La Brucellose 2011/2012

Chapitre I: La brucellose zoonose majeure

Introduction Dans les pays industrialisés ,la lutte contre les zoonoses

est considérée comme un enjeu prioritaires par les instances politique et décisionnelle .En effet ces maladies susceptibles de toucher les humains et les animaux ,ont un impact important mêlant à la fois des aspects sanitaires et économiques .Parmi celles-ci , la Brucellose dont les bactéries , Brucella sont les agents responsables.

Dans notre modeste travail qui suit nous évoqueront une étude bactériologique complète sur Brucella, les différents aliments qu’elle contamine et les différents tests effectués pour la mise en évidence de cette bactérie dans les aliments essentiellement le lait cru.

1- historique Ile de Malte, l'Anglais Marston, en 1861, décrit une

maladie humaine fébrile. 1887, David Bruce isole = Brucella melitensis. 1897, un vétérinaire danois, Bang, isola de l’estomac

d’avortons bovins qu’il appela Bacillus abortus bovis. 1897, Wright constate le séro-diagnostic de Wright. 1905, Zamitt découvrit la positivité du séro-diagnostic de

Wright chez toutes les chèvres de l’île de Malte. 1914, aux Etats-Unis, Traum isola des fœtus de truies

avortées un microbe semblable au bacille de Bang, Bacillus abortus suis

1918, Alice Evans devait démontrer la parenté de ces différents germes

2- Définition de la maladie Fièvre de Malte, Fièvre Ondulante, ou Fièvre

Méditerranéenne appelée Egalement, la

Brucellose est une des zoonoses majeures à travers le monde.

C’est une maladie infectieuse grave liée à la consommation d’aliment bien particulier, le fromage de chèvre étant souvent mis en cause. Elle ne poserait aucun problème si le lait destiné à leur fabrication était pasteurisé

3- Agent causal : Brucella Groupe alpha 2-Proteobacteria / famille des Brucellaceae :

genre Brucella,… Ce genre comprend 6 espèces : Pathogènes possible pour l’homme :

• B. melitensis (transmise par caprins et ovins), • B. abortus (bovins), • B. suis (porcins)

Règne Division Famille Genre Espèce

Procaryote Gracilicute GRAM (-) parvobacteriaceae Brucella B. abortus (9 biotypes)B. canisB. melitensis (3 biotypes)B. neotomaeB. ovisB. suis (4 biotypes)

4- Habitat de Brucella 

Les Brucella se trouvent essentiellement chez les animaux qui jouent le rôle de réservoir mais peuvent également être présentes dans l’environnement et les produits alimentaires.

De nombreux animaux présentent le réservoir . et constituent ainsi autant d’hôtes privilégiés pour les différentes espèces de Brucella. Ces espèce infectent à la fois des animaux domestiques parmi lesquels les bovins, ovins, et les suidés, mais aussi les animaux sauvage…

5- Survie de brucella dans l’environnement

La survie de brucella est influencée par différents élément tel que :

Le pH La température et l’humidité :  Brucella survie dans l’eau des mois à 4 – 8°C , 5 ans à 0°C

et plusieurs année dans des tissus ou milieux congelés. Concernant les substances d’origine animale Brucella peut

survivre30 jours dans l’urine, 75 jours dans les avortons, 120 jours dans les déjections et plus de 200 jours dans les exsudats utérins

6- Survie de Brucella dans les produits alimentaires 

La survie de Brucella dans le lait et les produits laitiers dépend de nombreux paramètres :

Le type et l’âge du produit considéré ; L’humidité du milieu et du produit ; La température ; Les variations de pH ; L’activité biologique des autres bactéries présentes ; Les conditions de stockage.

Dans le lait cru, la survie de Brucella est de 24 h à 25 – 37 °C, 48 h à 8 °C et 2,5 ans à – 40 °C. Brucella ne persiste pas très longtemps dans les fromages fermentés

7- Bactériologie Coccobacillaires de longueur entre

0.6 à 1.5µm et d’épaisseur de

0.5 à 0.7µm ; Aérobies et à pouvoir glucidolytique

faible ;  Immobiles, asporulées, non flagellées, acapsulées ; Gram négatif ; Exigeants, mais forts résistants dans le milieu

extérieur ; AS ; gélatinas -, VP-, RM-, LDC-, ODC-, ADH-et

hémolyse-, indole-, nitrate réductase+, urease+.

