Lineamientos Para Determinar La Calidad Del Agua de Mar Para Uso Recreativo

8/6/2019 Lineamientos Para Determinar La Calidad Del Agua de Mar Para Uso Recreativo

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SECRETARIA DE SALUD

COMISIN FEDERAL PARA LA PROTECCIN CONTRA RIESGOSSANITARIOS

LINEAMIENTOS PARA DETERMINAR LACALIDAD DE AGUA DE MAR PARA USO

RECREATIVO CON CONTACTO PRIMARIO

MARZO 2004

SECRETARADE SALUD SALUD


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ndice

1.- INTRODUCCIN 3

2.- OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIN...3

3.- ATRIBUCIONES Y COMPETENCIAS3

4.- CRITERIOS DE CALIDAD DE AGUA DE MAR PARA USO RECREATIVO 4

5.- CRITERIOS PARA LA TOMA DE MUESTRA 4

6.- FRECUENCIA DE MUESTREO 5

7.- PROCEDIMIENTO DE MUESTREO 5

8.- MATERIAL PARA MUESTREO.. 6

9.- PRESERVACIN DE LAS MUESTRAS 6

10.-MTODOS ANALTICOS 6

10.1 Mtodo del sustrato cromognico definido6

10.2 Mtodo de tubos mltiples 9

10.3 Mtodo de filtro por membrana 10

11.- BIBLIOGRAFA 13

12.- ANEXO 14


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LINEAMIENTOS PARA DETERMINAR LA CALIDAD DE AGUA DE MAR PARA USORECREATIVO CON CONTACTO PRIMARIO

1. INTRODUCCION

La calidad de agua para uso recreativo en centros tursticos es un factor primordial paragarantizar la proteccin de la salud de los usuarios y un punto de inters para el sectorturstico, dado que las playas adquieren un valor agregado al contar con un nivelaceptable de calidad del agua.

Los estudios en agua marina y playas indican que las enfermedades de las mucosas, dela piel y digestivas asociadas con los baistas estn directamente relacionadas con losniveles de contaminacin fecal. Los enterococos fecales son el indicador bacteriolgicoms eficiente para evaluar la calidad de agua de mar para uso recreativo de contactoprimario, dado que resiste a las condiciones del agua de mar y est relacionadodirectamente con enfermedades como gastroenteritis, enfermedades respiratorias,conjuntivitis y dermatitis, entre otras.

El grupo de enterococos fecales es un subgrupo de los estreptococos fecales y sondiferenciados de otros estreptococos por su habilidad para crecer en 6.5 % de cloruro desodio, pH de 9.6 y entre 10 y 45 C.

2. OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIN

Los presentes lineamientos establecen un mtodo para la deteccin y cuantificacin deenterococos fecales en agua de mar para uso recreativo con contacto primario.

El objetivo es proteger la salud de la poblacin baista estableciendo criterios declasificacin de playas de acuerdo a los niveles de enterococos presentes en el agua, yel procedimiento de muestreo y el mtodo de prueba para determinar este indicador enagua de mar.

Estos lineamientos son aplicables a zonas recreativas de playa en la RepblicaMexicana que de acuerdo a su afluencia turstica requieran vigilancia de la calidad del

agua.

3. ATRIBUCIONES Y COMPETENCIAS

Las autoridades estatales de Salud sern responsables de:


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4. CRITERIOS DE CALIDAD DE AGUA DE MAR PARA USO RECREATIVO CONCONTACTO PRIMARIO

El enfoque adoptado para la definicin de los criterios de calidad microbiolgica deaguas costeras para uso recreativo se obtuvo de estudios evaluados por la OrganizacinMundial de la Salud en los cuales se definen una serie de valores del indicadorasociados con un aumento en la frecuencia de diferentes tipos de enfermed. Lainformacin que contribuye a la definicin de los valores proviene de:

Valores umbrales y niveles de efectos adversos principalmente para

gastroenteritis y otros efectos sobre la salud publicados en estudiosepidemiolgicos individuales.

Tasas de incidencia de enfermedades derivadas de las curvas tpicas dedistribucin de enfermedades y de funciones de densidad de probabilidad paraorganismos indicadores.

