Hidrolisis Pati Enzimatis
Mochamad Iqbal Fernanda, 230110130132, Kelompok 10, Kelas B
Jurusan Perikanan, Fakultas perikanan dan Ilmu Kelautan,
Universitas PadjadjaranJl. Raya Bandung-Sumedang KM.21 Jatinangor
Telp. (022) 84288888/ 1888www. unpad.ac.id
Abstrak
Hidrolisis merupakan suatu proses pemecahan molekul air yaitu
H2O menjadi molekul kation berupa H+ dan anion berupa OH-,
sedangkan hidrolisis pati enzimatis merupakan suatu proses
pemecahan polimer menjadi monomer dengan bantuan enzim dan
penambahan katalisator berupa larutan asam, dan enzim merupakan
senyawa protein kompleks yang dihasilkan oleh sel-sel organisme dan
berfungsi sebagai katalisator suatu reaksi kimia. Prinsip kerja
praktikum ini adalah reaksi pemotongan ikatan -1,4 glikosidik pada
produk pati oleh amilase. Tujuan dari praktikum ini adalah
mahasiswa mampu memahami proses hidrolisis pati menggunakan enzim
amylase. Praktikum ini menguji 4 sampel yaitu aci, meizena, terigu
dan juga tepung beras. Prosedur kerja dari praktikum ini pertama
menyiapkan larutan pati yang berupa 4 sampel yang telah disebutkan,
kemudian ke empat sampel tersebut dilarutkan dimana tiap satu
sampel dilarutkan menjadi 4 ml dan 5 ml, kemudian sampel disimpan
dalam tabung reaksi dan selanjutnya ditambahkan larutan iodin
sebanyak 2 tetes sehingga menyebabkan perubahan pada larutan
tersebut, selanjutnya setiap tabung reaksi ditambahkan enzim
amilase sebanyak 6 tetes dan 10 tetes, dan kemudian larutan
diinkubasi, setelah diinkubasi larutan dipanaskan, dan kemudian
ditambahkan aquades kemudian dihomogenkan dengan vortex mixer, lalu
sampel diukur absorbansinnya menggunakan spektofotometer,dan
diamati perubahannya.
Kata Kunci : Hidrolisis Pati Enzimatis, Enzim Amilase,
Spektofotometer
PENDAHULUAN
Pati atau yang sering kita kenal dengan istilah amilum merupakan
karbohidrat atau hidrat arang yang bersifat kompleks yang tidak
larut dalam air, dengan wujud bubuk yang berwarna putih, berasa
tawar, dan tidak memiliki bau. Pati adalah bahan utama yang
dihasilkan oleh tumbuhan untuk menyimpan kelebihan gukosa(sebagai
produk fotosintesis) dalam jangka waktu yang panjang. Pada hewn dan
manusia juga menjadikan pati sebagai sumber energi yang penting.
Karbohidrat merupakan senyawa yang terbentuk dari molekul karbon
(C), hidrogen (H), dan oksigen (O). Kata Karbohidrat berarti hidrat
dari karbon atau hidrat arang atau sakarida berasal dari bahasa
Yunani sakcharon yang berarti gula adalah segolongan besar senyawa
organik yang paling banyak serta melimpah di muka bumi ini.
Karbohidrat memiliki banyak fungsi dalam tubuh makhluk hidup ,
terutama sebagai bahan bakar atau energi (contohnya glukosa),
sebagai cadangan makanan (contohnya pati pada tumbuhan dan glikogen
pada hewan), sebagai materi pembangun (contohnya selulosa pada
tumbuhan serta kitin pada hewan dan jamur). Di dalam tubuh
karbohidrat dapat dibentuk dari beberapa asam amino dan sebagian
dari gliserol lemak. Akan tetapi sebagian besar karbohidrat
diperoleh dari bahan makanan yang dikonsumsi sehari-hari, terutama
sumber makanan yang berasal dari tumbuh-tumbuhan.Melalui
fotosintesis, klorofil tumbuhan dengan bantuan sinar matahari akan
menyerap dan menggunakan energi matahari tersebut untuk membentuk
karbohidrat dengan bahan utama karbondioksida (CO2) berasal dari
udara dan air (H2O) dari tanah. Energi kimia yang terbentuk akan
disimpan di dalam daun, batang, umbi, buah dan biji-bijian.
Karbohidrat yang dihasilkan adalah karbohidrat sederhana (glukosa).
