

inhalaciones) 9, 11,17

.



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El ácido sulfhídrico es un tóxico de la respiración hística, inhibiendo los

sistemas oxido reducción celulares, específicamente a la citocromo oxidasa con la

consiguiente anoxia general. Secundariamente provoca modificaciones de la

hemoglobina (Hb) con aparición de pigmentos verdosos sulfahemoglobina (S – Hb) o

productos del tipo verdoglobina8, 9,

.

La S-Hb es una molécula de color verde que contiene un átomo de azufre en uno

o más anillos porfirínicos, siendo ineficaz en el transporte de oxígeno y ocasiona

cianosis, término que se refiere a la coloración azulada de la piel y mucosas que

depende de los niveles excesivos de hemoglobina reducida. La sulfahemoglobina resulta

de la oxidación irreversible de la hemoglobina inducida por ciertas drogas. También se

advierte como S-Hb en la intoxicación con dapsona., la exposición ocupacional a

compuestos sulfurados y respiración de aire contaminado 12, 13

. La concentración de S-

Hb tolerable es de 10 ppm según el Instituto de Salud y Seguridad Ocupacional

(NIOSH). El diagnóstico se establece por la demostración de un espectro anormal con

absorción máxima a 620 nm, con cubetas de trayectoria luminosa de 0,1 mm necesario

para medir en los límites de 500-650 nm. En la lectura el pico de S-Hb persiste después

del agregado de ditionita o cianuro. En contraposición con otras clases de hemoglobina,

S-Hb permanece en los glóbulos rojos durante toda su vida 14

.

Por la dificultad de la determinación de S-Hb , puesto que no es práctico preparar

estándares de referencia, se utiliza el método espectrofotométrico que se basa en los

trabajos de Nichol y Morell, que requiere una buena calibración del equipo, que se

trabaje con buena precisión y con cubetas de trayectoria luminosa de 1 cm. La

sulfahemoglobina se mide por la absorbancia a 614 nm. Esta se corrige por la presencia

de las otras hemoglobinas restando la absorbancia a 569 nm, multiplicada por un factor

determinado experimentalmente15, 16

.



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El Perú viene avanzando en cuanto al fortalecimiento de las instituciones y al

establecimiento de mecanismos que permitan desarrollar y aplicar los instrumentos

técnicos legales de manera efectiva en los aspectos de gestión de los residuos sólidos en

general y en particular al de los residuos peligrosos. Corresponde a la Dirección

General de Salud Ambiental - DIGESA, en su calidad de autoridad competente la

aplicación de los instrumentos legales como el Reglamento de la Ley General de

Residuos Sólidos - D.S. N° 057-2004/ PCM, así como vigilar la observancia de la

Norma Técnica Peruana 900,015:2002 de Gestión Ambiental de Emisiones

Atmosféricas que especifica la determinación de contenido de sulfuro de hidrógeno,

sulfuro de carbonilo y disulfuro de carbono en fuentes estacionarias 18, 19

.

Luego de todo lo expuesto se plantea la siguiente interrogante ¿Cuál es el efecto

del Ácido Sulfhídrico en Agua Residual de Curtiembre en hemoglobina de Rattus rattus

var. albinus y Buffus spinolosus?



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Los objetivos planteados fueron:

Determinar las concentraciones de ácido sulfhídrico en las muestras de

agua de la Curtiembre América ubicada en la Curva de Sun – Distrito de

Moche, Trujillo, La Libertad.

Comprobar el efecto de los vapores de agua residual de curtiembre en los

animales de los grupos problema.

Determinar espectrofotométricamente los porcentajes de

sulfahemoglobina en Rattus rattus var. albinus (animales de sangre

caliente) y Buffus spinolosus (animales de sangre fría).



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II. MATERIAL Y MÉTODO

2.1 Material de Estudio

2.1.1 Material biológico:

Cinco litros de agua residual de la curtiembre América ubicada América

ubicada en la Curva de Sun – Distrito de Moche, Trujillo, La Libertad.

Quince especímenes de Buffus spinolosus aparentemente sanos los cuales

fueron adquiridos en la provincia de Virú, con peso corporal entre 200 a

300 gramos. Quince especímenes de Rattus rattus var albinus

aparentemente sanos con peso corporal entre 200 a 300 gramos, los cuales

fueron adquiridos del Bioterio de la Facultad de Farmacia y Bioquímica.

