LAPORAN RESMI PRAKTIKUM ANALISIS FARMASI VALIDASI METODE
ANALISIS SPEKTOFOMETER UV DAN PENETAPAN KADAR TABLET ANTALGIN
LAPORAN RESMI PRAKTIKUM ANALISIS FARMASI VALIDASI METODE
ANALISIS SPEKTOFOMETER UV DAN PENETAPAN KADAR TABLET ANTALGIN
SECARA SPEKTROFOMETER UV
FAKULTAS FARMASIUNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
2009PRAKTIKUM I
VALIDASI METODE ANALISIS PENETAPAN
KADAR ANTALGIN DENGAN SPEKTROFOTOMETRI UV
I. TUJUANMampu memvalidasi suatu senyawa dalam hal ini penetapan
kadar antalgin dengan metode spektrofotometri ultraviolet dan mampu
mengujinya secara akurasi nipitabilitas dan linearitas.
II. RUANG LINGKUP
Dalam praktikum ini digunakan tablet antalgin produk kimia
farma, yang memiliki kandungan zat aktif 500 mg dan berat rata-rata
592,96 mg
III. TANGGUNG JAWAB
1. Praktikum
: - Yasinta Mila Shani
(K 100 070 070)
- Nur Hayati
(K 100 070 071)
- Pandu Al Rosyid
(K 100 070 059)
2. Pembimbing: Ika Trisharyanti DK,S.Si., Apt
IV. ALAT DAN BAHAN
Alat
Labu takar 10 m, 100m
- pipet tetes Gelas ukur
- Beacker glass
Erlemeyer 100m
- Spektrofotometri UV Mortir
- Kuvet
Stemper
- Mikropipet 20- 200 L
Pipet volume
Bahan
Antalgin/metampyronum
Digunakan tablet antalgin / metampiron produksi kimia farma
memiliki kandungan zat aktif 500 mg dan berat rata 592,96 dengan
menggunakan HCL 0,1N dengan pemberian serbuk hablur putih atau
putih kekuningan.
(FI. III hal 360)
HCl 0,1N
Cara pembuatannya:Ambil 100m HCL lalu ad kan dengan
aquadestillata 100 m, sehingga didapat konsentrasi 0,1N
Bobot per m lebih kurang 1,18gr
(Fl. III Hal 53)
Aquadest
Procedur
Pada praktikum kali ini menggunakan tablet antalgin dengan berat
500m dan berat rata-rata 592,96 yang diproduksi oleh kimia farma
dan diukur dengan menggunakan spektrofotometri UV yang mengacu pada
aquades acid 258 nm 1A = 266
(Clarke, 942)
Keseragaman Bobot
Tablet tidak bersalut harus memenuhi syarat keseragaman bobot
yang ditetapkan sebagai berikut: timbang 20 tablet, hitung bobot
rata-rata tiap tablet, jika ditimbang satu persatu, tidak boleh
lebih dari 2 tablet yang masing-masing bobotnya menyimpang lebih
besar dari bobot rata-rata yang ditetapkan kolom B
Bobot rata-rataPenyimpangan bobot rata-rata dalam 1%
AB
25 mg atau kurang
26 mg sampai dengan 150 mg
151 mg sampai dengan 130 mg
lebih dari 300 mg15%
10%
7,5%
5%30%
20%
15%
10%
(F.I.III hal 7, 1979)V. DASAR TEORI
SpektrofotometerSpektrofotometer merupakan studi yang
mempelajari antar aksi energi cahaya. Spektofotometri UV-VIS adalah
tehnik analisis yang menggunakan sumber radiasi elektromagnetik
ultraviolet dan sinar tampak dengan instrumen spektrofotometer
penerimaan energi gelombang
= hv = hc/( = hcn
dimana: E = Energi radiasi
h = Konstanta plank (6.63 x 10-34 j.s)
c = Kecepatan radiasi (2.99792 x 1010 cm/s)
( = Panjang gelombang (nm)
n = Bilangan gelombang
Serapan cahaya oleh molekul dalam daerah UV-VIS tergantung pada
struktur organik molekul. Penyerapan sejumlah energi menghasilkan
transisi elektron dari tingkat dasar ke orbital yang berenergi
lebih tinggi dalam keadaan tereksitasi. Sistem atau gugus atom yang
bertanggung jawab pada penyerapan nm cahaya disebut kromofor yang
merupakan gugus tidak jenuh kovalen yang dapat menyerap radiasi
dalam daerah UV-Vis.
