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Lecco 15-16 dicembre 2005Lecco 15-16 dicembre 2005
Valutazione performances dell’operatore
Elisa CodegaLaboratorio di Sanità PubblicaASL della Provincia di Lecco
Lecco 15-16 dicembre 2005
VALUTAZIONE DELLA PERFORMANCES DELL’OPERATORE NELL’ANALISI MICROBIOLOGICA QUANTATIVA
Un laboratorio che opera in Qualità, secondo quanto previsto dalla ISO 17025, deve assicurarsi che tutto il suo personale sia adeguatamente addestrato a svolgere le analisi seguendo i metodi di prova accreditati o che si vogliono accreditare, in modo da fornire dati oggettivi inerenti al suo modo di operare .
Ora andremo a descrivere le modalità e i criteri di valutazione delle performance degli operatori del Laboratorio di Sanità Pubblica dell’ASL di Lecco nelle analisi microbiologiche quantitative.
Lecco 15-16 dicembre 2005
VALUTAZIONE DELLA PERFORMANCES DELL’OPERATORE
Gli operatori presenti in laboratorio possono essere:
-IN FORMAZIONE: stanno seguendo un periodo di addestramento e non sono ancora coinvolti nell’attività routinaria di laboratorio;
-IDONEI ALLA MANSIONE: hanno già dimostrato di possedere le adeguate capacità per svolgere l’attività di laboratorio
a) coinvolti nell’attività routinaria di laboratorio
b) coinvolti solo saltuariamente nell’attività routinaria di laboratorio
Lecco 15-16 dicembre 2005
IDONEITA’ ALLA MANSIONE
-IDONEITA’ ALL’ESECUZIONE DELL’INOCULO:
l’operatore dimostra di essere affidabile nell’esecuzione dell’inoculo quando esegue inoculi ripetibili e proporzionali con le tecniche analitiche utilizzate in laboratorio;
-IDONEITA’ ALL’ESECUZIONE DELL’INOCULO:
l’operatore dimostra di essere affidabile nell’esecuzione del conteggio quando esegue conteggi ripetibili e confrontabili con quelli di altri operatori (riproducibili) sui terreni di coltura utilizzati in laboratorio.
Lecco 15-16 dicembre 2005
Valutazione performances operatore
Operatore in formazione o operatori idonei ma non
coinvolti nell’attività routinaria
Esecuzione prove specifiche per ripetibilità e proporzionalità
Accettabilità risultati ottenuti
NO SI
Idoneità all’esecuzione
dell’inoculo
inoculo Operatore già idoneo alla mansione
coinvolti nell’attività routinaria
Esecuzione prove routinarie per ripetibilità e proporzionalità
Accettabilità risultati ottenuti
NO SI
Mantenimento Idoneità
Esecuzione prove
specifiche
Lecco 15-16 dicembre 2005
RIPETIBILITA’ E PROPORZIONALITA’ INOCULO
Operatori in formazione o operatori idonei ma non coinvolti nell’attività routinaria
Un operatore non coinvolto nella prova ma già idoneo alla mansione prepara un campione contaminato artificialmente con ceppi batterici. Gli operatori che devono eseguire questa prova devono effettuare, nell’arco di una giornata sul campione preparato in laboratorio: -tre diluizioni diverse del campione - per ogni diluizione prove in parallelo. Occorre eseguire la seguente prova per ogni tecnica diversa di inoculo da testareL’operatore esegue l’inoculo con le rispettive diluizioni e
repliche seguendo le procedure di analisi riportate nelle metodiche di prova.Il conteggio viene eseguito dal RS che raccoglierà i dati
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RIPETIBILITA’ E PROPORZIONALITA’ INOCULO
Operatori idonei coinvolti nell’attività routinaria
Prove di ripetibilità e di proporzionalità randomizzate effettuate in doppio durante l’attività routinaria di laboratorio vengono utilizzate per valutare il limite di ripetibilità e di proporzionalità.
Sulla base dei valori reali riscontrati è possibile valutare il limite di dispersione sperimentaleI valori delle dispersioni sperimentali effettuate durante l’attività routinaria vengono ogni due mesi elaborati e conservati.
L’affidabilità degli operatori già idonei alla mansione dell’inoculo può essere valutata durante la normale attività di laboratorio.
Il RS si occuperà poi di effettuare le letture, raccogliere i dati
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21;
21 lnln*2
np
iiiin n
ccccG
Criteri per l’accettabilità della ripetibilità
INOCULO
21;
21 npnG
accettabile
21;
21
21; npnnp G
critico
21;
21 npnG
insufficiente
dove:
ci è il valore del conteggio riscontrato nella capsula i.
n è il numero delle osservazioni
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21;
21 npnG
accettabile
Criteri per l’accettabilità della ripetibilità
INOCULOI conteggi sono ACCETTABILI ed è possibile esprimere il risultato come media delle n prove in parallelo
21;
21
21; npnnp G
criticoLa compatibilità tra i conteggi deve essere considerata CRITICA e meritevole di approfondimento prima di esprimere il risultato delle n prove in parallelo
21;
21 npnG
insufficiente
La compatibilità tra i conteggi deve essere considerata INSUFFICIENTE e le prove in parallelo non possono essere considerate valide
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Criteri per l’accettabilità della proporzionalità
INOCULO
21;
1
1
11
2 lnln2
npm
i
m
iim
ii
m
i i
iisper
R
CC
R
CCG
dove:
Ci sono la somma dei conteggi sullo stesso campione ai rispettivi rapporti di diluizione Ri.