Di samping itu dihasilkan oksigen (O2) yang dilepas di udara. Sinar
matahari
6 CO2 + 6 H2O C6H12O6 + 6O2 Karbohidrat
Produk yang dihasilkan terutama dalam bentuk gula sederhana yang
mudah larut dalam air dan mudah diangkut ke seluruh sel-sel guna
penyediaan energi. Sebagian dari gula sederhana ini kemudian
mengalami polimerasi dan membentuk polisakarida yaitu salah satu
jenis karbohidrat. Jenis-jenis karbohidrat antara lain Karbohidrat
Sederhana dan Karbohidrat Kompleks. Karbohidrat Sederhana terdiri
dari Monosakarida (Glukosa, Fruktosa, Galaktosa, manosa, dan
Ribosa), Disakarida (sukrosa/sakarosa, maltosa, laktosa dan
trehaltosa), Gula Alkohol (sorbitol, manitol, dulsitol dan
inositol), dan Olisakarida (Rafinosa, stakiosa, verbaskosa, dan
Fruktan). Karbohidrat Kompleks terdiri dari Pati, Dekstrin,
Glikogen, dan Polisakarida Nonpati/Serat.Struktur karbohidrat
terdiri atas molekul karbon (C), hidrogen (H), dan oksigen (O).
Contohnya adalah glukosa (C6H12O6), sukrosa atau gula tebu
(C12H22O11), dan selulosa ((C6H10O5)n), dari ketiga contoh tersebut
maka karbohidrat mempunyai rumus umun Cn(H2O)n, Rumus molekul
glukosa misalnya, dapat dinyatakan sebagai (C6H12O6). Oleh karena
komposisi demikian, kelompok senyawa ini pernah disebut sebagai
hidrat karbon sehingga diberi nama karbohidrat. Akan tetapi, sejak
tahun 1880, disadari bahwa senyawa tersebut bukanlah hidrat dari
karbon. Nama lain dari karbohidrat adalah sakarida yang artinya
gula. Karbohidrat sederhana mempunyai rasa manis sehingga dikaitkan
dengan gula.Berdasarkan gugus fungsinya, karbohidrat merupakan
suatu polihidroksialdehida atau polihidroksiketon atau senyawa yang
pada hidrolisis menghasilkan senyawa seperti itu. Lihat beberapa
struktur karbohidrat pada Gambar 1. Semuanya mempunyai gugus
aldehida (---CHO) atau gugus keton (---CO) dan beberapa gugus
hidroksil. Glukosa mengandung satu gugus aldehida dan 5 gugus
hidroksil, sedangkan fruktosa mengandung satu gugus keton dan 5
gugus hidroksil.Berdasarkan jumlah karbohidrat sederhana yang
dihasilkan pada proses hidrolisis, karbohidrat dapat digolongkan
menjadi monosakarida, disakarida dan polisakarida. Monosakarida
merupakan satuan karbohidrat paling sederhana, tidak dapat
dihidrolisis menjadi karbohidrat lain yang sederhana. Monosakarida
dapat berikatan satu sama lainnya membentuk dimer, trimer, dan
seterusnya dan akhirnya membentuk polimer. Dimer dari monosakarida
disebut disakarida. Monosakarida dan disakarida larut dalam air dan
umumnya berasa manis. Karbohidrat yang tersusun dari dua sampai
delapan monosakarida biasa disebut oligosakarida, sedangkan yang
tersusun dari lebih delapan monosakarida disebut
polisakarida.Monosakarida adalah karbohidrat yang tidak dapat
dihidrolisis menjadi bentuk yang lebih sederhana. Monosakarida
meliputi glukosa, galaktosa, fruktosa, manosa, dan lain-lain.a.
GlukosaGlukosa merupakan suatu aldoheksosa, disebut juga dekstrosa
karena memutar bidang polarisasi ke kanan. Glukosa merupakan
komponen utama gula darah, menyusun 0,065- 0,11% darah kita.Glukosa
dapat terbentuk dari hidrolisis pati, glikogen, dan maltosa.
Glukosa sangat penting bagi kita karena sel tubuh kita
menggunakannya langsung untuk menghasilkan energi. Glukosa dapat
dioksidasi oleh zat pengoksidasi lembut seperti pereaksi Tollens
sehingga sering disebut sebagai gula pereduksi. D-glukosa
-D-glukosa -D-glukosa
b. GalaktosaGalaktosa merupakan suatu aldoheksosa. Monosakarida
ini jarang terdapat bebas di alam. Umumnya berikatan dengan glukosa
dalam bentuk laktosa, yaitu gula yang terdapat dalam susu.
