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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA CHAPINGODEPARTAMENTO DE FITOTECNIA

ACADEMIA DE FISIOLOGÍA VEGETAL

MANUAL DE PRÁCTICAS,Y

BITÁCORA DE LABORATORIO

PARA LA MATERIA DEBIOQUÍMICA VEGETAL

Julio-Diciembre 2015

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Profesor del curso : M.C. Román Sánchez CarrilloCiclo escolar: 2014-2015Semestre escolar: PrimeroGrupoHoraspráctica/semana:Número de equipo:

In tegrantes deequipo: ____________________________________________________

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Práctica 1 modificada delMANUAL DE PRÁCTICAS DE QUÍMICA Y BIOQUÍMICA DE ALIMENTOS.Autores: Armando Santos Moreno

Felix Esparza Torres.

Prácticas de la 2 a la 6 tomadas y modificado del MANUAL DE PRÁCTICAS DEL CURSO DE “BIOQUÍMICA VEGETAL”Autores:Q.F.B. Evangelina Sevilla Paniagua

Q.B.P. Salvador Martínez R.I.B.Q. Félix Esparza Torres

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PRÁCTICA 1

PRESENTACIÓN DEL LABORATORIO.

Esta práctica tiene como objetivo hacer conciente al alumno del reglamento interno dellaboratorio con la finalidad de que no se exponga a situaciones de riesgo que pudieranponer en peligro su integridad física o la de sus compañeros, así como reconocer yfamiliarizarse con el material que se utilizará durante las prácticas

Los estudiantes, auxiliares administrativos y académicos debarán cumplir con lossiguientes puntos:

1. Deberán llegar puntualmente a las instalaciones del laboratorio, teniendo unatolerancia de 10 minutos.

2. Deberán portar bata limpia, durante el trabajo experimental dentro del laboratorio.3. Está estrictamente prohibido fumar, comer y hacer uso del telefono en el

laboratorio.4. Se deberá presentar pulcritud en el trabajo de laboratorio, tanto en las mesas,

material de vidrio y equipo utilizado.5. Antes de realizar las practicas, cada equipo de trabajo debe:

a. Entregar un diagrama del procedimiento de la práctica.b. llenar un vale por el material que utilizará durante la práctica.

6. Al término de cada práctica el equipo entregará el material debidamente limpio.7. Cada equipo de trabajo tendrá como obligación registrar sus datos en el presente

formato de prácticas.8. Cada equipo deberá reportar la practica siguiendo el formato ya establecido en el

presente manual, para la cual el alumno tendrá que poner énfasis en:

1.-Objetivo(s) correspondientes a la práctica2.-Resultados3.-Análisis o discusión de los resultados.4.-Conclusiones.5.-Bibliografía utilizada6.-Anexos, que pueden ser cálculos y cuestionario.

CONSTANCIA Y ÉXITO EN EL CURSO.

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PRÁCTICA 2PREPARACIÓN DE SOLUCIONES

Fundamento

Parte importante de las determinaciones cualitativas y cuantitativas en Bioquímicalo constituyen los reactivos que se utilizan; así como las diferentes soluciones valoradasnecesarias para cuantificar por medio de neutralización un componente, por ello en estapráctica el objetivo principal es recordar la manera de preparar y valorar solucionesporcentuales, normales, molales, etc.

La concentración de una solución puede expresarse en porcentaje, normalidad,molaridad y molalidad.

a) Soluciones porcentuales. Pueden ser preparadas peso a volumen, o bien peso a peso(P/P) con el líquido disolvente, o volumen a volumen (V/V), cuando se trata de doslíquidos.

a) Soluciones normales (N). La normalidad de una dilución es el número de pesosequivalente gramo del soluto contenido en un litro de disolución.

N = Número de equivalentes gramo de solutoNúmero de litros de la disolución

a) Soluciones molales. La molalidad de una disolución es el número de moles desoluto por kilogramo de disolvente contenido en la disolución.

N = Número de moles de solutoNúmero de kilogramos de disolvente

a) Soluciones molares (M). La fracción molar de cualquier componente de unadisolución se define como el número de moles de soluto entre número de litros dedisolución.

