Manual de Practicas Quimico Farmaceutico 4 q.f.b. a y b

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA BENITO JUÁREZ DE OAXACA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

CARRERA PLAN DE ESTUDIOSCLAVE DE LA ASIGNATURA

NOMBRE DE LA ASIGNATURA

QUIMICO FARMACEUTICO

BIOLOGO2009-2009

MICROBIOLOGIA GENERALTITULAR :Q.B. EDILBERTA GARCIA SANTOS

PRÁCTICA NÚMERO

NOMBRE DE LA PRÁCTICAFECHA Y

DURACIÓN

1ESTERILIZACION DE MATERIAL Y

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO 2 sesiones

1 INTRODUCCIÓN

Para poder estudiar el comportamiento de los microorganismos en el laboratorio, el microbiólogo deberá contar, entre otras cosas, con material y medios de cultivo estériles. La esterilización es el proceso mediante el cual se destruyen todas las formas de vida de un objeto, medio o superficie. Para lograr este fin , se cuenta con una variedad de métodos y su elección dependerá de la naturaleza del material que se va a esterilizar.Los métodos de esterilización son: calor, ya sea seco o húmedo, filtración, radiaciones y agentes químicos.

2 OBJETIVOS

Al finalizar el presente ejercicio los alumnos serán capaces de: Comprobar la efectividad del proceso de esterilización, Elaborar adecuadamente los medios de cultivo deshidratados y por componentes. Envasar los medios de cultivo de manera adecuada en los diferentes recipientes de

acuerdo al uso que se les dará.

3 FUNDAMENTOPor su pequeño tamaño los Microorganismo no pueden estudiarse como individuos sino, que es necesario manejarlos como poblaciones. Para ello es necesario cultivarlos e decir, favorecer su multiplicación in Vitro.

4 PROCEDIMIENTOA EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO

Matraces Erlenmeyer de 250. 500 y 1,000ml Tubo de ensaye de 16 X 150 mm y de 22x 175mm Pipetas de 1 y 10 ml Cajas de petri Probeta de 100ml Vaso de precipitado de 250 ml Espátula , gradilla y agitador de vidrio Mechero

Refrigerador Incubadora Esterilizador

Termómetros Extracto y peptona de carne Agar exento de inhibidores Agua destilada Soluciones de HCL y NaOH 0.5 N Mezcla crómico Solución amortiguadora

Potenciómetro, autoclave y balanza granataria

Balanzas granatarias

B DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

1. Lavar toda la cristalería con jabón (de preferencia usar Dextran) para eliminar materia orgánica. Y Secarlo a temperatura amiente o en una estufa.

2. Envolver con papel las cajas de petri como indique el profesor, anotar en el papel el numero de caja , la fecha de preparación y el nombre de operario

3. Poner en la boquilla de las pipetas un filtro de algodón, de tal manera que el aire pase libremente a través de cada pipeta.

4. Envolver con papel cada pipeta y marcar en la envoltura el volumen de cada una de ellas.5. Cada equipo preparara el volumen del medio de cultivo indicado (caldo nutritivo, agar

nutritivo, gelatina nutritiva, agar EMB, agar sal y manito, agar Mac Conkey).6. Colocar la mitad del volumen total de agua destilada en el recipiente en donde se va a

preparar el medio de cultivo 7. Pesar en papel cada uno de los componentes del medio. 8. Adicionar la otra mitad de agua y homogenizar el contenido.9. Los medios líquidos no se calientan en tanto que los medios fluidos y sólidos que llevan agar,

es necesario calentarlos. tapar el recipiente con una torunda de algodón para evitar la perdida de agua y concentrar el calor, agitar constantemente para evitar que se queme.

10. Colocar los tubos en una gradilla o en un bote y cubrirlos con papel, marcar sobre el papel el número y el tamaño de los tubos.

11. Meter el material al autoclave dejarla calentar y esperar a que la presión suba hasta 1.1kg/cm2 o 15 lb. /in2 y una temperatura alrededor de 120 'C, mantener en estas condiciones durante 20minutos.

12. Al termino del ciclo de esterilización, apagar el autoclave esperar a que la presión del autoclave baje a CERO y sacar el material.

13. Los medios cuya esterilidad haya sido comprobada, podrán ser utilizados en la siguiente práctica.

14. Los medios en que se haya registrado crecimiento microbiano (contaminados) deben ser desechados, para ello es necesario primero esterilizarlos.

C CÁLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

con base en su bibliografía y el trabajo realizado, indicar si aplico los métodos de esterilización adecuados para el material y medios de cultivo que preparo

indicar si el proceso de esterilización aplicado a los medios de cultivo fue eficiente.

