Laporan PraktikumPengaruh ph dan temperatur terhadap aktivitas
enzim amilase
nAMA : KHALIL MUBARAKnim : h311 12 021hARI/TGL PERC.: SENIN/ 20
OKTOBER 2014KELOMPOK : i (SATU)ASISTEN : MUH. ADE ARTASASTA
LABORATORIUM BIOKIMIAJURUSAN KIMIAFAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU
PENGETAHUAN ALAMUNIVERSITAS HASANUDDINMAKASSAR2014
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar BelakangDalam menjalani kehidupannya, manusia bekerja
membutuhkanenergi. Namun terkadang proses pembentukan energi ini
lambat dalam bekerja, maka dari itu dibutuhkan biokatalisator untuk
mempercepat pembentukan energi. Suatu reaksi kimia dapat terjadi
dalam tubuh sangat lambat, namun bila dalam reaksi tersebut
ditambahkan enzim maka reaksi berjalan dengan cepat (Sumardjo,
2008).Enzim dapat bekerja secaraoptimalapabila dalam keadaan atau
kondisi asam ataupun basa.Dan untuk mengetahui pengaruh pH terhadap
enzim amilase, maka kami melakukan praktikum pengaruh pH terhadap
aktifitas enzim.Dimana pH digunakan untuk mengetahui apakah larutan
tersebut dalam keadaan asam atau basa.Dan apakah dalam keadaan asam
atau dalam keadaan basa enzim tersebut dapat bekerja secara optimal
ataukah sebaliknya (Sumardjo, 2008).Enzim mempunyai spesifitas yang
sangat tinggi, baik terhadap reaktan (substrat) maupun jenis
reaktan yang dikatalisiskan. Pada umumnya, suatu enzim hanya
mengatalisis satu jenis reaksi dan bekerja pada substrat
tertentu.Kemudian, enzim dapat meningkatkan laju reaksi yang luar
biasa tanpa pembentukan produk samping dan molekul berfungsi dalam
larutan encer pada keadaan biasa (fisiologis) tekanan, suhu, dan pH
normal. Hanya sedikit katalisator nonbiologi yang dilengkapi
sifat-sifat demikian (Sumardjo, 2008).Berdasarkan uraian di atas,
maka akan dilakukan percobaan pengaruh pH dan temperatur terhadap
aktivitas enzim amilase, dengan menggunakan amilum 1 % sebagai
substrat.1.2 Maksud dan Tujuan Percobaan1.2.1 Maksud
PercobaanMaksud dari percobaan ini adalah untuk mengetahui dan
mempelajari mengenai pengaruh pH dan temperatur terhadap aktivitas
enzim amilase.
1.2.2 Tujuan PercobaanTujuan dari percobaan ini antara lain :1.
Menentukan pH optimum untuk aktivitas enzim amilase, di mana enzim
ini mengkatalisis pati menjadi glukosa.2. Menentukan temperatur
otimum untuk aktivitas enzim amilase, di mana enzim ini
mengkatalisis pati menjadi glukosa.
1.3 Prinsip Percobaan1.3.1 Pengaruh pH terhadap Aktivitas Enzim
AmilaseMenentukan aktivitas enzim amilase berdasarkan waktu
penguraian pati menjadi glukosa pada berbagai pH tertentu dengan
penambahan iodida sebagai indikator yang memberi warna biru dan
akan berubah menjadi bening.
1.3.2 Pengaruh Temperatur terhadap Aktivitas Enzim
AmilaseMenentukan aktivitas enzim amilase berdasarkan waktu
penguraian pati menjadi glukosa pada berbagai temperatur kemudian
diuji dengan iodida pada interval waktu tertentu hingga warna biru
yang terbentuk berubah menjadi bening.
BAB IITINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tinjuan Umum SalivaSaliva adalah suatu cairan oral yang
kompleks yang terdiri atas campuran sekresi dari kelenjar ludah
besar dan kecil yang ada pada mukosa oral. Saliva yang terbentuk di
rongga mulut, sekitar sembilan puluh persensennya dihasilkan oleh
kelenjar submaksiler dan kelenjar parotis, 5 persen oleh kelenjar
sublingual, dan 5 persen lagi oleh kelenjar-kelenjar ludah yang
kecil. Sebagian besar saliva ini dihasilkan pada saat makan sebagai
reaksi atas rangsangan berupa pengecapan dan pengunyahan makanan.