N = Número de moles de soluto Número de litros de disolución

Objetivo(s):

Material

• 1 Bureta de 50 ml• 1 Probeta graduada de 25 ml• 4 Matraces Erlenmeyer de 100 ml• 2 Pipetas graduadas• 3 Matraces volumétricos de 100ml

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Reactivos

• Ácido clorhídrico.• Hidróxido de sodio.• Biftalato de potasio.• Solución indicadora de fenolftaleína al 1%

Procedimiento

1) Prepare una solución de NaOH 0.1 N.1) Prepare una solución de biftalato de potasio 0.1N1) Valore la normalidad hidróxido de sodio 0.1 N con el biftalato de Potasio1) Prepare una solución de HCl 0.1 N.1) Valore la solución de HCl 0.1 N con el NaOH 0.1N.1) Utilice fenolftaleina como indicador.

Cálculos realizados para la preparación de soluciones.

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Registro de resultados:

Utilice los criterios de concentración y valoración de soluciones para obtener lamolaridad correcta de las soluciones de: ácido clorhídrico e hidróxido de sodio que preparó.

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Análisis de resultados1.-Compare los datos calculados de forma teórica con los obtenidos experimentalmente.2.-¿Que función tiene el Biftalato de Potasio?

Conclusiones.

Bibliografía propuesta:

Brumblay V., R. 1988. Análisis Cuantitativo. Ed. C.E.C.S.A.

Gilbert H. Ayres, 1970, Análisis Químico Cuantitativo, Ed. Harla.

Bibliografía comp.lementaria.

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ANEXOS

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PRÁCTICA 3SOLUCIONES AMORTIGUADORAS

Fundamento

En ácidos fuertes el pH se puede obtener sabiendo la concentración del ácido,porque suponemos que este tipo de ácidos están disociados totalmente. Pero en lassoluciones de ácidos débiles, para conocer su acidez se debe considerar el equilibrio entreel ácido sin disociar y el disociado (ecuación de Henderson-Hasselbach).

Las soluciones amortiguadoras están constituidas por ácidos y bases débiles quetienen la propiedad de resistir cambios bruscos de pH en la célula, este fenómeno podríadisminuir la actividad enzimática, y en consecuencia originar la muerte de la célula vegetal.

Importancia

Para el mantenimiento de la vida es preciso que el pH interior de las células no varíefuera de estrechos límites cercanos a la neutralidad, los cambios de pH son controlados porsistemas amortiguadores como por ejemplo el sistema carbonato-bicarbonato, el fosfórico-fosfato ambos son los más importantes, otros lo representan algunos ácidos orgánicos comoel cítrico o ácidos grasos aminados.

Material y reactivos

2 Vasos de precipitados de 250 ml1 Potenciómetro1 Agitador de vidrio2 Pipetas graduadas de 5 y 10 ml2 Probetas de 100 mlSolución de ácido fosfórico (H3PO4) 0.1 molarSolución de ácido acético (CH3COOH) 0.1 molarSolución de hidróxido de sodio (NaOH) 0.1 molar

Procedimiento.

Curva de valoración del ácido acético.

1. En un vaso de precipitado de 250 ml agregar 50 ml de solución 0.1 molar de ácido(CH3COOH) y medir el pH.

2. Agregar 5 ml de solución de hidróxido de sodio (NaOH) 0.1 molar y agitar.3. Medir el pH con ayuda del potenciómetro.4. Continuar agregando de 5 en 5 ml de solución de hidróxido al ácido agitando y

midiendo el pH, después de cada adición.

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Curva de valoración del ácido fosfórico.

1. En un vaso de precipitado de 400 ml agregar 50 ml de solución 0.1 molar de ácidofosfórico (H3PO4).

2. Mida el pH con el potenciómetro.3. Agregue 5 ml de solución de hidróxido de sodio (NaOH) 0.1 molar, agite y mida el pH4. Continúe agregando de 5 en 5 ml, hasta completar 100 ml de solución de hidróxido de

sodio 0.1 molar, agitando y midiendo el pH, después de cada adición.

Objetivo(s).