5 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES

6 ANEXOS

CUESTIONARIO1. ¿Que es un autoclave? Hacer un esquema ilustrando las partes operativas

2. ¿Que tipo de material se recomienda esterilizar en un autoclave? Citar ejemplos.

3. ¿Que otros métodos de esterilización eficaz se pueden utilizar?

4. ¿Por que algunos medios de cultivo se esterilizar y otros no?

5. ¿Como se clasifican los medios de cultivo? Descríbalos.

7 REFERENCIAS

BIBLIOGRAFÍA BASICA:

ATLAS R. M.MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONESEDITORIAL CECSA

INGRHAM J. L. Y G. A. INGRHAM INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA I y IIEDITORIAL REVERTE S.A.

PRESCOTT- HARLEY-KLEINMICROBIOLOGIAEDITORIAL Mc GRAW HIL

8 MECANISMO DE EVALUACIÓN Puntualidad y asistencia 20%% Conducta 10% Reportes 50% Aprovechamiento 20%

9 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

1. limpiar perfectamente la superficie de su mesa con una solución de germicida, al principio y al final de cada sesión de laboratorio

2. Lleve puesta una bata para protección de su ropa 3. Mantenga su mesa libre de todo lo que no sea esencial.4. Evite el contacto de la boca con las manos y las operaciones como: fumar, comer, o

humedecer las etiquetas con la lengua.De cuenta inmediata al instructor de cualquier accidente tales como: cortaduras, quemaduras o derramamiento de cultivos

10 DISPOSICIÓN DE DESECHOS QUÍMICOS, FÍSICOS Y BIOLÓGICOS.

Esterilización de material contaminados







BIOLOGO2000-2009 MICROBIOLOGIA GENERAL

PRÁCTICA NÚMERO


DURACIÓN

2

TECNICAS BASICAS PARAEL CULTIVO DE MICROORGANISMOS

SIEMBRA Y ESTUDIO DE BACTERIAS(SIEMBRA DE PLACAS POR ESTRÍAS)

2 sesiones

1 INTRODUCCIÓN

Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el desarrollo de este en medios de cultivo y condiciones de laboratorio controladas; la población de microorganismos desarrollada en un medio se denomina cultivo. Cuando este contiene una sola especie de microorganismo, se denomina cultivo puro, cuando contiene mas de una especie de microorganismo se denomina cultivo mixto. un cultivo tipo contiene una especie conocida de microorganismo y es conservada en el laboratorio para realizar diversos ensayos y estudios. Un cultivo microbiano que ha estado creciendo por cierto tiempo en el mismo tubo o matraz, debe ser transferido a un medio de cultivo nuevo, de otra manera el crecimiento y sobre vivencia no pueden continuar. en esta transferencia se deben considerar dos aspectos básicos referentes a : no introducir microorganismos indeseables contaminantes y concentración o carga microbiana de la muestra a sembrar inoculo.

Para impedir la contaminación de los cultivos, es necesario que el alumno tenga plena conciencia de la ubicuidad de los microorganismos, lo que determina que el airea todas las superficies estén densamente pobladas por microorganismos, de este modo en la transferencia de una muestra microbiológica a otro recipiente, se deben tener una serie que eliminen los riesgos de contaminación. Estos incluyen la desinfección del área de trabajo, el lavado de las manos, la esterilización de todos los utensilios y medios de cultivo a emplear y realizar la transferencia del microorganismo en una zona estéril ,la que se obtiene trabajando cerca de la flama del mechero. Al conjunto de procedimientos realizados para prevenir o evitar la contaminación se le llama técnica aséptica; en el laboratorio de microbiología, la técnica aséptica, constituye la” regla de oro" dado que el seguimiento cuidadoso y detallado de la misma evita accidentes tales como:

la contaminación y perdida del cultivo en estudio y

la salida y dispersión del microorganismo del cultivo, lo que ocasionaría la contaminación de utensilios, productos y del personal.

2 OBJETIVOS

Mediante esta práctica el alumno lograra. Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar contaminaciones. Manipular adecuadamente los cultivos puros. Organizar e interpretar los resultados del estudio microscópico y microscópico de

bacterias.

3 FUNDAMENTOPara efectuar el estudio de los microorganismo se han diseñado diversasos métodos que permiten cultivarlos bajo condiciones artificiales. Una de las técnicas mas usadas en el laboratorio consiste n transferir una muestra microbiológica de un ambiente determinado aun medio de cultivo lo que nos permite obtener cultivos microbianos.