Estos estudios indican que los sntomas gastrointestinales y las enfermedadesrespiratorias febriles agudas y los estreptococos/enterococos pueden brindar una basecientfica lo suficientemente slida para asociar un efecto sobre la salud humana con lacalidad del agua recreativa. La mayora de estudios han identificado a los estreptococosy enterococos fecales como los indicadores ms estrechamente relacionados con losefectos sobre la salud en aguas costeras.

Por lo que los criterios para clasificar las playas que la Secretara de Salud estableceson:

Enterococos NMP/100 ml Clasificacin de la playa0 - 500 APTA PARA USO RECREATIVO> 500 NO APTA PARA USO RECREATIVO

Las playas se clasificarn de acuerdo a los niveles del cuadro anterior, considerandomuestras puntuales.

5. CRITERIOS PARA LA TOMA DE MUESTRA

Muchos cuerpos de agua usados para actividades recreativas frecuentemente son pocohomogneos con respecto a sus propiedades microbiolgicas, en estos casos esnecesario un muestreo en puntos mltiples. Los sitios pueden ser seleccionados conbase a informacin obtenida durante una medicin ambiental y poblacional, es decir, ensitios con:


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6. FRECUENCIA DE MUESTREO

El muestreo deber realizarse con una frecuencia mensual en tanto la calidad del aguasea apta para uso recreativo, en caso contrario cambiar la periodicidad del muestreohasta que las condiciones del agua se restablezcan.

Es importante que el muestreo se realice de preferencia en das donde haya mayorafluencia de baistas y procurar que sea tomada a la misma hora.

7. PROCEDIMIENTO DE MUESTREO

Las muestras se tomarn de acuerdo a las siguientes consideraciones:

En zonas de oleaje tranquilo, tomar las muestras en reas donde la profundidad delagua llegue a 1.0 m aproximadamente (cintura del verificador), la muestra debertomarse a contracorriente del flujo entrante y a 30 centmetros aproximadamente bajola superficie del agua.

En zonas de playa con rompiente cercana a la orilla, pasar la rompiente a unaprofundidad del agua de 1-1.15 metros. El verificador deber colocarse a

contracorriente del flujo entrante y tomar la muestra de agua a 30 centmetros bajo lasuperficie del agua. Si la pendiente del fondo es pronunciada, tomar la muestra en laorilla, donde la profundidad del agua est entre el tobillo y la rodilla, llenar elrecipiente procurando que contenga un mnimo de arena.

Tomar una muestra para determinar la temperatura del agua de mar.

En la orilla de la playa anotar en la hoja de verificacin, bitcora o cadena de custodia laidentificacin de la muestra, hora y temperatura. Llenar los datos de la etiqueta del

envase con fecha y hora del muestreo, identificacin de la muestra e iniciales delverificador.

De acuerdo al tipo de recipiente:

a) Frasco de vidrio.-. Aflojar levemente el tapn del frasco y el papel de proteccin,manejndolos como unidad y evitando que se contamine el tapn o el cuello delfrasco. Introducir el frasco con la boca hacia abajo hasta la profundidad seleccionadaal tipo de playa, quitar el tapn e invertir el frasco para llenarlo hasta que quede 1/3del frasco del volumen libre, poner el tapn y sacar el frasco.

b) Bolsa de plstico.- Quitar la tira de seguridad a la bolsa, introducir la bolsacerrada a la profundidad deseada, la cual deber quedar en sentido contrario al flujode corriente (para evitar que el agua toque primero las manos del verificador ydespus entre en la bolsa), una vez que se llena hasta el 80-90% de su volumen secierra, se saca la bolsa del agua. Mientras se jalan con fuerza los alambres, girar labolsa varias veces unir los extremos del alambre y retorcerlos entre s Llenar dos


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Bolsas de plstico. Bolsas de polietileno, estriles, con sello hermtico y de 180ml a 300 ml de capacidad.

(En ambos casos deber sersin tiosulfato de sodio en los recipientes)

9. PRESERVACIN DE LAS MUESTRAS Y ALMACENAMIENTO

Las muestras de agua deben preservarse de a 1 a 5C y en oscuridad durante sutransporte al laboratorio, deben ser colocadas en hielo para evitar que se contaminen sedebe evitar la inmersin de los recipientes en el agua deshielada. Bajo ningn motivodeben congelarse. De preferencia el anlisis debe ser inmediato, en todo caso no debe

rebasar las 24 horas desde que fue tomada la primera muestra.