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REGISTRO DE RESULTADOS:

ÁCIDO ACÉTICOpH inicial Vol 7 pH Vol 14 pHVol 1 pH= Vol 8 pH Vol 15 pHVol 2 pH= Vol 9 pH Vol 16 pHVol 3 pH= Vol 10 pH Vol 17 pHVol 4 pH= Vol 11 pH Vol 18 pHVol 5 pH= Vol 12 pH Vol 19 pHVol 6 pH= Vol 13 pH Vol 20 pH

ÁCIDO FOSFÓRICOpH inicial Vol 7 pH Vol 21 pHVol 1 pH Vol 11 pH Vol 22 pHVol 2 pH Vol 12 pH Vol 23 pHVol 3 pH Vol 13 pH Vol 24 pHVol 4 pH Vol 14 pH Vol 25 pHVol 5 pH Vol 15 pH Vol 26 pHVol 6 pH Vol 16 pH Vol 27 pHVol 7 pH Vol 17 pH Vol 28 pHVol 8 pH Vol 18 pH Vol 29 pHVol 9 pH Vol 19 pH Vol 30 pHVol 10 pH Vol 20 pH Vol 31 pH

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I.-Realiza las gráficas para cada uno de los amortiguadores.a)Identifica los pKas reportados en la literatura en cada una de las gráficas.b)Señala en la gráfica las zonas de amortiguación.

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Análisis de resultados:

-Qué diferencia encuentras entre las zonas de amortiguación del ácido acético y del ácidofosfórico, fundamenta la respuesta.-Qué importancia tienen los ácidos débiles en los organismos.

Conclusión(es).

Bibliografía.

Albert L. Lehninger. 1979. Bioquímica. Ediciones Omega, S.A.

R.G.S. Bidwell. 1979. Fisiología Vegetal. Primera Edición en Español. A.G.T. Editor, S.A.

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ANEXOS PRÁCTICA 3

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PRÁCTICA 4CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE AMINOÁCIDOS

La cromatografía es una técnica que permite realizar la separación de los componentes deuna mezcla, gracias a las características fisicoquímicas de cada compuesto, mediante el usode una fase estacionario (en nuestro caso el papel) y una fase móvil (disolvente).

En nuestro caso, utilizares un extracto protéico, en donde la muestra previamente sehidroliza, y posteriormente se efectúa el proceso cromatográfico que implica la aplicaciónde un soluto o sustancia absorbible entre dos fase, una de las cuales está inmóvil oestacionaria (adsorbente o papel) y la otra móvil (disolvente o portador).

La separación de cada aminoácido en una mezcla compleja utilizando las técnicascromatográficas (cromatografía en papel o capa fina), nos permite identificar cada uno delos aminoácidos presentes en la mezcla, con la finalidad de conocer la composición de lamuestra problema.

Las proteínas constituyen uno de los principales componentes de la materia viva enla célula, se pueden encontrar como coloides, formando estructuras o funcionando comoenzimas , por mencionar algunas de sus funciones. Están formadas por veinte diferentesaminoácidos protéicos, unidos mediante enlaces peptídicos, que al ser hidrolizado libera almonómero

En las plantas de acuerdo a la especie varía el tipo de aminoácidos que conforman laproteína, la semilla de soya posee menor proporción de metionina en cambio esteaminoácido se observa en mayor cantidad en las semillas de ajonjolí. Estas diferencias y lamisma conformación de la proteína son compuestos importantes de esta práctica.

Meterial

Placa con soilica gel para cromatografíaCámara de cromatografíaHorno de secado.Regla de 30 cm

Reactivos

Hidrolizado de proteínasDisolvente (Butanol-ácido-acético-agua)Solución reveladora (Ninhidrina)

Procedimiento

Separación Cromatográfica

1. Marcar en el papel filtro la líneas de colocación de las muestras.2. Colocar con ayuda del capilar cada una de las muestras (soluciones estándar y muestra

problema) dejando secar a temperatura ambiente.

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3. Llevar a la cámara de elución previamente saturada con los disolventes y dejar eluirentre 18 y 24 horas.

4. Transcurrido el tiempo secar el cromatograma y marcar el frente del disolvente.5. Dejar secar el cromatograma en la estufa durante 20 minutos, después aplicar el

revelador (solución de Ninhidrina)6. Determinar los Rf para cada uno de los aminoácidos y la muestra problema.