Suatu molekul menyerap suatu radiasi dengan panjang gelombang
yang khusus spesifik untuk molekul itu. Serapan cahaya ultraviolet
(radiasi berenergi tinggi) mengakibatkan pindahnya sebuah elektron
ke orbital dengan energi yang tinggi. Molekul-molekul yang
memerlukan lebih banyak energi untuk promosi elektron, akan
menyerap panjang gelombang yang lebih pendek. Sebaliknya,
molekul-molekul yang memerlukan energi yang lebih sedikit akan
menyerap pada panjang gelombang yang lebih panjang. Senyawa yang
menyerap cahaya dalam daerah Vis (yakni senyawa berwarna) mempunyai
elektron yang lebih mudah dipromosikan daripada senyawa yang
menyerap pada panjang gelombang UV.
Dalam persamaan : E = hv = hc/( maka kita akan dapat mengetahui
bahwa perbedaan tingkat energi perpindahan dari ground state dan
excited state sangat menentukan panjang gelombang dari senyawa
tersebut. Semakin besar selisih tingkat energinya maka akan semakin
kecil panjang gelombang maksimalnya.
Spektrofotometer UV-Vis dapat digunakan analisis kuantitatif
dari suatu senyawa. Analisis ini dilakukan dengan menggunakan
tetapan absorpritivitas molar dan panjang gelombang maksimal yang
dapat ditentukan dari penelitian.
(Skoog, 1985)
Senyawa kimia biasanya dianalisis melalui unsur, ion, radikal
atau gugusnya. Ada analisis senyawa anorganik secara volumetric
biasanya dibagi berdasarkan reaksi yang terjadi selama titrasi
seperti asidi-alkalimetri, pengendapan, oksidasi-reduksi, dan
lain-lain. Pembagian tersebut kurang tepat untuk analisis senyawa
organik. Reaksi ini juga tidak spesifik, karena reaksi ini tidak
hanya untuk satu senyawa saja, tetapi dapat juga untuk senyawa lain
yang mengandung unsur, ion, radikal, atau gugus yang sama. Ada
analisis metode modern, pembagian berdasarkan metode seperti
spektrofotometri UV-Vis, spektroflourometri dan kromatografi, juga
kurang cocok. Oleh karena itu pembagian berdasarkan struktur kimia
merupakan cara pengelompokkan yang cocok untuk nyawa obat.
(Sudjadi dan Abdul Rahman, 2004)
Validasi Metode Analisis
Definisi validasi menurut SK Menkes RI. No. 43/MENKES/Sk/1998
tentang CPOB adalah tindakan pembuktian dengan cara yang sesuai
bahwa bahan, prosedur, sistem, perlengkapan atau mekanisme dalam
produksi dan pengawasan senantiasa mencapai hasil yang
diinginkan.
(Anonim, 2007)
Adapun urutan kerja validasi diawali dengan penyusunan dan
persetujuan protokol yang berisi rancangan tertulis validasi,
kriteria penerimaan untuk proses. Jumlah validasi, peralatan,
proses kritis, range parameter proses, sampling data uji, dan hasil
yang diterima.
Tahap pelaksanaan meliputi kegiatan verifikasi, pengumpulan data
dan pengujian selanjutnya diikuti evaluasi data, baik secara
analisis statistik maupun grafik, dan tahap terakhir dilakukan
penyusunan laporan validasi.
(Anonim, 2004)
validasi metode analisis ialah proses yang ditetapkan melalui
studi laboratorium karakteristik kinerja metode analisis memenuhi
persyaratan sesuai tujuan susunannya. Karakteristik kinerja metode
analisis dinyatakan sebagai parameter yang harus dipertimbangkan
dalam validasi metode analisis dapat dilihat dalam tabel dibawah
ini
parameter analisis:
PresisiBatas kuantitasi
AkurasiLinieritas
spesifitas/spesifitasRentang
DeteksiKetegaran /Ruggedness
Ruggednes
Devinis akurasi adalah suatu metode analisis yang tingkat
kedekatannya dari metode analisis yang divalidasi sedang dengan
nilai sebenarnya atau nilai yang dianggap benar. Akurasi dinyatakan
sebagai persen perolehan kembali dengan cara melakukan analisis
terhadap analit yang ditambahkan ke dalam sampel zat dalam jumlah
yang diketahui.
Penetapan akurasi dilakukan dengan menggunakan pengujian
menggunakan metode yang sedang divalidasi terhadap sample zat yang
ditambah analit dalam kadar yang diketahui lebih tinggi maupun
lebih rendah dari kadar normal yang diharapkan terkandung dalam
sampel zat. Presentasi analit yang diperoleh kembali dalam sampel
zat.
Presisi
Definisi presisi dalam metode analisis ialah tingkat kedekatan
diantara hasil uji individu bila prosedur digunakan berulang kali
terhadap sampling ganda atas sampel yang homogen. Presisi metode
analisis biasanya dinyatakan sebagai simpangan baku relatif
(Koefisien varias). Presisi dapat berupa ukuran derajat
reprodusibilitas atau ripitabilitas metode analisis dalam kondisi
kerja normal. Dalam konteks ini reprodusibitas mengacu pada
penggunaan metode analisis di laboratorium yang berbeda.
