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Introdução ao delineamento experimental
Prof. Dr. Vinicius Campos Disciplina de Bioestatística e Delineamento Experimental
Graduação em Biotecnologia - UFPel
1. Histórico
2. O Que são experimentos e para que servem
3. Planejamento de experimentos
4. Execução de experimentos
5. Análise e interpretação dos resultados
Abordagens da aula...
• Empirismo – homem pré-histórico
Histórico
• Método Científico – Grécia Antiga – Filósofos Gregos
• Revolução Científica – Idade Média – Isaac Newton
• Métodos Estatisticos Modernos – século XX
• Métodos atuais - Bioinformática
Histórico
O que é um experimento?
Um experimento é um teste feito para validar uma
hipótese
A experimentação razão pela qual nós estamos onde
estamos
Reflita e estude sobre o experimento
Publique os resultados
Seja critico com seus dados
Boa reputação
O que um experimento propicia para o pesquisador
Dolly e Sir Ian Wilmut
Planejamento do experimento
Um experimento é igual à um crime
Nunca será perfeito
Planejamento do experimento
Mas como driblamos este
problema?
Definindo objetivos
específicos
1. Defina a pergunta
– Hipótese define o objetivo
2. Esboce o experimento (projeto)
– Variáveis experimentais
– Controles
– Número de amostras e repetições do exp.
– Estatística
3. Organize o experimento
4. Realize o experimento
5. Colete e analise os dados
Planejamento do experimento
• Não pensar sobre a necessidade do exp.
• Planejar experimentos grandes
• Esquecer dos controles
• Não verificar se todos os reagentes estão disponíveis
• Não verificar se a estrutura do laboratório é suficiente para a execução do experimento
• Não saber como é feita a coleta e análise dos dados
Erros comuns no planejamento
• Buscar leitura sobre experimentos semelhantes/metodologias
– Buscar protocolos
– Entrar em contato com pesquisadores
• Ler poucos artigos no início
– Artigos em português e depois em inglês
• Buscar artigos sobre o tema uma vez por semana
Referencial teórico
Referencial teórico
Referencial teórico
Referencial Teórico
• Controles experimentais – Marcador de peso molecular de DNA
• Controles de tratamento
– Positivos ou negativos
• Controles positivos - soro sabidamente contaminado
• Controles negativos – soro sabidamente não-contaminado
Controles
• Intervalos de tempo – Expressão gênica em 0, 2, 4, 8, 16 h após o tratamento com IGF-1 em
células tumorais em cultivo
Controles
O que fazer se não der para fazer os controles?
• Alguns controles podem ser excluídos nesta ordem:
1. Controles de procedimento
2. Duplicatas de controles experimentais
Se tiver que excluir outros controles desista do experimento!!!
Controles
• Cuidados com as normas de cada técnica
• Rigidez na repetibilidade
• Use protocolos estabelecidos
Execução do experimento
1. Obtenha o protocolo
2. Leia o protocolo e veja se ele faz sentido
3. Prepare os reagentes listados no protocolo,
verifique e reserve os equipamentos necessários
4. Siga o protocolo exatamente na primeira vez
5. Modifique o protocolo baseado na sua
experiência com ele
Execução do experimento - protocolos
• Repetibilidade – similaridade de replicação, mensurações de uma técnica ou equipamento; Ex. replicatas de absorbância
• Reprodutibilidade – quanto dois ou mais métodos de mensuração de mesma quantidade concordam; Ex. mensurações realizadas em laboratórios diferentes
Termos usados na análise dos dados
Protocolos
• Coleta dos dados
– Saiba que tipo de resultado você está coletando!!!
Exemplo: Avaliação da produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) em oócitos maturados in vitro
Técnica: coloração dos oócitos com 2', 7'- diacetato de diclorofluoresceína – corante fluorescente
Resultado: ????
Coleta e análise dos dados
Oócitos corados com 2', 7'- diacetato de diclorofluoresceína
Intensidade de fluorescência dos oócitos corados
• Estatística – Comparação dos dados
– Cálculos para testar se a diferença entre os dados é devida ao tratamento ou é meramente ao acaso
Importante!!! – Conhecer o tipo de dado com o que você está
trabalhando
– Identificar previamente que teste estatístico será usado para comparar o tipo de dados que será obtido
Análise dos dados
• Repetibilidade – similaridade de replicação, mensurações de uma técnica ou equipamento; Ex. replicatas de absorbância
• Reprodutibilidade – quanto dois ou mais métodos de mensuração de mesma quantidade concordam; Ex. mensurações realizadas em laboratórios diferentes
Termos usados na análise dos dados
• Os dados deverão ser resumidos e organizados para apresentação e futura publicação
– Em tabelas – quando é importante a apresentação dos valores
– Em gráficos – apresentação distribuições, tendências ou relacionamento entre variáveis
Apresentação dos dados
Intensidade de fluorescência dos oócitos corados
• O experimento funcionou? – controles
• Quais são os resultados? - análise
• O que o experimento significa? - discussão
• Outros investigadores vão entender o
experimento? - pergunte
• O resultado pode ser repetido? – faça novamente
Interpretação de resultados
O experimento NÃO funciona!!!
• Checar os equipamentos
• Checar os reagentes
• Refaça parte do experimento
• Refaça todo o experimento
• Pense em trocar de experimento
Geralmente as idéias precedem a tecnologia
disponivel!
O experimento funciona!!!
• Escreva e publique os resultados
imediatamente!!!
• Deposite uma patente de invenção!!!
Referências
Prof. Dr. Vinicius Farias Campos Graduação em Biotecnologia [email protected] [email protected]