Cálculos

Rf del componente C = Distancia recorrida por C Distancia recorrida por D

C = ProblemaD = Disolvente (frente del disolvente)

Cuestionario

1. Tipo de aminoácidos identificados.2. Fórmula y nombre de los aminoácidos esenciales.3. Aminoácidos presentes y porcentajes en los que se encuentran en los cultivos de soya,

maíz, trigo y arroz.

Bibliografía

Daviet T. Plummer. 1981. Bioquímica Práctica. Ed. Mc Graw-Hill Latinoamericana, S.A.

Domínguez S. Alejandro. 1982. Cromatografía de papel y en capa delgada. O.E.A.Washington, D.F.

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PRÁCTICA 5CINÉTICA DE LAS REACCIONES ENZIMÁTICAS

Introducción

Para que se lleve a cabo una reacción química algunas veces es necesarioproporcionar diferentes tipos de energía, que puede ser térmica, eléctrica o agregarcatalizadores. En la célula en cambio para efectuar las reacciones existen activadorespropios del citoplasma que conocemos como enzimas.

Las enzimas y otras moléculas en el metabolismo son imprescindibles, para efectuarlas diversas reacciones químicas por medio de las cuales la planta sintetiza y transformasustancias a fin de obtener tanto los materiales de que está hecha como la energía con quetrabaja.

Para actuar las enzimas necesitan ponerse en contacto con el sustrato y formar uncomplejo enzima-sustrato cuya vida es de fracciones de segundo pero suficiente para quepor su alta energía inicie la reacción.

Las enzimas se encuentran en toda la célula vegetal y llevan a cabo funcionesespecíficas, un ejemplo lo constituyen los Glioxisomas y Peroxisomas, cuerposmicroscópicos que poseen enzimas relacionados con el metabolismo de las grasas y con laproducción de glicolato en la fotosíntesis. Su presencia es objeto de esta práctica.

Equipo

Matraz volumétrico de 500 mlMortero de PorcelanaVaso de precipitado de 300 mlEmbudo de vidrioProbeta graduadaPipetas graduadas de 2, 5 y 10 ml5 Tubos de SmithCronómetro

Material

Chícharos frescos

Reactivos

Carbonato de calcioSolución de peróxido de oxígeno al 3%

Procedimiento

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1. Pesar 5 gramos de chícharos frescos.2. Molerlos en el mortero con 50 ml de agua destilada3. Agregar 0.2 g de carbonato de calcio4. filtrar y transferir el filtrado a un matraz volumétrico de 100 ml.5. Numerar 5 tubos de Smith y agregar a cada uno 7 ml de extracto de enzima.6. Enseguida agregar las cantidades de agua destilada a cada tubo que en el cuadro 1 se

indican.7. Tener a la mano cronómetro8. agregar a cada tubo las cantidades de sustrato indicadas en el cuadro 1 tomando el

tiempo, (homogeneizar y dejar pasar 10 segundos).

Cuadro 1. Cantidades de solución enzimática, sustrato y agua destilada.

M I L I L I T R O SNo. Del tubo Solución de

Enzimas (E)AguaDestilada

Solución de *H2O2 al 3% (S)

1 8.5 4 02 8.5 3.6 0.43 8.5 3.2 0.84 8.5 3.0 1.05 8.5 2.5 1.5

9. Después de 2 minutos tomar lectura del oxígeno producido.

OBJETIVO(s).

RESULTADOS.

Registro del volmen de O2 producido en cada uno delos ensayos.

TUBO V DE O2 PRODUCIDO123456

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ANÁLISIS DE RESULTADOS

a) Elabora la gráfica relacionando el volumen de sustrato contra el volumen de oxígenoproducido.

b) ¿Cuál es la función de la peroxidasa en los vegetales? ¿En qué ruta participa y cuál esla función de la ruta?

CONCLUSIÓN

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Bibliografía

N.E. Tolbert. 1980. The Biochemistry of plants. A Comprechsive treatise Vol. I, The plantcell. Editor Depto. Biochemistry, Michigan State U.