7-1-Culture de la bactérie  a) Condition de culture : Culture difficile sur milieu ordinaire; Métabolisme principalement oxydatif; Bactérie aérobie mais certaine espèces nécessite du CO2;

La multiplication est favorisée par des facteurs de croissance;

Culture lente (48 heures à 4 jours en bouillon ) à la température optimal de 37 °C ;

le milieu sera rendu sélectif par addition d’antibiotiques tels que la cycloheximide ,la bacitracine et la polymyxine B

Les milieux les plus fréquemment utilisées sont la gélose à l’extrait de foie, la gélose nutritive additionnée de glycérol (2° /

°) et de glucose (1°/°), ou additionnée de sérum (5°/

°) et de glucose (1°/

°).

b) Caractère des cultures:

  Les colonies de Brucella deviennent visibles en deux ou trois jours sur un milieu solide adapté. Leur mise en culture laisse apparaitre deux type de souches : Les colonies S (Smooth = lisse) et R (Rough =rugueuse) . Les colonies S sont petites, rondes et convexes mais une dissociation, avec une perte des chaines O du LPS, arrive fréquemment pour former des variantes Rough.

quelques aspects culturaux à 37°C après 48 h (haut) et 72 h d'incubation (bas)

aspects de culture sur la gélose trypticase soja

8- Mode de transmission de la maladie

Elle est directe dans la majorité des cas (70°/°). L’homme se contamine par voie cutanée; La brucellose est une maladie professionnelle

qui atteint surtout les ruraux (vétérinaires, bergers,

marchands de bestiaux etc.….). La contamination indirecte, digestive est plus rare.

Elle se fait par ingestion de lait cru

(de chèvre ou de brebis) ou par consommation

de fromage frais de fabrication artisanale. Il n’existe pas de contamination interhumaine.

9- Pathogenèse  Plusieurs espèces de Brucella peuvent contaminer l’homme

toutefois, le degré de gravité est variable selon les espèces considérées. Les espèce les plus contaminentes pour l’homme sont:

B. melitensis, B. abortus, B. suis. Le principal facteur de virulence des espèces de Brucella

est le lipopolysaccharide (LPS) de la paroi cellulaire. La bactérie s'installe dans un foyer local puis gagne un

ganglion lymphatique avant de disséminer.

Elle est capable de se multiplier dans les phagocytes en inhibant la fusion lysosome-phagosome.

Cycle intracellulaire (parasite intracellulaire facultatif)

10- Présentation clinique  Les symptômes de la brucellose sont : Fièvre; Symptôme constitutionnelle (anorexie, asthénie, faiblesse,

malaise); Sueurs, Frissons; Douleurs articulaires; Symptômes gastro-intestinaux (douleurs abdominales,

constipation, diarrhées); Maux de tête ; Douleurs lombaires; Douleurs musculaires .

11- Epidémiologie de la maladie1- Espèces animales infectées: a) Animaux domestiques: B. abortus infecte les bovidés

(bœufs et vaches, Buffles, yacks, etc.), B. melitensis les caprins et les ovins, B. suis les porcs.

b) Animaux sauvages: fauves, cervidés, Bovidés, rongeurs, oiseaux, etc.

2- infection chez l’homme: La brucellose humaine n'existe qu'en fonction de la brucellose

animale. En effet, la Contamination interhumaine, si elle existe, est exceptionnelle parce que l'homme malade N’excrète que très rarement des Brucella.

L'épidémiologie de la maladie humaine est centrée, d'une part, sur les contaminations Par contact avec des animaux infectes ou des objets contamines, d'autre part sur la Contamination alimentaire.

12- Base du traitement 1 .Curatif :

Il repose généralement sur la tétracycline, associée à la rifampicine. Le traitement doit être prolongé, pour diminuer le risque de rechute à l’arrêt du traitement.

2 .Préventif :

La maladie est à déclaration obligatoire.