Presisi antara menyatakan variasi dalam laboratorium, pengujian
dilakukan pada hari yang berbeda atau analis yang berbeda atau
peralatan yang berbeda dalam laboratorium yang sama. Ripitabilitas
mengacu pada penggunaan metode analisis dalam laboratorium yang
sama dalam waktu singkat, menggunakan analisis dan instrument yang
sama.
Penetapan presisi ialah metode analisis penetapan dengan
menentukan kadar larutan sampel homogen beberapa kali (dengan n
kali pengujian) sehingga hasil uji dapat dihitung secara statistika
perkiraan yang valid dari simpangan baku atau simpangan baku
relative (koefisien variasi). Penetapan kadar dalam konteks ini
adalah analisis mandiri (independent) terhadap sampel yang
dilakukan melalui analisis lengkap mulai dari penyiapan hingga
diperoleh hasil akhir.
Spesifitas atau Selektivitas
Definisi selektivitas atau spesifitas metode analisis adalah
kemampuan metode analisis untuk mengukur secara tepat dan spesifik
analit yang tercampur dengan komponen lain dan diperkirakan ada
dalam matriks sampel. Spesifitas dinyatakan sebagai derajat bisa
hasil uji, yang diperoleh dari analisis sampel mengandung cemaran
yang ditambahkan. Spesifitas ialah ukuran derjat gangguan (atau
tanpa gangguan) dalam analisis campuran sampel yang kompleks.
Penetapan spesifitas metode analisis ditentukan dengan
membandingkan uji sampel yang mengandung cemaran, hasil urai atau
senyawa sejenis. Bila terjadi bias hasil maka bias ini ialah
perbedaan hasil uji antara kedua kelompok sampel tadi.
Bila cemaran atau produk urai tidak atau produk urai tidak
teridentifikasi atau tidak tersedia, spesifitas dapat ditunjukkan
dengan melakukan analisis menggunakan metode yang sedang validasi
terhadap sampel yang mengandung cemaran atau produk urai dan
membandingkan hasil yang diperoleh dengan metode penetapan kadar
tambahan misalnya penetapan kadar dengan kromatografi. Derajat
kesesuaian hasil uji kedua metode ini adalah ukuran spesifitas.
Batas Deteksi
Definisi batas deteksi adalah parameter uji batas. Batas deteksi
adalah konsentrasi rendah analit dalam sampel yang dapat dideteksi,
tetapi tidak perlu secara kuantitatif. Uji batas hanya semata-mata
menunjang bahwa konsentrasi analit adalah di bawah atau di atas
kadar tertentu. Batas deteksi dinyatakan sebagai konsentrasi analit
(misalnya persen, bagian per semilyar) dalam sampel.
Penetapan penentuan batas deteksi suatu metode analisis
bervariasi tergantung ada apakah metode analisis merupakan prosedur
instrumental atau non instrumental. Untuk prosedur instrumental
dapat digunakan beberapa teknik. Ada peneliti yang mengukur signal
terhadap noise dengan membandingkan hasil uji sampel yang
mengandung analit dalam konsentrasi yang diketahui dengan blangko
sampel dan menetapkan konsentrasi analit terendah yang dapat
dideteksi dengan baik. Secara umum rasio signal terhadap noise 2:1
atau 3:1 dapat diterima.
Peneliti lain mengukur besarnya respon latar belakang analisis
dengan melakukan analisis terhadap sejumlah blangko sampel dan
menghitung simpangan baku respon ini. Simpangan baku dikalikan
dengan faktor, biasanya 2 atau 3, memberikan batas deteksi. Batas
deteksi perkiraan ini selanjutnya divalidasi dengan melakukan
beberapa kali analisis dalam jumlah yang cukup terhadap sampel yang
mengandung kadar analit mendeteksi batas deteksi atau sampel yang
dibuat konsentrasinya mendekati batas deteksi.
Untuk metode non instrumental, batas deteksi umumnya ditetapkan
dengan melakukan analisis sampal yang mengandung analit dalam kadar
yang diketahui dan menentukan kadar terendah analit yang dapat
dideteksi dengan baik.
Batas Kuantitasi
Definisi batas kuantitasi adalah parameter penetapan kuantitatif
senyawa dengan kadar rendah dalam matrik sampel zat seperti cemaran
atau hasil urai dalam bahan tambahan pangan atau bahan penolong.
Batas kuantitas dinatakan sebagai konsentrasi analit (misal persen,
bagian persemiliyar) dalam sampel zat.
Penentuan batas kuantitas suatu metode analisis bervariasi
tergantung pada apakah metode analisis merupakan prosedur
instrumental atau non instrumental.
