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IV Curso Avanzado WHO GSS 2006
Buenos Aires 15 al 24 de mayo de 2006
María Isabel FaraceServicio Bacteriología Sanitaria – Departamento Bacteriología
INEI – ANLIS “Carlos G. Malbrán”
“ AISLAMIENTO Y CARACTERIZACION FENOTIPICA DE Campylobacter spp.”
Viernes 19 de mayo
CARACTERISTICAS GENERALES
Bacilos Gram negativos. Tamaño: 0,2-0,5 mµCurvos, espirilados o en forma de S.Flagelo único en uno o en ambos extremos.En cultivos de varios días, degeneran a formas cocoides.
Campylobacter termotolerantesColoración de Gram
mpylobacter jejuni
Campylobacter jejuniFormas cocoides
ESPECIES TERMOFILAS
recen a 42 - 43°C; no crecen a 25°C*Campylobacter jejuni (Subsp. jejuni y doylei). Agente causal de diarrea (más virulento, resistente a la fagocitosis)*Campylobacter coli. Produce diarrea más benigna.
)Comensales de intestino de: vacas, ovejas, cerdos, cabras, perros, roedores domésticos y silvestres y aves.Campylobacter lari. Ha sido aislado de intestino de gaviotas. No está definido el rol patógeno para el hombre. Indoxil acetato (-).Campylobacter upsaliensis. Raro aislarlo de diarreas. Produce bacteriemias en HIC. No está definida la fuente de infección. Relacionado con animales, especialmente perros, alimentos como leche no pasteurizada y derivados
FISIOPATOGENIA
Microorganismo ingresa por vía digestiva.Periodo de incubación: 1 a 7 días.Cepas con distinto grado de patogenicidad en diferentes países.
FERENTES MECANISMOS DE VIRULENCIAInvasión de células epiteliales con abscesos en las criptas e infiltrados inflamatorios en la lámina propia (sim. Shigella)Atraviesan mucosa intestinal y proliferan a lámina propia y ganglios. Infecciones extraintestinales (sim. Salmonella)Pueden producir toxinas termolábiles provocando una diarrea secretora (sim. a E. coli y V. cholerae)Puede observarse acción citotóxica sobre células Hela y Vero
PRESENTACION CLINICA
HIPERTERMIA MIALGIASCEFALEAS
• ANOREXIA• MALESTAR GENERAL• TENESMO
DEPOSICIONES:DISGREGADAS O ACUOSASMUCOSANGUINOLENTASLIGERAMENTE VERDOSAS CON MAYOR OLOR
Síndrome de Guillain-BarréSíndrome de Guillain-Barré
rácteristicas de la enfermedad:
iradiculopatia aguda desmielinizante que se asocia a infección previa días o 3 semanas por Campylobacter. Se puede producir en 1 de cada
00 infecciones.adro autoinmune por producción de IgG-AntiGM-1 (Ac con especificidadgida al PLS de ciertos serotipos de Campylobacter jejuni, estos Acccionan cruzadamente con gangliósidos de la vaina de mielina que ubre el axón de la célula neuronal).
ra asociar síndrome con infección previa se aconseja realizar:
tivo:Coprocultivo seriado (3 muestras): con un aislamiento basta
uebas serológicas (ELISA):gG e IgM post infección por Campylobacter generalmente permanecen
d 3 4
ATMOSFERA DE INCUBACION
eemplazo de una atmósfera normal por una mezcla de gases apropiados5% de N2, 10% de CO2 y 5% de O2
Sobres generadores de gases especiales para CampylobacterBL, Oxoid, Bio-Merieux 5-10% de O2 y 5-12% de CO2
Sobres generadores de hidrógeno y oxígeno para anaerobiosis
Jarra con vela 7-19% de O2 y de 2-4% de CO2 (usar suplemento FBP)
Generadores caserosUna pastilla de boranato de sodio ( 0,8 gr para una jarra de 3 litros)Una pastilla de Alka Seltzer o Yastá10 ml de agua destilada..Lana de aceroSolución ácida de sulfato cúprico: SO4Cu2 5gr, H2O 100 ml, H2SO4 0,33ml y
Coloniassospechosas
Coloniassospechosas
Gram(bacilo gram (-) curvo)
Morfología típicaMovimiento en espiral(en contraste de fase o
campo oscuro)
Oxidasa (+)Catalasa (+)
PROBABLE CAMPYLOBACTER
Identificacion Presuntiva de Campylobacter spp
Muestra demateria fecal
Examen microscópico directo(contraste de fase)(tincion de Gram)
Aislamientoindirecto(optativo)
Aislamientodirecto
Placas de medio selectivo(Skirrow)
Enriquecimiento(caldo Preston 42-43 ºC)
Incubacion24 - 48 hs.42 - 43 º Ccondiciones
microaerobicas
Identificación presuntiva-examen microscopicodireccto(contraste de fase)(tincion de Gram)-prueba de oxidasa-prueba de catalasa
Aislamiento de Campylobacter en muestras de materia fecal
25 g de alimento en 100 ml decaldo de enriquecimiento
(Preston)
Incubar 3 - 4 hs. a 37ºC enatmósfera microaérofila(pre-enriquecimiento)
Continuar la incubación 24 - 48 hs.a 42ºC atmósfera microaérofila
(enriquecimiento)
Sembrar en placas de medios selectivo(Skirrow)
Identificación de colonias sospechosas
Identificación presuntiva-examen microscopico directo
(contraste de fase)(tinción de Gram)-prueba de oxidasa-prueba de catalasa
Aislamiento de Campylobacter en muestras de alimentos
Ventajas y desventajas de los distintos métodos para la búsqueda de Campylobacter spp en heces.
