Konvensional, farmakokinetik (PK) parameter telah dinilai dengan menggunakan sampel plasma berdasarkan kesederhanaan relatif plasma sebagai matriks bioanalitis dibandingkan dengan seluruh darah. Pada hewan yang lebih besar, seperti tikus atau anjing, koleksi plasma untuk bioanalysis kuantitatif adalah proses yang relatif mudah karena setiap hewan dapat serial berdarah untuk mendapatkan volume yang cukup dari plasma. Namun, pada hewan pengerat kecil, seperti tikus, koleksi plasma lebih rumit, padat karya, dan memakan waktu. Setiap tikus dapat berdarah hanya untuk waktu terbatas, karena volume darah koleksi tidak melebihi sekitar 10% dari volume darah selama 24 jam. Untuk mouse dengan berat badan 20 g, hanya sekitar 0.125 ml darah dapat ditarik (dengan asumsi bahwa volume darah total sekitar 6% dari berat badan), membatasi pengumpulan darah sekitar satu sampai tiga sampel tergantung pada volume darah yang diambil. Oleh karena itu, sejumlah besar tikus per studi yang dibutuhkan, meningkatkan persyaratan majemuk, penanganan hewan, dan biaya.

Mendapatkan parameter PK pada tikus selama penemuan obat dan pengembangan sering penting untuk mendukung memimpin optimasi dengan mengidentifikasi molekul dengan yang diinginkan. Sifat PK, untuk mendukung toksikologi praklinis kajian dan penelitian obat antikanker untuk mendukung Studi keberhasilan dalam tikus xenograft tumor manusia model untuk lebih memahami PK-farmakodinamik hubungan., Selain itu, model tikus seperti hati sitokrom P450 reduktase tikus null, chimeric tikus dengan hati manusiawi atau tikus knockout sering juga digunakan untuk studi penelitian dasar. Untuk meringankan beberapa masalah ini, kaset (N-in-one) dosis, yang melibatkan administrasi simultan beberapa senyawa untuk seekor hewan, dan / atau serial perdarahan pada tikus telah digunakan dengan munculnya methods.1-6 bioanalitis lebih sensitif dan spesifik

Meskipun kekhawatiran potensial berhubungan dengan darah PK dan kaset dosis, seperti asmatrix efek, narkoba interaksi obat, dan tantangan formulasi (misalnya, kendaraan yang sama diperlukan untuk semua senyawa), banyak program telah menggunakan teknik ini sangat berhasil untuk meningkatkan process.7-9 penemuan obat Namun, Data yang dipublikasikan pada studi tikus menggunakan salah satu dari metode ini terbatas dan beberapa metode ini memiliki keterbatasan seperti yang dibahas oleh Watanabe et al.10

Selain itu, meskipun pemberian obat oral mencerminkan paling klinis dan diinginkan secara komersial dan rute yang ramah pasien administrasi dan kaset Dosis memiliki dampak yang sangat tinggi pada perbaikan proses (Misalnya, senyawa berkurang, biaya, dan kebutuhan hewan), data yang sangat terbatas telah dipublikasikan pada kaset lisan dosis pada tikus.

Mayoritas ini Studi konsentrasi obat ditentukan dalam plasma bukan seluruh darah. Selain merugikan mengharuskan volume darah yang lebih besar untuk analisis plasma, untuk senyawa yang istimewa mendistribusikan ke Sel darah merah, analisis darah akan lebih tepat dari analisis plasma parameter PK ditentukan berdasarkan konsentrasi plasma diukur dapat menyesatkan (misalnya, terlalu tinggi clearance dan meremehkan paparan lisan). Untuk pengetahuan kita hanya satu penelitian yang diterbitkan dilaporkan menggunakan PK darah untuk kaset oral (empat-in-one) dosis di mice.10 Dalam studi, empat epoksida hidrolase inhibitor dievaluasi; parameter PK Namun, diskrit dan kaset dan profil konsentrasi plasma dapat dibandingkan hanya dua senyawa karena rendah paparan lisan dari dua senyawa lainnya. Sampel darah persiapan juga cukup terlibat dan termasuk berat, pengeringan, dan pemulihan dari sampel darah.