Untuk prosedur instrumental, pendekatan umum adalah dengan
mengukur besarnya respon latar belakang analisis dengan cara
melakukan analis sejumlah blangko sampel dan menghitung simpangan
baku relatif respon tersebut. Simpangan baku yang diperoleh
dikalikan dengan suatu faktor, biasanya 10, memberikan perkiraan
batas kuantitas. Selanjutnya batas kuantitas ini divalidasi dengan
cara melakukan analisis terhadap sejumlah sampel yang mengandung
analit dalam jumlah yang diketahui mendekati batas kuantitasi atau
sampel yang dibuat mengandung analit pada batas kuantitas atau
sampel yang dibuat mengandung analit pada batas kuantitas.
Untuk metode non instrumental, batas kuantitas umumnya
ditetapkan dengan melakukan analisis sampel yang mengandung analit
dalam kadar yang diketahui dan menentukan kadar terendah analit
yang dapat dideteksi dengan presisi dan akurasi yang dapat
diterima.
Linearitas dan Rentang
Definisi linearitas ialah metode analisis adalah kemampuan
(dalam rentang penggunaan) untuk menyebabkan hasil uji yang secara
langsung atau melalui transformasi matematis yang umum dikenal
proporsional terhadap konsentrasi analit dalam sampel dalam rentang
penggunaan metode analisis. Linearitas dinyatakan dengan varians
disekitar slope garis regresi (koefisien korelasi) dihitung
berdasarkan hubungan matematis yang pasti dari hasil uji yang
diperoleh dengan melakukan analisis terhadap sampel yang mengandung
analit dalam jumlah yang berbeda.
Definisi rentang, rentang metode analisis adalah interval antara
dan termasuk batas terendah dan termasuk batas terendah dan batas
tertinggi kadar analit yang telah terbukti dapat ditetapkan dengan
metode analisis dengan presisi, akurasi dan linieritas yang dapat
diterima sesuai dengan tertulis dalam unit yang sama dengan hasil
uji (misalnya persen, bagian persejuta) yang diperoleh dengan
metode analisis.
Penetapan linearitas dan rentang. Linearitas metode analisis
ditetapkan dalam perlakuan matematis perlakuan matematis hasil uji
yang diperoleh dengan melakukan analisis terhadap sampel-sampel
yang mengandung analit sepanjang tentang pengujian yang dinyatakan
pada metode analisis. Perlakuan matematis pada umumnya meliputi
perhitungan analisis regresi dengan hitungan kuadrat terkecil hasil
terhadap konsentrasi analit. Dalam beberapa analisis untuk
memperoleh linearitas hasil uji dari konsentrasi analit dalam
sampel, data hasil uji lalu ditransformasikan secara matematis
sebelum dilakukan analisi regresi.
Rentang metode analisis divalidasi dengan melakukan verifikasi
bahwa metode analisis menghasilkan presisi, akurasi dan linearitas
yang dapat diterima bila digunakan untuk menguji sampel yang
mengandung analit, baik pada konsentrasi tertinggi dan terendah
maupun pada konsentrasi lain dalam rentang pengujian sesuai dengan
penggunaan metode analisis.
Ruggednes
Definisi Ruggedness metode analisis adalah derajat
reproduksibiltas metode analisis yang dilakukan dengan melakukan
analisis sampel yang sama dalam variasi kondisi pengujian normal
seperti laboratorium, analis, instrumen, lot pereaksi, atau
pelaksanaan pengujian, suhu selama pengujian dan hari yang berbeda.
Reproduksibilitas biasanya dinyatakan sebagai kurangnya pengaruh
tabel operasional dan lingkungan penggunaan metode analisis
terhadap hasil uji.
Ruggednes adalah ukuran reproduksibilitas hasil analisis dalam
kondisi normal, kondisi yang diterapkan dari laboratorium ke
laboratorium yang lain dan dari analisis ke analisis.
Penetapan ruggedness adalah analisis ditentukan dengan melakukan
analisis terhadap larutan zat dari sampel yang homogen dalam
laboratorium yang berbeda, analis yang berbeda, menggunakan kondisi
operasional dan lingkungan yang mungkin bervariasi tapi masih dalam
batas parameter yang ditetapkan untuk penetapan kadar.
Ketegaran (Robustness)
Definisi ketegaran metode analisis adalah ukuran kemampuan
metode untuk tetap bertahan terhadap pengaruh kecil tetapi
dilakukan dengan sengaja dengan membuat variasi dalam parameter
metode analisis dan memberikan indikasi kehandalan metode selama
penggunaan normal.
Unsur Data yang diperlukan untuk validasi
Prosedur penetapan kadar dalam monografi KMI sangat bervariasi
dari penetapan analisis yang sangat pasti sampai evaluasi subjektif
dari atribut pengujian. Mempertimbangkan variasi penetapan seperti
ini, sangat logis bila metode pengujian yang berbeda memerlukan
bagan validasi yang berbeda pula.