2.1.2 Material de laboratorio.

Material de Vidrio

El de uso común en el laboratorio

Equipos de laboratorio

Balanza analítica SARTORIOS BP 301 S

Centrífuga eba 20 Hettich

Equipo de destilación simple

Equipo de agitación magnética LINDBERG

Equipo de disección

Estufa MEMMERT

Espectrofotómetro JENWAY 6105 UV/ Vis

Reactivos

Bicarbonato de sodio

Buffer fosfato 0,1N; pH 6,0

CO(g) obtenido de los gases de escape del motor de gasolina de una moto



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Ditionato de sodio en cristales frescos (Na3S2O4).

HCL cc

Hidróxido de sodio

Heparina

Solución de HCL 0,1N

Solución de almidón

Tiosulfato de sodio 0,1 N

Trióxido arsénico

Yodo 0,1 N

Otros

Jaulas metálicas

Cámaras de vidrio

2 cocinas eléctricas

Goteros

Jeringas hipodérmicas de 3 y 5 mL



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2.2 Métodos y Técnicas

2.2.1 Dosaje de Ácido Sulfhídrico de las Muestras de Agua Residual (23)

.

Se preparó el equipo de destilación, se colocó 50 mL de la muestra en un balón

de 500 mL, por otro lado en un matraz de 250 mL se agregó 5 mL de solución de

iodo 0,1N y 1 mL de HCL 0,1 N.

Se destiló la muestra de tal forma que el extremo del refrigerante estaba

sumergido en la solución de iodo.

La destilación se realizó hasta obtener un volumen de 15 a 20 mL.

Se valoró el exceso de iodo con una solución de tiosulfato de sodio 0,1 N, hasta

obtener una coloración ligeramente amarilla o marrón claro.

Luego se colocó 2 mL de solución de almidón al 1% como indicador, se siguió

dejando caer la solución de tiosulfato de sodio hasta la desaparición del color azul

del indicador.

Luego se calculó la cantidad de mL de iodo que se habían combinado o que

habían reaccionado con H2S.

mL de Iodo 0,1N colocados – mL de Tiosulfato 0,1N gastados = mL de Iodo

0,1N combinados con H2S.

2.2.2 Intoxicación experimental

Se agrupó a los animales de experimentación en dos grupos: 8 para el grupo

experimental y 7 para el grupo blanco.

Se construyó una cámara de vidrio, a la cual se adaptó una tapa que permitió el

ingreso de los especímenes y un orificio por donde ingresó el vapor de agua

residual sometida a ebullición a través de un tubo para el grupo problema y

vapor de agua potable para el grupo blanco.



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Luego de la intoxicación se procedió a sacar a los animales de la cámara. Se

extrajo por punción cardiaca 1,0 mL de sangre de los grupos Blanco y Problema,

tanto del grupo de Rattus rattus var albinus y del grupo de Buffus spinolosus.

2.2.3 Método Espectrofotométrico para la Sulfahemoglobina en sangre

La determinación se realizó según la técnica de Nichol y Morell (20)

:

Se diluyó 1mL de sangre (heparinizada) de los subgrupos antes indicados, con

agua para hacer 10 mL en tubos de ensayo estériles respectivamente.

Después de completar la hemolisis se centrifugó con fuerza para remover el

estroma.

Se hizo una dilución de 1 mL del sobrenadante claro hasta 10 mL con buffer

fosfato 0,1 M pH 6,0 en otros tubos de ensayo estériles respectivamente.

Luego se expuso a un chorro moderado de monóxido de carbono en forma de

grandes burbujas a través de la solución durante tres minutos en cada uno de los

tubos de ensayos respectivamente.

Usando cubetas con 1 cm de trayectoria luminosa se midió la absorbancia,

usando como blanco buffer fosfato, a 570 y 638nm a cada uno de los tubos de

ensayo respectivamente.

Después de la lectura espectrofotométrica se agregó unos cristales de ditionato

de sodio (hidrosulfito de sodio), que contiene derivados de CO en los tubos de

ensayo, luego se mezcló por inversión suave y procedió otra vez a 570, 614 y

638 nm contra blanco de buffer fosfato con ditionato de sodio.

Luego se calculó los porcentajes de Sulfahemoglobina en las muestras

sanguíneas empleando la siguiente fórmula:



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III. RESULTADOS

DOSAJE DE H2S EN LA MUESTRA DE AGUA DE CURTIEMBRE

La cantidad de H2S encontrada en 1000 mL den la muestra de agua residual de

curtiembre fue de 71.06 ppm.

TABLA I: PORCENTAJE DE SULFAHEMOGLOBINA EN MUESTRAS

SANGUÍNEAS DEL GRUPO BLANCO DE Buffos spinolosus A

LONGITUDES DE ONDA DE 570, 614, 638 nm.