Studi tikus PK tampaknya sangat relevan dengan penemuan obat antikanker dan pengembangan karena penggunaan model tumor xenograft pada tikus untuk menilai tanggapan tumor terhadap obat antikanker yang potensial baru tapi sangat sedikit publikasi yang berfokus pada terapi ini area.11-13

Di sini, kami mengevaluasi bioanalitis kuantitatif. Metode untuk studi PK diskrit atau kaset dosis menggunakan diencerkan seluruh darah dari serial mikro Bled (10 atau 15: L) tikus. Karena setiap tikus memberikan sedikit darah, darah yang dikumpulkan ditambahkan ke jumlah tetap air. Pengenceran ini disajikan beberapa tujuan: darah merah sel segaris; antikoagulan itu tidak perlu dan volume cairan sampel diencerkan cukup untuk tes bioanalytical. Metode bioanalitik dikembangkan selama lima molekul senyawa antikanker Model kecil: dacarbazine, gemcitabine, gefitinib, imatinib, dan topotecan (Gbr. 1). Kedua efek matriks dan Intermatrix penelitian dilakukan untuk memastikan ketahanan dan integritas tes bioanalytical. Ini Senyawa kemudian dosis oral pada tikus di 10 mg / kg baik sebagai kaset (lima-in-one) atau discretely. Itu konsentrasi obat dalam darah (setelah diskrit dan dan kaset dosis) dan sampel plasma (setelah diskrit dosis) diukur dan parameter PK yang ditentukan.

Pengukuran konsentrasi darah obat mungkin tidak cukup untuk perhitungan yang konsisten parameter PK atau berdasarkan fisiologis PK pemodelan dan, akibatnya, penafsiran PK dan data farmakodinamik obat antara darah dan plasma dapat bervariasi. Untuk alasan ini, tekad dari rasio darah plasma diperlukan. Mungkin cara mengukur parameter ini disarankan.

METODE DAN MATERIAL

Blood PK following Discrete and Cassette Dosing

Tikus secara acak ke dalam kelompok (n = 3 atau 4 tikus / kelompok) dan senyawa yang diberikan secara individu atau sebagai kaset (-lima dalam satu) yang berisi semua lima senyawa. Enam sampel darah diambil dari setiap hewan berikut anestesi isoflurane melalui koleksi darah ekor nick sebesar 0,25, 0,5, 1, 2 (kecuali untuk gemcitabine setelah dosis diskrit), 4, dan 6 jam postdose. Sebelum tikus koleksi sampel ditempatkan di bawah lampu panas (sekitar 3 menit) sampai vena ekor lateral melebar. Sebuah jarum 27G digunakan untuk nick ekor vena lateral. Tepat 10 atau 15: L darah dikumpulkan. Sebuah perpindahan pipet positif digunakan untuk meningkatkan pengumpulan sampel dan akurasi mentransfer dibandingkan dengan pipet udara perpindahan. Perawatan diambil untuk menghapus semua kelebihan darah dari luar ujung dengan kain kasa sebelum menambahkan sampel darah (10 atau 15: L) air (40 atau 60: L) untuk pengenceran lima kali lipat. Sampel disimpan dalam tabung polypropylene Costar cluster (Format 96-baik) sekitar -80◦C sampai dicairkan untuk analisis.

Preparation of Working Solutions for Calibration Curves

Dacarbazine, gemcitabine, gefitinib, imatinib, dan topotecan dan ISS dibuat pada 1 mg / mL dalam 100% DMSO. Karena lima senyawa tersebut tertutup kaset, komposit bekerja solusi spiking standar 0,1 mg / mL dalam 100% DMSO disiapkan mengandung semua lima senyawa. Selain itu, komposit IS spiking solusi (dengan semua lima ISS) disiapkan pada 1000 ng / mL dalam 50% DMSO / 50% air. Serial diencerkan solusi spiking kurva kalibrasi dibuat dalam 100% DMSO.