Kategori I Metode analisis untuk kuantitasi komponen utama bahan
baku, tambahan pangan atau bahan penolong (termasuk pengawet)
Kategori II Metode analisis untuk menentukan cemaran dalam bahan
baku, penetapan karakteristik pangan atau bahan penolong. Dalam
kategori tercakup uji batas dan penetapan secara kuantitatif
Kategori III Metode analisis untuk penentuan karakteristik
performan (misalnya pelarutan, titik lebur).
Untuk masing-masing kategori penetapan, dibutuhkan informasi
analisis yang berbeda. Daftar dari tabel 2 adalah unsur data yang
umumnya diperlukan untuk tiap kategori penetapan.
Tabel 2. unsur data yang diperlukan untuk validasi metode
analisis
Parameter Metode AnalisisKategori
Kategori IKuantitatifUji BatasKategori III
Akurasi ++**
Presisi++-+
Spesifitas-+-*
Batas Deteksi--+*
Batas Kuantitasi++-*
Linieritas++-*
Rentang++**
Ruggednes ++++
Keterangan: + Diperlukan
- Tidak diperlukan
* Mungkin diperlukan, tergantung pada sifat pengujian
Metode dan penetapan dan pengujian umum yang sudah dikenal baik
seperti de titrasi untuk penetapan kadar air, uji identifikasi
harus divalidasi pula untuk dibuktikan akurasinya dan tidak ada
gangguan yang mungkin bila digunakan untuk baru atau bahan
baku.
Validasi suatu metode analisis hanya dapat dilakukan dengan
studi laboratorium: bila itu dokumentasi keberhasilan
penyelesaiannya studi seperti ini merupakan persyaratan dasar untuk
menetapkan apakah metode sesuai dengan tujuan penggunaanya.
Dokumentasi yang memadai harus menyertai setiap proposal metode
analisis kompendial baru atau revisinya.
(Kovar-Auterhoff, 1987)
VI. CARA KERJA
Cara kerja standar
Antalgin
dalam etanol 265 pada 236 nm
230 pada 265 nm
(Kovar-Auterhoff, 1987)
Cara Kerja Praktis:
1. Pembuatan larutan stock 0,1%
Lebih kurang 100,0 mg bahan standar (murni) yang ditimbang
seksama, dimasukkan dalam labu takar 100,0 ml dan ditambahkan
pelarutnya hingga 100,0 ml.
2. Penentuan panjang gelombang max (( max)
Diambil 200 (l larutan stock 0,1% dimasukkan dalam tabu takar 10
ml. ditambahkan pelarutnya sampai 10,0 ml. Ambil larutan tersebut
kedalam kurvet uv kemudian ukur pada daerah panjang gelombang
ultraviolet. Ditentukan ( max.
3. Dibuat seri vol. pengambilan larutan stock
(75, 125, 175, 225, 300), dimasukkan dalam labu takar 10,0 ml
adkan dengan pelarutnya yakni HCl 0,1N 10,0 ml. Ambil larutan
tersebut dalam kuvet uv kemudian ukur pada daerah panjang gelombang
ultraviolet pada panjang gelombang maksimum (max) = 258 nm.
4. Menentukan absorbansi sampel
Lebih kurang 100,0 mg sampel ditimbang dengan seksama.
Dimasukkan dalam labu takar 100,0 ml. ditambahkan pelarut hingga
100 ml. diambil 0,5 ml. dimasukkan dalam labu takar 10,0 ml.
ditambahkan pelarut hingga 10,0 ml. dimasukkan dalam kuvet UV.
Dibaca absorbansi pada ( max yang dapat.
