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LA VALUTAZIONE DELL’Hb F NEL
PERCORSO DIAGNOSTICO DELLE
EMOGLOBINOPATIE
Giannone Valentina
Laboratorio di Genetica Medica
Emoglobina Fetale
Emoglobina Fetale
Emoglobina Fetale
1. Per l’inquadramento di disordini a carico dei geni globinici
2. Monitoraggio in soggetti affetti trattati con farmaci per l’induzione dell’Hb F
Perché si misura l’Hb F?
1. DENATURAZIONE ALCALINA
2. HPLC
3. SPETTROMETRIA DI MASSA
4. METODI CELLULARI (anticorpi
monoclonali e citometria a flusso)
Screening di I livello: Metodi analitici
L’unità di misura di Hb F è % sulla Hb totale
Presso la nostra Struttura si ritiene normale un valore di Hb F ≤1%
Esame/Analisi: EMOGLOBINA
FETALE
Sigla e sinonimi: HbF
Valori normali donna:
oltre 2 anni: 0 - 0.5
Valori normali uomo:
oltre 2 anni: 0 - 0.5
Unità di misura:% Hb tot
Metodo: HPLC
UNITA’ DI MISURA E VALORI
DI RIFERIMENTO
Unità di misura: %
Valori di riferimento: Hb fetale
dopo 2 anni 0.0-1.0
PRINCIPIO DEL METODO
Principio analitico: elettroforesi
capillare
Screening I livello: Intervallo di riferimento
Scheda esame:
ID: HBF
Nome: Emoglobina fetale
Unità di misura: %
VALORI DI RIFERIMENTO< 2.0
Metodica: HPLC
• DISORDINI ACQUISITI
• DISORDINI EREDITARI
Cause di aumento di Hb F
• MALATTIE DEL SANGUE (NON
NEOPLASTICHE)
• NEOPLASIE (leucemia mieloide
cronica/acuta… )
• CONDIZIONI ASSOCIATE A SPECIFICI
TRATTAMENTI TERAPEUTICI
• ALTRE CONDIZIONI (gravidanza,
insufficienza renale cronica,
ipertiroidismo..)
• SINDROMI TALASSEMICHE
• γ-TALASSEMIA
• ALTRE EMOGLOBINOPATIE (ANEMIA
FALCIFORME, HB C, HB LEPORE…)
Cause di aumento di Hb F nei disordini ereditari: geni γ globinici
Cause di aumento di Hb F: geni γ globinici
BCL11A binding site
VARIANTI BENIGNE HBG1
c.-548 T>A(rs57966301) c.*259 A>T(rs1143541)
c.*344G>A(rs147256314) c.-637G>A(rs2855039)
c.-29 G>A(rs368698783) c.*55delA(rs3841756)
c.93-58C>T(rs202216517) c.*246A>T(rs916111)
c.-275_-274insAGCA(rs561507744) c.*124 T>A(rs2402330)
c.-320C>T(rs12290216) c.-366A>G(rs2860456)
c.-418 G>C(rs2855040) c.-447G>A(rs35993903)
c.-69C>G(rs558015287)
VARIANTI BENIGNE HBG2
c.-437-121C>G (rs73402643)c.-437-13_-437-8delCTTTAA(rs112075505)c.-437-13C>T(rs531285196)c-422C>G(rs112215533)c.-362A>G(rs112479156)c-324T>C(rs113622787)c.-321G>C(rs904054277)c.-309A>G(rs1045222350)c.-69C>G(rs551623060)
HPFH-2
GR (106 /ml) 4.01
Hb (g/dL) 12.3
MCV (fL) 88.5
Hb A2 (%) 2.8
Hb F (%) 5.0
Cause di aumento di Hb F nei disordini ereditari: geni γ globinici
Aγ-158 C>T omo
GR (106 /ml) 4.50
Hb (g/dL) 12.7
MCV (fL) 81
Hb A2 (%) 2.5
Hb F (%) 31
La presenza di polimorfismi/varianti nei geni γ globinici non dà
informazioni aggiuntive alla condizione clinica
• Portatore sano di β-talassemia
GR (106 /ml) 5.39
Hb (g/dL) 11.2
MCV (fL) 62.3
Hb A2 (%) 5.7
Hb F (%) 2.3
Cod39 etero + Hb F Sardinia etero
GR (106 /ml) 5.26
Hb (g/dL) 10.7
MCV (fL) 63.7
Hb A2 (%) 6.2
Hb F (%) 6.6
Cod39 etero + Xmn1-HBG2 omo
QUANDO IL VALORE DI Hb F DIVENTA IMPORTANTE IN DIAGNOSTICA?