R.G.S. Bidwell. 1979. Fisiología Vegetal A.G.T. Editor.

ANEXOS

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PRÁCTICA 6REACCIONES CUALITATIVAS PARA IDENTIFICAR CARBOHIDRATOS EN

EXTRACTOS VEGETALES

Fundamento

Los carbohidratos tienen la propiedad de reaccionar con algunos compuestosespecíficos y producir coloraciones o precipitados; por ejemplo, el reactivo de Seliwanoffes utilizado para identificar cetosas; la reacción de Fehling en cambio produce unprecipitado rojo con los azúcares reductores, estas características se aprovecharán en estapráctica con el fin de identificar el tipo de azúcares que poseen los vegetales.

Importancia

Los carbohidratos son biomoléculas cuyas funciones más importantes son: Comomaterial energético, sustancias de reserva, formadores de los compuestos estructurales en laplanta, deben ser reconocidos e identificados de acuerdo a su estructura molecular, porquede ésta depende su función en la planta y en el fruto.

Material y equipo

Extracto de frutas (uva, naranja, lima o caña) soluciones al 40% aproximadamente.Baño María (vaso de precipitado)Mechero BunssenSoporte universalAnillo para soporteRejilla de asbestoGradilla para tubos de ensayoPinzas para tubos de ensayo20 tubos de ensayo5 vasos de precipitado de 5 ml2 vasos de precipitado de 600 ml10 pipetas graduadas de 1 ml10 pipetas graduadas de 5 ml5 pipetas graduadas de 10 ml5 pipetas volumétricas de 5 mlProbeta graduada de 25 ml2 matraces Erlenmeyer de 250 mlEmbudo tallo cortoPapel filtro Whatman No. 1

Reactivos

-Resorcinol -Orcinol -Ácido clorhídrico concentrado-Sulfato de cobre Penta-hidratado -Tartrato de sodio y potasio-Hidróxido de sodio -Acetato de cobre

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Reactivo de Seliwanoff. A 3.5 de solución resorcinol (Resorcinol al 0.5%) agregar 12 ml deácido clorhídrico concentrado; diluir a 35 ml con agua destilada (preparar el día deuso).

Reactivo de orcinol de vial. Disolver un gramo de orcinol y un ml de cloruro férrico al 10%en 500 ml de ácido clorhídrico.

Reactivo de Fehling. Solución a (solución de sulfato de cobre); disolver 34.64 g de sulfatode cobre (CuSO4)5112O) en agua destilada y diluir a 500 ml, filtrar si es necesario.Solución B, disolver 173.9 de tratado de sodio y potasio y 50 g de hidróxido desodio en 500 ml de agua destilada, filtrar si es necesario.

Reactivo de Barfoed. En 25 ml de agua destilada, disolver 1.66 g de acetato de cobre, filtrarla solución y añadir 0.625 ml de ácido acético al 38%.

Procedimiento.

1) Reacción de Seliwanoff. Esta reacción es específica para identificar cetonas en losextractos que la contengan al formarse un compuesto (Hidroximetil furfural) el cualcombinado con el resorcinol da una coloración rojo brillante, las aldosas dancoloración rosa.

a) En tubos marcados como testigos y problemas, agregue 5 ml de reactivo deSeliwanoff.

b) A los tubos marcados con problemas agregue 1 ml de los extractos de fruta.c) A los tubos marcados como testigos agregue 1 ml de cada una de las soluciones de

azúcares.d) Ambos tubos caliéntelos en Baño María 15 minutos.e) Anote los cambios de color observados para cada uno de los tubos.