Calibration Curve Preparation

Jumlah yang tepat dari solusi kerja standar (5: L) dibubuhi ke 25: L matriks (baik plasma atau darah diencerkan) untuk menghasilkan kurva kalibrasi untuk decarbazine (,0165-110: M), gefitinib (,00671-44,7: M), gemcitabine (0,0114-76,0: M), imatinib (,00607-40,5: M), dan topotecan (0,00713-47,5: M). Sepuluh mililiter IS spiking solusi (1000 ng / mL) ditambahkan ke masing-masing sampel. Kurva kalibrasi diekstraksi dengan kecelakaan presipitasi protein dari 200: L asetonitril. Sampel kemudian vortexed selama 5 menit dan disentrifugasi pada 6019g selama 15 menit pada 25◦C. Setelah sentrifugasi, supernatan dibagi menjadi pelat injeksi yang berbeda. Tujuh puluh lima mikroliter supernatan dipindahkan masing-masing untuk dua 350: piring injeksi shallowwell L (satu piring digunakan untuk quantitate dacarbazine dan gemcitabine, piring lain digunakan untuk quantitate gefitinib, imatinib, dan topotecan). Sepuluh mikroliter supernatan dari setiap piring langsung disuntikkan ke sistem LC-MS / MS untuk analisis.

Sample Preparation

Dua puluh lima mikroliter sampel (diencerkan darah atau plasma) yang dipipet ke tabung klaster individu dan 10: L IS spiking solusi (1000 ng / mL), 5: L dari 100% DMSO, dan 200: L asetonitril ditambahkan ke masing-masing sampel. Sampel kemudian vortexed bersama dengan sampel kurva kalibrasi dan diperlakukan dengan cara yang sama sebagai sampel kurva kalibrasi seperti dijelaskan di atas.

Chromatographic Conditions

Sebuah sistem Nexera UPLC (Shimadzu, Kyoto, Jepang) termasuk Shimadzu SIL-30AD sistem pengiriman pelarut, autosampler SIL-30AC, dan kolom CTO-30AC oven digunakan untuk menganalisis semua lima senyawa dan ISS masing-masing. Untuk gefitinib, imatinib, dan topotecan, pemisahan kromatografi dicapai dengan menggunakan kolom PhenomenexKinetex XB-C18 (50 × 2,1 mm2, 2,6: m) dengan elusi gradien menggunakan 5 mM amonium asetat dalam air dengan 0,1% asam format (fase gerak A) dan 0,1% asam format dalam asetonitril (Mobile phase B). Kromatografi cair (LC) laju alir adalah 0,8 mL / menit dan volume injeksi sampel adalah 10: L. Total waktu berjalan adalah 2,3 menit. Untuk dacarbazine dan gemcitabine, kolom SIELC Obelisc N (50 × 2.1mm2, 5: m, campur-mode HILIC, dan pertukaran anion fase stasioner) dan fase gerak yang sama, laju aliran, dan volume injeksi yang digunakan. Total waktu berjalan adalah 2,5 menit. Program gradien rinci ditunjukkan pada Tabel 1. waktu retensi 0,85 menit untuk gemcitabine, 1.00 menit untuk topotecan, 1,13 menit untuk imatinib, 1,17 menit untuk gefitinib, dan 1,32 menit untuk dacarbazine.

Mass Spectrometric Conditions

Sebuah QTRAP R? 5500 spektrometer massa tandem (Sciex, Foster City, California) dengan Turbo Sumber ionspray (TIS) antarmuka dioperasikan dalam mode ionisasi positif dengan pemantauan reaksi beberapa untuk LC- tandem spektrometri massa (LC-MS / MS) analisis. Parameter instrumen dioptimalkan untuk memantau lima senyawa ini adalah sebagai berikut: Suhu TIS: 500◦C; TIS tegangan: 5500 V; gas tirai: 20; gas nebulizing: 50, heater gas: 50, dan gas tabrakan: menengah. Para pendahulu untuk transisi ion produk dan parameter rinci lainnya dirangkum dalam Tabel 2. Spektrometer massa dioperasikan pada resolusi unit massa untuk kedua Q1 dan Q3 quadrupoles.

