KARAKTERISASI DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI

DARI FUNGI ENDOFIT DAUN TANAMAN GALING-

GALING (Cayratia trifolia L.) TERHADAP Staphylococcus

aureus

RIZKY ULFAH AFRIDA M.

2443014181

PROGRAM STUDI S1

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS KATOLIK WIDYA MANDALA SURABAYA

2018

i

i

i

ABSTRAK

KARAKTERISASI DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI DARI

FUNGI ENDOFIT DAUN TANAMAN GALING-GALING (Cayratia

trifolia L.) TERHADAP Staphylococcus aureus

RIZKY ULFAH AFRIDA MUAZOMA

2443014181

Mikroba endofit merupakan mikroorganisme yang hidup di dalam

jaringan tanaman inang. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk

mengisolasi, menguji aktivitas antibakteri dan mengkarakterisasi fungi

endofit yang diperoleh dari daun tanaman Galing-Galing (Cayratia trifolia

[L.]). Proses isolasi dilakukan dengan cara menempelkan potongan daun

tanaman Galing-Galing yang telah disterilisasi permukaannya dengan

alkohol 70% dan NaOCl 5,3% pada media Potato Dextrose Agar. Terdapat

6 fungi endofit yang dapat diisolasi dari daun tanaman Galing-Galing.

Fungi endofit yang diperoleh diuji aktivitas antibakterinya terhadap bakteri

Staphylococcus aureus dengan metode inokulasi langsung menggunakan

media Plate Count Agar. Dari hasil pengujian didapatkan hasil adanya

aktivitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus dengan rasio

DHP pada CI 1 sampai CI 5 berturut-turut sebesar 1.22;1.14;1.42;1.17

dan1,54. Karakterisasi dilakukan pada isolat yang meliputi pengamatan

makroskopis, mikroskopis dan uji biokimia (uji hidrolisa amilum, uji

hidrolisa kasein, uji hidrolisa gelatin dan uji hidrolisa lemak). Berdasarkan

hasil determinasi isolat, diduga CI 1, CI 2 dan CI 5 fungi endofit termasuk

dalam kelas Deuteromycetes, sedangkan pada CI 3 dan CI 6 termasuk dalam

kelas Zygomycetes, dan pada CI 4 termasuk dalam kelas Ascomycetes.

Kata Kunci: fungi endofit, antibakteri, Cayratia trifolia L., Staphylococcus

aureus

ii

ABSTRACT

CHARACTERIZATION AND ANTIBACTERIAL ACTIVITY

ASSAY OF ENDOPHYTIC FUNGI OF GALING-GALING (Cayratia

trifolia L.) AGAINST Staphylococcus aureus

RIZKY ULFAH AFRIDA MUAZOMA

2443014181

Endophyte is microorganisms that live in plant tissues. The

purpose of this study was to isolate, to test antibacterial activity and to

characterize the endophytic fungi obtained from the leaves of the Galing-

Galing plant (Cayratia trifolia [L.]). The isolation process was done by

attaching the leaf pieces of Galing-Galing plant that had been surface

sterilized with 70% alcohol and 5.3% NaOCl on Potato Dextrose Agar

medium. Six endophytic fungi were isolated form Galing-Galing plant

leaves. The obtained endophytic fungi were tested for their antibacterial

activity against Staphylococcus aureus bacteria by direct inoculation

method using Plate Count Agar media. From the test result obtained the

result of antibacterial activity against Staphylococcus aureus with ratio of

diameter area of growth inhibition CI 1 to CI 5 respectively is equal to 1.22;

1.14; 1.42; 1.17 and 1.54. Characterization was performed on isolates that

included macroscopic, microscopic and biochemical observations (starch

hydrolysis test, casein hydrolysis test and fatty hydrolysis test). Based on

the results of isolates determination, it was suspected that isolates 1, isolate

2 and 5 endophytic fungi were in the Deuteromycetes class, while isolate 3

and isolate 6 ware in the Zygomycetes class, and isolate 4 was included in

the Ascomycetes class.

Keywords: endophytic fungi, antibacterial, Cayratia trifolia L.,

Staphylococcus aureus

iii

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa yang

telah memberikan rahmat dan karunia-Nya, sehingga skripsi dengan judul

Karakterisasi Dan Uji Aktivitas Antibakteri Dari Fungi Endofit Daun

Tanaman Galing-Galing (Cayratia Trifolia L.) Terhadap Staphylococcus

Aureus dapat terselesaikan dengan baik. Penyusunan skripsi ini

dimaksudkan untuk memenuhi persyaratan untuk memperoleh gelar Sarjana

Farmasi di Fakultas Farmasi, Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya.

