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Lnea 5

Estructura, funcin y manipulacinde pptidos y protenas

Programas

5.1 Caracterizacin qumica y cintica de proteasas de altaespecificidad de venenos de reptiles mexicanos.

5.2 Purificacin y caracterizacin qumica de toxinas de ve-nenos de alacranes.

5.3 Aislamiento y caracterizacin de receptores especficosmediante el uso de toxinas peptdicas.

5.4 Caracterizacin funcional de toxinas peptdicas.5.5 Purificacin y caracterizacin del activador del plasmi-

ngeno de la saliva de murcilagos hematfagos.5.6 Desarrollo y optimizacin de mtodos y sistemas de pu-

rificacin de protenas y pptidos.5.7 Produccin de anticuerpos monoclonales contra ppti-

dos y protenas.5.8 Ingeniera de protenas.

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Programa 5.1 Caracterizacin qumica y cintica de pro-teasas de alta especificidad de venenos de reptiles mexicanos.

Los venenos de saurio s y ofidios ponzoosos son fuentesmuy ricas de enzimas proteolticas. Sin embargo, han sidopoco estudiados.

Por medio de cromatografa de afinidad y mtodos con-vencionales de purificacin se han obtenido en forma ho-mognea una calicrena y dos actividades de plasmingenodel veneno del saurio Heloderma horridum. Su caracteriza-

cin permite explicar a nivel molecular las relaciones filoge-nticas del Heloderma con otros organismos y su participa-cin en la fisiopatologa de la intoxicacin por la mordedurade este animal.

Tambin se realiza un estudio de tamizado para detectarestas y otras actividades proteolticas en el veneno de unaveintena de vboras endmicas de nuestro pas. Se explorasu potencial en investigacin bsica y la aplicacin de estasherramientas tan selectivas.

Proyectos especficos

Secuenciacin de la helodermatina, una calicrena nuevapresente en el veneno de Heloderma horridum.A. Alagn, L.D. Possani y W.D. Schleuning1985/T/S/DBQ

Accin molecular de helodermina sobre el sustratonatural.

B. Sosa, A. Alagn y W.D. Schleuning1985/P/S/DBQ

Programa 5.2 Purificacin y caracterizacin qumica de to-xinas del veneno de alacranes.

Los venenos de muchas especies de alacranes continenpolipptidos y protenas altamente txicos para el hombre.

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El aislamiento y la caracterizacin qumica de estos compo-nentes txicos han permitido descubrir el mecanismo mo-lecular de accin de los mismos. Entre los animales cuyo ve-neno ha sido ampliamente estudiado estn las serpientes ylos alacranes. Por medio de tcnicas cromatogrficas y elec-trocinticas se ha podido separar un gran nmero de poli-pptidos y protenas neurotxicas con efecto de receptores(acetilcolina), canales inicos (Na +, K+, Ca ++) y una serieimportante de funciones fisiolgicas como secrecin pancre-tca, hipotermia y liberacin de neurotransmisores.

Las toxinas han sido purificadas a homogeneidad y sucomposicin de aminocidos y la secuencia primaria ha sidoo est en vas de determinarse.

Proyectos especficos

Aislamiento y caracterizacin qumica de toxinas del ve-neno del alacrn Centruroides noxius .L.D. Possani, E.M. Martin y E. Carbone1982/P/SIDBQ

Secuencia total de aminocidos de una toxina aislada delveneno del alacrn Centruroides limpidus tecomanus.A.N. Ramrez, B.M. Martn, G.E. Gurrola y L.D. Possani1984/T/SIDBQ

Aislamiento y caracterizacin de toxinas del veneno delalacrn Centruroides infamatus infamatus.M.D. Dehesa, B.M. Brian y L.D. Possani1985/T/SIDBQ

Estructura primaria de toxinas del alacrn Tityus serrula-tus.

L.D. Possani, B.M. Martin, M. Fletcher y P.L. Fletcher19811P/SIDBQ

Purificacin y caracterizacin de la taicatoxina, un nuevoy selectivo pptido bloqueador del canal de calcio.

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L.O. Possani, E.M. Martin, A. Yatani, F.Z. Zamudio, J. Moch-ea y A.M. Brown1985/P/S/DBQ

Purificacin y caracterizacin de una toxina causante dehipotermia a partir del veneno de Heloderma horridum ho-rridum.

J. Mochca, B.M. Martin y 1.0. Possani1981/T/S/DBQ

Aislamiento y caracterizacin de una toxina del venenodel alacrn Centruroides limpidus limpidus que afecta a crus-tceos.C. Balderas y 1.0. Possani1987/I/S/DBQ

Aislamiento y caracterizacin del canal de potasio del axngigante del calamar.H.H.F. Valdivia, G. Prestipino y 1.0. Possani198

como trazadores biolgicos, o se han utilizado para la snte-sis de soportes para cromatografa de afinidad.

Proyectos especficos

Aislamiento y caracterizacin del canal de potasio del ce-rebro de ratn.

H.H.F. Valdivia, A. Zentella, G. Szabo y L.D. Possani1984/P/SIDBQ

Utilizacin de la noxiustoxina y de la taicatoxina para elestudio de la distribucin de canales de potasio y de calcioen membranas excitables.

K. Angelides, Y. Srinivasan, J.M. Mochca, H.H.F. Valdiviay L.D. Possani1986/P/SIDBQ

Programa 5.4 Caracterizacin funcional de toxinas pep-tdicas.