TABLA II: PORCENTAJE DE SULFAHEMOGLOBINA EN MUESTRAS

SANGUÍNEAS DEL GRUPO PROBLEMA DE Buffos spinolosus A


Buffos spinolosus

ABSORBANCIA %S-Hb

λ= 570nm λ= 614nm λ= 638nm

M1 0.845 0.322 0.089 1.866

M2 0.711 0.403 0.094 2.415

M3 0.642 0.264 0.164 1.542

M4 0.519 0.285 0.21 1.704

M5 0.613 0.4 0.325 2.419

M6 0.428 0.314 0.249 1.911

M7 0.336 0.254 0.119 1.548

M(promedio) 0.585 0.32 0.179 1.915

Buffos

spinolosus

ABSORBANCIA %S-Hb

λ= 570nm λ= 614nm λ= 638nm

M1 0.961 0.604 0.168 3.644

M2 1.057 0.553 0.113 3.296

M3 1.225 0.67 0.291 4.006

M4 0.863 0.642 0.31 3.91

M5 1.498 1.298 1.084 7.962

M6 1.137 0.512 0.485 3.015

M7 1.158 0.987 0.426 6.05

M8 0.564 0.451 0.35 2.756

M(promedio) 1.058 0.715 0.403 4.33



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TABLA III: PORCENTAJE DE SULFAHEMOGLOBINA EN MUESTRAS

SANGUÍNEAS DEL GRUPO BLANCO DE Rattus rattus var. albinus. A


Rattus rattus

var. albinus

ABSORBANCIA %S-Hb

λ= 570nm λ= 614nm λ= 638nm

M1 0.31 0.271 0.259 1.663

M2 0.28 0.181 0.162 1.094

M3 0.201 0.19 0.125 1.17

M4 0.184 0.171 0.163 1.052

M5 0.192 0.181 0.161 1.114

M6 0.204 0.165 0.158 1.009

M7 0.215 0.197 0.181 1.211

M(promedio) 0.227 0.194 0.173 1.188

TABLA IV: PORCENTAJE DE SULFAHEMOGLOBINA EN MUESTRAS

SANGUÍNEAS DEL GRUPO PROBLEMA DE Rattus rattus var. albinus. A

LONGITUDES DE ONDA DE 570, 614, 638 nm

Rattus

rattus var.

albinus

ABSORBANCIA

%S-Hb

λ= 570nm λ= 614nm λ= 638nm

M1 0.803 0.72 0.321 4.423

M2 0.433 0.135 0.07 0.764

M3 0.813 0.754 0.7 4.638

M4 0.453 0.372 0.298 2.276

M5 0.256 0.111 0.085 0.651

M6 0.546 0.351 0.29 2.121

M7 0.276 0.152 0.093 0.909

M8 0.326 0.272 0.21 1.666

M(promedio) 0.488 0.358 0.258 2.181



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TABLA V: PORCENTAJES PROMEDIO DE SULFAHEMOGLOBINA EN

MUESTRAS SANGUÍNEAS DE LOS GRUPOS BLANCO Y PROBLEMA DE

Buffos spinolosus (ANIMALES DE SANGRE FRÍA) Y Rattus rattus var.

albinus (ANIMALES DE SANGRE CALIENTE) DE LA IDENTIFICACIÓN

ESPECTOFOTOMÉTRICO EN INTOXICACIÓN EXPERIMENTAL IN

VIVO CON H2S.

%S-Hb en una muestra de 50mL de agua de curtiembre

%S-Hb

(promedio)

MUESTRA

Rattus rattus var.

albinus

BLANCO 1.188

PROBLEMA 2.181

Buffos spinolosus BLANCO 1.915

PROBLEMA 4.330

%S-Hb = [A614nm – (A570 nm x 0.036)] x 6.4 Fórmula de % de Sulfohemoglobina.



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IV. DISCUSION

Los sulfatos, sulfuros o cualquier material orgánico o inorgánico que contenga

azufre en su estructura, en estado oxidado o reducido, representan un potencial

para la generación de ácido sulfhídrico (H2S). De estos, los sulfatos constituyen

la mayor fuente de azufre en los drenajes y de su reducción se produce la mayor

parte de H2S.

Por otro lado algunos sulfuros también se depositan en los drenajes a través de

los excrementos humanos o de animales y su concentración puede llegar a

alcanzar hasta 3 mg/L. Otro depósito aunque con poca frecuencia, son las aguas

subterráneas que son vertidas a los drenajes. Sin embargo, la mayor fuente de

sulfuros lo constituye la actividad biológica, en este caso, sulfuros pueden

producirse por la descomposición de materia orgánica y de la reducción

anaeróbica de sulfatos inorgánicos, siendo este último la principal fuente de H2S

en drenajes (8)(13).