Cara Kerja Skematis
1. Pembuatan larutan stock 0,1 %
Ditimbang seksama 100,0 mg bahan standar (murni) / antalgin
murni
(dimasukkan dalam labu takar 100,0 ml
(ditambahkan HCl 0,1N ad 100,0 ml
2. Penentuan panjang gelombang max (( max)
Diambil 100(l larutan stock 0,1%
(Dimasukkan dalam labu takar 10,0ml
(Ditambahkan HCL ad 10,0 ml
(Larutan diambil dimasukkan dalam kuvet UV
(Diukur pada daerah panjang gelombang UV
(Ditentukan ( max
3. Pengukuran absorbansi larutan standar
Diambil 100(l larutan standar 0,1%
(Dimasukkan dalam labu takar 10,0ml
(Ditambahkan HCL ad 10,0 ml
(Diambil larutan tersebut dalam kuvet
(Diukur absorbansi pada ( max = 258nm
4. Penentuan kurva baku
Diambil larutan stock 75(l, 125(l, 175(l, 225(l, 300(l
(Dimasukkan dalam labu takar 10,0 ml
(Ditambahkan HCL ad 10,0 ml
(Dibaca Absorbansi pada ( max yang didapat = 258 nm
5. Penentuan kurva baku
= 100,0 mg sampel ditimbang seksama
(Dimasukkan dalam labu takar 100,0ml
(Ditambahkan HCL ad 100,0 ml
(Diambil 100(l ( dimasukkan dalam labu takar 10,0 ml
(ditambahkan HCL ad 10,0 ml
(dimasukkan dalam kuvet UV
(Dibaca Absorbansi pada ( max yang didapat = 258 nm
Untuk A = kadar tanpa penambahan zat aktif
B = kadar dengan penambahan zat aktif
PERHITUNGAN AKURASI
1. Kelompok dengan penambahan zat aktif 80%
% zat aktif yang ditambahkan
2. Kelompok dengan penambahan zat aktif 100%
% zat aktif yang ditambahkan
3. Kelompok dengan penambahan zat aktif 120%
% zat aktif yang ditambahkan
1. SampelDihitung keseragaman bobot, gerus ad halus
(Sampel Antalgin ditimbang seksama 120 mg
(Dimasukkan dalam labu takar 100 ml di ad-kan dengan HCL ad 100
ml
(Dari campuran di atas ambil 100(l, ditambahkan dengan HCL ad 10
ml dalam labu takar 10 ml
(Dibaca Absorbansinya pada Spektrofotometri UV pada ( max 258
nm
(Dicari kadarnya dari persamaan kurva baku yang didapat
(Dihitung % recover-nya
2. Sampel + 80% zat aktif
Zat murni antalgin ditimbang 120,0 mg dimasukkan dalam labu
takar 100,0 ml + sampel zat aktif atau dari larutan stock
80%-nya(ditambahkan HCL ad larut (bila tidak larut disaring)
(Dimasukkan dalam labu takar 100 ml di ad HCL ad 100 ml
(diambil 100(l, ad HCL ad 10 ml pada labu takar 10 ml
(Dibaca Absorbansinya pada pada ( max 258 nm
(Dicari kadarnya dari persamaan kurva baku yang didapat
(Dihitung % recoverynya
3. Sampel + 100% zat aktif
Zat murni antalgin ditimbang 120,0 mg dimasukkan dalam labu
takar 100,0 ml + sampel zat aktif atau diambil dari larutan stok
100%-nya(Ditambahkan HCL ad larut (bila tidak larut disaring)
(Dimasukkan dalam labu takar 100 ml di ad HCL ad 100 ml
(Diambil 100L ad HCL ad 10 ml pada labu takar 10 ml
(Dibaca Absorbansinya pada pada ( max 258 nm
(Dicari kadarnya dari persamaan kurva baku yang didapat
(Dihitung % recoverynya
4. Sampel +120% zat aktif
Zat murni antalgin ditimbang 120,0 mg dimasukkan dalam labu
takar 100,0 ml + sampel zat aktif atau dari larutan stock
120%-nya(ditambahkan HCL ad larut (bila tidak larut disaring)
(Dimasukkan dalam labu takar 100 ml di ad HCL ad 100 ml
(Diambil 100(l, ad HCL ad 10 ml pada labu takar 10 ml
(Dibaca Absorbansinya pada pada ( max 258 nm
(Dicari kadarnya dari persamaan kurva baku yang didapat
(Dihitung % recoverinya
RIPITABILITAS
Keseragaman bobot dihitung, gerus ad halus
(Sampel Antalgin ditimbang seksama 120 mg
(di replikasi 7X
(Masing-masing dimasukkan dalam labu takar 100,0 ml
(Ditambahkan HCL ad 100,0 ml ad larut (bila tidak larut
disaring)
(Diambil 150(l, dimasukkan dalam labu takar 10 ml dan
ditambahkan HCL 10 ml
(Dibaca absorbansinya pada ( max (258 nm)
(Dihitung RSD-nya dengan kriteria keberterimaan RSD < 2%
LINIERITAS
Ditimbang antalgiin dengan range kadar 70%-130% dengan seksama
yakni: 70,01 mg, 80,11 mg, 90,13 mg, 100,52 mg, 110,16 mg, 120,17
mg, 130,18 mg
(Diimasukkan dalam labu takar 100,0 ml dan ditambakan HCL ad 10
ml
(Diambil 100(l, untuk range kadar 70%-130% dimasukkan dalam labu
takar 10 ml dan ditambahkan ad 10ml, dikocok hingga homogen
(Dibaca absorbansinya dan dicari kadarnya dari persamaan kurva
baku yang didapat
(Dicari R dengan Regresi Linier kadar/berat penimbangan vs
Absorbansi
(Kriteria keberterimaan adalah jika r> 0,98
VII. PEMBAHASAN
Percobaan kali ini bertujuan agar mahasiswa mampu mengetahui dan
menetapkan kadar antalgin dalam sediaan tablet dengan metode
analisis spektrofotometri UV serta mampu melakukan validasi metode
analisis spektrofotometri UV pada antalgin dalam sediaan tablet
dengan menguji secara akurasi, ripitabilitas dan linieritas.