GR (106/ml) 5.50
Hb (g/dL) 12.5
MCV (fL) 65
Hb A2 (%) 2.8
Hb F (%) 11.1
DELEZIONE SICILIANA
Aumento di fetale in presenza di microcitemia• Talassemia
QUANDO IL VALORE DI Hb F DIVENTA IMPORTANTE IN DIAGNOSTICA?
DELEZIONE ASSOCIATA AD ALFA (3.7 ETERO)
CON HbF 2.8%
GR (106/ml) 6.23
Hb (g/dL) 12.4
MCV (fL) 61.2
Hb A2 (%) 2.9
Hb F (%) 2.8
DELEZIONE ASSOCIATA
AD ALFA (NCO OMO) CON
HbF 2.5%
GR (106/ml) 6.4
Hb (g/dL) 13
MCV (fL) 65
Hb A2 (%) 3.0
Hb F (%) 2.5
Il mancato aumento di fetale rispetto all’atteso avrebbe potuto
portare ad un errore diagnostico
• Talassemia
QUANDO IL VALORE DI Hb F DIVENTA IMPORTANTE IN DIAGNOSTICA?
• Talassemia Intermedia
GR (106/ml) 3.85
Hb (g/dL) 9.2
MCV (fL) 62.2
Hb A2 (%) 7.1
Hb F (%) 5.7
IVS I-6 OMOZIGOTE
GR (106/ml) 5.85
Hb (g/dL) 9.5
MCV (fL) 52.2
Hb A2 (%) 9.1
Hb F (%) 4.4
-101/IVS I-1
QUANDO IL VALORE DI Hb F DIVENTA IMPORTANTE IN DIAGNOSTICA?
• Genotipi complessi
GR (106 /ml) 5.19
Hb (g/dL) 9.6
MCV (fL) 59.3
Hb A2 (%) 4.5
Hb F (%) 3.5
Cod 39+ ααα
GR (106/ml) 5.22
Hb (g/dL) 12.3
MCV (fL) 71.8
Hb A2 (%) 2.3
Hb F (%) 5.2
Cod 6(-A) eterozigote+ Sindrome
di Gilbert (UGTA1:TA[7]/TA[7])
GR (106 /ml) 5.50
Hb (g/dL) 9.5
MCV (fL) 65
Hb A2 (%) 4.1
Hb F (%) 4.2
--MED+ Xmn1-HBG2
QUANDO IL VALORE DI Hb F DIVENTA IMPORTANTE IN DIAGNOSTICA?
• DIFETTI DI MEMBRANA DEI GR
• DIFETTI ENZIMATICI DEI GR
• ANEMIE DISERITROPOIETICHE
Pannello NGS per Anemie Emolitiche Rare
Haematologica. 2018;103 doi:10.3324/haematol.2018.201160
Kruppel Like Factor 1 (KLF1)
Blood 2016 127:1856-1862; doi: https://doi.org/10.1182/blood-2016-01-694331
Kruppel Like Factor 1 (KLF1)
Kruppel Like Factor 1 (KLF1)
GR (106 /ml) 4.6
Hb (g/dL) 12
MCV (fL) 77.8
Hb A2 (%) 3.1
Hb F (%) 2.1
-α3.7 etero
KLF1:c.809C > A etero, p.Ser270Ter
La mutazione su KLF1 giustifica i valori borderline di HbA2 e Hb F
L’AUMENTO DI Hb F E’ UN PARAMETRO DI RIFERIMENTO
PER LA CORRETTA INTERPRETAZIONE DEL QUADRO
CLINICO
CONCLUSIONI
Un aumento di Hb F infatti può essere legato a condizioni benigne, ma anche
nascondere un quadro clinico più complesso
Una valutazione critica del livello di Hb F è fondamentale per la corretta valutazione
del rischio riproduttivo