Ventajas y desventajas de los distintos métodos para la búsqueda de Campylobacter spp en heces.
Desventajas:* No se puede usar lata con vela, por lo que es máscaro.
* Desde el momento en que se siembra y se cierrala jarra hay perdida de viabilidad. Hay que esperar a última hora y sembrar todas las
tajas:te buscar solo Campylobacter jejuni y coliayor contaminación de las placas
Ventajas:*Se pueden buscar todas las especies de
Campylobacter incubando más tiempo.* Se obtienen cultivos puros*Sirve como metodo para aislarcuando en las
Placas de Skirrow se obtienen mezclas degérmenes
s:eden sembrar las muestras cuando
por tener FBP las bacterias estanidas de la toxicidad del O2 ambiental, sedemorar en cerrar la jarra.
conomico, si hay pocas muestras se puedeta con vela.i y C coli crecen mas eugónicos.cesan más facilmente las muestras.
Agar sangre o chocolate sembrado por filtración a través de filtros de acetato decelulosa (poros de O,45µ), microarofilia + H2
modificado incubado a 42º-43ºC en erofilia por 48 horas.o recomendado)
IDENTIFICACION FINAL
Crecimiento a 42-43°C y a 25°C
Sensibilidad al ácido nalidíxico y cefalotina
Hidrólisis del hipurato
Hidrólisis de indoxil acetato
Producción de ácido sulfhídrico(Medio de Lior)
SENSIBILIDAD AÁCIDO NALIDÍXICO Y CEFALOTINA
Acido nadílixicoSensibilidad variable
CefalotinaResistente
HIDRÓLISIS DEL HIPURATOHIDRÓLISIS DE INDOXIL ACETATO
idrólisis del hipurato
Hidrólisis de indoxil acetato
Esquema mínimo de tipificaciónde Campylobacter spp.
C C hyoin- C fetus C. C jejuni C coli C lari upsaliensis testinalis ssp fetus mucosalis
I II III IV I II I IIP - - + + - - + + - + - +ducción - + - + - + - +
hipurato + - - - - - -I - - V - + (91%) - +
+ + + + + + ++ + + - o + debil + + -
díxico V V R S R R Vina R R R S(11%R) S(18%R) S So a 42º C + + + + V V +
Es importante la busqueda rutinaria de Campylboacter jejuni y Campylobacter colien huespedes Inmunocomprometidos, dada su alta incidencia y el mejoramiento del cuadro diarreico con el tratamiento específico.
Cuando de un sistema automatizado de hemocultivos se obtiene un falso positivo, conviene repicarlo a ciegas a un medio de cultivo de Campylobacter sin FBP e ncubarlo varios días en microaerofilia a 37º C (Mejor con atmósfera de H2).
Dada la aparición esporadica de cepas de Campylobacter jejuni y Campylobacter coli resistentes a la eritromicina en nuestro medio, es importante ensayar siempre su sensibilidad.
Por la alta resistencia a quinolonas y fluoroquinolonas es aconsejable testear sususceptibilidad y no considerarlas como prueba valida para diferenciar Campylobacter coli de Campylobacter lari.
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