Galaktosa mempunyai rasa kurang manis jika dibandingkan dengan
glukosa dan kurang larut dalam air. Seperti halnya glukosa,
galaktosa juga merupakan gula pereduksi. D-galaktosa
-D-galaktosa-D-galaktosac. FruktosaFruktosa adalah suatu heksulosa,
disebut juga levulosa karena memutar bidang polarisasi ke kiri.
Merupakan satu-satunya heksulosa yang terdapat di alam. Fruktosa
merupakan gula termanis, terdapat dalam madu dan buah-buahan
bersama glukosa.Fruktosa dapat terbentuk dari hidrolisis suatu
disakarida yang disebut sukrosa. Sama seperti glukosa, fruktosa
adalah suatu gula pereduksi. (a). Strukturterbuka. (b).
Struktursikliskarbohidrat yang terbentuk ketika dua monosakarida
mengalami reaksi kondensasi yang meliputi eliminasi sejumlah kecil
molekul, seperti air, dari gugus fungsional saja. Seperti
monosakarida, disakarida membentuk larutan berair ketika dilarutkan
dalam air. Tiga contoh umum disajarida adalah sukrosa, laktosa, dan
maltosa.Disakarida merupakan salah satu dari empat kelompok zat
kimia karbohidrat (monosakarida, disakarida, oligosakarida dan
polisakarida). Ada dua tipe disakarida yang berbeda, yaitu:
disakarida yang mereduksi, di mana satu monosakarida, gula reduksi,
masih memiliki unit hemiasetal bebas; dan disakarida non-reduksi,
di mana komponen-komponen yang berikatan melalui rantai asetal
antara pusat-pusat anomer mereka dan tidak satu pun monosakarida
memiliki unit hemiasetal bebas. Sellobiosa dan maltosa merupakan
contoh dari disakarida reduksi. Sukrosa dan trehalosa adalah
contoh-contoh disakarida non-reduksi.Disakarida terdiri dari
sukrosa, maltosa, dan laktosa. Dimana setiap disakarida terdiri
dari dua monosakarida. Maltosa merupakan contoh dari disakarida
yang tersusun dari dua molekul glukosa. Laktosa merupakan suatu
contoh dari disakarida yang tersusun dari molekul polisakarida
jenis galaktosa dan glukosa. Sedangkan sukrosa merupakan jenis
disakarida yang terdiri dari molekul glukosa jenis fruktosa dan
glukosa.Oligosakarida adalah polimer derajat polimerisasi 2 sampai
10 dan biasanya bersifat larut dalam air. Oligosakarida yang
terdiri dari 2 molekul disebut disakarida, dan bila terdiri dari 3
molekul disebut triosa. Bila sukrosa (sakarosa atau gula tebu).
Terdiri dari molekul glukosa dan fruktosa, laktosa terdiri dari
molekul glukosa dan galaktosa. Polisakarida Polisakarida merupakan
polimer molekul-molekul monosakarida yang dapat berantai lurus atau
bercabang dan dapat dihidrolisis dengan enzim-enzim yang spesifik
kerjanya.Polisakarida merupakan polimer dari monosakarida,
mengandung banyak satuan monosakarida yang dihubungkan oleh ikata
nglikosida. Hidrolisis lengkap dari polisakarida akan menghasilkan
monosakarida. Glikogen dan amilum merupakan polimer glukosa.
Berikut beberapa polisakarida terpenting.a. SelulosaSelulosa
merupakan polisakarida yang banyak dijumpai dalam dinding sel
pelindung seperti batang, dahan, daun dari tumbuh-tumbuhan.
Selulosa merupakan polimer yang berantai panjang dan tidak
bercabang. Suatu molekul tunggal selulosa merupakan polimer rantai
lurus dari 1,4--D-glukosa. Hidrolisis selulosa dalam HCl 4% dalam
air menghasilkan D-glukosa. Struktur selulosa
Dalam sistem pencernaan manusia terdapat enzim yang dapat
memecahkan ikatan -glikosida, tetapi tidak terdapat enzim untuk
memecahkan ikatan -glikosida yang terdapat dalam selulosa sehingga
manusia tidak dapat mencerna selulosa. Dalam sistem pencernaan
hewan herbivora terdapat beberapa bakteri yang memiliki enzim
-glikosida sehingga hewan jenis ini dapat menghidrolisis selulosa.