Penulis mengucapkan terima kasih kepada pihak-pihak yang telah

membantu selama proses pembuatan naskah skripsi ini:

1. Puji dan rasa syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT, karena atas

rahmat, hidayah, dan inayah-Nya sehingga penulis dapat

menyelesaikan skripsi ini.

2. Orang tua saya Ibu Chusnul dan Bapak Mawan serta adik saya Ratu

dan Cantika yang selalu mendoakan, menyayangi, mendampingi dan

memberi semangat kepada penulis.

3. Lisa Soegianto, S.Si., M.Sc., Apt. selaku dosen pembimbing atas

saran, nasehat, semangat, kesabaran dan waktu yang telah banyak

diluangkan untuk mendampingi penulis selama proses pengerjaan dan

penyusunan naskah skripsi ini.

4. Dr. Lanny Hartanti, S.Si., M.Si., dan Dr. Ignatius Srianta, STP.,

M.Si.,selaku ketua penguji dan penguji atas saran yang diberikan dan

masukan untuk kelancaran penelitian dari awal hingga akhir

penelitian.

5. Drs. Kuncoro Foe, G.Dip.Sc., Ph.D., Apt. selaku Rektor Universitas

Katolik Widya Mandala Surabaya yang telah memberikan sarana

iv

prasarana dalam menunjang perkuliahan di Universitas Katolik Widya

Mandala Surabaya

6. Lucia Hendriati, S.Si., M.Sc., Apt. selaku Pembimbing Akademik

sejak semester 1 hingga semester 8 yang selalu memberikan semangat

dan motivasi kepada penulis.

7. Sumi Wijaya, S.Si., Ph.D., Apt., selaku Dekan, Lisa Soegianto, S.Si.,

M.Sc., Apt., selaku Wakil Dekan II, Henry Kurnia Setiawan, S.Si.,

M.Si., Apt., selaku Wakil Dekan I dan Dr. Lanny Hartanti, S.Si.,

M.Si., selaku Ketua Prodi S-1 Fakultas Farmasi Universitas Katolik

Widya Mandala Surabaya yang telah memberikan fasilitas dalam

penyusunan skripsi ini.

8. Seluruh staf laboran, pak Anto, mas Dwi dan mas Randy yang selalu

sabar menghadapi penulis, membantu penulis dalam proses

penyusunan naskah penelitian dan selalu memberikan saran kepada

penulis untuk menunjang penelitian penulis.

9. Seluruh teman-teman, Skolastika Febby, Rizky Endah Sari, Ajeng

Prihatiningsih, Maria Mahardwika, Fenny Desiani yang selalu

memberikan semangat dan saran kepada penulis agar penulis dapat

menyelesaikan serangkaian penelitian dengan baik. Tetap semangat

bagi yang masih berjuang ya.

10. Seluruh mahasiswa Fakultas Farmasi 2014, tetap semangat ya teman-

teman bagi yang masih berjuang di Fakultas Farmasi.

11. Seluruh mahasiswa Fakultas Farmasi angkatan 2012 dan 2013 yang

telah memberikan dukungan dan nasehat sehingga penelitian ini dapat

berjalan dengan baik.

12. Nazelia Alfin, Mia, dan Saristisari yang telah meluangkan waktunya

untuk membantu penulis dalam menyelesaikan penelitian ini.

v

13. Reri Dian, Ratna Dewi, dan Nugroho Prasetyo yang telah memberikan

semangat dan saran agar penulis dapat menyelesaikan serangkaian

penelitian dengan baik.

14. Tim Goyang Dumang, Orientvisti, Arinda, Riris, Yuda Adi, Yusufi,

Alfian, Pramita, Naomi, Silviana yang memberikan semangat dan

saran agar penulis dapat menyelesaikan serangkaian penelitian dengan

baik.

15. Karyawan Apotek Lancar, Anggi, Mbak Nia, Mbak Yan, Mbak Nur,

Mbak Inar, Pita, Mbak Datin, Rika, Yati, Mas Febri dan Mas Basori

yang telah meluangkan waktu dan tenaga untuk membantu penulis

menyelesaikan skripsi ini.

