ISOLASI GLIKOSIDA FLAVONOID DARI DAUNKETELA POHON

(Manihot utilissiima Pohl)

1. Tujuan Praktikum

 Dapat memahami dan dapat melakukan isolasi flavonoiddari daun ketela pohon.

 Dapat memahami dan dapat melaksanakan analisis kualitatif golongan senyawa

tersebut dengan metode kromatografi lapis tipis.

2. Dasar Teori Percobaan

Semua flavonoid, menurut strukturnya, merupakan senyawa induk flavon yang terdapat

berupa tepung putih pada tumbuhan Primula, dan semuanya mempunyai sejumlah sifat yang

sama. Saat ini dikenal sekitar 20 jenis flavonoid.

Flavonoid terutama berupa senyawa yang larut dalam air. Mereka dapat diekstraksi

dengan alkohol 70% dan tetap ada pada lapisan air setelah ekstrak dikocok dengan eter minyak

bumi. Flavonoid berupa senyawa fenol, karena itu warnanya berubah bila di tambah basa atau

amoniak, jadi flavonoid mudah dideteksi pada kromatogram atau dalam larutan.

Flavonoid mengandung sistem aromatik yang terkonyugasi dan karena itu menunjukan

pita serapan kuat pada spektrum UV dan spektrum tampak. Flavonoid umumnya terdapat dalam

tumbuhan, terikat pada gula sebagai glikosida dan aglikon flavonoid.

Flavonoid terdapat dalam tumbuhan sebagai campuran, jarang sekali dijumpai

hanya flavonoid tunggal dalam jaringan tumbuhan. Disamping itu, sering terdapat campuran

yang terdiri atas flavonoid yang berbeda kelas. Antosianin berwarna yang terdapat

dalam daun bunga hampir selalu disertai oleh flavon dan flavonolol tanwarna.

Flavonoid mempunyai rumus umum, C6C3C6.

Flavonoid

(2-phenyl-1,4-benzopyrone)

Aktivitas biologi flavonoid antara lain,

anti kanker : kuersetin, mirisetin

anti oksidant : kuersetin, antosianidin, dan prosianidin

anti inflamasi : apigenin, taksifolin, luteolin, kuersetin

anti alergi : nobeletin, tangeretin

anti hipertensi : prosianidin

anti virus : amentiflavum, skutellarein, kuersetin

Klasifikasi flavonoid umumnya didasarkan atas inti molekul,

*Harbone membagi flavonoid kedalam kelompok

- Antosianin

- Proantosianidin

- Flavonol

- Flavon

- Khalkon dan auron

- Flavanon

- Glikoflavon

- Isoflavon

- Biflavonil

*Berdasarkan warna flavonoid

*Berdasarkan flavonoid major dan flavonoid minor

- flavonoid major : flavon, flavonol, biflavonil

- flavonoid minor : khalkon, dihidrokhalkon, auron, flavanon, flavononol dan isoflavon.

Hampir setiap tumbuhan tingkat tinggi menunjukkan pola khasglikosida flavon dan

flafonol dalam daun atau bunga. Senyawa tersebut merupakan penanda taksom idel dalam

pengkajian masalah penggolongan tumbuhan, penghibridaan, atau fitogeografi. Walaupun

banyak yang dipelajari dengan membandingkan pola bercak flavonoiddalam kromatogram dua

arah dari ekstrak 2 jenis tumbuhan yang berbeda, atau dari populasi tumbuhan, tetapi tetap perlu

diidentifikasi komponen utama yang ada. Ini dapat dilakukan dengan menggunakan sederetan

cara fitokimia sederhana, dan untuk mempelajari cara ini dianjurkan pertama-tama

pada flavonoid yang sudah dikenal, yaitu rutin yang merupakan glikosida kuersetin.

Rutin atau kuersetin 3-rutinosida pertama kali diisolasi dari Fagopyrum esculentum dan

sampai sekarang tumbuhan ini masih tetap digunakan. Tidak dapat diragukan lagi

bahwa dari semua glikosidakuersetin, rutin paling luas penyebarannya dan mungki terdapat pada

25 % dari flora setempat. Sumber yang mudah diperoleh termasuk bunga Magnolia, Viola,

Aesculus hippocastanum, Nicotiana tabacum (dauntembakau), Rheum, teh, dan Phaseolus

vulgaris. Bahan tumbuhan yang diperoleh dari sumber tersebut di atas harus dikumpulkan da

diekstraksi oleh etanol 95 % panas (jaringan segar) atau etanol 70 % (jaringan kering) selama 30

menit, lalu ekstrak dipekatkan sampai volumenya tinggal sedikit.