El efecto tóxico de ciertas drogas y gases como el ácido sulfhídrico, sobre la

hemoglobina no solo lleva a la formación de metahemoglobina sino también por

el grado de toxicidad de sustancias como el ácido sulfúrico y derivados, puede

causar un cambio estructural irreversible dentro de la porción de protoporfirina

formándose de esta manera la Sulfahemoglobina (13)

.

Las muestras de sangre tienen que estar diluidas y son saturadas con monóxido

de carbono para producir compuestos más estables. La Sulfahemoglobina se

mide a una absorbancia de 614 nm, corrigiéndose con la lectura de 570 nm que

representa la presencia de las otras hemoglobinas y este multiplica por un factor

determinado empíricamente (20)

.



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En los resultados del presente trabajo experimental, se puede identificar que en

las Tablas I y III se describen las absorbancias a las longitudes de onda de 570,

614 y 638 nm del blanco buffer fosfato 0,1 M con ditionato de sodio frente a la

muestra sanguínea del grupo blanco después de agregar ditionato de sodio, tanto

de Buffus spinolosus y Rattus rattus var. albinus, respectivamente. Ambos

casos demuestran el posible cambio que pudo sufrir la hemoglobina al estar

sometidos a vapores de agua, resaltando así, que el espectro de absorción normal

de la oxihemoglobina tiene densidad óptica por encima de 600 nm, sin embargo,

el espectro puede sufrir modificaciones al someterse a una desnaturalización de

la hemoglobina que se encuentran presentes en un hemolizado, al estar

sometidos a productos definidos, resultando una elevación general de la curva

de absorción en el intervalo de 600 a 620 nm (20)(21)

.

En la Tabla II se observa las lecturas de las absorbancias a las longitudes de

onda de 570, 614 y 638 nm del blanco buffer fosfato 0,1 M con ditionita de

sodio contra la muestra sanguínea del grupo problema de Buffus spinolosus

después de agregar ditionita de sodio. Los resultados de esta tabla indican un

mayor porcentaje de S-Hb a comparación del grupo blanco, esto se explica a que

la muestra de agua de curtiembre contiene altos niveles de Ácido sulfhídrico.

A los especímenes Buffos spinolosus se les consideran animales de sangre fría,

lo cual manifiestan un mecanismo de defensa de su organismo que se activa por

la presencia del H2S; su posterior conversión a sulfuros es debido a sus

condiciones de Temperatura (T°), es decir la capacidad de combinación de O2 y

Hb se eleva al disminuir la temperatura (animal de sangre fría) pero se deprime

la disociación de O2-Hb, posiblemente aprovechando al máximo su O2-Hb



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limitada de su circulación incompleta, para autooxidarse a Metahemoglobina. La

Metahemoglobina tiene bastante afinidad por los sulfuros presentes en el animal

y por ende no se produce la muerte de los Buffus spinolosus (animales de sangre

fría) experimentalmente (20)

.

En la Tabla IV, se observa las lecturas de las muestras problema de Rattus

rattus var. albinus en valores de las absorbancias a longitudes de onda de 570,

614 y 638 nm del blanco buffer fosfato 0,1 M con ditionato de sodio frente a la

muestra sanguínea del grupo problema después de agregar ditionato en Rattus

rattus var. albinus, dando como concentración final promedio de 2.181 % S-

Hb, considerando que estos animales son de sangre caliente y la difusión fue

mayor en menor tiempo a comparación de los Buffos spinolosus causando la

muerte en los especímenes. La muerte posiblemente se produjo por acción

directa en la cadena respiratoria, inhibiendo a la enzima citocromooxidasa a

nivel del citocromo a3 que es el último paso en el transporte de electrones para la

distribución del O2. Esto ocurre porque el H2S se metaboliza en la sangre y en

los tejidos a sulfuro alcalino, formando complejos con el hierro férrico (Fe3+

) de

la citocromooxidasa. También secundariamente se produce efectos a nivel

central inhibiendo el centro respiratorio (20)(21)

.

Los resultados descritos identifican espectrofotométricamente la formación de

Sulfohemoglobina en Buffus spinolosus en mayor proporción que en Rattus

rattus var. albinus.



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V. CONCLUSIONES

1. Se determinó que las concentraciones de ácido sulfhídrico en la

muestra de agua de Curtiembre obtenida de la Curva de Sun, es 71.06

ppm.