Pada saat tidak makan, walaupun aliran saliva ini sangat sedikit,
saliva merupakan hal yang sangat penting (Kidd dan Bechal,
1991).Saliva berfungsi melindungi permukaan rongga mulut (mukosa,
gigi-geligi) melalui pembersihan mulut secara alamiah, kapasitas
dapar, mengadakan remineralisasi, pembentukan acquired pellicle,
aktivitas anti-bakteri dan antivirus (tiosianat, hidrogen
peroksida, lisozim, laktoperoksida, laktoferin, imunoglobulin)
(Kidd dan Bechal, 1991).
2.2 Tinjauan Umum EnzimEnzim adalah polymer biologi yang
mengkatalis reaksi kimia yang terjadi dalam tubuh. Keberadaan dan
pemeliharaan kumpulan enzim yang sempurna dan seimbang penting
untuk mengurai nutrisi untuk menyuplai energi dan membangun berkas
kimia. Berkas-berkas kimia tersebut kemuadian disususn menjasi
protein, DNA, membran sel, dan jaringan. Enzim-enzim yang
mengkatalisis perubahan dari satu atau lebih senyawa (substrat)
menjadi satu atau lebih senyawa yang berbeda (produk) meningkatkan
kecepatan reaksi yang tidak katalis yang sama oleh faktor minimal
106. Seperti semua katalis, enzim tidak dikonsumsi atau permanen
diubah sebagai akibat dari partisipasi mereka dalam reaksi (Murray
dkk., 2003). Enzim dikenal untuk pertama kalinya sebagai protein
oleh summer pada tahun 1926 yang telah berhasil mengisolasi urease
dari kata pedang (jack bean). Urease adalah enzim yang dapat
menguraikan urea menjado CO2 dan NH3. Beberapa tahun kemudian
Northrop dan Kunitz dapat mengisolasi pepsin, tripsin, kimotripsin.
Selanjutnya makin banyak enzim yang telah dapat diisolasi dan telah
dibuktikan bahwa enzim tersebut ialah suatu protein (Poedjiadi dan
Supriyanti, 1994). Enzim adalah suatu kelompok protein yang
menjalankan dan mengatur perubahan-perubahan kimia dalam sistem
biologi. Zat ini dihasilkan oleh organ-organ hewan dan tanaman,
yang secara katalitik menjalankan berbagai reaksi, seperti
pemecahan hidrolisis, oksidasi, reduksi, isomerasi, adisi, transfer
radikal dan kadang-kadang pemutusan rantai karbon. Kebanyakan enzim
yang terdapat di dalam alat-alat atau organ organisme hidup berupa
larutan koloidal dalam cairan tubuh, seperti air ludah, darah,
cairan lambung dan cairan pancreas. Enzim terdapat di bagian dalam
sel. Hal ini terikat erat dengan protoplasma. Enzim juga ada di
dalam mitokondria dan ribosom (Sumardjo, 2008).Kemampuan katalis
enzim bergantung pada integritas konformasi protein asli mereka.
Jika suatu enzim terdenaturasi atau terpisah menjadi subunitnya,
kemampuan katalisnya akan hilang. Jika enzim terurai menjadi
komponen asam amino, kemampuan katalisnya akan rusak. Seperti
protein lainnya, enzim memiliki berat molekul berkisar antara
12.000 sampai 1 juta. Beberapa enzim tidak memerlukan kelompok
kimia untuk kegiatan selain residu asam amino mereka, sedangkan
yang lainnnya membutuhkan komponen kimia tambahan yang disebut
kofaktor, baik itu satu atau lebih ion anorganik seperti Fe2+,
Mg2+, Mn2+, atau Zn2+, atau suatu kompleks organik atau molekul
logam organik yang disebut koenzim (Nelson dan Cox, 2005).Enzim
merupakan suatu protein yang bermolekul besar. Substrat adalah
senyawa yang dipengaruhi oleh enzim yang bermolekul relatif lebih
kecil. Perbedaan molekul yang sangat mencolok ini memberikan kesan
bahwa hanya sebagian molekul enzim yang langsung berkontak atau
terlibat dalam pembentukan kompleks enzim substrat. Bagian penting
ini disebut sisi aktif, tempat aktif atau lokasi aktif yang diduga
sebagai tempat substrat menempel pada enzim dan terjadinya reaksi
kimia (Sumardjo, 2008).