21; npPer calcolare il utilizzare un livello di probabilità p = 0,95 e i gradi
di libertà si calcolano facendo il numero delle diluizioni –1.
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Valutazione idoneità complessiva dell’inoculoPer l’operatore in formazione e per quello già idoneo alla
mansione ma non coinvolto nell’attività routinaria
Il sistema permette inoltre di valutare il contributo alla dispersione dei risultati dovuto a:
a- dispersione legata agli inoculi delle diverse repliche (ripetibilità)
b-dispersione legata alla preparazione delle diluizioni utilizzate negli inoculi (proporzionalità)
Il Gtot2 viene calcolato utilizzando la seguente equazione:
j
jj
j
jJTOT R
cc
R
ccG lnln*22
dove Cj sono le singole letture ai rispettivi rapporti di diluizioni Rj
Il valore di Gtot2 è confrontato con il valore teorico della distribuzione del con
g.l.= numero di piastre esaminate-1 alla p=0.95.
Quindi l’analisi della dispersione totale risulterà accettabile e quindi l’operatore idoneo alla mansione dell’inoculo quando il Gtot
2 risulta < di .
2sp
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Valutazione idoneità complessiva dell’inoculoPer l’operatore già idoneo alla mansione ma coinvolto
nell’attività routinaria
Valutare trimestralmente la dispersione dei dati osservata tra le singole repliche e tra le singole diluizioni effettuate durante le analisi routinarie attraverso la sommatoria dei singoli G2 secondo la seguente equazione:
n
iitàripetibili GG
1
22
n
iialitàproporzion GG
1
22
dove Gi2 sono le dispersioni ottenute sulle singole repliche o sulle singole diluizioni e n
è il numero di prove effettuate.
La dispersione dei dati tra prove indipendenti comprendenti lo stesso numero di repliche o di diluizioni è accettabile quando:
2..
2lgtàripetibiliG
g.l. del 2 =n.di piastre considerate-1
2..
2lgalitàproporzionG
g.l. del 2 =n.di diluizioni considerate-1
L’operatore già idoneo alla mansione, mantiene quindi la sua idoneità se ogni tre mesi rispetta i criteri sopraesposti.
Lecco 15-16 dicembre 2005
RIPETIBILITA’ E RIPRODUCIBILITA’ CONTEGGIO
Operatori in formazione e tutti gli operatori già idonei alla mansione
Il RS sceglie delle piastre, con e senza identificazione morfologica in fase di lettura, tra quelle con una contaminazione compresa tra 15 e 300 colonie, ottenute dalle analisi di laboratorio routinarie.Il RS sceglierà, volta per volta, a rotazione tra i terreni in uso nel laboratorio, su quale di essi effettuare la prova con identificazione morfologica.
Questo tipo di prova va eseguita inoltre da tutti gli operatori idonei alla mansione del conteggio quando nelle analisi routinarie di laboratorio vengono introdotti nuovi terreni con identificazione morfologica.
Lecco 15-16 dicembre 2005
Gli operatori coinvolti in questa prova sono almeno tre operatori, due tra quelli in formazione o già idonei alla mansione e il Responsabile della Sezione (RS).
RIPETIBILITA’ E RIPRODUCIBILITA’ CONTEGGIO
Operatori in formazione e tutti gli operatori già idonei alla mansione
La valutazione della differenza statistica dei conteggi effettuati dall’operatore e dal RS permette di attestare l’idoneità al conteggio.
I conteggi devono essere eseguiti più volte ed in tempi brevi dagli operatori in modo da non poter essere influenzati dalla conoscenza dei risultati ottenuti in precedenza da essi stessi o da altro operatore, quindi occorre somministrare le piastre in maniera cieca.
Lecco 15-16 dicembre 2005
Criteri per l’accettabilità della ripetibilità
CONTEGGIO
n
uu
n
i
A
1
2
2
Scarto tipo:
1
2
n
CCs i
Scarto tipo relativo: C
sui
La ripetibilità di conteggio dell’operatore A è calcolata mediante la valutazione della media quadratica degli scarti tipo relativi alle singole serie di conte e si determina attraverso il calcolo della media quadratica degli STR ottenuti nelle singole prove, grazie alla formula
Ci il conteggio ottenuto sulla piastra
il conteggio medioC
Lecco 15-16 dicembre 2005
•per le conte effettuate con interpretazione della tipicità delle colonie, le prestazioni dell’operatore sono considerate accettabili se:
u(operatore) ≤ 0,1
I criteri di accettabilità della ripetibilità del conteggio dell’operatore sono i seguenti:
•per le conte effettuate su piastre in cui il conteggio non prevede l’interpretazione della tipicità della colonia, le prestazioni dell’operatore sono considerate accettabili se:
u(operatore) ≤ 0,02
Criteri per l’accettabilità della ripetibilità
CONTEGGIO
Lecco 15-16 dicembre 2005
Criteri per l’accettabilità della riproducibilità
Per verificare se i tre operatori coinvolti nella prova contano in maniera equivalente si applica l’analisi della dispersione sperimentale tra i conteggi effettuati in parallelo dagli operatori.