Blood Stability and Extraction Recovery

Stabilitas gemcitabine, dacarbazine, gefitinib, imatinib, dan topotecan dalam darah diencerkan dievaluasi dengan spiking senyawa menjadi kosong seluruh sampel darah tikus diencerkan dengan air (1: 4, v / v) pada konsentrasi 0,0549 dan 8.24: M untuk dacarbazine, 0,0224 dan 3,36: M untuk gefitinib, 0,0380 dan 5.70: M untuk gemcitabine, 0,0202 dan 3,04: Mfor imatinib, dan 0,0238 dan 3,56: Mfor topotecan (n = 3). kualitas ini control (QC) sampleswere disimpan di sekitar -80◦C selama 2 minggu sebelum analisis. Pemulihan ekstraksi gemcitabine, dacarbazine, gefitinib, imatinib, dan topotecan dalam darah encer juga dievaluasi pada dua konsentrasi yang sama sebagai stabilitas sampel QC. Pra-dan postextraction berduri sampel (n = 3) dianalisis dan pemulihan ekstraksi dihitung dengan membandingkan rasio respon analit / IS sampel prespike dengan sampel postspike (n = 3).

PK Data Analysis

Analisis data farmakokinetik dilakukan pada darah dan plasma Data konsentrasi-time dengan menggunakan rata-rata (plasma) atau individu data (darah) konsentrasi-waktu. Konsentrasi di bawah batas kuantisasi dianggap sebagai nol dalam perhitungan nilai rata-rata untuk setiap titik waktu. Parameter PK ditentukan dengan metode noncompartmental menggunakan WinNonlin R? Enterprise, versi 5.2 (Pharsight Corporation, Mountain View, California).

RESULTS

LC–MS/MS Sensitivity, Precision, and Accuracy

Sebuah uji LC-MS / MS dengan berbagai 0.0165- 110: M untuk dacarbazine, ,00671-44,7: M untuk gefitinib, 0,0114-76,0: M untuk gemcitabine, ,00607-40,5: M untuk imatinib, dan 0,00713-47,5: M untuk topotecan digunakan untuk evaluasi mouse diencerkan darah dan plasma PK profil. Perwakilan kromatogram dari standar terendah kalibrasi dacarbazine (0,0165: M), gefitinib (0,00671: M), gemcitabine (0,0114: M), imatinib (0,00607: M), topotecan (0,00713: M), dan ISS (250 ng mereka / mL) dalam sampel darah tikus diencerkan ditunjukkan pada Gambar 2 dan 3. Sensitivitas senyawa ini dalam plasma tikus mirip dengan yang ada pada sampel darah tikus diencerkan. Sinyal untuk rasio kebisingan terendah standar kalibrasi> 5 sudah cukup untuk mendeteksi diandalkan senyawa ini dalam plasma tikus dan sampel darah diencerkan. Karena sampel darah tikus diencerkan lima kali lipat menggunakan air, semakin rendah Batas kuantitasi (LLOQ) untuk mouse diencerkan sampel darah adalah 0,0825: M (dacarbazine), 0,0336 : M (gefitinib), 0,0570: M (gemcitabine), 0,0304: M (Imatinib), dan 0,0356: M (topotecan) dan LLOQ yang untuk sampel plasma

adalah 0,0165: M (dacarbazine), 0,00671: M (gefitinib), 0,0114: M (gemcitabine), 0,00607: M (imatinib), dan 0,00713: M (Topotecan). Sebuah analisis regresi (1 / x2) tertimbang adalah digunakan untuk pengujian tersebut. Ketepatan [Koefisien% variasi (CV) = (standar deviasi / berarti) × 100] dan akurasi [% kesalahan relatif (RE) = (rata-rata - nominal) / nominal) × 100] penetapan kadar dinilai menggunakan semua tingkat sampel kurva kalibrasi dan berada dalam 18% CV dan ± 17% RE, masing-masing untuk semua lima senyawa.