Gambar 1. Lokasi aktif enzim dan substratPrinsip kerja enzim
berlangsung dalam dua tahap. Pada tahap pertama, enzim (E)
bergabung dengan substrat (S) membentuk kompleks enzim substrat
(E-S). Tahap kedua, kompleks enzim-substrat terurai menjadi produk
(zat hasil) dan enzim bebas (Sumardjo, 2008).E+SE SE+SE + A + B +
CPada reaksi diatas, hasil peruraian (A + B + C dan seterusnya)
atau produk tidak terikat oleh enzim sehingga enzim dapat
memengaruhi substrat yang lain. Dua model yang disusulkan pada
kegiatan enzim dalam memengaruhi substrat sehingga diperoleh zat
hasil, yaitu model kunci dan gembok yang ternyata lebih banyak
disetujui, serta model cocok imbasan. Pada model kunci dan gembok,
substrat atau bagian substrat harus memenuhi bentuk yang sangat
tepat dengan sisi aktif enzim. Substrat ditarik oleh sisi aktif
enzim yang cocok untuk substrat tertentu sehingga terbentuk
kompleks enzim substrat (Sumardjo, 2008).Enzim dinamai dengan
menambahkan akhiran -ase pada nama substrat meraka atau pada kata
yang mendeskripsikan aktivitas mereka. Secara internasional, enzim
dibagi menjadi 6 kelas, masing-masing memiliki sub-kelas
berdasarkan atas tipe reaksi katalisnya. Kalasifikasi enzim
ditunjukkan dalam tabel berikut (Nelson dan Cox, 2005):No.KelasTipe
reaksi katalis
1OksidareduktaseTransfer elektron (ion hidrat atau atom H)
2TransferaseReaksi transfer gugus kimia
3HidrolaseReaksi hidrolisis (transfer gugus fungsi ke air)
4LiasePenambahan ikatan rangkap, atau pembentukan ikatan rangkap
dengan memutuskan beberapa ikatan
5IsomerasePerpindahan gugus di dalam molekul untuk menghasilkan
bentuk isomer
6LigasePembentukan ikatan C-C, C-S, C-O, dan C-N dengan reaksi
pengembunan.
Tabel 1. Klasifikasi enzim internasional Aktivitas enzim
merupakan salah satu fungsi yang paling menonjol dalam protein.
Enzim mengendalikan dan mengkatalisasikan aktivitas kimia dari
suatu sel hidup. Daya kerja enzimbersifat spesifik dan semua
perombakan zat makanan dalam organisme hanya dapat terjadi jika di
dalamnya terdapat suatu enzim. Enzim umumnya larut dalam air, oleh
karena itu banyak enzimtidak ekonomis untuk digunakan
dalampengoperasian tipe batch skala besar. Selain itu, enzim juga
sulit dipisahkan dari substrat dan produk serta sulit digunakan
secara berulang kali. Tetapi dalam tahun-tahun belakangan ini
berbagai teknik telah ditemukan untuk memperbaiki kerja enzim,
yaitu dengan cara mengikatkan enzim pada bahan-bahan yang tidak
larut dalam air, sehingga bahan-bahan tersebut dapat dipisahkan
dari produk dengan mudah. Hal itu memungkinkan penggunaan kembali
bahan-bahan tak larut yang mengandung enzim tersebut atau disebut
juga amobilisasi enzim (Laila dkk., 2007).
2.2.1 Enzim HidrolaseEnzim hidrolase merupakan kelompok enzim
yang sangat penting dalam pengolahan pangan, yaitu enzim yang
mengkatalisis reaksi hidrolisis suatu subtrat atau pemecahan
subtrat dengan pertolongan molekul air. Enzim-enzim yang termasuk
dalam golongan ini diantaranya adalah amilase, invertase, selulase
dan sebagainya (Sumardjo, 2008).Enzim hidrolase adalah enzim yang
mengatalisasi hidrolisis substrat atau enzim yang memecah substrat
dengan bantuan air. Enzim hidrolase dibagi atas kelompok kecil
berdasarkan substratnya yaitu (Sumardjo, 2008):1. Karbohidrase,
yaitu enzim yang menguraikan golongan karbohidrat.2. Esterase,
yaitu enzim-enzim yang memecah golongan ester.3. Proteinase atau
protase, yaitu enzim-enzim yang mengurai holongan protein.
2.2.2 Enzim Amilase Amilase merupakan salah satu jenis enzim
yang sering digunakan. Amilase dapat dihasilkan dari bakteri maupun
cendawan, namun amilase yang dihasilkan dari cendawan cenderung
tidak tahan terhadap suhu tinggi. Untuk mendapatkan -amilase yang
memiliki sifat termostabil dapat diperoleh dari mikroorganisme
termofilik (Hastuti dkk., 2012).Amilase adalah biokatalis yang
paling penting karena kemampuan mereka untuk memanfaatkan spektrum
yang luas dari substrat, stabilitasnya tinggi terhadap suhu
ekstrim, pH dan sebagainya. Di antara enzim mikroba, tanaman dan
hewan, amilase mikroba memiliki aplikasi besar dalam berbagai
bidang. Secara keseluruhan, persiapan amilase bakteri yang berasal
dari jamur lebih diutamakan untuk pekerjaan ini karena stabilitas
panas mereka yang lebih besar (Amutha dan Priya, 2011).Amilase
terdiri atas 3 jenis yaitu -amilase, -amilase dan glukoamilase.