Si procede come segue:
• Operatore valutato vs. RS: vengono confrontati i quattro conteggi effettuati su ogni piastra dai due operatori presi in considerazione, calcolando l’indice di dispersione sperimentale in base all’equazione sottoriportata;
i
i
isp C
C
Cn 22
dove Ci è il valore di conteggio riscontrato nella capsula
•Operatore valutato vs. altro operatore coinvolto nella prova: vengono confrontati i quattro conteggi effettuati su ogni piastra dai due operatori presi in considerazione, calcolando l’indice di dispersione sperimentale
Lecco 15-16 dicembre 2005
1 21;
2 npsp
I conteggi sono accettabili e quindi i due operatori contano in maniera equivalente
2 2
1;22
1; npspnp La compatibilità tra i conteggi deve essere considerata critica e l’equivalenza di lettura tra i due operatori è meritevole di approfondimento
3 21;
2 npsp
La compatibilità tra i conteggi deve essere considerata insufficiente e quindi i due operatori non contano in maniera equivalente
Criteri per l’accettabilità della riproducibilità
Nel caso in cui i ottenuti dall’operatore valutato, sia rispetto al RS che all’altro operatore, risultino accettabili nel 95% dei casi, si ritiene che l’operatore conti in maniera riproducibile.
2sp
Confrontando l’indice di dispersione sperimentale , con quello limite tabulato si possono verificare i tre casi riportati in tabella
2sp
Lecco 15-16 dicembre 2005
VALUTAZIONE COMPLESSIVA DEL LABORATORIO
Viene calcolata la dispersione dei dati ottenuti su diverse repliche o su diverse diluizioni sommando le dispersioni ottenute dai singoli operatori
n
iilabrip GG
1
22..
21;95.0
2.. nplabripG
n
iilabpropor GG
1
22..
2.1;95.0
2.. nplabproporG
Il laboratorio per fornire una dimostrazione oggettiva del suo modo di operare controlla e registra trimestralmente la capacità operativa dei suoi operatori mentre ogni sei mesi valuta complessivamente tutti gli operatori.
Di tale convalida viene tenuta la registrazione delle prove eseguite e dei risultati ottenuti.
dove Gi sono le singole dispersioni ottenute dagli n operatori presenti in laboratorio nelle prove di valutazione della ripetibilità e della proporzionalità.
Lecco 15-16 dicembre 2005
VALUTAZIONE COMPLESSIVA DEL LABORATORIO
conteggio
La ripetibilità di conteggio totale del laboratorio è data invece dalla media quadratica della ripetibilità dei singoli operatori
n
RR
n
I
L
1
2
I criteri di accettabilità del dato Rlaboratorio sono gli stessi utilizzati per la ripetibilità di conteggio dell’operatore
Lecco 15-16 dicembre 2005
Il Laboratorio risulta quindi complessivamente idoneo all’esecuzione delle analisi microbiologiche quantitative poiché tutti gli operatori mostrano abilità e competenza nell’esecuzione dell’inoculo e del conteggio.
Lecco 15-16 dicembre 2005
Azioni correttive in caso di non conformità dell’operatore
Per l’operatore in formazione e per gli operatori non coinvolti nell’attività routinaria, le non conformità riscontrate durante l’esecuzione delle prove specifiche riguardanti l’inoculo e/o il conteggio,
deve esercitare le sue capacità di inoculo e/o di conteggio affiancando gli operatori già idonei alla mansione durante l’attività di laboratorio routinaria e dopo un congruo periodo di tempo, a giudizio del RS, ripetere le prove specifiche in cui si sono verificate le non conformità.
PROVVISORIA NON IDONEITA’ ALLA MANSIONE
Lecco 15-16 dicembre 2005
Azioni correttive in caso di non conformità dell’operatore
Se dall’elaborazione delle prove di ripetibilità e proporzionalità eseguite durante l’attività di laboratorio routinaria dall’operatore già idoneo all’esecuzione dell’inoculo si evince una non accettabilità dei risultati ottenuti
+
In caso di accettabilità dei risultati ottenuti da questa prova specifica l’operatore continua a mantenere l’idoneità all’esecuzione del conteggio.
occorre verificare l’effettiva idoneità dell’operatore sottoponendolo alla prova specifica.
+
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Azioni correttive in caso di non conformità dell’operatore
Nel caso invece di non conformità riscontrate durante l’esecuzione delle prove per la ripetibilità e riproducibilità del conteggio
occorre eseguire nuovamente la prova, dopo aver esercitato la capacità di conteggio affiancando il RS nelle letture dei terreni.