Kuersetin merupakan salah satu flavonoid yang banyak terdapat di alam dan diketahui

mampu menghambat enzim sitokrom P-450 yang berperan dalam metabolisme parsetamol. Hasil

penelitian menunjukkan kadar parasetamol dalam darah tidak dipengaruhi oleh dosis kuersetin

yang diberikan. Derajat nekrosis hati karena pemberian parasetamol dosis toksik lebih rendah

pada pemberian kuersetin 750 mg/kg BB (p<0,05). Kuersetin dosis 750 mg/kg BB dapat

menghambat aktivitas sitokrom P-450 yang tinggi karena parasetamol dosis toksik

(p<0,05).Dari hasil penelitian dapat disimpulkan kuersetin dosis 750 mg/kg BB dapat

menurunkan efek hepatotoksik parasetamol, dan menurunkan aktivitas enzim sitokrom P-450.

Kuersetin 3-rutinoside

3. Alat Dan Bahan

a. Alat

- Seperangkat alat infuse ( panic

infuse )

- Erlenmayer 250 ml

- Gelas ukur

- Beaker glass

- Corong gelas

- Corong pisah

- Cawan porselen

- Tabung reaksi

- Flakon lempeng selulosa

b. Bahan

- Serbuk daun ketela pohon

- Air suling

- Amoniak

- Methanol

- HCL 2N

- Natrium sulfat anhydrat

- Asam asetat 15%

- N-butanol

- Pereaksi sitroborat

- KMNO4

4. Cara Kerja

A. Isolasi Glikosida Flavonoid

Dididihkan air pada panc bawah

Timbang ± 40 gr serbuk daun ketela pohon,masukkan ke panc atas + air 240 ml

Panaskan selama 15 menit pada suhu 90°C

Saring dengan corong buchner

Simpan di dalam almari es

B. Hidrolisis Glikosida Flavonoid

saring dengan kertas saring yang telah ditara, jika masih ada padatan

larutkan dengan 10 ml aquades dingin Kristal dioven pada suhu 40 – 50 °C

Ditimbang

- Untuk analisis KLT : 1/3 bagian (sari 1) dilarutkan dalam methanol Rutin

- Untuk Hidrolisis : 1/3 kristal dalam tabung reaksi + 10ml HCL dipanaskan ± 30

menit ( jika menguap ditambah air 5ml ), mulut tabung reaksi ditutup kapas, cairan

dalam tabung reaksi didinginkan/direndam dalam air es dan di ekstraksi dengan eter

2x

-

-

- Fase eter (A) dan (B) digabungkan kemudian disaring +Na2SO4 anhidrat (Sari 2)

- Fase air asam (C) panaskan di water bath (Sari 3)

C. Gambar Alat

Sisa padatan (sari 1)

Fase air asam,diekstraksi lagi dengan eter 25 ml

Fase eter,Aglikon (A)

Fase air asam ,Glikon (C)

Fase eter (B)

erlenmayer

D. Hasil Praktikum

1. Data pengamatan

Plastic + zat = 43,362

Plastic = 1,494

Zat = 41,868

Massa kristal rutin (tidak murni) yang didapat dari 40 gram daun singkong adalah,

Massa vial + rutin = 10,9312 gr???????

Massa vial kosong = 7,9043 gr

Gambar Corong Buncher

Gambar Panci Infus

Massa kristal rutin adalah 10,9312 gr - 7,9043 gr = 3,0269 gr

n Rendemen = [3,0269 gram / 40 gram] x 100%= 7,56%

Hasil pengamatan lempeng KLT dengan sinar UV panjang gelombang 254 nm

E. Pembahasan

Pada praktikum kali ini adalah untuk mengisolasi rutin (flavonoid-3-glikosida) sebagai salah satu jenis glikosida flavonoid(glikosida flavonol) yang terkandung dalam daun singkong/ketelapohon. Glikosida flavonoid termasuk rutin merupakan salah satu metabolit sekunder yang bersifat polar, termasuk kedalam kelompokglikosida O (molekul gula berikatan dengan O-aglikon). Rutin daunsingkong (satu zat aktif) sebagai bahan obat-obatan dan kosmetik, serta jadi zat pengatur tumbuh tanaman.