La prévention est basée sur l’élimination des animaux infectés et la pasteurisation du lait

Chapitre 2: contamination des aliments par Brucella

et sa mise en évidence dans ces derniers

1- Contamination des aliments par Brucella 

Les principaux aliments responsables de

brucellose humaine sont : Les laits de vache, brebis et chèvre, Les fromages frais de chèvre et de brebis, Les viandes, Les légumes.

2- Techniques d’isolement et d’identification des Brucella 

Prendre quelques gouttes de l’échantillon de lait

Ensemencer sur gélose ou bouillon Brucella

Ajouter le PBC

Incuber pdt 24 à 48 h à 37 °C

Interprétation des résultat:

Sur la gélose : les colonies sont petites, lisses, translucide, a bord régulier et elles ont parfois une

couleur de miel. Dans le bouillon :

la présence de trouble.

L’identification est parfois réalisée en

testant la croissance en présence de colorants : Culture en présence de thionine et de fuchine :

B. melitensis. Culture en présence de fuschine et pas de culture en

présence de thionine r : B. abortus. Culture en présence de thionine et pas de culture en

présence de fuchine : B. suis.

On peut utiliser les Épreuves de Huddleson : (exigence en dioxyde de carbone, production d'H2S, résistance à la thionine, résistance à la fuschine)

Espèce Exigence en CO2

Production d’H2S

Resistance a la thionine

Resistance a la fuschine basique

B. melitensis - - ou trace + +

B. abortus + + en 2 jrs et plus

- +

B. suis - ++ en 4 jrs + -

3-méthode de détection de Brucella dans les aliments 

a) Epreuve de l’anneau sur le lait = Ring Test

C’est une réaction d’agglutination qualitative obtenue par interaction des anticorps contenus dans le lait dirigés contre le LPS bactérien avec un antigène coloré par

l’hématoxyline. Les agglutinats colorés sont adsorbés sur les globules gras et se regroupent en surface dans l’anneau de crème.

placer L’antigène une heure à

température

ambiante (18-23°C)

avant le début

des tests

Agiter avec soin

l’antigène au

moment de

l’emploi

Homogénéiser

les laits à tester

par agitation

, puis les

répartir en tubes de 1 mL

Ajouter 50 μL

d’antigène et

Mélanger

soigneusement

Incuber une

heure à l’étuve à

37°C, puis 18 à 20h

entre +2 et +8°C

Effectuer la

lecture

Interprétation des résultats : Si l’anneau de crème est moins

coloré que le lait sous jacent,

cela signifie qu’il n’y a pas d’anticorps,

tandis que si l’anneau de crème est

plus ou autant coloré que le lait sous

jacent, des anticorps doivent être présents. Une réaction fortement positive est indiquée par la formation d’un anneau bleu/violet au dessus d’une colonne de lait, mais tout dépôt bleu à l’interface entre le lait et la crème doit être considéré comme positif car il peut être révélateur, surtout dans les gros troupeaux.

b) Test Eliza

Préparer les dilutions de lait

et les mettre dans les puits

des microplaques

en polypropylène

Formation de complexe

LPS/anticorps fixés sur les

parois du puits

Lavage, couplage d’une immunoglobuli

ne anti-anticorps à une

enzyme est mise à incuber

Lavage et ajout du substrat de

l’enzyme (TMB)

Interprétation des résultats :

Si l’immun complexe est présent, l’enzyme assure la transformation du substrat en un composé bleu, devenant jaune après blocage. L’intensité de la coloration mesure le taux d’anticorps présents dans l’échantillon.

 

Conclusion La brucellose a constitué une zoonose majeure au

cours des dernières décennies. Face aux problèmes économiques d’une part, notamment en raison des pertes enregistrées dans le secteur de l’élevage, mais surtout d’autre part en raison des enjeux de santé publique, les autorités ont pris des mesures visant à traiter le problème. Celles-ci ont pour l’essentiel consisté en des mesures de prophylaxie animale ainsi qu’a la mise en place d’un réseau de surveillance de la maladie au niveau humain avec le classement de la brucellose en maladie à déclaration obligatoire.