Pada praktikum kali ini bahan obat yang digunakan adalah tablet
antalgin yang sering digunakan sebagai analgesik atau antipiretik.
Tablet adalah sediaan padat mengandung bahan obat dengan atau tanpa
bahan pengisi. (FI IV). Tablet metampiron atau antalgin mengandung
metampiron, C13HI6N3NaO4S.H2O, tidak kurang dari 95,0% dan tidak
lebih dari 105,0% dari jumlah yang tidak tertera dalam etiket (FI
IV).
Pada percobaan ini digunakan metode spektrofotometri UV karena
dilihat dari strukturnya, antalgin memiliki gugus kromofor sehingga
kadarnya bisa ditetapkan dengan spektrofotometri UV. Gugus kromofor
ini adalah gugus atom yang bertanggung jawab pada penyerapan cahaya
yang merupakan gugus tidak jenuh kovalen yang dapat menyerap
radiasi dalam daerah UV-VIS. Gugus kromofor disini berupa benzen
yang mempunyai ikatan rangkap terkonjungsi. Spektrofotometri UV
adalah teknik analisis yang menggunakan sumber radiasi
elektromagnetik ultraviolet dan sinar tampak dengan instrument
spektrofotometer. Sumber radiasi elektromagnetik ultraviolet
190-380 nm dan sinar tampak 380-780 nm. Spektrofotometri UV
melibatkan energi elektronik yang cukup besar pada molekul yang
dianalisis sehingga lebih banyak dipakai untuk analisis kuantitatif
dibandingkan kualitatif.
Pada analisis spektrofotometri umumnya menentukan Operating Time
(OT) terlebih dahulu dengan tujuan untuk memberikan reaksi yang
sempurna antar pereakasi warna yang digunakan dengan obat sehingga
diperoleh harga absorbansi yang stabil. Tetapi pada penetapan kadar
antalgin hal tersebut tidak dilakukan karena antalgin tidak
direaksikan dengan pereaksi warna hanya dilarutkan pada pelarut
yang sesuai (salah satu syarat pembacaan absorbansi pada
spekttofotometer UV).
Hal pertama yang dilakukan adalah membuat larutan stock 0,1%.
Dengan cara menimbang sampel antalgin 100 mg dimasukkan dalam labu
takar 100 ml dan dilarutkan dengan HCL ad 100 ml. Sebelum
dimasukkan dalam labu takar, labu takar terlebih dahulu dicuci
dengan aquadest dan sedikit HCL, hal ini dimaksudkan agar pada
penentuan ( max absorbansinya tepat sebab tidak ada zat lain yang
tercampur. HCL disini berfungsi sebagai pelarut dari antalgin
karena antalgin hanya dapat larut dalam pelarut organik. Tetapi
dalam percobaan antalgin tidak dapat larut sempurna dalam HCL
sehingga perlu dilakukan penyaringan sebab adanya antalgin yang
tidak larut akan mempengaruhi pada pembacaan absorbansi.
Setelah itu ditentukan ( maxnya dengan mengambil 200(l dari
larutan stok 0.1% yang telah dibuat kemudian ditambahkan HCL ad 10
ml dalam labu takar 10 ml. dibaca Absorbansinya pada
spektrofotometri UV pada berbagai panjang gelombang 200-300 nm.
Kemudian diambil rentang range absorbansi (0.2-0.8). Panjang
gelombang maksimum adalah panjang gelombang yang memberikan serapan
terbesar disamping itu pada panjang gelombang maksimum
absorpitifitas molarnya stabil dan menunjukkan kurva kalibrasi
linier. Kenapa harus dilakukan pembacaan pada ( max dikarenakan
pada ( max kepekaannya tinggi dan pada ( max penyimpangan kadar
yang kecil bisa terdeteksi dengan baik. Pada pembacaan ( max
dilakukan terlebih dahulu pembacaan blangko, hal ini dimaksudkan
untuk mengkalibrasi alat untuk mengurangi kesalahan. Blangko hanya
terdiri pelarut saja. Perlu diperhatikan pada pemegangan kuvet
harus benar karena akan mempengaruhi pembacaan absorbansi pada
alat. Dari hasil percobaan didapat ( max sebesar 258 nm. Hal ini
sesuai dengan teori karena Antalgin memiliki dalam Aqueos acid 258
nm pada absorbansi 266 nm.