10. METODO ANALITICO

10.1 Mtodo del sustrato cromognico definido1

Introduccin

La determinacin de organismos enterococos por medio del sustrato cromognico, sefundamenta en el uso de sustratos cromognicos hidrolizables para la deteccin deenzimas del grupo enterococo como E. faecium y E. fecales. Cuando se utiliza estatcnica, el grupo se define como todas las bacterias que poseen la enzima -glucosidasay capaces de romper el sustrato cromognico, dando como resultado una liberacin delcromgeno.

Principio

El mtodo Enterolert emplea un indicador nutriente que emite fluorescencia cuando esmetabolizado por las bacterias del grupo enterococo. La tecnologa del sustrato definidoevita la necesidad de utilizar azida de sodio utilizada en los mtodos tradicionales. Elsustrato cromognico tal como el orto-nitrofenil--D galactopiransido (ONPG) u otroequivalente, es empleado para detectar la enzima -glucosidasa, la cual es producidapor bacterias el grupo Enterococo.

La enzima -glucosidasa hidroliza al sustrato y provoca un cambio de color, el cual indicay sustenta una prueba positiva despus de 24 horas sin procedimientos adicionales.

En lo que se refiere a Enterococos, un sustrato fluorognico como el 4-metilumbeliferil---D-glucornido (MUG) es utilizado para detectar la enzima -glucosidasa. La enzima -glucosidasa hidroliza el sustrato, produciendo fluorescencia cuando el lquido esexpuesto a la luz ultravioleta de onda larga (365 nm)


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Formulacin del sustrato

Las formulaciones del sustrato se presentan comercialmente en tubos mltiples o enrecipientes para muestras de 100 ml para la determinacin de presencia /ausencia.Tambin son aprovechables porciones prepesadas del reactivo para mezclar y dosificaren tubos mltiples para pruebas de 10 ml u otros recipientes para muestras de 100 ml.Se requiere de un proveedor confiable para el aseguramiento de calidad y uniformidaddel sustrato comercial. Se debe evitar la exposicin prolongada del sustrato a la luzdirecta del sol.

La formulacin en polvo contiene los siguientes compuestos anhidros (por litro desustrato preparado):

Sulfato de amonio (NH4)2SO4 5.00 grSulfato de manganeso, MnSO4 0.0005 grSulfato de zinc, ZnSO4 0.0005 grSulfato de magnesio, MgSO4 0.10 grCloruro de sodio, NaCl 10.0 grCloruro de calcio, CaCl2 0.05 gr

Sulfito de sodio, Na2SO3 0.04 grAmfotericina B 0.001 grO-Nitrofenil--D-galactopiransido 0.50 gr4-metilumbeliferil--D-glucornico 0.075 grSolanio 5.3 grBuffer Hepes de ac, orgnicos 6.9 gr

Procedimiento

Se prepara una dilucin 1:10 con agua destilada estril. Por ejemplo, 10 ml. de muestracon 90 ml. de agua estril. Separe cuidadosamente un paquete de reactivo en polvo,procurando no abrir el paquete siguiente. Golpee el paquete ligeramente para hacer quetodo el polvo Enterolert se acumule en la parte inferior del paquete. Abra el paqueterompiendo la parte superior a nivel de la raya cuidando no tocar la apertura del paquete.Agregue el reactivo a una muestra diluida previamente 1:10. Tape y selle el recipiente deforma asptica. Agite para disolver el reactivo por completo. Vierta la mezcla de muestra

y reactivo en el dispositivo (charolas) del sellador, evitando tocar la lengeta metlica.Identifique la charola con la muestra correspondiente. Selle con calor la charola con lamuestra para distribuirla en las 49 celdas grandes y 48 pequeas de la charola. Incubedurante 24 horas a 41C 0.5C. Lea los resultados al cabo de 24 horas. Cuente elnmero de celdas fluorescentes de la charola utilizando una lmpara de luz ultravioleta.Es posible que la intensidad de las celdas positivas varie. Consulte la tabla de NMP

d t i l b bl d t l t L


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incub por 28 horas puede haber poco desarrollo de fluorescencia e interpretarse comonegativo o puede desarrollarse ms celdas fluorescentes e interpretarse con falsos

positivos.