Matrix Effect of Mouse Plasma and Diluted Blood Samples

Efek matriks dievaluasi dengan menjalankan infus percobaan postcolumn untuk dacarbazine, gefitinib, gemcitabine, imatinib, dan topotecan. Sepuluh mikroliter reagen kosong (50:50, asetonitril-air), plasma tikus kosong diekstraksi, dan sampel darah diencerkan disuntik ke kolom HPLC, masing-masing, dan solusi rapi dacarbazine, gefitinib, gemcitabine, imatinib, dan topotecan di 500 ng / mL yang diresapi pasca kolom dengan pompa jarum suntik di 10: L / min. Gambar 4 menunjukkan infus postcolumn kromatogram imatinib dengan menyuntikkan reagen kosong, diekstrak plasma tikus kosong, dan sampel darah diencerkan. Kromatogram, pada waktu retensi imatinib, dari imatinib diresapi sangat sama antara reagen rapi kosong, plasma blankmouse diekstrak, dan sampel darah diencerkan. Hasil yang sama diperoleh untuk lainnya empat senyawa (data tidak ditampilkan) dari infus postcolumn percobaan, yang menunjukkan tidak ada efek matriks untuk plasma tikus diekstraksi dan sampel darah diencerkan untuk semua senyawa ini pada waktu retensi mereka.

PK in Female CD-1 Mice

parameter PK plasma setelah pemberian dosis diskrit: Area di bawah kurva konsentrasi-waktu (AUC) nilai terakhir berada dalam 1,8 kali lipat; Tertinggi konsentrasi yang diamati (Cmax) nilai berada dalam 2,3 kali lipat. Kedua AUClast dan Cmax parameter berbeda yang paling untuk imatinib. Untuk menilai kesesuaian kaset dosis untuk studi PK darah menggunakan sampel darah mikro dan darah diencerkan sebagai alat skrining, semua senyawa yang diberikan dalam kaset-lima dalam satu. Nilai AUClast diperoleh dari konsentrasi darah berada dalam dua kali lipat untuk diskrit dan kaset dosis kecuali untuk imatinib (selisih 2,1 kali lipat) dan sesuai dengan yang diperoleh dari konsentrasi plasma setelah pemberian dosis diskrit. Nilai Cmax berada dalam dua kali lipat untuk PK darah setelah diskrit dan kaset dosis kecuali dacarbazine (selisih 2,2 kali lipat), imatinib (perbedaan 3,4 kali lipat), dan topotecan (perbedaan 2,7 kali lipat). Tidak ada kecenderungan umum yang lebih tinggi atau konsentrasi yang lebih rendah diamati ketika mengukur darah terhadap plasma. Independen pemberian dosis (Diskrit atau kaset dosis) dan matriks untuk analisis bioanalitis (plasma atau darah diencerkan) dacarbazine menunjukkan tertinggi paparan lisan (AUClast dan

Cmax), diikuti oleh gefitinib. Nilai AUClast adalah perkiraan AUCinf, yaitu, paparan bisa diremehkan sebagai periode sampling terbatas pada 6 jam dan diasumsikan bahwa kontribusi AUC dari tlast hingga tak terbatas diabaikan.

Darah dan plasma konsentrasi senyawa yang paling dapat ditentukan atas seluruh perjalanan waktu studi PK mouse di atas rentang kurva kalibrasi 0.0165-110: M untuk dacarbazine,,00671-44,7: M untuk gefitinib, 0,0114-76,0: M untuk gemcitabine, 0,00607-40,5: M untuk imatinib, dan,00713-47,5: M untuk topotecan. Namun, beberapa sampel yang diambil pada titik waktu kemudian (4 dan / atau 6 jam postdose) berada di bawah LLOQ (misalnya, untuk gemcitabine dan topotecan).

Diluted Blood Sample Stability and Recovery

Stabilitas darah dan pemulihan ekstraksi gemcitabine, dacarbazine, gefitinib, imatinib, dan topotecan diuji dalam tiga ulangan untuk masing-masing konsentrasi [0,0549 dan 8.24: M (dacarbazine), 0,0224 dan 3,36: M (gefitinib), 0,0380 dan 5.70: M (gemcitabine ), 0,0202 dan 3,04: M (imatinib), dan 0,0238 dan 3,56: M (topotecan)]. Konsentrasi rendah, tiga kali di atas LLOQ, dan konsentrasi tinggi dipilih berdasarkan sensitivitas LC-MS / MS dan tingkat paparan lisan pada tikus. Hasil penelitian menunjukkan bahwa semua senyawa berada dalam ± 18% RE konsentrasi nominal, yang menunjukkan senyawa ini stabil dalam darah tikus diencerkan selama minimal 2 minggu di sekitar -80◦C. Pemulihan ekstraksi adalah dihitung dengan membandingkan rasio respon analit / IS sampel prespike dengan sampel postspike. Perolehan rata-rata ekstraksi untuk dua tingkat QC adalah 73,5% dan 76,2% (gemcitabine), 79,3% dan 81,1% (dacarbazine), 89,5% dan 88,7% (gefitinib), 89,2% dan 91,2% (imatinib), dan 85,6% dan 88,6% (topotecan).