Contoh hewan yang memiliki bakteri tersebut adalah rayap, sehingga
dapat menjadikan kayu sebagai makanan utamanya. Selulosa sering
digunakan dalam pembuatan plastik. Selulosa nitrat digunakan
sebagai bahan peledak, campurannya dengan kamper menghasilkan
lapisan film (seluloid).b. Pati / AmilumPati terbentuk lebih dari
500 molekul monosakarida. Merupakan polimer dari glukosa. Pati
terdapat dalam umbi-umbian sebagai cadangan makanan pada tumbuhan.
Jika dilarutkan dalam air panas, pati dapat dipisahkan menjadi dua
fraksi utama, yaitu amilosa dan amilopektin. Perbedaan terletak
pada bentuk rantai dan jumlah monomernya. Amilosa adalah polimer
linier dari -D-glukosa yang dihubungkan dengan ikatan 1,4-. Dalam
satu molekul amilosa terdapat 250 satuan glukosa atau lebih.
Amilosa membentuk senyawa kompleks berwarna biru dengan iodium.
Warna ini merupakan uji untuk mengidentifikasi adanya pati.
Struktur amilosa
Molekul amilopektin lebih besar dari amilosa. Strukturnya
bercabang. Rantai utama mengandung -D-glukosa yang dihubungkan oleh
ikatan 1,4'-. Tiap molekul glukosa pada titik percabangan
dihubungkan oleh ikatan 1,6'-.Struktur amilopektin
Hidrolisis lengkap pati akan menghasilkan D-glukosa. Hidrolisis
dengan enzim tertentu akan menghasilkan dextrin dan maltosa. Pati
atau amilum adalah karbohidrat kompleks yang tidak larut dalam air,
berwujud bubuk putih, tawar dan tidak berbau.Pati merupakan bahan
utama yang dihasilkan oleh tumbuhan untuk menyimpan kelebihan
glukosa (sebagai produk fotosintesis) dalam jangka panjang.Hewan
dan manusia juga menjadikan pati sebagai sumber energi yang
penting.Enzimmerupakan satu atau beberapa gugusan dari polipeptida
(protein) yang berfungsi sebagai katalis(senyawa yang dapat
mempercepat proses reaksi tanpa habis bereaksi) dalam suatu reaksi
kimia. Enzim bekerja dengan cara menempel pada permukaan molekul
zat-zat yang bereaksi dan dengan demikian mempercepat proses
reaksi. Percepatan terjadi karena enzim menurunkan energi
pengaktifan atau juga disebut dengan energi aktivasi dimana dengan
sendirinya akan mempermudah terjadinya reaksi. Sebagian besar enzim
bekerja secara khas, yang artinya setiap jenis enzim hanya dapat
bekerja pada satu macam senyawa atau reaksi kimia. Hal ini
disebabkan perbedaanstruktur kimia tiap enzim yang bersifat tetap.
Sebagai contoh, enzim - amilase hanya dapat digunakan pada proses
perombakan pati menjadi glukosa.Hidrolisis merupakan suatu proses
pemecahan molekul air yaitu H2O menjadi molekul kation berupa H+
dan anion berupa OH-, sedangkan hidrolisis pati enzimatis merupakan
suatu proses pemecahan polimer menjadi monomer dengan bantuan enzim
dan penambahan katalisator berupa larutan asam, dan enzim merupakan
senyawa protein kompleks yang dihasilkan oleh sel-sel organisme dan
berfungsi sebagai katalisator suatu reaksi kimia.