Enzim -amilase bekerja dengan memutus ikatan -1,4-glikosidik pada
rantai lurus amilum sehingga menghasilkan glukosa dalam konfigurasi
alpha, maltosa dan dekstrin. Enzim -amilase bekerja dengan memecah
ikatan -1,4 glikosidik dan tidak mampu melewati ikatan percabangan
-1,6 glikosidik sehingga menghasilkan maltosa dalam konfigurasi
beta. Enzim glukoamilase bekerja dengan menghidrolisis ikatan -1,4
dan -1,6 glikosidik dari gugus non pereduksi sehingga menghasilkan
D-glukosa (Jayanti, 2011).Cara Kerja -amilase melalui dua tahap
yaitu pertama degradasi amilosa menjadi maltosa dan maltotriosa
yang terjadi secara acak. Degradasi ini terjadi sangat capat dan
diikuti dengan menurunya viskositas dengan cepat. Tahap kedua
relatif lambat yaitu pembentukan glukosa dan maltosa sebagai hasil
akhir secara tidak acak (Jayanti, 2011).Menurut Sebayang (2005),
enzim amilase bekerja optimum pada pH 6,0. pH berhubungan dengan
struktur enzim yang terdiri dari asam-asam amino. Perubahan pH
dalam suatu larutan menunjukkan perubahan-perubahan jumlah ion H+
yang ada dalam larutan. Jumlah ion yang ada akan mempengaruhi
struktur enzim yang terdiri dari asam-asam amino terutama pada
ikatan hidrogennya. Sedangkan pada pH optimum jumlah ion H+ tidak
mempengaruhi konformasi enzim sehingga konformasi substrat sama
dengan konformasi enzim. Hal ini menyebabkan interaksi antara enzim
dan substrat meningkat, sedangkan pada pH optimum aktivitas enzim
paling tinggi.Berdasarkan penelitian Sebayang (2005), suhu optimum
enzim amilase adalah pada 60 oC. Sebelum mencapai suhu optimum
aktivitas enzim kecil, hal ini disebabkan karena pada suhu dibawah
suhu optimum energi aktivasi yang diperlukan enzim untuk
mengkatalis reaksi hidrolisis substrat amilum tidak cukup sehingga
enzim tidak dapat bekerja dengan baik. Kenaikan suhu menyebabkan
aktivitas enzim meningkat. Setelah mencapai suhu optimum, aktivitas
enzim akan menurun. Terjadinya penurunan aktivitas disebabkan
karena pada suhu tinggi struktur tertier enzim yang terdiri dari
ikatan bukan kovalen atau elektrostatik, ikatan hidrogen, ikatan
disulfida dan ikatan hidrofobik bila menyerap energi tinggi akan
terjadi pemutusan dan mengakibatkan terjadinya pembukaan struktur
tertier dan kuarter yang menyebabkan konformasi enzim berubah dan
menyebabkan aktivitasnya menurun.Pada aktivitas enzim, kofaktor
logam seperti Ba2+, Ca2+, Co2+, K+, Ni2+, Ag2+, Mn2+, Hg2+, Li2+,
Cu2+, Mg2+, dan Pb2+ sangat penting karena kehadiran atau
ketidakhadiran mereka mempengaruhi aktivitas enzim. Kehadiran ion
atom tertentu bersama dengan kandungan makanan dapat menghambat
atau mempercepat aktivitas enzim amilase dan kecepatan pencernaan.
Berdasarkan beberapa penelitian, Mg2+ dan Mn2+ menyebabkan
peningkatan atau penurunan aktivasi enzim amilase dari sumber yang
berbeda (Dutta dkk., 2005).2.2.3 Manfaat Enzim AmilaseEnzim
-amilase mampu menghidrolisis pati dan glikogen melalui pemotongan
internal ikatan -1,4-glikosida secara acak, menghasilkan
oligosakarida seperti maltosa, glukosa, dan -dekstrin. Enzim yang
mempunyai peranan penting pada penggunaan polisakarida ini banyak
dikandung berbagai bakteri, fungi, tanaman, dan hewan. -amilase
merupakan enzim yang penting dan dimanfaatkan secara luas dalam
dunia industri seperti industri pangan, fermentasi, tekstil,
kertas, obat-obatan, dan gula (Lestari dkk., 2011). Dalam industri
pangan, enzim amilase berfungsi menyediakan gula hidrolisis pati
sehingga dapat dimanfaatkan untuk produksi sirup glukosa ataupun
sirup fruktosa yang mempunyai tingkat kemanisan tinggi, pembuatan
roti, dan makanan bayi. Di industri tekstil enzim amilase digunakan
untuk membantu dalam proses penghilangan pati, yang digunakan
sebagai perekat untuk melindungi benang saat ditenun agar lentur.