Los pptidos naturales y sintticos han sido utilizadoscomo herramientas en la caracterizacin de ciertas funcio-

nes biolgicas, desde el punto de vista electrofisiolgico, neu-roqumico y morfolgico.

El estudio del mecanismo de apertura y cierre de canalesinicos de membranas excitables ha sido beneficiado con eldescubrimiento de las toxinas peptdicas. De la misma forma,el estudio de la liberacin de neurotransmisores o el estu-dio de la pancreatitis experimental se ha podido llevar a cabogracias al uso de los pptidos naturales y sintticos.

Finalmente, alteraciones morfolgicas y localizaciones in-munohistoqumicas se han podido realizar o visualizar gra-cias al uso de los pptidos mencionados.

Proyectos especficos

Efecto de dos toxinas de alacranes del nuevo mundo encanales de sodio del corazn.

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A. Yatani, G. Kirsch, L.D. Possani y A.M. Brown1985/T/S/DBQ

Efecto de la toxina 11.9.2.2 y 11.10del veneno del alacrnC. noxius en la liberacin de GABA de sinaptosomas del ce-rebro de ratn.M. Sitges, L.D. Possani y A. Bayn1984/P/S/DBQ

Neurotoxinas que actan selectivamente en el canal decalcio del corazn dependiente de voltaje.A. Brown, A. Yatani, A. Lacerda, G.B. Gurrola y L.D. Possani1985/T/S/DBQ

Localizacin del sitio de accin de toxinas de alacrn enel sistema nervioso central por tcnicas de marcaje con an-ticuerpos monoclonales antitoxinas.G.M. Villarreal, A.T. Crabez, M.R.G. Snchez y L.D.Possani1985/T/S/DBQ

Efecto de las toxinas de Tityus serrulatus en la secrecinpancretica.

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P.L. Fletcher, M. Fletcher y L.D. Possani1984/P/S/DBQ

Programa 5.5 Purificacin y caracterizacin del activadorde plasmingeno de la saliva de murcilagos hematfagos.

El activador de plasmingeno (desmocinasa) de Desmo-dus rotundus degrada con gran eficiencia los cogulos san-guneos de mamferos. Se pretende detallar la bioqumicamolecular de esta enzima y explorar su posible utilizacincomo agente tromboltico.

Su alta dependencia de fibrina, su especificidad y su bajainmunogenicidad permiten prever su utilizacin rutinaria enpacientes con trombosis profundas.

Proyectos especficos

Purificacin y caracterizacin qumica de la desmocina-sa, activador del plasmingeno de la saliva del murcilagoDesmodus rotundus.

E. Gmez, B. Sosa, R. Medelln y A. Alagn1985/P/S/DBQ

Dependencia de fibrina para la accin de la desmocinasa.B. Sosa, A. Alagn y W.D. Schleuning1985/P/S/DBQ

Programa 5.6 Desarrollo y optimizacin de mtodos y sis-temas de purificacin de protenas y pptidos.

Se pretende desarrollar metodologas tanto generalescomo especficas para la purificacin de polipptidos utili-zando principalmente tcnicas de cromatografa de afinidad,de intercambio inico, de permeacin en gel, y de alta reso-lucin, electroforesis y difusin a travs de membranas. Asi-mismo, se trabaja en el escalamiento de las metodologas depurificacin de pptidos especficos.

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Proyectos especficos

Utilizacin de la cromatografa de intercambio inico parala purificacin de las cadenas de insulina humana produci-das en bacterias.1. Gereca, X. Alvarado, G. Estrada, N. Cruz y F. Bolvar1984/T/SIDBQ

Utilizacin de la cromatografa de alta presin para puri-ficar a nivel analtico y semipreparativo los pptidos A y Bde insulina humana producidos en bacterias y los produc-tos de reasociac~n qumica.S. Antonio, N. Cruz y 1. Gereca1985/T/SIDBQ

Desarrollo de columnas de inmunoafinidad para TRH.P. ]oseph-Bravo1984/PIDBQ

Optimizacin de un mtodo general de purificacin de en-zimas para manejar cidos nucleicos.1. Vichido y N. Cruz1986/PIDGBM

Programa 5.7 Produccin de anticuerpos monoclonalescontra pptidos y protenas.

Se desarrollan metodologas de produccin de anticuer-pos monoclonales dirigidos contra polipptidos especficos,que sern utilizados para cuantificarlos, caracterizarlos y pu-rificarlos.

Proyectos especficos

Produccin de anticuerpos monoclonales contra LHRHy su utilizacin para la purificacin de la hormona por cro-matografa de afinidad.

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P. Hrion, R. Saavedra y P. ]oseph-Bravo1983/T/SIDBQ

Programa 5.8 Ingeniera de protenas.

Este campo tiene profundas implicaciones en la interpre-tacin molecular de fenmenos fisiolgicos y en la aplica-cin biotecnolgica de protenas especficas. Se persigue pro-fundizar en la relacin estructura-funcin en protenas. Seintentar aplicar este conocimiento en el diseo de prote-nas mejoradas para diversos fines. Se aplicarn los mtodosde ingeniera gentica y gentica clsica en un perodo ini-cial/ y los de grfica molecular y dinmica molecular en unaetapa posterior.

Proyectos especficos

Mutagnesis a saturacin y seleccin de mutantes de es-pecificidad de la endonucleasa EcoRl.M. Alonso y X. Sobern1985/PIDGBM

Aislamiento de DNA que codifica para fragmentos inmu-nognicos no txicos de la toxina tetnica.J. Osuna y X. Sobern1985/P/SIDGBM

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