2) Reacción de Orcinol de Vial. Esta reacción se emplea para diferenciar pentosas dehexosas, de acuerdo a la coloración obtenida. Las pentosas con este reactivo producenun color verde intenso por la formación del complejo furfural. Las hexosas por elcontrario, al contacto con el reactivo producirán coloración amarilla o marrón debidoal hidroxi-metil furfural formado.

a) En tubos previamente identificados colocar 1 ml de la solución de azúcares, y en losde problemas 1 ml de solución de éstos.

b) A todos los tubos agregar 1 ml de reactivo de orcinol.c) Sumergir los tubos en Baño María durante 15 minutos, observar y anotar los

cambios.3) Reacción de Fehling. Esta reacción nos sirve para identificar azúcares reductores, ya

que el grupo aldehído y cetónico de éstos es un medio alcalino y con el complejo desodio-potasio y cobre dan un precipitado rojo ladrillo.

a) Soluciones A y B del reactivo de Fehling se mezclan en el momento de emplearlo(5 ml de solución A y 5 ml de B).

b) En tubos identificados agregar 1 ml de cada una de las soluciones de azúcares, y alde sacarosa agregar unas gotas de ácido clorhídrico (hidrólisis).

c) En otros tubos marcados con los nombres de las soluciones de frutas, agregar 1 mlde éstas.

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d) A todos los tubos adicionar 2.5 ml de reactivo de Fehling al tubo con sacarosahidrolizada, neutralizar con solución de NaOH antes de añadir solución de Fehling.Hacer la misma reacción con sacarosa sin hidrolizar.

4) Reacción de Barfoed. Esta reacción se emplea para diferenciar un monosacárido de undisacárido, se basa en las diferentes velocidades de reacción que existen entre unmonosacárido y un disacárido reductor con el acetato de cobre.

a) A 5 ml de las soluciones de azúcares, así como a 5 ml de las soluciones de frutasañadir ml de reactivos de Barfoed.

b) Colocar los tubos en Baño María, anotar los tiempos aproximadamente en queaparece el precipitado rojo en cada uno de los tubos.

Objetivo(s).

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Resultados:

Tipo de reacciónMUESTRAS

SELIWANNOF ORCINOL FEHLIN BARFOED

Análisis de resultados:Qué cambios observaste en cada una de las muestras en función de las reacciones, explicatú respuesta fundamentándola en el principio de la reacción (escribe las reacciones).

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Conclusión(es).¿Qué tipo de carbohidratos tienen las diferentes muestras analizadas?

Bibliografía

AOAC. 1975. Official Methods of Analysis of the Associacition of Official AnalyticalChemists.

Conn, E.C. 1982. Bioquímica Fundamental. Ed. Limusa.

Lit Wack, G. 1967. Bioquímica Experimental. Ed. Omega, S.A.

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ANEXOS PRÁCTICA 4

25

PRÁCTICA 7CUANTIFICACIÓN DE AZÚCARES EN JUGO DE NARANJA

(Método volumétrico de Fehling con modificación de Soxhlet)

Fundamento

El análisis de los azúcares presente en vegetales en este caso se realizaaprovechando el poder reductor que presentan aquellos compuestos que poseen gruposcarbonilo (aldehido y acetona) de reducir el cobre.

Importancia

Cuando son verdes algunas frutas contienen almidón que se transforma en azúcaresal llegar a la completa madurez.

El almidón es con frecuencia el mayor sustrato respiratorio en este caso esdegradado por enzimas como la fosforilasa, amilasa o amilosa.

Después del desdoblamiento del almidón por las enzimas quedan libres residuos dehexosas y destrinas que pueden servir como iniciadores de las síntesis de nuevas moléculasde almidón.

Se ha comprobado que la degradación de almidón por la amilasa es el sistemautilizado por las semillas para movilizar sus reservas en cambio, en las hojas y lostubérculos el almidón se moviliza por la reacción de la fosforilaza en todos los casos ladegradación implica formación de azúcares, estos pueden ser reductores o no reductores enfunción del cultivo y la etapa fisiológica.

Material

3 matraces Erlenmeyer de 250 ml2 vasos de precipitado2 pipetas volumétricas de 5 ml2 pipetas graduadas de 10 ml1 bureta de 50 ml2 matraces volumétricos de 250 ml2 tubos de ensayo2 papeles filtro Whatman No. 12 embudos tallo largo2 vasos de precipitado de 250 mlMorteroParrilla eléctricaSoporte UniversalPinzas para bureta

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Reactivos y soluciones

Solución sacarosa invertida Solución de Fehling ASolución de Fehling B Azul de metilo al 1%Acido clorhídrico concentrado Solución de fenolftaleína al 1%Acido sulfúrico concentrado

Procedimiento en muestras de naranja

preparación de la solución problema .