Enzim amilase adalah enzim ekstrasel yang mengkatalisis reaksi
pemotongan ikatan glukosidik 1,4 pada bagian dalam molekul substrat
(endoenzim). Secara komersial enzim ini dihasilkan baik oleh
bakteri seperti dari genus Bacillus, maupun kapang dari genus
Aspergillus dan Rhizopus (Setiasih dkk., 2006).
2.3 Tinjauan Umum Amilum Amilum yang dalam kehidupan sehari-hari
dikenal sebagai zat pati atau zat tepung, yang merupakan suatu
glukosan dan cadangan persediaan makanan bagi tanaman. Dalam
tanaman, amilum terutama terdapat pada akar, umbi, atau biji
tanaman. Poliosa ini merupakan sumber kalori yang sangat penting
untuk tubuh, karena sebagian besar karbohidrat dalam makanan
terdapat dalam bentuk amilum. Rasa amilum tidak manis dan terbentuk
pada proses asimilasi dalam tanaman. Tanaman yang mengandung amilum
antara lain umbi kayu, kentang, sagu, dan jenis gandum (Sumardjo,
2008).Pati atau amilum merupakan polimer yang tersusun dari unit
-D-glukosa yang dihubungkan oleh ikatan -1,4 glikosidik dan ikatan
-1,6 glikosidik pada percabangan rantainya. Secara alami, pati
merupakan campuran dati amilosa dan amilopektin yang merupakan
suatu polimer dari -D-glukosa (Jayanti, 2011).Amilosa merupakan
suatu polimer rantai tunggal tidak bercabang, terbentuk 500-20.00
monomer -D-glukosa yang dihubungkan oleh ikatan -1,4 glikosidik.
Amilopektin merupakan suatu polimer rantai bercabang, terbentuk
dari 100.000 monomer glukosa yang dihubungkan oleh ikatan -1,4
glikosidik pada rantai utama dan ikatan -1,6 glikosidik pada
percabangannya (Jayanti, 2011).
Gambar 2. Stuktur Amilum Hidrolisis amilum oleh pengaruh enzim
amilase menjadi molekul-molekul matosa tidak berjalan spontan,
tetapi bertahap dengan hasil-antara berupa dekstrin. Tiga buah
dekstrin yang penting sebagai hasil-antara hidrolisis amilum adalah
amilodekstrin, yang dengan iodium memberikan warna ungu;
eritrodekstrin, yang dengan iodium memberikan warna merah; dan
akrodekstrin, yang dengan iodium tidak memberikan warna. Tidak
seluruh amilum dapat diubah menjadi maltosa oleh pengaruh enzim
amilase (Sumardjo, 2008).Amilum dapat dihirolisis sempurna dengan
menggunakan asam sehingga menghasilkan glukosa. Hidrolisis juga
dapat dilakukan dengan bantuan enzim amilase. Dalam ludah cairan
yang dikeluarkan oleh pankreas terdapat amilase yang bekerja
terhadap amilum yang terdapat dalam makanan kita. Oleh enzim
amilase, amilum diubah menjadi maltosa dalam bentuk maltosa
(Poedjiadi dan Supriyanti, 1994).
BAB IIIMETODE PERCOBAAN3. 1 Bahan PercobaanBahan-bahan yang
digunakan pada percobaan ini adalah larutan pati (amilum) 1%,
saliva (enzim amilase), buffer fosfat pH 8,0; 7,4; 6,8; 6,2; 5,4;
5,0, NaCl 0,1 M, asam asetat, iodin 0,01 M, akuades, tissue roll
dan es batu.
3. 2 Alat PercobaanAdapun alat-alat yang digunakan dalam
percobaan ini diantaranya ialah tabung reaksi, rak tabung reaksi,
gelas kimia, hot plate, inkubator, pipet tetes, pipet skala 1 mL,
plat tetes, sikat tabung, dan gegep.