Setelah diperoleh ( max, dilakukan pembuatan seri kadar dari
larutan stok. Diambil larutan stock 150(l, 175(l, 200(l, 225(l,
250(l ,275(l dan 300(l kemudian dilarutkan dengan etanol ad 10 ml.
bila tidak larut disaring dengan kertas saring, kemudian dibaca
absorbansinya pada ( max (258nm). Pembuatan seri kadar ini
digunakan untuk membuat kurva baku yang nantinya digunakan untuk
menghitung kadar sampel. Kurva baku dibuat dengan membuat persamaan
regresi linier dari data konsentrasi masing-masing seri kadar VS
absorbansinya dengan persaman kurva baku y = 304,602 x + (-0,1910).
Persamaan kurva baku ini dibutuhkan untuk menghitung konsentrasi
pada saat uji parameter validasi seperti akurasi, presisi dan
liniearitas.
Dari persamaan kurva baku tersebut ditentukan absorbansinya
Sampel (tablet altalgin) dengan cara menimbang sejumlah antalgin
dengan seksama 100,0 mg kemudian dimasukkan dalam labu takar 100 ml
dan ditambahkan HCL ad 100 ml dan kocok hingga homogen. Dari
larutan diambil 200(l ml kemudian di ad-kan dengan HCL ad 10 ml
dalam labu takar 10 ml. Setelah itu dibaca Absorbansinya pada
spektrofotometri UV pada ( max 258 nm. Setelah didapat absorbansi
kemudian dihitung kadarnya.
Mungkin hasil yang di dapat tidak sesuai dengan teoritis
dikarenakan kesalahan dari praktikan pada saat praktikum dan dari
pengalaman praktikan yang kurang.
VIII. KESIMPULAN
Percobaan bertujuan untuk menetapkan kadar Antalgin dengan
menggunakan spektrofotometri UV mahasiswa mampu melakukan validasi
metode analisis, mahasiswa mampu menganalisis bagaimana penetapan
kadar suatu obat spektrometri UV
Parameter validasi yang digunakan adalah akurasi, presisi, dan
linieritas
Akurasi merupakan keterdekatan nilai pengukuran dengan nilai
sebenarnya dari analit dalam sampel. Akurasi sering dinyatakan
sebagai persen perolehan kembali (% recovery) atau error
Ripitabilitas merupakan sejumlah pencaran hasil yang diperoleh
dari analisis berulangkali pada suatu sampel homogen
Linieritas adalah kemampuan (dalam rentang penggunaan) untuk
mendapatkan hasil uji yang secara langsaung proporsional dengan
konsentrasi (jumlah) analit didalam sampel
Presisi dinyatakan dengan koefisiensi variasi (Coefficient of
Variation = CV) atau simpangan baku relatif (Relative Standard
Deviation = RSD), CV atau RSD < 2%.
Liniearitas yang didapat adalah R= 0,861 hal ini tidak sesuai
dengan nilai teoritis yaitu R> 0,98
Hasil uji parameter
NoParameterHasilKeterangan
1Akurasi dan recovery
a. Penambahan zat aktif 80%
b. Penambahan zat aktif 100%
c. Penambahan zat aktif 120%a. RSD = 7.06 %
% Recovery = 1.63 %
b. RSD = 70.73%
% Recovery = 19.17%
c. RSD = 39.002%
% Recovery = 25.46%Tidak diterima
Tidak diterima
Tidak diterima
Tidak diterima
Tidak diterima
Tidak diterima
2.RipitabilitasRSD = 8.36 %Tidak diterima
3.Liniearitas R1 = 0.9845
R2 = 0.796diterima
Tidak diterima
IX. DAFTAR PUSTAKAAnonim, 1979. Farmakope Indonesia Ed. II,
Depkes RI: Jakarta
Anonim, 2006. Petunjuk Praktikum Instrumental, Fakultas Farmasi
UMS: Surakarta
Anonim, 2007. Petunjuk Praktikum Analisis Farmasi, Fakultas
Farmasi UMS: Surakarta
Kover-Auterhoff, 1987. Identifikasi Obat. Fakultas Farmasi: ITB:
Bandung
Skog, D.A. 1985. Principles Of Instrumental Analysis, 3rd Ed.,
Sauders College Publ., Philadelphia.
Sudjadi dan Rohman, A. 2004. Analisis Obat Dan Makanan. Fakultas
Farmasi. UGM: Yogyakarta.Nas03 CH2 - N
N
C6H5
N
N
O
CH3
CH3
CH3
H2O
C10H16N3NaO4S.H2O
BIM = 351,32
Nas03 CH2 - N
N
C6H5
N
N
O
CH3
CH3
CH3
H2O
C10H16N3NaO4S.H2O
BIM = 351,32
_1306118049.unknown
_1306118050.unknown
_1306118047.unknown
_1306118048.unknown
_1306118045.unknown
_1306118046.unknown
_1306118044.unknown