METODOLOGIPraktikum hidrolisis pati enzimatis ini dilaksanakan
pada hari pada hari Jumat, pada tanggal 7 November 2014, pukul
13.00 WIB. Praktikum hidrolisis pati enzimatis dilaksanakan di
Laboratorium Biotektonologi Kelautan, gedung 4 Fakultas Perikanan
dan Ilmu Kelautan Universitas Padjadjaran.Peralatan yang digunakan
dalam praktikum hidrolisis pati enzimatis ini adalah gelas ukur,
fungsi dari alat ini adalah alat untuk mengukur volume larutan
dalam skala tertentu. Alat alain yang digunakan adalah alumunium
foil yang berfungsi sebagai alat pembungkus dalam autoklaf atau
biasa digigunakan dalam hot plate dan sterilisasi, kemudian alat
yang digunakan adalah labu ukur yang digunakan sebagai alat untuk
membuat larutan baku dan juga pengenceran, alat yang digunakan
selanjutnya adalah spektofotometer yang berfungsi sebagai alat
untuk mengukur absorbansi dengan cara melewatkan chaya dengan
panjang gelombang tertentu pada suatu objek yang disebut dengan
kuvet, alat selanjutnya yakni hot plate yang digunakan untuk
memanaskan sampel, alat lainnya yang digunakan dalam praktikum ini
adalah vortex mixer yang berfungsi sebagai alat untuk
menghomogenkan larutan.Bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum
hidrolisis pati enzimatis adalah pati yang berupa aci, meizena,
terigu, dan tepung beras yang dijadikan larutan. Bahan lainnya yang
digunakan dalam praktikum ini adalah glukosa, larutan iodin, enzim
amilase. Bahan-bahan tersebut digunakan sesuai dengan prosedur yang
telah ada didalam modul praktikum biokimia mengenai hidrolisis pati
enzimatis.
Menyiapkan sampel pati yang terdiri dari aci, meizena, terigu,
dan tepung beras. Setiap sampel terdiri dari 0,2 gram. Sampel
disimpan dalam alumunium foil.Prosedur Percobaan
Melarutkan sampel menjadikan sampel tersebut menjadi 4 ml, dan 5
ml. Kemudian menyimpan sampel dalam tabung reaksi.
Menambahkan larutan iodin sebanyak 2 tetes pada setiap sampel
yang telah disimpan dalam tabung reaksi. Lalu mengamati sampel
Kemudian menambahakan enzim amilase sebanyak 6 tetes dan 10
tetes pada setiap sampel yang telah disimpan dalam tabung reaksi,
Memanaskan sampel, lalu mengamati sampel
Menginkubasi setiap sampel dalam tabung reaksi pada suhu 55oC
selama 10 menit, setelah itu mengamati perubahan pada larutan
tersebut.
Memanaskan kembali sampel setelah diinkubasi, memanaskan sampel
dilakukan sampai sampel mendidih, atau berbuih.
Menghomogenkan larutan dengan menggunakan vortex mixer, namun
sebelumnya larutan yang telah dipanaskan, didinginkan terlebih
dahulu, kemudian perlakuan selanjutnya adalah menambahkan aquades
secukupnya, dan menghomogenkan larutan tersebut.
Mengambil sampel dari larutan tersebut dan menyipannya didalam
kuvet, lalu mengukur absorbansi larutan sampel tersebut dengan
menggunakan spektofotomter, kemudian mengamati perubahan yang
terjadi.
HASIL DAN PEMBAHASANTabel PengamatanPembuatan Kurva Larutan
Standar Glukosa(data untuk kelas Perikanan A, B, C)NoX(Konsentrasi
Glukosa)Y(Absorbansi)X.YX2
10,4 gr/ml0,0300.0120.16
20,3 gr/ml0,0260.00780.09
30,2 gr/ml0,0130.00260.04
0.90.0690.02240.29
Kemudian buat persamaan:Y = a + b X
Perhitungan Glukosa StandarDimana rumus untuk mencari a yaitu:a
= = = = = -0,0025
Perhitungan Glukosa Standarb = b = = = = 0,085
Sehingga,y = -0,0025+0,085x
Dari persamaan diatas maka dapat dihitung konsentersi glukosa
seperti dibawah ini :y = -0,0025+0,085xX = Maka (Data Kelompok 10 (
Sampel aci 5 ml)) :Untuk 6 tetes : X = = 16.26 gr/ml
Untuk 6 tetes: X = = 22.91 gr/mlSetelah dilakukan pembuatan
kurva maka didapatkan hasi koefisien korelasi yaitu :R=nxy(x)(y)
=3(0,0224)-(0,8)(0,069) . {nx (x)} {ny2
(y)2}{3(0,29)-(0,8)2}{3(0,001745)-(0,069) 2}R= 0,914Jika dilihat
dari nilai koefisien korelasi maka dapat kita Bandingkan nilai
koefisien korelasi R2 dengan tabel interpretasi, yaitu hasil dari
koefisien korelasi adalah sebesar 0, 914 itu berarti nilainya
menunjukan nilai yang sangat kuat karena Apabila Nilai Koefisien
Korelasi mendekati +1 (positif Satu) berarti pasangan data Variabel
X dan Variabel Y memiliki Korelasi Linear Positif yang
kuat/Erat.