3. 3 Prosedur3. 3. 1 Penentuan Pengaruh pH Terhadap Kerja
EnzimSaliva dienecerkan dengan akuades, kemudian sebanyak 6 buah
tabung reaksi masing-masing diisi dengan 10 mL larutan buffer
berturut-turut pH 8,0; 7,4; 6,8; 6,2; 5,4; 5,0. Kemudian kedalam
larutan buffer ini ditambahkan 5 mL larutan pati 1%, 2 mL NaCl 0,1
M dan 2 mL saliva encer. Tabung yang berisi larutan pH 8,0 dan pH
7,4 diasamkan dengan 1 mL asam asetat, untuk mengurangi
kebasaannya. Selanjutnya semua tabung ditetesi 1 mL iodin dan
dimasukkan ke dalam oven bersuhu 38 oC setiap interval 5 menit
dikeluarkan untuk pengambilan data.
3. 3. 1 Penentuan Pengaruh Temperatur Terhadap Kerja
EnzimSebanyak 4 buah tabung reaksi masing-masing diisi dengan 2,5
mL larutan pati (amilum) 1%. Kemudian masing-masing diisi dengan 1
mL saliva encer. Tabung (I) dimasukkan dalam air es (0 oC). Tabung
(II) dibiarkan saja menempati suhu kamar (25 oC). Tabung (III)
dimasukkan dalam inkubator (38 oC). Tabung (IV) dimasukkan dalam
penangas air (100 oC). Setiap 5 menit larutan dipipet dan
diteteskan pada plat tetes yang telah berisi iodin sampai larutan
menjadi bening.
BAB IVHASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Pengamatan4.1. 1 Pengaruh pH Terhadap Aktivitas Enzim
Amilase pH sangat mempengaruhi aktivitas enzim. Pada pH tertentu,
enzim akan mencapai aktivitas optimumnya yang ditandai dengan
kecepatan reaksi yang meningkat. Pada percobaan ini pH yang
digunakan yaitu 8,0; 7,4; 6,8; 6,2; dan 5,0. Berdasarkan percobaan
ini diperoleh data sebagai berikut:Tabel 1. Pengaruh pH terhadap
Enzim amilaseWaktu(menit)Warna
pH 5,0pH 6,2pH 6,8pH 7,0pH 7,4pH 8,0
051015202530++++++-+++++++++++++++++---++++++--++++---+++----
35------
Keterangan :Biru Tua= ++Biru Muda = +Bening = -
Tabel 2. Waktu Laju Perubahan Warna terhadap pH
pH (Buffer)Waktu (t) (Menit)1/t (Menit)
8,07,47,06,86,25,01515202035300,060,060,050,050,020,03
Berdasarkan tabel di atas, maka dapat dibuat grafik sebagai
berikut:Grafik 1. Grafik pH versus Kebalikan Waktu ( 1/T ) 4.1.2
Pengaruh Temperatur Terhadap Aktivitas Enzim Selain keasaman atau
pH, temperatur juga merupakan salah satu faktor yang sangat
mempengaruhi aktivitas enzim. Adapun temperatur yang digunakan pada
percobaan kali ini ialah 0 C (dalam air es), 25 C (suhu kamar), 38
C (dalam inkubator), dan 100 C (air mendidih). Berdasarkan
percobaan yang telah dilakukan, diperoleh data sebagai
berikut:Tabel 3. Pengaruh Temperatur terhadap Aktivitas Enzim
AmilaseWaktu (menit)Warna
Tabung I(0 oC)Tabung II(suhu kamar)Tabung III(38oC)Tabung
IV(100oC)
0++++++++++++++++++++
10++++++++++++++++
15++++++++++++
20+++++++++
25++++++
30-++++
35--++
40--+-
45----
Keterangan : Biru muda = + +Agak Biru Muda = +Bening = -Biru
pekat = + + + + +Biru tua= + + + +Biru = + + +
Tabel 4. Waktu Laju Perubahan Warna terhadap
TemperaturTemperatur (C)Waktu (t) (Menit)1/t (Menit)
02538100303545400,0330,0280,0220,025
Berdasarkan tabel di atas, maka dapat dibuat grafik sebagai
berikut:Grafik 2. Grafik Temperatur versus Kebalikan Waktu
(1/T)
4.2 ReaksiAdapun reaksi yang terjadi yaitu:
4.3 PembahasanPada percobaan pengaruh pH terhadap enzim amilase
ini akan ditentukan pH optimum dari aktivitas enzim amilase
Masing-masing tabung reaksi diisi dengan larutan buffer fosfat pada
pH yang berbeda-beda yaitu 8; 7,4; 7,0; 6,8; 6,2; 5,0. Digunakan
beberapa macam pH yang berbeda-beda agar dapat ditentukan pada pH
berapa enzim bekerja dengan baik (pH Optimum). Tabung reaksi yang
berisi larutan buffer dengan pH berbeda-beda ditambahkan larutan
pati 1%, larutan NaCl 0,1 M dan saliva encer yang merupakan enzim
amilase. Penambahan NaCl bertujuan sebagai zat untuk menyamakan
kondisi enzim di mulut dengan keadaan enzim yang sudah dipindahkan
ke dalam tabung reaksi dan pati atau amilum dimana pati ini
merupakan substrat yang akan bereaksi dengan iodium membentuk
kompleks biru. Saliva yang merupakan enzim amilase akan
menghidrolisis pati menjadi dekstrin kemudian maltosa (disakarida)
dan terhidrolisis lagi menjadi 2 molekul glukosa secara enzimatis.