+
Lecco 15-16 dicembre 2005
FREQUENZE DELLA VALUTAZIONETIPO DI ATTIVITA’ FREQUENZA
Operatore in formazione
Prova per la valutazione ripetibilità dell’inoculoEntro 1 mese
Prova per la valutazione proporzionalità dell’inoculo
Prova per la valutazione ripetibilità del conteggioEntro 3 mesi
Prova per la valutazione riproducibilità del conteggio
Operatore già idoneo alla mansione (impiegato nell’attività routinaria di laboratorio)
Valutazione ripetibilità dell’inoculo durante attività routinaria 20 prove ogni 2 mesi
Valutazione proporzionalità dell’inoculo durante attività routinaria
15 prove ogni 6 mesi
Prova per la valutazione ripetibilità del conteggio Ogni 6 mesi
Prova per la valutazione riproducibilità del conteggio Ogni 6 mesi
Operatore già idoneo alla mansione (non impiegato nell’attività routinaria di laboratorio)
Prova per la valutazione ripetibilità dell’inoculo annuale
Prova per la valutazione proporzionalità dell’inoculo annuale
Prova per la valutazione ripetibilità del conteggio Ogni 6 mesi
Prova per la valutazione riproducibilità del conteggio Ogni 6 mesi
Lecco 15-16 dicembre 2005
Prove idoneità all’esecuzione dell’inoculoOperatore in formazione o non coinvolto nell’attività
routinaria
Un operatore non coinvolto nella prova ma già idoneo alla mansione prepara un campione contaminato con ceppi batterici secondo la procedura
Gli operatori devono eseguire questa prova devono effettuare, nell’arco della stessa giornata sul campione preparato in laboratorio:- TRE DILUZIONI del campione ( TQ, 1:2,1:10)-Per ogni diluzione 5 PROVE IN PARALLELO
Lecco 15-16 dicembre 2005
FASI SVOLTE DA UN OPERATORE GIA’ IDONEO ALLA MANSIONE CHE NON PARTECIPA ALLA PROVA
FASE SVOLTE DALL’OPERATORE VALUTATO
SCHEMA PER L’ALLESTIMENTO DILUIZIONI ESCHERICHIA COLI
Tecnica per filtrazione
1 McF = 3x108 cellule/ml
DILUIZIONE 10-1: 100 l (3x108 cellule/ml) + 900 l fisiologica = 1 ml (3x107 cellule/ml) DILUIZIONE 10-2: 100 l (3x107 cellule/ml) + 900 l fisiologica = 1ml (3x106 cellule/ml)DILUIZIONE 10-3: 100 l (3x106 cellule/ml) + 900 l fisiologica = 1 ml (3x105 cellule/ml)DILUIZIONE 10-4: 100 l (3x105 cellule/ml) + 900 l fisiologica = 1 ml (3x104 cellule/ml)DILUIZIONE 10-5: 1 ml (3x104 cellule/ml) + 9 ml fisiologica = 10 ml (3x103 cellule/ml)DILUIZIONE 10-6: 3 ml (3x103 cellule/ml) + 6 ml fisiologica = 9 ml (1x103 cellule/ml)DILUIZIONE 10-7: 2 ml (1x103 cellule/ml) + 18 ml fisiologica = 20 ml (1x102 cellule/ml)Terreno utilizzato: m-ENDO
CAMPIONE DI PARTENZA: 20 ml di diluzione 10-7 con 100 cellule/ml
Preparare 5 provette di a)DIL 1: 1 ml (100 cellule/ml) + 9 ml fisiologica = 10 ml (10 cellule/ml)Filtrare ogni provetta Risultato atteso:100 celluleDILUIZIONE 10-8: 5 ml (100 cellule/ml) + 5 ml fisiologica = 10 ml (50 cellule/ml)
Preparare 5 provette di a)DIL 2: 1 ml (50 cellule/ml) + 9 ml fisiologica = 10 ml (5 cellule/ml)Filtrare ogni provetta Risultato atteso: 50 celluleDILUIZIONE 10-9: 1 ml (100 cellule/ml) + 9 ml fisiologica = 10 ml (10 cellule/ml)Preparare 5 provette di:•DIL 3 : 1 ml (10 cellule/ml) + 9 ml fisiologica = 10 ml (1 cellula/ml)Filtrare ogni provetta Risultato atteso:10 cellule
Lecco 15-16 dicembre 2005
Occorre seguire la seguente prova per ogni tecnica diversa di inoculo secondo le informazioni:
Tecnica da testare
Terreno da utilizzare
Ceppo batterico
MdP di riferimento
Inclusione Water Plate Agar
E.coli n.2: Carica batterica totale
Spatolamento Baird Parker S.aureo n.16:Stafilococco aureo negli alimenti
Filtrazione m-Endo E. coli n.51: Coliformi totali nelle acque
Prove idoneità all’esecuzione dell’inoculoOperatore in formazione o non coinvolto nell’attività
routinaria
L’operatore esegue l’inoculo con le rispettive diluzioni e repliche
Per il personale in formazione il conteggio viene eseguito dal RS che raccoglierà i dati
Lecco 15-16 dicembre 2005
TAL QUALE 1:2 1:10
REPLICA 1 218 107 21
REPLICA 2 214 104 25
REPLICA 3 175 118 23
REPLICA 4 203 102 28
REPLICA 5 197 126 30
MEDIA 201,4 111,4 25,4 TOTALE 1,73 TOTALE ACCETTABILE
G 2n-1 REPLICHE 5,837 3,7139 2,095
Accettabilità ripetibilità dei risultatiACCETTABILE ACCETTABILE ACCETTABILE
DATA: 10/07/04OPERATORE VALUTATO: Elisa CodegaTECNICA ANALITICA TESTATA:spatolamentoTERRENO UTILIZZATO:T7+TCC
DILUIZIONI VALUTAZIONE PROPORZIONALITA' DELL'INOCULO