2. El H2S contenido en los vapores de agua residual tuvieron un efecto

tóxico en comparación con los vapores de agua potable, causando

una posible interrupción de la cadena respiratoria (estado comatoso),

en los animales de sangre caliente, y una pigmentación de la dermis

en los animales de sangre fría.

3. Se determinó espectrofotométricamente que las muestras de sangre

de Buffus spinolosus (animales de sangre fría) tuvieron un mayor

porcentaje de formación de sulfahemoglobina comparados con las

muestras de Rattus rattus var. Albinus (animales de sangre caliente).



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VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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título de Ingeniero Químico. Fac. de Ingeniería Química. Universidad Nacional

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preprofesionales.Facultad de Farmacia y Bioquímica. Trujillo-Perú.

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FIGURA N° 1: LECTURAS DE LAS MUESTRAS BLANCO A DISTINTAS

LONGITUDES DE ONDA

FIGURA N°2: LECTURAS DE LAS MUESTRAS PROBLEMAS A

DISTINTAS LONGITUDES DE ONDA

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

M9 M10 M11 M12 M13 M14 M15

LON

GIT

UD

DE

ON

DA

(n

m)

Buffos spinulosus - BLANCO

λ= 570nm

λ= 614nm

λ= 638nm

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8

LON

GIT

UD

DE

ON

DA

(n

m)

Buffos spinolosus - PROBLEMA

λ= 570nm

λ= 614nm

λ= 638nm



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FIGURA N°3: LECTURAS DE LAS MUESTRAS PROBLEMAS A

DISTINTAS LONGITUDES DE ONDA

FIGURA N° 4: LECTURAS DE LAS MUESTRAS BLANCO A DISTINTAS

LONGITUDES DE ONDA

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8

LON

GIT

UD

DE

ON

DA

(n

m)

Rattus rattus var. albinus- PROBLEMA

λ= 570nm

λ= 614nm

λ= 638nm

0.000

0.050

0.100

0.150

0.200

0.250

0.300

0.350

M9 M10 M11 M12 M13 M14 M15

LON

GIT

UD

DE

ON

DA

(n

m)

Rattus rattus var. albinus - BLANCO

λ= 570nm

λ= 614nm

λ= 638nm



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FIGURA N°5: %S-Hb (promedio)

0.000

0.500

1.000

1.500

2.000

2.500

3.000

3.500

4.000

4.500

BLANCO PROBLEMA BLANCO PROBLEMA

1.188

2.181 1.915

4.330

%S-

Hb

Rattus rattus var. albinus Buffos spinolosus

BLANCO

PROBLEMA

BLANCO

PROBLEMA



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CALCULOS (24):

DOSAJE DE H2S EN LA MUESTRA DE AGUA DE CURTIEMBRE

A. Determinación del gasto promedio de tiosulfato de sodio 0,1N F = 0,99056

G1: primer gasto

G2: segundo gasto

Gp: gasto promedio

B. Determinación del Gasto real (Gr)

mL

C. Determinación de la cantidad de Iodo 0,1N combinados con H2S (Vc)

- A: Volumen de Yodo colocado = Vp*F Vp: Volumen de Yodo Factor de Yodo = 0.9162

A = 5*0.9162 = 4.581mL Vc: Volumen combinado

D. Determinación de H2S presente en 1000 mL de muestra (B)

B = 71.06 ppm. En agua residual



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25

GALERIA DE FOTOS

AGUA DE ASEQUIA QUE ES EXPULSADA POR LA CURTIEMBRE UBICADA EN LA

CURVA DE SUN, DISTRITO DE MOCHE – PROVINCIA DE TRUJILLO. LA LIBERTAD



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26

DESTILACIÓN SIMPLE DEL AGUA RESIDUAL – OBTENCIÓN DE H2S EN SOLUCION DE IODO 0.1 N

COLOR CARACTERISTICO DE H2S



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27

INTOXICACIÓN CON AGUA RESIDUAL A LOS ESPECÍMENES DEL GRUPO PROBLEMA DE

Rattus rattus var. albinus.

INTOXICACIÓN CON AGUA RESIDUAL A LOS ESPECIMENES DEL GRUPO EXPERIMENTAL DE

Buffus spinulosus.



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28

PIGMENTACIÓN DE LA PIEL DE LOS ESPECÍMENES DE EXPERIMENTACIÓN Buffus spinulosus.

MUESTRAS SANGUÍNEAS LISTAS PARA SER PROCESADAS Y SEGUIDO SOMETER A LECTURAS,

PARA DETERMINAR POR MÉTODO DE NICOLL Y MORREL LA CANTIDAD DE H2S.



Documents

INFORME DE TESIS I BIOQUIMICA FARMACIA DE BIBLIOTECA