Pada tabung reaksi yang berisi larutan buffer dengan pH 8,0 dan 7,4
ditambahkan asam asetat (CH3COOH) dengan tujuan untuk mengasamkan
larutan tersebut karena enzim tidak dapat bekerja pada pH basa.
Selanjutnya ke dalam tabung-tabung ini ditambahkan dengan larutan
iodium sebagai indikator yang akan bereaksi dengan amilum membentuk
kompleks biru keunguan yang ditandai dengan perubahan warna dari
bening menjadi biru.Tabung-tabung yang berisi larutan tersebut
ditempatkan pada oven bersuhu 38 C selama 35 menit dan pengamatan
dilakukan pada tiap interval waktu 5 menit. Dari pengamatan
terlihat bahwa yang mengalami perubahan warna yang cepat yaitu pH
8; kemudian disusul oleh pH 6,8; 7,4; 7,0; 5,0; dan 6,2 . Perubahan
warna terjadi pada menit ke-15 yaitu pada pH 6,8 dari warna biru
muda menjadi bening. Berdasarkan hasil yang diperoleh, terlihat
bahwa pH optimum dari enzim amilase adalah pada pH 6,2. Tentunya
hal ini sesuai dengan teori dimana pH optimum suatu enzim agar
dapat bekerja dengan baik yakni berkisar antara 5,4-7,2. Adapun
sedikit perbedaan hasil yang diperoleh dari percobaan ini
dikarenakan beberapa faktor, seperti kualitas saliva yang buruk,
suhu inkubator yang tidak tetap ataupun bahan yang tidak berfungsi
dengan baik.Percobaan pengaruh temperatur terhadap enzim amilase
ini ditinjau dengan 4 suhu yang berbeda, yaitu suhu 0 C, 25 C, 38 C
dan 100 C. Hal ini dilakukan agar aktivitas enzim amilase dapat
ditinjau berdasarkan suhu yang berbeda. Penambahan larutan pati di
sini agar dapat menjadi substrat bagi enzim. Penambahan larutan
iodin berfungsi sebagai indikator yang akan menunjukkan warna biru
jika I2 berikatan dengan glukosa dan membentuk kompleks.Sampel yang
mengalami perubahan warna biasa adalah pada suhu 25 C. Adapun hal
ini sesuai dengan teori bahwa suhu optimum bagi enzim untuk dapat
bekerja dengan baik adalah pada suhu sekitar 25 C. Enzim yang
bekerja pada suhu lebih rendah atau tinggi dapat menyebabkan tidak
efektifnya enzim bekerja bahkan dapat rusak, misalnya pada suhu 100
C.Enzim di sini seharusnya sudah tidak dapat bekerja dengan
baik.Ternyata setelah dilakukan percobaan memang tidak bekerja
dengan baik, hal ini dapat dilihat dari susahnya larutan berubah
warna menjadi bening.
BAB VKESIMPULAN DAN SARAN5.1 KesimpulanBerdasarkan percobaan
yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa :1. Nilai pH optimum
di mana peruraian pati paling cepat oleh enzim amilase ialah pada
pH 6,2.1. Temperatur optimum di mana peruraian pati paling cepat
oleh enzim amilase ialah pada suhu 25 oC.5.2 SaranSaran untuk
percobaan agar sampel enzim yang digunakan dapat disediakan. Serta
keadaan bahan yang akan digunakan diperhatikan agar tidak terjadi
kesalahan pada saat praktikum yang disebabkan karena kerusakan
bahan.Saran untuk laboratorim sekiranya menambah jumlah alat agar
lebih mengefisienkan kinerja percobaan. Serta memperhatikan kondisi
alat yang digunakan.Saran untuk asisten cara asisten membimbing dan
menjelaskan percobaan sudah bagus, sehingga praktikan dapat
melakukan praktikum dengan baik. Serta diharapkan agar laporan
dikembalikan lebih cepat.