Asas de platino Agua destilada Mechero Cajas de petri Medio de cultivo (agar y caldo nutritivo) Cepas microbiológicas Matraz Erlenmeyer Tubos de ensaye Frasco de alcohol

Refrigerador Incubadora Esterilizador Balanzas granatarias

B DESARROLLO DE LA PRÁCTICAA) Siembra de placas por estrías

1. Utilizando el agar nutritivo suministrado, preparar cinco cajas de petri de acuerdo a las instrucciones de la practica anterior

2. Dejar enfriar y solidificar.3. Mediante el asa de inoculación, siembre cuidadosamente por estría un cultivo problema

co0nla técnica de estría abierta.4. Siembra otra placa en estría continua cerrada.5. Tomar la siguiente placa y sembrar cuidadosamente por estría en cuadrantes. 6. Sembrar la siguiente placa por estría cruzada tomando una pequeña muestra del cultivo

proporcionado siguiendo las indicaciones.7. La última placa reutiliza como control.8. Se incuba a 37 'C por 24 horas.


Se estudia el crecimiento en las placas de agar durante la incubación. se observan las diferenciasen el tamaño, forma, aspecto, color y textura de las colonias.


6 REFERENCIAS





7 MECANISMO DE EVALUACIÓN

Puntualidad y asistencia 20%% Conducta 10% Reportes 50% Aprovechamiento 20%




humedecer las etiquetas con la lengua.5. De cuenta inmediata al instructor de cualquier accidente tales como: cortaduras,

quemaduras o derramamiento de cultivo










PRÁCTICA NÚMERO


DURACIÓN

2 B TECNICA DE VACIADO EN PLACA 2 sesiones

1 INTRODUCCIÓN

Técnica de la placa vertida: El principio de la técnica de la placa vertida es la dilución (adelgazamiento) de la muestra en tubos con agar fundido y enfriado. Se necesita hacer diluciones en más de un tubo para obtener colonias bien aisladas.

Para realizar diluciones de diez en diez, se añade 1 ml de la suspensión bacteriana a 9 ml (le medio estéril o solución salina, igualmente estéril. Se agita vigorosamente para diluir las células y el proceso se repite cuantas veces sea necesario. A continuación, se puede proceder de dos maneras diferentes.

En el método de vertido en placa, las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y se vierten en placa. Algunas colonias quedarán embebidas en el agar y otras creceran en la superficie. Las colonias superficiales se extenderán y serán más grandes

2 OBJETIVOS

Mediante esta práctica el alumno lograra. Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar contaminaciones. Manipular adecuadamente los cultivos puros. Organizar e interpretar los resultados del estudio microscópico y microscópico de

bacterias Organizar el material para su fácil manejo e identificación

3 FUNDAMENTOEn la primera parte de esta practica se realizan una serie de actividades que permitan lograr la transferencia séptica de M.O utilizando técnicas de siembra diversas y en esta segunda parte incluye métodos específicos que permitan realizar el cultivo.

4 PROCEDIMIENTO

A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO

.MATERIAL Y EQUIPO

cantidad descripción características1521011

mechero bunsen cajas de Petri asas bacteriológicas de platino tubos de ensaye medio de cultivo( agar nutritivo) cepa bacteriológica

normal estándar estándar

15 ml estándar

diferentes géneros



PROCEDIMIENTO

1. fundan tres tubos de agar nutritivo (12 15 ml) y enfríelos hasta 45 'C2. Transfiera asépticamente un asa de cultivo microbiano mixto al primer tubo de agar fundido.

Mezcle bien el inoculo.3. Transfiera dos asas de inoculo mezclado con el agar, del primer tubo al segundo de agar

fundido y mezcle bien.4. Transfiera tres asas del segundo al tercer tubo de agar fundido y , mezcle perfectamente,

estos pasos deben de realizarse con rapidez para evitar la solidificación del agar.5. Vierta cada uno de los tubos de agar en una placa de petri diferente, girándola para distribuir

el agar perfectamente y déjalas solidificar.Incube las placas a 30'C hasta el próximo periodo de laboratorio


Se examinan los tamaños relativos de las colonias en placas con muchas y en placas con pocas colonias, estas tienden a ser muy pequeñas y a extenderse conjuntamente, de forma que el crecimiento aparece como una mancha continua.Las colonias bien separadas son más grandes, con forma, aspecto, color y consistencia diferente y característica.

Obsérvese también que las colonias que por distribución al azar han crecido sobre la superficie de la placa, se desarrolla grande y probablemente circular. en contraste, las colonias que se han desarrollado dentro del agar son relativamente pequeños y presientan generalmente una sección transversal lenticular, que refleja la limitación física del crecimiento en el interior del agar.


6 REFERENCIAS




















PRÁCTICA NÚMERO


DURACIÓN

2 C SIEMBRA EN MEDIO LÍQUIDO 2 sesiones1 INTRODUCCIÓN

En la transferencia de M.O. se emplean agujas, asa de inoculación, hisopos, pipetas ó pipetas pasteur que deberán esterilizarse previamente.La utilización de estos dispositivos así como de los diferentes medios de cultivo tienen aplicaciones especificas por ejemplo los medios líquidos se preparan en tubos o matraces que se cubren con tapones de algodón o tapas especiales .