Terima kasih kepada seluruh pihak yang telah mendukung penulis

dan penulis meminta maaf apabila pada naskah ini masih terdapat

kekurangan. Akhir kata, penulis berharap penelitian ini dapat dilanjutkan

atau dikembangkan.

Surabaya, 20 Juli 2018

Penulis

vi

DAFTAR ISI

Halaman

ABSTRAK..................................................................................................... i

ABSTRACT ................................................................................................... ii

KATA PENGANTAR ................................................................................. iii

DAFTAR ISI ............................................................................................... vi

DAFTAR TABEL ....................................................................................... ix

DAFTAR GAMBAR .................................................................................... x

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... xi

BAB 1. PENDAHULUAN ........................................................................... 1

1.1 Latar Belakang ........................................................................ 5

1.2 RumusanMasalah .................................................................... 5

1.3 TujuanPenelitian...................................................................... 5

1.4 Hipotesa Penelitian .................................................................. 6

1.5 ManfaatPenelitian.................................................................... 6

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA .................................................................. 7

2.1 Tinjauan tentang MikrobaEndofit ........................................... 7

2.2 Tinjauan tentang Isolasi Mikroba Endofit ............................... 9

2.3 Tinjauan tentang Tanaman Galing-Galing ............................ 11

2.3.1 Klasifikasi Tanaman Galing-Galing ............................. 11

2.3.2 Makroskopis Daun Tanaman Galing-Galing ................ 12

2.3.3 Mikroskopis Daun Tanaman Galing-Galing ................ 12

2.4 Tinjauan tentang Senyawa Antibakteri ................................. 13

2.5 Tinjauan tentang Uji Aktivitas Antibakteri ........................... 15

2.5.1 Metode Dilusi ............................................................... 16

2.5.2 Metode Difusi ............................................................... 16

2.5.3 Metode Bioautografi..................................................... 17

vii

Halaman

2.5.4 E-test ............................................................................ 18

2.5.5 Time-kill Test ................................................................ 18

2.5.6 Radiometri .................................................................... 19

2.5.7 Flow Cytrometry .......................................................... 19

2.6 Tinjauan tentang Staphylococcus aureus .............................. 20

2.6.1 Klasifikasi Staphylococcus aureus ............................... 21

2.6.2 Karakteristik Staphylococcus aureus ........................... 21

2.6.3 Patogenitas dan Pengobatan terhadap

Staphylococcus aureus ................................................. 22

BAB 3. METODE PENELITIAN .............................................................. 25

3.1 Jenis Penelitian ...................................................................... 25

3.2 Bahan dan Alat Penelitian ..................................................... 25

3.2.1 Bahan Penelitian ........................................................... 25

3.2.2 Alat Penelitian .............................................................. 26

3.3 MetodePenelitian ................................................................... 26

3.4 Variabel Penelitian ................................................................ 27

3.4.1 Tahap Isolasi ................................................................ 27

3.4.2 Tahap Uji Aktivitas Antibakteri ................................... 28

3.5 Tahapan Penelitian ................................................................ 28

3.5.1 Pengambilan Sampel Daun Tanaman Galing-

Galing(Cayratia trifolia L.) ......................................... 28

3.5.2 Determinasi, Pengamatan Makroskopis dan

Mikroskopis Daun Tanaman Galing-Galing

(Cayratia trifolia L.) .................................................... 28

3.5.3 Isolasi Fungi Endofit dari Daun Tanaman Galing-

Galing (Cayratia trifolia L.) ......................................... 29

3.5.4 Pemurnian Kultur Fungi Endofit dari Daun Tanaman

Galing-Galing (Cayratia trifolia L.) .......................... .. 29

viii

Halaman

3.5.5 Penyiapan Bakteri Uji .................................................. 30

3.5.6 Pengujian Aktivitas Antibakteri Fungi Endofit dari

Daun Tanaman Galing-Galing (Cayratia trifolia L.) ... 30

3.5.7 Karakteristik Fungi Endofit .......................................... 31

3.6 Analisis Data ......................................................................... 33

3.7 Skema Kerja .......................................................................... 34

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................... 35

4.1 Hasil Penelitian ..................................................................... 35

4.1.1 Determinasi Daun Galing-Galing ................................. 35

4.1.2 Hasil Makroskopis dan Mikroskopis Daun Tanaman

Galing-Galing ............................................................... 35

4.1.3 Isolasi Fungi Endofit Dari Daun Tanaman Galing-

Galing ........................................................................... 37