G 2 sper PROPORZIONALITA'0,006 ACCETTABILE
0,656 ACCETTABILE
VALUTAZIONE RIPETIBILITA' DELL'INOCULO
0,013 ACCETTABILE
2,071 ACCETTABILE
0,710 ACCETTABILE
Lecco 15-16 dicembre 2005
TAL QUALE 1:2 1:10REPLICA 1 218 107 21REPLICA 2 214 104 25REPLICA 3 175 118 23REPLICA 4 203 102 28REPLICA 5 197 126 30MEDIA 201,4 111,4 25,4 TOTALE 1,73 TOTALE ACCETTABILE
G 2n-1 REPLICHE 5,837 3,7139 2,095
Accettabilità ripetibilità dei risultati ACCETTABILE ACCETTABILE ACCETTABILE
11,646
NON CONFORMITA' RISCONTRATE____________________________________________
IDONEITA' ALL'INOCULO SI NO
PROVA DI IDONEITA' ALL'ESECUZIONE DELL'INOCULO PER L'OPERATORE IN FORMAZIONE
DATA: 10/07/04OPERATORE VALUTATO: Elisa CodegaTECNICA ANALITICA TESTATA:spatolamentoTERRENO UTILIZZATO:T7+TCC
DILUIZIONI VALUTAZIONE PROPORZIONALITA' DELL'INOCULO
G 2 sper PROPORZIONALITA'0,006 ACCETTABILE0,656 ACCETTABILE0,013 ACCETTABILE2,071 ACCETTABILE0,710 ACCETTABILE
VALUTAZIONE RIPETIBILITA' DELL'INOCULO ANALISI DELLA DISPERSIONE TOTALE
G2 totale 7,54 ACCETTABILE
3,457
Il calcolo dell’accettabilità dei risultati viene eseguito automaticamente secondo il seguente criterio:
G2n-1 <9,488: RIPETIBILITA’ ACCETTABILE
9,488< G2n-1 >13,277: RIPETIBILITA’ CRITICA
G2n-1 >13,277: RIPETIBILITA’ NON ACCETTABILE
Lecco 15-16 dicembre 2005
TAL QUALE 1:2 1:10REPLICA 1 300 120 32REPLICA 2 251 80 18REPLICA 3 200 83 21REPLICA 4 255 90 26REPLICA 5 300 119 23MEDIA 261,2 98,4 24 TOTALE 3,65 TOTALE ACCETTABILE
G 2n-1 REPLICHE 27,160 15,4308 4,651
Accettabilità ripetibilità dei risultati NON ACCETTABILE NON ACCETTABILE ACCETTABILE
NON CONFORMITA' RISCONTRATE____________________________________________
IDONEITA' ALL'INOCULO SI NO
G2 totale 23,73 NON ACCETTABILE
5,587 CRITICA
VALUTAZIONE RIPETIBILITA' DELL'INOCULO ANALISI DELLA DISPERSIONE TOTALE
2,305 ACCETTABILE8,853 NON ACCETTABILE
4,910 CRITICA13,974 NON ACCETTABILE
TERRENO UTILIZZATO:T7+TCC
DILUIZIONI VALUTAZIONE PROPORZIONALITA' DELL'INOCULO
G 2 sper PROPORZIONALITA'
PROVA DI IDONEITA' ALL'ESECUZIONE DELL'INOCULO PER L'OPERATORE IN FORMAZIONE
DATA: 10/07/04OPERATORE VALUTATO: -----------TECNICA ANALITICA TESTATA:spatolamento
Il calcolo dell’accettabilità dei risultati viene eseguito automaticamente secondo il seguente criterio:
Gsper<3.841: PROPORZIONALITA’ ACCETTABILE3.841< Gsper >6.635: PROPORZIONALITA’ CRITICAGsper >6.635 PROPORZIONALITA’ NON ACCETTABILE
Lecco 15-16 dicembre 2005
Gli operatori, durante l’attività routinaria di laboratorio, devono eseguire in maniera randomizzata delle prove in parallelo e delle diluizioni su campioni reali al fine di valutare la ripetibilità e la proporzionalità nell’inoculo.
Il RS si occuperà poi di effettuare le letture, raccogliere i dati compilando il Modulo 2 e la proporzionalità degli operatori compilando il Modulo 3.
Prove idoneità all’esecuzione dell’inoculoOperatore coinvolto nell’attività routinarai
Lecco 15-16 dicembre 2005
NOME OPERATORE: XXXXXXXXXXX
MESE DI febbraio-marzo
ANNO:
DATA TERRENO NRGAREPLICA
1REPLICA
2MEDIA G n-1
2 RIPETIBILITA'
febbraio PCA 37AM 23 20 21,5 0,21 ACCETTABILEfebbraio BP 84AL 24 15 19,5 2,10 ACCETTABILEfebbraio Bcereus 91CQ 154 137 145,5 0,99 ACCETTABILEfebbraio Bcereus 91CQ 141 148 144,5 0,17 ACCETTABILEfebbraio CID 92CQ 59 73 66 1,49 ACCETTABILEfebbraio CID 92CQ 59 58 58,5 0,01 ACCETTABILEfebbraio MCK 288TA 254 266 260 0,28 ACCETTABILEfebbraio CID 355AL 200 180 190 1,05 ACCETTABILEfebbraio PCA 393TA 114 107 110,5 0,22 ACCETTABILEfebbraio PCA 455TA 114 107 110,5 0,22 ACCETTABILEmarzo MCK 498TA 390 387 388,5 0,01 ACCETTABILEmarzo TSC 552CQ 27 24 25,5 0,18 ACCETTABILEmarzo TSC 552CQ 37 31 34 0,53 ACCETTABILEmarzo BP 466AL 90 100 95 0,53 ACCETTABILEmarzo MCK 575TA 24 23 23,5 0,02 ACCETTABILEmarzo PCA 634AL 180 166 173 0,57 ACCETTABILEmarzo PCA 743TA 98 81 89,5 1,62 ACCETTABILEmarzo PCA 744TA 101 89 95 0,76 ACCETTABILEmarzo WPCA 803AP 23 20 21,5 0,21 ACCETTABILEmarzo WPCA 804AP 49 57 53 0,60 ACCETTABILE
n° %
20 1000 00 0
11,76
NON CONFORMITA' RISCONTRATE____________________________________________
TOTALE PROVE ACCETTABILITOTALE PROVE NON ACCETTABILI
TOTALE PROVE CRITICHE
VALUTAZIONE RIPETIBILITA' DELL'OPERATORE GIA' IDONEO ALLA MANSIONE
VALUTAZIONE RIPETIBILITA' OPERATORE
VALUTAZIONE RIPETIBILITA' TOTALE
G2 totale dell'operatore ACCETTABILE
NOME OPERATORE: XXXXXXXXXXXX