1. Extraer el jugo de varias naranjas colar y filtrar.2. Tome 40 ml del jugo filtrado páselos a un matraz volumétrico de 250 ml y afore con

agua destilada, ésta es la solución de azúcares.

Efectuar el procedimiento de clarificación con crema de alumbre.

Procedimiento general

Azúcares reductores directos

1. Coloque en un matraz Erlenmeyer (de 250 ml) 10 de solución Fehling recién preparada(en el momento mezclar Feheling A y Fehling B en iguales proporciones).

2. Agregue 50 ml de agua destilada y ponga en la parrilla a ebullición.3. Agregue a la solución 3 gotas de indicador azul de metilo cuando ya este caliente la

solución.4. Coloque en la bureta la solución de azúcares del problema.5. Empiece a titular con la solución de azúcares, el reactivo de Fehling caliente.6. Cuando aparezca un precipitado y el color de la solución cambie detenga la titulación y

anote los ml gastados para obtener azúcares reductores directos.

Azúcares reductores totales

1. Tome 20 ml de solución problema de azúcares páselos a un matraz volumétrico de 100ml.

2. Adicione 5 ml de ácido Clorhídrico concentrado y pase a un baño María por 15 minutos(aproximadamente a 65ºC)

3. Saque el matraz y enfríe al chorro de agua.

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4. Agregue 5 gotas de fenolftaleína con hidróxido de sodio y potasio neutralice la soluciónal primer color rosa observado, agregando 1 ml de hidróxido para tener un medioalcalino.

5. En esta solución se valoran los azúcares reductores totales.6. Con esta solución valore nuevamente el reactivo de Felhing (pasos 4, 5 y 6 segunda

parte).

Objetivo(s).

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REGISTRO DE RESULTADOS.

Azúcares reductores directos.

Repetición Volumen gastado (ml)12345678

Promedio =

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Azúcares reductores totales

Repetición Volumen gastado (ml)12345678

Promedio =

Muestra estándar de sacarosa invertida.

Cantidad de sacarosa utilizada____________________

Cálculo del V de Fehling que reacciona con la sacarosa.

Repetición Volumen gastado (ml)12

Promedio =

Cálculos para la concentración de azucares totales en el fruto de naranja:

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Análisis de resultados.¿Qué importancia tiene conocer la [carbohidratos] en los frutos?

Conclusión(es).

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Bibliografía.

ANEXOS PRÁCTICA 7

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PRÁCTICA 8EXTRACCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE LÍPIDOS EN SEMILLAS OLEAGINOSAS

Fundamento.

Los vegetales en general sintetizan aceites como producto de almacenamiento y lamayor proporción se encuentra en la semilla.

La extracción de aceites se lleva a cabo por medio de disolventes no polares (éter,benceno, cloroformo, etc.) por las propiedades hidrofóbicas que poseen los lípidos.

Importancia

Los lípidos son substancias de reserva en la célula y están formados por ácidosgrasos y gliocerol.

En los vegetales la cantidad de lípidos encontrados en las células es diferente; porejemplo en tallos por lo general las células son más ricas en celulosa y lignina, en cambioen las células de semillas existe una mayor proporción de lípidos; por otra parte tambiéndepende de la especie y las condiciones ambientales para favorecer o no la síntesis de aceitesobre todo en las especies oleaginosas.

El aceite extraído de las diferentes especies es utilizado para la alimentaciónhumana o bien en la industria.

Por esto es importante conocer la síntesis y formación de lípidos en las distintasespecies vegetales.

Material y equipo

Material

Semillas de diferentes tipos de oleaginosas, soya, girasol, etc…

Equipo

Equipo de extracción (Soxhlet o Goldfish)Placas de calentamientoCartuchos o dedales (para colocar las muestras)

Reactivos

Éter de petróleo

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Procedimiento

1) Primeramente se debe moler o triturar las semillas, a las cuales se les va a extraer elaceite (en mortero o molino).