Data Konsenterasi glukosakelsampelKonsentrasi glukosa(
gr/mL)
6 tetes10 tetes
9Aci15.7817.08
10 Aci16.2422.97
11Maizena 12.6816.35
12Maizena 11.2912.13
13Terigu 8.853.44
14Terigu 14.9714.13
15Tepung beras12.918.78
16Tepung beras16.383.00
PembahasanHidrolisis pati enzimatis merupakan suatu proses
pemecahan atau penguraian polimer menjadi monomer dengan bantuan
enzim dan penambahan katalisator berupa larutan asam. Enzim yang
dilakukan dalam pengujian ini adalah enzim - amilase. Pengujian
hidrolisis pati enzimatis ini adalah menggunakan beberapa sampel
berupa aci, meizena, terigu, dan juga tepung beras. Pengujian ini
dilakukan dengan cara mengukur absobansi pada setiap sampel.Aci,
meizena, terigu, dan tepung beras merupakan salah satu contoh dari
amilum atau yang sering dikenal dengan istilah pati. Dalam
praktikum pengujian hidrolisis pati enzimatis ini sampel yang
digunakan berupa amilum seperti aci, meizena, tepung terigu, dan
tepung beras. Setiap kelompok melakukan pengujian dengan sampel
yang berbeda-beda, namun ada beberapa kelompok yang melakukan
pengujian dengan sampel yang sama anmun dengan takaran yang
berbeda.Kelompok 10 melakukan uji hidrolisis pati enzimatis dengan
sampel berupa aci sebanyak 0,2 gram, mula-mulanya aci dibungkus
oleh alumunium foil. Setelah mendapatkan samp[el, kemudian
dilakukan pengenceran atau melarutkan sampel berupa aci tersebut
sebanyak 5 ml, kemudian menyimpan sampel dalam 2 tabung reaksi yang
berbeda pula. Pelarutan ini dilakukan sebagai prosedur awal dalam
pengujian sebab proses pengujian hidrolisis pati enzimatis ini
dilakukan dalam kondisi cair, pelarutan sampempel ini menggunakan
aquades.Setelah sampel dilarutkan maka prosedur selanjutnya yakni
penambahan larutan berupa iodine sebanyak 2 tetes, setelah
dilakukan penambahan larutan iodi n tersebut maka didapat hasil
dengan perubahan warna yang terjadi pada larutan, mula-mulanya
larutan berwarna putih seperti susu kemudian setelah penambahan
larutan iodine, warna berubah menjadi biru pekat.Kegiatan yang
dilakukan setelah penambahan iodine dan setelah pemanasan adalah
penambahan enzim amylase. Penambahan enzim dilakukan pada 2 tabung
reaksi dengan tabung reaksi yang berbeda. Pada tabung reaksi
pertama ditambahkan 6 tetes enzim amylase dan pada tabung reaksi
kedua ditambahkan 10 tetes enzim amylase. Setelah ditambahkan enzim
dapat dilihat perubahan yang terjadi, yakni pada tabung reaksi 1
yang ditambahkan enzim amylase 6 tetes, warna berubah tetapi masih
berwarna biru pekat, dan pada tabung reaksi kedua yakni sampel yang
ditambahkan 10 tetes enzim amylase warna sampel berubah menjadi
biru sangat pekat. Kemudian larutan dipanaskan sambil diaduk
menggunakan spatula, hal tersebut diperuntukan agar sampel tidak
menggumpal.Setelah penambahan enzim amylase dan setelah dipanaskan,
lalu sampel didinginkan terlebih dahulu kemudian langkah yang
selanjutnya dilakukan adalah proses inkubasi pada sampel tersebut,
proses inkubasi ini dilakukan agar larutan sampel tetap stabil dan
agar enzim tidak terdenaturasi, inkubasi ini dilakukan selama 10
menit, setelah dilakukakan perlakuan inkubasi dapat dilihat
perubahan pada sampel tersebut yakni pada sampel yang diberi 6
tetes enzim amylase terjadi perubahan yakni pada lapiasan tersebut
terdapat 2 lapisan dimana pada bagian atas berwarna biru dan pada
lapiasan bawah terdapat warna coklat, dan pada sampel yang ditambah
enzim amylase 10 tetes didapatkan hasil yaitu pada larutan terdapat