DAFTAR PUSTAKA
Amutha, K., dan Priya, K.Y., 2001, Effect of pH, Temperature and
Metal Ions on Amylase Aactivity from Bacillus Subtilis KCX 006,
International Journal of Pharma and Bio Science, 2(2): 407-413.
Dutta, T.K., Jana, M., Pahari, P.R., dan Bhattacharya, T., 2005,
The Effect of Temperature, pH, and Salt on Amylase in
Heliodiaptomus viduus (Gurney) (Crustacea: Copepoda: Calanoida),
Turk J. Zool, 30 (2006): 187-195.
Hastuti, W., Agustien, A., dan Nurmiati, 2012, Penapisan dan
karakterisasi bakteri Amilo-Termofilik dari Sumber Air Oanas
Semerup kerinci Jambi, Jurnal Biologi Universitas Andalas, 1
(2):150-155.Jayanti, R.T., 2011, Pengaruh pH Suhu Hidrolisis Enzim
-Amilase dan Konsentrasi Ragi Roti untuk Produksi Etanol
Menggunakan Pati Bekatul (Skripsi), Univ. Sebelas Maret,
Surakarta.
Kidd, E. A. M., dan Bechal, S. J., 1991, Dasar-Dasar Karies
Penyakit dan Penanggulangannya, ECG, Jakarta.
Laila, A., Fetra, A., Hendri, J., Suka, I.G., Peningkatan
Stabilitas Enzim Amilase melalui Amobilisasi pada Polimer Kitosan,
Jurnal Sains MIPA edisi khusus, 13 (2):119-126.Lestari, P.,
Richana, N., Darwis, A.A., Syamsu, K., dan Murdiyanto, U., 2011,
Purifikasi dan Karakterisasi -Amilase Termostabil dari Bacillus
Stearothermophilus TII-12, Jurnal AgroBiogen, 7(1): 56-62.
Murray, R.K., Granner, D.K., Mayes, P.A., dan Rodwell, V.W.,
2003, Harpers Illustrated Biochemistry, McGraw-Hill, New York.
Nelson, D.L., dan Cox, M.M., 2005, Lehninger Principles of
Biochemistry, W.H. Freeman, New York.
Poedjiadi, A., dan Supriyanti, F.M.T., 1994, Dasar-dasar
Biokimia, UI-Press, Jakarta.
Sebayang, F., 2005, Isolasi dan Pengujian Aktivitas Enzim
-Amilase dari Aspergillus Niger Dengan Menggunakan Media Campuran
Onggok dan Dedak, Jurnal Komunikasi Penelitian, 17(5): 81-88.
Setiasih, S., Wahyunitari, B., Trismilah, Apriliani, D, 2006,
Karakterisasi Enzim -Amilase Ekstrasel dari Isobat Bakteri Termofil
SW2, Jurnal Kimia Indonesia, 1 (1):22-27.
Sumardjo, D., 2008, Buku Panduan Kimia Mahasiswa Kedokteran,
Penerbit Buku Kedokteran, Jakarta.
LEMBAR PENGESAHAN
Makassar, 24 Oktober 2014Asisten Praktikan
MUH. ADE ARTASASTA KHALIL MUBARAKLampiran 1. Bagan Kerja0.
Penentuan Pengaruh pH terhadap Aktivitas Enzim AmilaseLarutan
Buffer
sebanyak 5 mL buffer pH 8,0;7,0; 6,8; 6,2; 6,0; 5,8 dimasukkan
ke dalam tabung reaksi sebanyak 0,5 mL saliva encer ditambahkan ke
dalam tabung.ditambahkan larutan pati 1 % sebanyak 2,5 mL dan 1 mL
NaCl 0,1 Mtabung berisi buffer pH 8 diasamkan dengan menambahkan 10
tetes CH3COOH 0,1 Mditambahkan iodin sebanyak 10 tetesdimasukkan
kembali dalam inkubator dan setiap 5 menit keluarkan untuk
pengambilan dataData
2. Pengaruh Temperatur terhadap Aktivitas Enzim Amilase
Bahan
sebanyak 4 buah diisi dengan 2,5 mL larutan pati 1% dan 2 tetes
saliva encertabung pertama dimasukkan dalam air es (0 C)tabung
kedua ditempatkan pada suhu kamar (25 C)tabung ketiga dimasukkan
dalam inhibitor (38 C)tabung keempat dimasukkan dalam air mendidih
(100 C)setiap interval 5 menit teteskan sebanyak 5 tetes pada plat
tetes dan ditambahkan 2 tetes iodindicatat perubahan warna setiap
intervalData