2) Identifique perfectamente el cartucho donde colocará su muestra3) Pasar aproximadamente 2 g de muestra molida en el cartucho para Goldfish, o bien 4 g

si es de Soxhlet.4) Preparar el equipo de extracción (Soxhlet o Goldfish), teniendo cuidado de revisar las

conexiones de agua y la placa de calentamiento.5) Pesar el vaso de Goldfish o bien el matraz balón (después de haberlos puesto a peso

constante).6) En el matraz balón colocar 200 ml de éter de petróleo para el Soxhlet y para el

Goldfish 60 ml de disolvente en el vaso.7) Colocar las muestras y los recipientes con el disolvente en su respectivo equipo de

extracción.8) Encender la placa de calentamiento a una temperatura de 50 ºC.9) Dejar que se efectúe la extracción durante 3 horas continuas.10) Retirar el recipiente de las placas de calentamiento.11) Evaporar el éter a temperatura ambiente.12) Para asegurarse la evaporación completa, colocar los recipientes en estufa de secado a

50ºC durante una hora.13) Conservar el extracto para la siguiente práctica (7).

Objetivo(s).

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_______________________________________________________________________

_______________________________________________________________________

Registro de datos:

Tipo de muestra utilizada:_______________________

Peso del cartucho con la muestra:_______________________

Peso del cartucho con la muestra después de la extracción:_____________________

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Cálculos parea la concentración de aceites:

% de aceite en la muestra:_____________________________

Análisis de resultados.Según la bibliografía que tipo de aceites se encuentran en la muestra que trabajaste y enque proporción, compara con los datos obtenidos.

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PRÁCTICA 9CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE LíPIDOS

Introducción.

La cromatografía es un método de separación de compuestos contenidos en unamezcla, mediante la distribución entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otramóvil, por lo que se tienen varios tipos de cromatografía dependiendo de la naturaleza delas dos fases involucradas; sólido-líquido (capa fina, papel o columna), líquido-líquido ygases-líquido. Todas las técnica cromatográficas dependen de la distribución de loscomponentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles, la móvuil que transporta lassustancia que se separarán y la estacionaria que sirve como medio de soporte

En nuestro caso se utilizará una placa de vidrio recubierta con silica gel quefuncionará como fase estacionaria, el eluyente, fase móvil, ascenderá por capilaridad através de la silica y arrastrará los componentes a lo largo de esta, separándolos segúncompartan la polaridad con el eluyente.

Los eluyentes más comúnmente utilizados son:

Éter de petroleo, tolueno, acetato de etilo, ciclohexano, éter etílico , cloroformo,etanol, metanol ácido acético y agua.

Material .

Placas de silica gel.Cámaras de vidrioAplicadores (capilares)Éter de petróleo.Éter etílicoAceites de diferentes oleaginosasPapel, regla y marcador

Procedimiento:

Preparación del eluyente: mezcla a parte iguales éter de petróleo y éter etílico (1:1) ycolóquelo en una cámara, a otra cámara agréguele éter de petróleo y éter etílico en relación1.5:0.5.

En una hoja de papel traza un cuadrado que corresponda con las dimensiones de la placa desilica gel, en uno de los extremos marca a dos centímetros del canto una línea y divídela enocho segmentos (uno por cada muestra), en el centro de cada segmento haz una señal con elmarcador, este seña corresponderá al lugar de aplicación en la placa de silica.

Coloca la placa de silica gel sobre la hoja cuadriculada y realiza la aplicación en las zonasseñaladas con el marcador.

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Realiza tres aplicaciones de cada muestra.

Coloca la placa de silica gel en la cámara saturada con la mezcla de eluyentes.

Permite el desarrollo de la cromatografía hasta que el frente del eluyente llegue a doscentímetros del canto de la placa de silica gel.

Deja secar la placa

Revelar con molibdato

Objetivo(s).

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Registro de resultados.

Hacer esquema del cromatograma a escala o incluir fotografía

Análisis

¿Cuántas manchas aparecen en la muestra problema? Investiga que tipo de aceites contiene la muestra problema

Bibliografía

A. O. A. C. 1975. Associstion of Official Analytical Chemistry, Methods of Analysis.William Horwitz. Washington, D.C.

U.C. Mehlenbacher. 1977. Análisis de Grasas y Aceites. Enciclopedia Química Industrial.Tomo 6. Editorial Urmo.