DISCUSSION

Dalam penelitian ini, metode bioanalitis kuantitatif untuk studi PK menggunakan darah seluruh diencerkan dari tikus serial berdarah dievaluasi dan praklinis PK dosis tunggal lima senyawa antikanker Model dinilai setelah baik lisan diskrit dan kaset dosis. Sampel darah mikro (10 atau 15: L) dikumpulkan dan diencerkan dengan air tanpa adanya antikoagulan yang biasa digunakan seperti EDTA atau heparin, menyederhanakan langkah pengolahan sampel dan mengurangi biaya (misalnya, untuk antikoagulan tabung dilapisi). EDTA atau berlapis heparin tabung yang paling umum digunakan dirancang untuk volume besar darah. Volume Micro koleksi darah memerlukan desain khusus antikoagulan dilapisi tabung kapiler, yang tidak

mudah digunakan. Selain itu, kehadiran antikoagulan dapat memiliki efek pada stabilitas senyawa, 14 dan berdasarkan bimbingan FDA, sebuah revalidation parsial metode bioanalitis dianjurkan pada antikoagulan changes.15 Metode pengambilan sampel darah mikro memungkinkan untuk seri berdarah daripada perdarahan komposit, sehingga hewan dan senyawa persyaratan yang lebih sedikit.

Salah satu perhatian untuk sampel matriks baru biologi, seperti sampel darah tikus diencerkan utuh, adalah stabilitas sampel. Dalam studi saat ini, stabilitas penyimpanan sampel darah seluruh tikus diencerkan dacarbazine, gefitinib, gemcitabine, imatinib, dan topotecan dievaluasi dengan spiking senyawa ini ke dalam darah tikus seluruh diencerkan dan menyimpannya di sekitar -80◦C selama 2 minggu. Konsentrasi darah berduri setelah analisis awal dan setelah reanalysis berada dalam ± 18% RE untuk semua senyawa ini. Kriteria penerimaan khas untuk divalidasi uji LC-MS / MS berada dalam ± 15% RE untuk kurva standar dan QC. Namun, dalam proses penyaringan penemuan obat, kriteria penerimaan untuk uji LC-MS / MS nonvalidated tidak terlalu ketat dan sering ditetapkan sebesar ± 25% RE. Atas dasar kriteria penerimaan tersebut, hasil menunjukkan bahwa semua senyawa yang stabil selama minimal 2 minggu di sekitar -80◦C (satu siklus beku-mencair) dan sampel darah diencerkan dapat disimpan untuk waktu yang cukup setelah selesai percobaan in vivo tanpa degradasi yang signifikan, yang akan menyebabkan pengukuran konsentrasi obat yang salah dan pembuatan data PK benar berikutnya.

Perlu dicatat bahwa meskipun metode kami muncul bermanfaat bagi penentuan konsentrasi obat dalam darah spesies praklinis lain dan manusia, terutama untuk studi di pediatri atau orang tua jika sensitivitas izin, metode ini menarik tampaknya menjadi spesies tertentu pada tikus dan tikus berdasarkan pengalaman kami dan evaluasi lebih lanjut akan diperlukan sebelum aplikasi untuk spesies lain. Misalnya, memanfaatkan metode ini pada tikus studi toxicokinetic akan memungkinkan pengumpulan sampel dari hewan individu daripada hewan komposit. Metode ini akan sangat berguna jika dua obat dengan profil PK yang berbeda yang perlu dipantau adalah dipakai bersamaan, sehingga peningkatan jumlah sampel titik waktu dibandingkan dengan study.However rutin, pembentukan bekuan darah diamati setelah satu freeze-thaw siklus ketika utuh, laki-laki tikus darah Sprague- Dawley diencerkan dengan air (1: 4, v / v) adalah disimpan dengan tidak adanya antikoagulan. EDTA mencegah koagulasi dengan chelating ion kalsium, sehingga satu penjelasan potensial bisa jadi bahwa spesies yang diamati Perbedaan mungkin disebabkan karena darah terionisasi kadar kalsium yang lebih tinggi pada tikus dibandingkan dengan tikus; Namun, kita tidak tahu apakah atau tidak perbedaan ini adalah factor.16,17 kontribusi