MESE DI febbraio-maggio
ANNO: 2004
DATA TERRENO NRGA Dil Valori SommaRapporto diluizione
G2 sper Proporzionalità
454
46
287
31
146
65
240
27
228
30
333
25
257
17
177
18
200
15
171
16
n° %
10 200
0 0
NON CONFORMITA' RISCONTRATE____________________________________________
G 2 totale operatore 2,9726 ACCETTABILE
TOTALE PROVE ACCETTABILI
TOTALE PROVE NON ACCETTABILI
VALUTAZIONE PROPORZIONALITA' TOTALE
171 100,0659 ACCETTABILE
16 1maggio PCA 2008AL
1
2
200 101,2550 ACCETTABILE
15 1maggio PCA 2048AL
1
2
177 100,0046 ACCETTABILE
18 1aprile PCA 1348AL
1
2
257 103,0780 ACCETTABILE
17 1aprile PCA 1087AL
1
2
333 102,0764 ACCETTABILE
25 1marzo CID 1016MV
1
2
228 101,8615 ACCETTABILE
30 1marzo MCK 1008AL
1
2
240 100,3263 ACCETTABILE
27 1marzo PCA 937TA
1
2
146 20,6148 ACCETTABILE
65 1febbraio PCA 888AL
1
2
0,1629 ACCETTABILE2 31 1
2 46 1
febbraio TSC 91CQ
1 287 10
Valutazione proporzionalità
febbraio TSC 91CQ
1 454 100,0072 ACCETTABILE
Il calcolo dell’accettabilità dei risultati viene eseguito automaticamente secondo il seguente criterio:
G2n-1 <3,841: RIPETIBILITA’ ACCETTABILE
3,841<G2n-1 >6,635: RIPETIBILITA’ CRITICA
G2n-1 >6,635: RIPETIBILITA’ NON ACCETTABILE
Lecco 15-16 dicembre 2005
Prove idoneità all’esecuzione del conteggio
Tutti gli operatori
Gli operatori coinvolti in queste prove sono almeno tre, due tra quelli già idonei alla mansione o in formazione e il Responsabile Subunità (RS).Per questa prova è opportuno utilizzare le stesse capsule Petri per tutti gli operatori usandone una serie che comprenda terreni per i quali sia prevista o meno identificazione morfologica in fase di lettura scelte tra quelle ottenute dalle diverse determinazioni di routine con una contaminazione compresa tra 15 e 300 UFC seguendo i criteri riportati in tabella 3
Terreno Parametro Matrice N° di piastre Senza identificazione morfologica
Plate Count agar Carica Batterica totale Alimenti e Acque
5
Con identificazione morfologica
Variabile Variabile Alimenti e Acque
5
Lecco 15-16 dicembre 2005
Il RS sceglierà, volta per volta, il terreno dove viene prevista l’identificazione morfologica con cui eseguire la prova, utilizzando dei criteri di rotazione rispetto ai terreni utilizzati all’interno del laboratorio.
L’operatore dovrà seguire i criteri di conteggio riportati nel MdP di riferimento e per i terreni con identificazione morfologica dovrà eseguire il conteggio delle colonie che in fase di lettura vengono presuntivamente attribuite al germe ricercato (solo colonie reputate TIPICHE).
Prove idoneità all’esecuzione del conteggio
Tutti gli operatori
Lecco 15-16 dicembre 2005
Ogni operatore dovrà eseguire conteggi in doppio in modo da non essere influenzato da quelli ottenuti in precedenza da esso stesso o da altri operatori.Per ottenere questo risultato occorre che vengano assegnate in maniera cieca le piastre agli operatori coinvolti
Prove idoneità all’esecuzione del conteggio
Tutti gli operatori
Una volta che il foglio di lavoro personale risulterà compilato in tutte le sue parti l’operatore consegnerà i risultati al RS
Lecco 15-16 dicembre 2005
1. il RS esegue il primo conteggio delle piastre, riportandolo nell’allegato 2, durante l’attività routinaria di lettura in laboratorio e se reputa le piastre adatte all’esecuzione della prova le ripone in cella a 4°C e comunica la disponibilità di piastre per l’esecuzione delle prove agli altri operatori;
2. Un operatore che non partecipa alla prova, distribuisce le piastre agli operatori che devono eseguire la prova cancellando il codice identificativo, la diluizione e la data dalla piastra ed attribuendo un codice numerico seguendo la tabella riportata nell’allegato 3;
3. Gli operatori coinvolti nella prova, tranne il RS, eseguono nell’arco della mattinata, la prima replica di conteggio e segnano il risultato su un foglio di lavoro personale riportato nell’allegato 2;
4. L’operatore che non partecipa alla prova cancella nuovamente i codici dalle piastre ed attribuisce un nuovo codice seguendo lo schema riportato nella tabella dell’allegato 2 e ripone le piastre in cella a 4°C;
5. Gli operatori e il RS eseguono, entro 24 ore dal primo conteggio, la seconda replica di conteggio e riportano il risultato ottenuto sul foglio di lavoro personale riportato nell’allegato 3.