2 lapisan juga dengan bagian atas berwarna biru pekat dan pada
lapiasan bawah terdapat warna coklat. Setelah dilakukan proses
inkubasi, maka kegiatan yang dilakukan selanjutnya adalah proses
pemanasan kembali, proses pemanasan ini dilakukan sampai larutan
berbuih atau agak mendidih. Setelah dilakukan pemanasan larutan di
amati kembali dan didapatkan hasil yakni pada bagian atas berwarna
biru dan pada lapiasan bawah terdapat warna coklat perubahan tidak
terlalu signifikan. Pada sampel yang ditambah 10 tetes enzim yang
kemudian diinkubasi dan selanjutnya dipanaskan kembali maka dapat
diamati yaitu pada larutan terdapat 2 lapisan juga dengan bagian
atas berwarna biru pekat dan pada lapiasan bawah terdapat warna
coklat perubahan pada larutan ini juga tidak berubah secara
signifikan.Setelah proses pemanasan selesai dilakukan maka sampel
ditambah aquades dan dihomogenkan menggunakan vortex mixer. Setelah
itu sampel diukur aborbansinya menggunakan spektofotometer,
pengukuran ini dilakukan dengan cara mnuangkan larutan sampel yang
telah dihomogenkan menggunakan vortex mixer kedalam kuvet, kemudian
diukur absorbansinya.Didapatkan hasil dari pengukuran absorbansi
dari larutan sampel aci sebaanyak 5 ml, dengan nilai absorbansi
sebesar 1,38 untuk larutan sampel yang ditambahkan enzim amylase
sebanyak 6 tetes, dan nilai absorbansi sebesar 1,95 untuk larutan
sampel yang ditambahkan enzim amylase sebanyak 10 tetes. Langkah
yang dilakukakan selanjutnya yakni penghitungan konsenterasi
glukosa seperti yang telah dijelaskan diatas,dan didapatkan hasil
yaitu nilai konsenterasi glukosa sebesar 16.26 gr/ml untuk larutan
sampel yang ditambahkan enzim amylase sebanyak 6 tetes, dan nilai
konsenterasi glukosa sebesar 22.91 gr/ml untuk larutan sampel yang
ditambahkan enzim amylase sebanyak 10 tetes.Dan jika kita
membandingkan dengan kelompok yang sampel yang sama namun dengan
takaran atau ukuran pelarutan yang berbeda maka dapat dilihat bahwa
pada prosedur yang dilakukan sampel rata-rata mengalami perubahan
yang sama baik secara warna ataupun konsenterasi, namun jika
dilihat dari segi nilai absorbansi ternyata memilik perbedaan dalam
nilai absorbansi pada kelompok yang menggunakan sampel yang sama
namun dengan takaran pelarutan yang berbeda, ternyata nilai
absorbansi yang terukur adalah sebesar 1,339 untuk larutan sampel
yang ditambahkan enzim amylase sebanyak 6 tetes, dan nilai
absorbansi sebesar 1,455 untuk larutan sampel yang ditambahkan
enzim amylase sebanyak 10 tetes. Langkah yang dilakukakan
selanjutnya yakni penghitungan konsenterasi glukosa seperti yang
telah dijelaskan diatas,dan didapatkan hasil yaitu nilai
konsenterasi glukosa sebesar 15.78 gr/ml untuk larutan sampel yang
ditambahkan enzim amylase sebanyak 6 tetes, dan nilai konsenterasi
glukosa sebesar 17.08 gr/ml untuk larutan sampel yang ditambahkan
enzim amylase sebanyak 10 tetes.Perbedaan ini wajar terjadi karena
beberapa faktor, misalkan faktor-faktor pada saat prosedur
percobaan berlangsung, begitu pula dengan kelompok lainnya yang
memilik nilai aborbansi yang berbeda beda pula. Dimana perbedaan
data tersebut telah dituliskan pada table data aborbansi dan
konsenterasi glukosa diatas.Pengujian hidrolisis pati enzimatis ini
sangat dipengaruhi oleh beberapa faktor yang dapat menyebabkan
keberhasilan dalam pengujian. Data yang menyebabkan nilai
absorbansi diatas satu adalah warna larutan yang akan diabsorbansi
terlalu pekat dikarenakan konsenterasi larutan yang terlalu pekat,