Reporte

Si se desarroll el procedimiento del NMP, calcular el valor de NMP del nmero deceldas positivas, de acuerdo a las tablas de nmero ms probable, correspondiente(aplicar el factor de correccin de acuerdo a la dilucin utilizada.

Control de calidad

Pruebe cada lote del sustrato comercial desarrollando la prueba por inoculacin de tresbacterias de control: enterococcus faecium ATCC 35667, Serratia marcescens(gram-) ATCC 43862,Aerococcus viridans (gram +) ATCC 10400. El primero producefluorescencia pero el segundo y tercero no la producen.

Medidas de seguridad

Asegurar que la fuente de luz UV sea de onda larga (365 nm). En caso de usar unafuente mas poderosa como de 15 watts, usar lentes o goggles protectores de los ojos.

10.2 Mtodo de Tubos Mltiples

Materiales y medio de cultivo

a) Caldo de azida dextrosa

Extracto de carne 4.5 grTristona o polipeptona 15.0 grGlucosa 7.5 grCloruro de sodio, NaCl 7.5 grAzida de sodio, NaN3 0.2 grAgua grado reactivo 1 L

Debe estar a un pH de 7.2 0.2 a 25C despus de esterilizacin.

b) Agar de enterococos selectivo PSE

Peptona C (triptona) 17.0 grPeptona B (proteosa peptona) 3.0 grExtracto de levadura 5 0 gr


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Debe estar a un pH de 7.1 0.2 despus de esterilizacin. Mantener el medio por noms de 4 horas de 45 a 50 C antes de vertirlos en las cajas de cultivo.

Procedimiento de prueba presuntiva

Inocular una serie de tubos de caldo de azida dextrosa con porciones de muestra de10ml o menos. Usar caldo reforzado para inocular 10.0 ml. Las porciones usadas puedenllegar a variar en tamao y nmero de acuerdo al tipo de muestras. Usar slo mltiplosdecimales de 1 ml.

Incubar los tubos inoculados a 35 0.5 C. Examinar cada tubo por turbiedad al final de24 2 horas, si no se encuentra turbiedad, en caso de no encontrar reincubar y volver aleer al final de 48 3 hr.

Procedimientos de prueba confirmativa

Tomar todos los tubos con caldo de dextrosa azida que mostraron turbiedad despus de24 a 48 horas de incubacin como positivos.

Sembrar una porcin de crecimiento de cada uno de los tubos positivos de caldo dedextrosa azida en agar PSE. Incubar en las cajas invertidas a 35 0.5 C por 24 2 h.Colonias cafs negruzcas con halos color caf confirman la presencia de estreptococosfecales.

Las colonias cafs negruzcas con halos de color caf pueden ser transferidas a tuboscon caldo de infusin de cerebro-corazn conteniendo 6.5 % de NaCl. El crecimiento encaldo de NaCl al 6.5% y a 45C indican que las colonias pertenecen al grupo de

enterococos.

Estimar la densidad de estreptococos fecales del nmero de tubos en cada serie dediluciones que fueron positivos en PSE. Similarmente, estimar la densidad deenterococos del nmero de tubos en cada serie de dilucin conteniendo estreptococosque crecieron en caldo de NaCl al 6.5 %.

10.3 Mtodo de filtro de membrana

Aparatos de laboratorio

Para un anlisis de filtracin de membrana se debe usar cristalera y otros aparatoscompuestos de material libre de agentes que pueden afectar el crecimiento bacterial.Botellas de muestreo.


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Microscopio y fuente de luz.- Para determinar el conteo de colonias en filtro demembrana, usar una magnificacin de 10 a 15 dimetros y una fuente de luz

fluorescente blanca ajustada a dar un mximo discernimiento del brillo. Preferentementeusar un microscopio con campo binocular amplio.