Lecco 15-16 dicembre 2005Il Responsabile della sezione di Microbiologia
Tabella attribuzione piastre e letture del RSProva per la ripetibilità/riproducibilità del conteggio dell’operatoreSCAMBIO DI PIASTRE EFFETTUATO DA:_________________OPERATORI CONVOLTI NELLA PROVA:___________________________________
DATA IDENTIFICATIVO
CAMPIONE
TERRENO UTILIZZATO N° attribuito alle piastre nel primo
conteggio
N° attribuito alle piastre nel secondo
conteggio
1 14
2 20
3 16
4 19
5 11
6 15
7 13
8 17
9 12
10 18
Il Responsabile della sezione di Microbiologia
Lecco 15-16 dicembre 2005
OPERATORE VALUTATO:Elisa Codega
PROVA TERRENO Replica 1 Replica 2 Media Varianza s u i u i2 TIPO DI CONTEGGIO
1 PCA 221 226 223,5 12,5 3,54 0,0158 0,000252 PCA 210 212 211 2 1,41 0,0067 4,49E-053 PCA 122 121 121,5 0,5 0,71 0,0058 3,39E-054 PCA 97 97 97 0 0,00 0,0000 05 PCA 103 108 105,5 12,5 3,54 0,0335 0,0011236 CID 53 52 52,5 0,5 0,71 0,0135 0,0001817 CID 49 51 50 2 1,41 0,0283 0,00088 BP 91 89 90 2 1,41 0,0157 0,0002479 BP 77 77 77 0 0,00 0,0000 0
10 MYP 35 38 36,5 4,5 2,12 0,0581 0,003378
NON CONFORMITA' RISCONTRATE____________________________________________
PROVE DI IDONEITA' ALL'ESECUZIONE DEL CONTEGGIO: valutazione ripetibilità
DATA:03/07/04
VALUTAZIONE RIPETIBILITA' DEL CONTEGGIORIPETIBILITA'
TOTALE MEDIA RIPETIBILITA'
Senza interpretazione della colonia
0,02 ACCETTABILE
Con interpretazione della colonia
0,0304 ACCETTABILE
Viene poi automaticamente calcolata , la ripetibilità dell’operatore sulla replica (u2i) e
quella totale ottenuta dall’operatore sul terreno senza identificazione morfologica (ua) e su quello con identificazione morfologica (ub)
Il calcolo dell’accettabilità dei risultati viene eseguito automaticamente secondo il seguente criterio:ua<0,02: RIPETIBILITA’ senza identificazione morfologica ACCETTABILEua >0,02: RIPETIBILITA’ senza identificazione morfologica NON ACCETTABILEub<0,1: RIPETIBILITA’ con identificazione morfologica ACCETTABILEub>0,1: RIPETIBILITA’ con identificazione morfologica NON ACCETTABILE
Lecco 15-16 dicembre 2005
OPERATORE VALUTATO:Daniela Pilato
PROVA TERRENO Replica 1 Replica 2 Media Varianza s u i u i2 TIPO DI CONTEGGIO
1 PCA 77 60 68,5 144,5 12,02 0,1755 0,0307952 PCA 77 74 75,5 4,5 2,12 0,0281 0,0007893 PCA 44 43 43,5 0,5 0,71 0,0163 0,0002644 PCA 66 76 71 50 7,07 0,0996 0,0099195 PCA 45 43 44 2 1,41 0,0321 0,0010336 #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0!7 #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0!8 #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0!9 #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0!
10 #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0!
NON CONFORMITA' RISCONTRATE: non accettabilità della prova senza interpretazione della colonia….RIPETERE PROVA
PROVE DI IDONEITA' ALL'ESECUZIONE DEL CONTEGGIO: valutazione ripetibilità
DATA:14/06/04
VALUTAZIONE RIPETIBILITA' DEL CONTEGGIORIPETIBILITA'
TOTALE MEDIA RIPETIBILITA'
Senza interpretazione della colonia
0,09 NON ACCETTABILE
Con interpretazione della colonia
#DIV/0! #DIV/0!
n
uu
n
i
A
1
2
2
Scarto tipo:
1
2
n
CCs i
Scarto tipo relativo: C
sui
Ci il conteggio ottenuto sulla piastra
il conteggio medioC
Lecco 15-16 dicembre 2005
Prove idoneità all’esecuzione del conteggio
Tutti gli operatori
Occorre inserire i conteggi ottenuti dagli operatori e dal RS sulla stessa piastra nel modulo 5 per verificare la dispersione dei dati ottenuti e quindi la riproducibilità dei conteggi ottenuti dai vari operatori.
Per confrontare la ripetibilità di conteggio dei vari operatori in automatico viene applicata l’equazione confrontando gli operatori a due a due per comprendere se i conteggi ottenuti dai vari operatori sono tra loro congruenti o statisticamente differenti.