hal tersebut dapat disebabkan dari pemberian iodine yang terlalu
banyak pada larutan sehingga nilai absorbansinya terlalu tinggi
yaitu lebih dari satu. Selain itu juga hal yang dapat menyebabkan
nilai absorbansinya terlalu tinggi yaitu pada saat pemanasan pada
lrutan, tidak dilakukan pengadukan, atau pengudukan kuarng
maksimal, sehingga sampel dalam larutan cepat bergumpal. Faktor
lainnya juga yaitu pada saat pemanasan suhu penangas air yang
kurang panas, ataupun pemanasan larutan yang kurang lama, atau juga
bias disebakan karena larutan tidak homogen.Hal-hal tersebut dapat
menyebabkan larutan yang telah dihomogenkan tetap berwarna biru
pekat sehingga tidak dapat terbaca oleh spektofotometer, atau nilai
yang tertera di spektofotometer lebih dari satu atau terlalu besar,
jika nilai yang didapatkan dari spektofotometer lebih dari satu
maka dapat dikatakan bahwa sampel kurang baik, karena data yang
baik untuk larutan ialah jika nilai absorbansi pada larutan
tersebut kurang dari satu, namun jika terlalu mendekati nol pun
tidak terlalu baik, karena nilai yang terlalu mendekati nol
disebabkan karena larutan terlalu encer, jika nilai absorbansinya
semakin baik maka konsenterasi glukosa dapat dihitung mendekati
keakuratan
KESIMPULANJadi kesimpulan yang didapatkan dari praktikum
hidrolisis pati enzimatis ini adalah bahwa hidrolisis pati
enzimatis merupakan suatu proses pemecahan polimer menjadi monomer
dengan bantuan enzim dan penambahan katalisator berupa larutan
asam, dan enzim merupakan senyawa protein kompleks yang dihasilkan
oleh sel-sel organisme dan berfungsi sebagai katalisator suatu
reaksi kimia.Konsenterasi larutan dapat diketahui dengan mengukur
absorbansi larutan oleh spektofotometer. Jika nilai aborbansi
dibawah satu maka data semakin akurat, namun jika data diatas satu
maka data kurang baik. Data yang menyebabkan nilai absorbansi
diatas satu adalah warna larutan yang akan diabsorbansi terlalu
pekat dikarenakan konsenterasi larutan yang terlalu pekat, hal
tersebut dapat disebabkan dari pemberian iodine yang terlalu banyak
pada larutan sehingga nilai absorbansinya terlalu tinggi yaitu
lebih dari satu. Selain itu juga hal yang dapat menyebabkan nilai
absorbansinya terlalu tinggi yaitu pada saat pemanasan pada lrutan,
tidak dilakukan pengadukan, atau pengudukan kuarng maksimal,
sehingga sampel dalam larutan cepat bergumpal. Faktor lainnya juga
yaitu pada saat pemanasan suhu penangas air yang kurang panas,
ataupun pemanasan larutan yang kurang lama, atau juga bias
disebakan karena larutan tidak homogen.Hal-hal tersebut dapat
menyebabkan larutan yang telah dihomogenkan tetap berwarna biru
pekat sehingga tidak dapat terbaca oleh spektofotometer, atau nilai
yang tertera di spektofotometer lebih dari satu atau terlalu besar,
jika nilai yang didapatkan dari spektofotometer lebih dari satu
maka dapat dikatakan bahwa sampel kurang baik, karena data yang
baik untuk larutan ialah jika nilai absorbansi pada larutan
tersebut kurang dari satu, namun jika terlalu mendekati nol pun
tidak terlalu baik, karena nilai yang terlalu mendekati nol
disebabkan karena larutan terlalu encer, jika nilai absorbansinya
semakin baik maka konsenterasi glukosa dapat dihitung mendekati
nilai yang akurat.
DAFTAR PUSTAKAHart,H, 1987, Kimia Organik, alih bahasa: Sumanir
Ahmadi, Erlangga, Jakarta.Poedjiadi,Anna, 1994. Dasar-Dasar
Biokimia. Penerbit UI-Press: Jakarta.Winarno, F.G, 1997, Kimia
Pangan Dan Gizi, Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
LAMPIRAN