Karena sifatnya yang polar maka pengisolasian rutin dilakukan dengan penggunaan pelarut polar yaitu air, dengan penggunaan air yang kemudian dipanaskan membuat semua senyawa polar tertarik bersama filtrate. Hal ini merupakan salah satu kerugian penggunaan air sebagai pelarut karena, banyak sekali komponen-komponen polar yang dapat larut bersama air.

Filtrate yang diperoleh diuapkan hingga didapat filtrate kental dan disimpan dalam lemari pendingin untuk mempercepat pembentukan kristal rutin dan mencegah terjadinya penjamuran. Karena dengan media air memungkinkan timbulnya jamur atau bakteri jika disimpan di suhu ruang.

Endapan yang diperoleh disaring dan dicuci dengan menggunakan etanol dingin dengan maksud agar kemurnian filtrate bertambah dan terbebas dari pengotor-pengotor yang tidak ingin diisolasi, tetapi dengan pencucian ini tidak menyebabkan kristal larut.

Sebagian dari endapan ditambahkan HCl untuk proses hidrolisis dimaksudkan agar glikosida flavonoid rutin terhidrolisis sehingga aglikon flavonoid (kuersetein) terpisah dengan molekul gulanya.Kuersetin ini termasuk aglikon flavonoid (zat bukan gula) yang berdasarkan strukturnya dapat digolongkan menjadi flavonol, kuersetin mempunyai khasiat sebagai antiinflamasi, antikanker dan antioksidant.

Setelah dihidrolisis, larutan dipartisi dengan pelarut eter dengan menggunakan corong pisah, eter digunakan karena memiliki kepolaran yang sama dengan aglikon flavonoid (kuersetin). Maka seluruh senyawa kuersetin akan tertarik kedalam pelarut eter, ekstraksi dilakukan sebanyak 2 kali untuk memaksimalkan pengisolasian. Seluruh fase eter yang dicampur disaring dengan tambahan Na sulfat anhidrat agar molekul air yang ada dalam eter dapat tertarik, sehingga larutan benar-

benar murni eter dan aglikon flavonoid. Fase eter ini diuapkan dan selanjutnya residu yang ada ditambahkan methanol sebagai pelarut (sari II) untuk dilakukan KLT.

F. Kesimpulan

Rutin merupakan salah satu jenis glikosida flavonoid yang bersifat polar, sehingga dapat diekstraksi dengan pelarut polar, seperti air, methanol atau etanol. Filtrate yang didapat dari hasil penyarian didinginkan untuk mempercepat pembentukan kristal.

Pemisahan aglikon dan glikosidanya dapat dilakukan dengan hidrolisis asam, seperti menggunakan HCl. Akan didapat hasil berupa kuersetin dan glukosa dari hidrolisis rutin.

Analisa dari aglikon dan glikosida ini dapat dilakukan dengan menggunakan kromatografi lapis tipis, dan menggunakan eluen tertentu sesuai dengan kepolaran senyawa yang dianalisa.

G. Daftar Pustaka Mamik Ponco Rahayu ,2011. Petunjuk Praktikum Kimia Produk Alam ,Isolasi

Senyawa Glikosida Flavonoid dari Daun Ketela Pohon (Manihot utillisima,pohl).

Universitas Setia Budi Surakarta .

Harbone, J.B. 1987. Metode Fitokimia penuntun cara modern menganalisis

tumbuhan terbitan kedua. Bandung: ITB.

Markham, K.R. 1988 .Cara mengidentifikasi Flavonoid. Bandung: ITB.

Sekolah Farmasi ITB http://bahan-alam.fa.itb.ac.id

LAPORAN RESMI

PRAKTIKUM KIMIA PRODUK ALAM

ISOLASI GLIKOSIDA FLAVONOID DARI DAUNKETELA POHON

(Manihot utilissiima Pohl)

DOSEN PENGAMPU : MAMIK PONCO RAHAYU

Silvi Tian Eka C

14082563A

KEL.A/FSTOA

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SETIA BUDI

SURAKARTA

2011