Awalnya, kurva konsentrasi-waktu darah dan plasma dan parameter PK dari dacarbazine, gefitinib, gemcitabine, imatinib, dan topotecan (Gbr. 5, Tabel 3)

ditentukan setelah dosis oral diskrit pada 10 mg / kg. Untuk semua senyawa, parameter PK darah yang mirip dengan parameter PK plasma setelah pemberian dosis diskrit: nilai AUClast berada dalam 1,8 kali lipat; Nilai Cmax berada dalam 2,3 kali lipat. Hasil uji t menghitung bahwa tidak ada perbedaan yang terdeteksi antara AUClast dari plasma diskrit terhadap AUClast dari darah diskrit untuk semua senyawa dalam rentang dua kali lipat pada interval kepercayaan 95%. CV untuk data konsentrasi setelah pemberian dosis diskrit pada titik waktu individu berkisar antara 3% sampai 76%, 5% sampai 41%, 3% menjadi 89%, 20% sampai 130%, dan 7% sampai 35% untuk dacarbazine, gefitinib, gemcitabine, imatinib, dan topotecan, masing-masing, dengan imatinib setelah itu% CV terbesar diamati. Mengingat variabilitas antarindividu besar imatinib (misalnya, 3,6 kali lipat untuk Cmax dalam darah) perbedaan yang diamati antara plasma dan PK darah berada dalam variabilitas interanimal. In vitro darah plasma partisi pada tikus berkisar 0,8-1,3 (dacarbazine = 1.16, gefitinib = 1,01, gemcitabine = 1,30, imatinib = 0,762, dan topotecan = 0,970; Data tidak ditunjukkan), menunjukkan bahwa tidak ada partisi senyawa istimewa ke dalam sel darah merah. Memanfaatkan PK darah selama plasma PK dengan rancangan penelitian dijelaskan mengurangi jumlah material dan jumlah hewan yang digunakan oleh sekitar 50%, memiliki keuntungan untuk mendapatkan semua tingkatan obat yang membentuk kurva PK dari satu binatang daripada binatang komposit, dan diharapkan dapat memberikan perbandingan yang lebih baik antara obat yang berbeda terutama jika mereka berbeda sehubungan dengan mereka partisi darah plasma. Perhatian harus diambil ketika menafsirkan PK darah terhadap PK plasma jika rasio darah plasma senyawa yang luar 0,8-1,3 rentang yang menunjukkan bahwa senyawa tersebut dapat sangat partisi ke teknik Microsampling cells.18 darah merah memungkinkan serial microbleeding tikus di obat fase penemuan. Di antara teknik microsampling, kering tempat darah (DBS) sampel menarik minat besar dalam studi praklinis dan uji klinis karena manfaatnya untuk bagian dalam kehidupan, seperti pengurangan hewan dan perbaikan, data PK berkualitas tinggi dari perdarahan serial, user-friendly Prosedur pengumpulan sampel, dan kemudahan penyimpanan sampel dan transport.19-22 Dibandingkan dengan DBS, prosedur kami diencerkan pengambilan sampel darah memiliki sebagian besar keuntungan tersebut di atas kecuali untuk prosedur pengumpulan karena sampel darah harus diencerkan di tempat koleksi . Namun, prosedur pengambilan sampel darah diencerkan memiliki keunggulan tersendiri. Karena sampel dalam bentuk cair, prosedur persiapan sampel untuk uji bioanalitis jauh lebih mudah seperti uji tradisional. Ini diminimalkan beberapa isu yang datang dengan sampel bentuk padat seperti DBS, seperti IS addition23 dan perbedaan dalam difusi yang disebabkan oleh berbagai tingkat hematokrit di samples.24 darah Dalam sebelumnya fase penemuan obat, diencerkan transportasi sampel darah dari fasilitas hewan ke laboratorium analitis bukan masalah besar karena mereka biasanya dekat satu sama lain.