i
i
isp C
C
Cn 22
dove Ci è il valore di conteggio riscontrato nella capsula
Lecco 15-16 dicembre 2005
OPERATORI VALUTATI: A: Elisa Codega
221 225 218 225 221 218226 226 214 226 226 214122 125 114 125 122 114121 124 116 124 121 116
97 98 93 98 97 9397 98 92 98 97 92
103 110 102 110 103 102108 110 103 110 108 103210 224 214 224 210 214212 223 215 223 212 215
53 55 52 55 53 5252 55 54 55 52 5449 53 54 53 49 5451 52 54 52 51 5491 89 89 89 91 8989 89 88 89 89 8877 77 77 77 77 7777 77 77 77 77 7735 40 37 40 35 3738 38 37 38 38 37
NON CONFORMITA' RISCONTRATE____________________________________________
accettabile
accettabile
DATA:03/07/04
PROVE DI IDONEITA' ALL'ESECUZIONE DEL CONTEGGIO: prova di riproducibilità
CONTEGGIO OPERATORE A E RS CONTEGGIO OPERATORE B E RS CONTEGGIO OPERATORE A E B
B: -------------
A RSRIPRODUCIBILITA'
BRIPRODUCIBILITA'
Xsp Xsp XspB RS
RIPRODUCIBILITA'A
PCA0,08 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,45 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,35 COMPATIBILITA' ACCETTABILE
PCA0,08 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,77 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,38 COMPATIBILITA' ACCETTABILE
PCA0,01 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,32 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,22 COMPATIBILITA' ACCETTABILE
PCA0,30 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,53 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,21 COMPATIBILITA' ACCETTABILE
PCA0,73 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,37 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,07 COMPATIBILITA' ACCETTABILE
CID0,13 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,11 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,05 COMPATIBILITA' ACCETTABILE
CID0,17 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,05 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,35 COMPATIBILITA' ACCETTABILE
BP0,03 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,01 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,05 COMPATIBILITA' ACCETTABILE
BP0,00 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,00 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,00 COMPATIBILITA' ACCETTABILE
MYP0,34 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,16 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,13 COMPATIBILITA' ACCETTABILE
Riproducibilita' operatore A: ELISA CODEGASenza identificazione morfologica non accettabile
Con identificazione morfologica non accettabile
Lecco 15-16 dicembre 2005
OPERATORI VALUTATI:
42 41 77 41 42 7753 40 60 40 53 6064 72 77 72 64 7772 70 74 70 72 7444 38 44 38 44 4446 39 43 39 46 4352 56 66 56 52 6665 58 76 58 65 7639 35 45 35 39 4541 34 43 34 41 43
PROVE DI IDONEITA' ALL'ESECUZIONE DEL CONTEGGIO: prova di riproducibilità
CONTEGGIO OPERATORE A E RS CONTEGGIO OPERATORE B E RS CONTEGGIO OPERATORE A E B
A RSRIPRODUCIBILITA'
BRIPRODUCIBILITA'
Xsp Xsp XspB RS
RIPRODUCIBILITA'A
PCA2,50 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 17,05 COMPATIBILITA' NON ACCETTABILE 11,14 COMPATIBILITA' CRITICA
PCA0,62 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,37 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 1,29 COMPATIBILITA' ACCETTABILE
PCA1,07 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,63 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,11 COMPATIBILITA' ACCETTABILE
PCA1,54 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 3,88 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 4,49 COMPATIBILITA' ACCETTABILE
PCA0,88 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 2,36 COMPATIBILITA' ACCETTABILE 0,48 COMPATIBILITA' ACCETTABILE
DATA:14/06/04B: ----------------- A: -------------
Il criterio su cui si basa il confronto è il seguente:<7,815: DIFFERENZA ACCETTABILE e quindi OPERATORI CONGRUENTI7,815> >11,345: DIFFERENZA CRITICA >11,345: DIFFERENZA NON ACCETTABILE e quindi OPERATORI
STATISTICAMENTE DIFFERENTI
2sp
2sp
2sp
Nel caso in cui i ottenuti dall’operatore valutato, sia rispetto al RS che all’altro operatore, risultino accettabili nel 95% dei casi, si ritiene che l’operatore conti in maniera riproducibile.
2sp
Lecco 15-16 dicembre 2005
MESE DI agosto-gennaio
ANNO:2003-2004
riproducibilità
VALUTAZIONE COMPLESSIVA DELL'IDONEITA' DEL LABORATORIO
R totale
ripetibilità
VALUTAZIONE CONTEGGIO
G 2tot G 2totAccettabilità
risultati
NOME OPERATORE
ripetibilità proporzionalità
VALUTAZIONE INOCULO
senza identificazione con identificazione
op 1 40 21,23 5 4,18 0,005 0,01 ACCETTABILE
op 2 33 37,87 8 3,28 0,02 0,03 ACCETTABILE
op 3 6 14,22 15 11,57 0,02 0,02 ACCETTABILE
op 4 4 14 10 21,97 0,02 0,03 ACCETTABILE
op 5 6 18,91 15 23,5 0,02 0,02 ACCETTABILE
op 6 6 15,33 15 4,068 0,007 0 ACCETTABILE
op 7 6 8,482 15 11,85 0,01 0,01 ACCETTABILE
op 8 6 13,9 15 21,2 0,01 0 ACCETTABILE
op 9 6 5,96 15 14,031 0,02 0,03 ACCETTABILE
senza ident. con identif ic. media
G2 totale 0,016 0,023 0,02
CONTEGGIO
routin
no attività routinaria
IDONEITA'
149,902 115,649
R totaleG 2tot G 2tot
Accettabilità risultati
NOME OPERATORE
113 113
INOCULORIPETIBILITA'
RIPETIBILITA' PROPORZIONALITA'
TOTALE PROVEX2 limite
IDONEITA'
PROSPETTO RIASSUNTIVO IDONEITA' DEL LABORATORIO
Accettabile: SI NOAccettabile: SI NO
Accettabile: SI NOAccettabile: SI NO
IDONEITA'
ACCETTABILE
Ripetibilità
113 113151 151
ACCETTABILE
Proporzionalità
CONTEGGIO
RipetibilitàRiproducibilità
INOCULO
Operatori coinvolti
nell’attività routinaria
Operatori non coinvolti nell’attività routinaria
Il Laboratorio risulta quindi complessivamente idoneo all’esecuzione delle analisi microbiologiche quantitative poiché tutti gli operatori mostrano abilità e competenza nell’esecuzione dell’inoculo e del conteggio.