4.1.4 Pemurnian Kultur Fungi Endofit Dari Daun

Tanaman Galing-Galing ............................................... 37

4.1.5 Penyiapan Bakteri Uji .................................................. 39

4.1.6 Penujian Aktivitas Antibakteri Fungi Endofit

terhadap Staphylococcus aureus................................... 40

4.1.7 Karakteristik Fungi Endofit .......................................... 41

4.2 Pembahasan ........................................................................... 48

BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN ..................................................... 57

5.1 Kesimpulan ........................................................................... 57

5.2 Saran ...................................................................................... 58

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................. 59

LAMPIRAN ............................................................................................... 65

ix

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

2.1 Kriteria Rasio Aktivitas Antibakteri Fungi Endofit ............................. 16

4.1 Pengamatan Makroskopis Daun Galing-Galing .................................. 36

4.2 Pengamatan Makroskopis Staphylococcus aureus dan Pengamatan

Mikroskopis Perbesaran 10x100 hasil Pengecatan Gram

Staphylococcus aureus ........................................................................ 39

4.3 Hasil Uji Aktivitas Antibakteri terhadap Saphylococcus aureus

ATCC 6538 ......................................................................................... 41

4.4 Hasil Pengamatan Makroskopis Isolat Fungi Endofit pada Media

PDA ..................................................................................................... 42

4.5 Hasil Pengamatan Mikroskopis Fungi Endofit yang Tumbuh pada

Media Potato Dextrose Agar dengan Perbesaran 10x40 ...................... 42

4.6 Hasil Pengamatan Uji Biokimia Isolat Fungi Endofit ......................... 48

x

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

2.1 Hifa Kapang Endofit Dalam Jaringan Daun Tanaman ........................... 8

2.2 Tanaman Galing-galing ....................................................................... 11

2.3 Daun tanaman Galing-Galing .............................................................. 12

2.4 Permukaan Daun Bagian Atas Tanaman Galing-Galing ..................... 13

2.5 Mikroskopis Staphylococcus aureus dengan pengecatan Gram .......... 21

4.1 Pengamatan Makroskopis Daun Tanaman Galing-Galing................... 35

4.2 Pengamatan Mikroskopis Penampang Melintang Daun Tanaman

Galing-Galing (Cayratia trifolia L.) dengan Perbesaran 40x10

dengan Media Fluorogusin HCl........................................................... 36

4.3 Stomata Tipe Anisositik pada Penampang Mebujur Permukaan

Bawah Daun Tanaman Galing-Galing (Cayratia trifolia L.) dengan

Perbesaran 40x10 ................................................................................. 36

4.4 Posisi Penanaman Daun Galing-Galing (Cayratia trifolia L.) pada

Media Potato Dextrose Agar ............................................................... 37

4.5 Pengamatan Pertumbuhan Fungi Endofit Setelah Inkubasi pada

Suhu Ruang Hari ke-5 ......................................................................... 37

4.6 Koloni Murni Fungi Endofit Daun Tanaman Galing-Galing

(Cayratia trifolia L.) pada Usia 5 Hari pada Media Potato

Dextrose Agar ...................................................................................... 38

4.7 Hasil Pengamatan Staphylococcus aureus ATCC 6538 pada

Perbesaran 10x100 ............................................................................... 39

4.8 Hasil Pengamatan Uji Aktivitas Antibakteri Fungi Endofit Daun

Galing-Galing (Cayratia trifolia L.) terhadap Staphylococcus

aureus Setelah Inkubasi pada Suhu Ruang 24 jam pada Media

Plate Count Agar ................................................................................. 40

4.9 Hasil Uji Hidrolisa Amilum pada Media Starch Agar ......................... 44

4.10 Hasil Uji Hidrolisa Kasein pada Media Skim Milk Agar ..................... 45

4.11 Hasil Uji Hidrolisa Gelatin pada Media Gelatin Agar ......................... 46

4.12 Hasil Uji Hidrolisa Lemak pada Neutral Red Agar ............................. 47

xi

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

A. DETERMINASI DAUN TANAMAN GALING-GALING

(Cayratia trifolia L.) ............................................................................. 65

B. SERTIFIKAT ANALISIS Staphylococcus aureus ............................... 66