Materiales y medio de cultivo.

a) mE Agar para enterococos

Peptona 10 grCloruro de sodio, NaCl 15.0 grExtracto de levadura 30.0 grEsculina 1.0 grActidiona ciclohexamida 0.05 grAzida de sodio, NaN3 0.15 grAgar 15.0 grAgua grado reactivo 1 L

Calentar para disolver los ingredientes, esterilizar y mantener en un bao de agua de 44

a 46 C. Mezclar 0.25 gr de cido nalidixico en 5 ml. de agua grado reactivo, agregarunas pocas gotas de NaOH 0.1 N para disolver el antibitico, y adicionar al medio basal.Adicionar 0.15 gr. de 2,35-cloruro tetrazolium trifenilo y mezclar para una buenadisolucin. Verter el agar en cajas petri de 9 x 50 mm hasta una altura de 4 a 5 mm(aproximadamente 4 a 6 ml), y dejar solidificar. El pH final debe llegar a 7.1 0.2.Colocar el sobrante en la oscuridad de 2 a 10C, despus de 30 das tirar el sobrante.(NOTA: este medio es recomendado para cultivo de enterococos en aguas recreativasdulces y marinas).

b) EIA substrato

Esculina 1.0 grCitrato frrico 0.5 grAgar 15.0 grAgua grado reactivo 1 L

El pH debe llegar a 7.1 0.2 antes de pasar por la autoclave. Calentar para disolver losingredientes, esterilizar y mantener en un bao de agua de 44 a 46C. Verter el medio encajas Petri de 50 mm y a una altura de 4 a 5 mm (aproximadamente 4 a 6 ml), y dejarsolidificar. Preparar el medio fresco por cada grupo de muestras. Mantener el sobranteen la oscuridad de 2 a 10C, despus de 30 das, tirar el sobrante.

) E t t t f l


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Calentar para disolver los ingredientes. No utilizar autoclave. Colocar el cajas petri de 9x 50 mm a una profundidad de 4 a 5 mm (aproximadamente 4 a 6 ml) y dejar solidificar.

Preparar medio fresco por cada grupo de muestras. (NOTA: este medio es recomendadopara el Grupo D de estreptococos en agua dulce y marina).

d) Caldo infusin de cerebro-corazn.

Infusin de cerebro de ternero 200 grInfusin de corazn de res 250 grPeptona proteosa 10.0 grGlucosa 2.0 grCloruro de sodio, NaCl 5.0 grFosfato hidrogenado disdico, Na2HPO4 2.5 grAgua grado reactivo 1 L

El pH debe llegar a 7.4 despus de la esterilizacin.

e) Agar infusin de cerebro-corazn. Adicionar 15.0 gr de agar a los ingredientes decaldos de infusin de cerebro-corazn. El pH debe llegar a 7.4 despus de la

esterilizacin. Los tubos deben estar inclinados.

f) Agar bilis esculina

Extracto de res 3.0 grPeptona 5.0 grOxgall 40.0 grEsculina 1.0 gr

Citrato frrico 0.5 grAgar 15.0 grAgua grado reactivo 1 L

Calentar para disolver los ingredientes. Colocar 8 a 10 ml en tubos inclinados envolumen apropiado. Llevar la autoclave a 121C durante 15 minutos. No sobrecalentardebido a que puede causar obscurecimiento del medio. Mantener de 44 a 46C y colocaren tubos inclinados 15 ml colocar 15 ml en cajas petri de 15 x 100 mm. El pH final

debe llegar a 6.6 0.2 despus de la esterilizacin. Mantener a una temperatura de 4 a10C.

Procedimiento

a) mE Mtodo


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b) m Mtodo enterococos

1. Seleccin de tamao de muestra y filtracin. Igual al punto 1 del m-E-Mtodo.2. Incubacin. Colocar las cajas por 30 minutos, posteriormente invertirlos e

incubarlos a 35 0.5C por 48 horas.


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11. BIBLIOGRAFIAStandard Methods for the Examination of Water and Wastewater; Eaton A, Clesceri L,Greenberg A.; 19th edition 1995

Norma Oficial Mexicana. NOM-014-SSA1-1993. Procedimientos sanitarios para elmuestreo de agua para uso y consume humano en sistemas de abastecimiento de aguapblicos y privados. Diario Oficial e la Federacin, 12 de agosto de 194.

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