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Interacciones microorganismos - planta
PRÁCTICO N° 6
Objetivo: Conocer las técnicas de laboratorio para el manejo de microorganismos que interactúan con las plantas
Positivas (sinérgicas)
• Simbiosis (micorrizas, rizobios)• Mutualismo (Azozpirillum)
Negativas (antagónicas)
• Competencia• Amensalismo
Interacciones más comunes
Técnicas de laboratorio
Aislamiento de microorganismos Selección de cepasProducción de inoculantes
Simbiosis: micorrizas
Ectomicorrizas Endomicorrizas
IntercelularesManto externoRaíz modificadaHongos superioresCultivables
Intercelulares e intracelularesSin manto externoSin raíz modificadaHongos inferioresNo cultivables
Actividad: observar micorrizas en raíces de pino
incubar
estriar en medio YEM
cortar la raíz lavar
seleccionar nódulos turgentes extraer los
nódulos
nódulos
desinfectar con H2O2 (5minutos)
macerar enjuagar con H2O estéril
1 mL de H2O estéril
incubar
repicar (pico de flauta)
colorear (Gram -)
conservar
Aislamiento de microorganismos: rizobios
Aislamiento de microorganismos: rizobios
Extraer los nódulosRaíz de leguminosa
Desinfectar con H2O2 (20%) 5 minutos
Enjuagar con H2O estéril
Aislamiento de microorganismos (rizobios)
Colocar los nódulos en un
tubo con 1ml de agua estéril
Extraer una alícuotaEstriar en medio YEM
Macerar con varilla de vidrio
Incubar (28-30° C)
Cultivo de rizobio Colorear y observar
Repicar a “pico de flauta”
Incubar y conservar
Aislamiento de microorganismos (rizobios)
Actividades: - realizar macerado de nódulos y colorear
- observar al microscopio bacteroides y bacterias .
Nodulos (A a C) y bacteroides (D a F) deP. sativum cv. (arveja).
Síntesis de aislamiento de rizobios
incubar
estriar en medio YEM
cortar la raíz lavar
seleccionar nódulos turgentes extraer los
nódulos
nódulos
desinfectar con H2O2 (5minutos)
macerar enjuagar con H2O estéril
1 mL de H2O estéril
incubar
repicar (pico de flauta)
colorear (Gram -)
conservar
incubar
cortar raíz lavar1 g de raíz
colocar en H2O estéril y agitar
extraer alícuotasembrar en medio NFB semisólido
incubar
crecimiento de Azospirillum
aislamiento en medio NFB sólido
incubar
repicar (pico de flauta)
colorear (Gram -)
conservar
Aislamiento de microorganismos: Azospirillum
Aislamiento de microorganismos: Azospirillum
Gramínea
Agitar
Suspender en H2O estéril
Cortar raíces
Extraer alícuota
Sembrar en medio NFB semisólido
Incubar
Halo de crecimiento de Azospirillum
Repicar a “pico de flauta"
Aislamiento de microorganismos: Azospirillum
Incubar y conservar
Síntesis de aislamiento de Azozpirillum
incubar
cortar raíz lavar1 g de raíz
colocar en H2O estéril y agitar
extraer alícuotasembrar en medio NFB semisólido
incubar
crecimiento de Azospirillum
aislamiento en medio NFB sólido
incubar
repicar (pico de flauta)
colorear (Gram -)
conservar
Selección de cepas para capacidad fijadora de N
Ensayo de laboratorio: alfalfa
Medio de cultivo: Yensen
Testigo: medio sin N sin inocular
Control: medio sin N inoculado con cepa eficiente
Tratamientos: medio sin N inoculados con cepas a testear
Testigo: medio con N sin inocular
Síntesis de selección de cepas
Testigo medio sin N sin inocular
Controlmedio sin Ninoculado con cepa eficiente
Tratamientosmedio sin Ninoculados concepas a testear
Testigomedio con Nsin inocular
Selección de cepas: parámetros de evaluación
• Cantidad de nódulos• Color• Posición en la raíz• Actividad Nasa• N en planta• Peso de raíz
Síntesis de producción de inoculante
incubar (4-5 días)
filtro de aire
manguera
aireador
cámara de aire 30%
incubar 3 o 4 días
extraer una alícuota de cultivo conservado
cultivar en medio YEM liquido (pie de cuba) colorear
(control del pie de cuba)
• agregar antibiótico
• colocar el pie de cuba
colorear(control del inoculante)
Primera etapa
cultivo de iniciación (pie de cuba)
Segunda etapa
cultivo a gran escala (biodigestor)
50 ml
Medio Ashby(estéril)
Producción de inoculantes
Aireador
Mechero
Mangueras
Tapones Biodigestores
Filtro de aire
Producción de inoculantes
Planta Industrial
Actividad: observar un biodigestor