2 OBJETIVOS

Mediante esta práctica el alumno lograra. Identificar y describir correctamente las caracteristicas en un medio liquido Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar contaminaciones. Manipular adecuadamente los cultivos puros.

Organizar e interpretar los resultados del estudio microscópico y microscópico de bacterias

3 FUNDAMENTO Un cultivo liquido puede ser transferido a través de distinto dispositivos, el inoculo se deposita dentro del caldo o medio liquido presentado un desarrollo microbiano particular que se manifiste en la superficie o a través de todo el liquido.


Asas de platino Agua destilada Mechero Medio de cultivo (agar y caldo nutritivo) Cepas microbiológicas Matraz Erlenmeyer Tubos de ensaye Frasco de alcohol



1. Esterilizar el asa a la flama2. Con la mano izquierda tomar el tubo que contiene el cultivo por su extremo inferior 3. Introducir el asa y enfriarla apoyándola en la pared interna del tubo.4. Tomar una asada del cultivo de Escherichia coli y sacar el asa del tubo manteniéndola cerca

de la flama.5. Flamear el algodón, la boca del tubo y taparlo.6. Colocar el tubo en la gradilla y tomar el tubo que va a sembrar7. Destapar, flamear y mantener el tubo en la forma indicada.8. Introducir el asa y depositar el inoculo dentro del medio liquido 9. Sacar el asa10. Flamear el algodón, la boca del tubo y taparlo11. Flamear el asa al rojo para destruir los microorganismos adheridos a ella.Repetir el procedimiento inoculando los otros tubos con Racillus subtilis, Staphylococcus aureus y Micrococcus luteus. el 5º tubo se usa como control o testigo


DESARROLLO EN CALDO NUTRITIVO:

1. Cantidad de desarrollo: escaso, moderado o abundante.

2. Distribución del desarrollo en el caldo: uniformemente distribuido (turbidez), desarrollo confinado (nata o pelusa), peliculado, anillado o desarrollo que se acumula como sedimento.

3. Olor: pútrido, a frutas o aromático, o imperceptible


6 REFERENCIAS






8 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL1. limpiar perfectamente la superficie de su mesa con una solución de germicida, al

principio y al final de cada sesión de laboratorio 2. Lleve puesta una bata para protección de su ropa 3. Mantenga su mesa libre de todo lo que no sea esencial.4. Evite el contacto de la boca con las manos y las operaciones como: fumar, comer, o












PRÁCTICA NÚMERO


DURACIÓN

2 D SIEMBRA POR PICADURA 2 sesiones1 INTRODUCCIÓN

Los medios semisólido se preparan en tubos se inoculan con aguja de siembra (asa recta) o con pipeta pasteur En este último caso es necesario calentar e medio y cuando se encuentra en estado liquido a una temperatura aproximada de 42ºC se agrega el inoculo se homogeniza y se deja solidificar . A eta técnica se le conoce como puntura o picadura.

2 OBJETIVOS

Mediante esta práctica el alumno lograra. Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar contaminaciones. Manipular adecuadamente los cultivos puros.


3 FUNDAMENTOEstos medio se emplean para estudiar la movilidad de los microorganismos y para favorecer la su separación con diferentes requerimientos de oxigeno.


mechero bunsen asas bacteriológicas rectas tubos de ensaye medio de cultivo( agar nutritivo) cepa bacteriológica



Siguiendo las instrucciones anteriores y con el asa recta, introducirla en la parte central, hasta el fondo o apenas picando, para inocular los mismos microorganismos en 4 tubos que contengan 6 ml de galosa y 4 tubos que contengan gelatina y estén en posición vertical. el 5º tubo de los dos medios de cultivo se emplea para control.

1. Esterilizar el asa a la flama2. Con la mano izquierda tomar el tubo que contiene el cultivo por su extremo inferior 3. Introducir el asa y enfriarla apoyándola en la pared interna del tubo.4. Tomar una asada del cultivo de Escherichia coli y sacar el asa del tubo manteniéndola

cerca de la flama.5. Flamear el algodón, la boca del tubo y taparlo.6. Colocar el tubo en la gradilla y tomar el tubo que va a sembrar7. Destapar, flamear y mantener el tubo en la forma indicada.8. Introducir el asa y depositar el inoculo dentro del medio liquido 9. Sacar el asa10. Flamear el algodón, la boca del tubo y taparlo11. Flamear el asa al rojo para destruir los microorganismos adheridos a ella.12. Repetir el procedimiento inoculando los otros tubos con Racillus subtilis,

Staphylococcus aureus y Micrococcus luteus.


DESARROLLO EN GELATINA POR PICADURA:

1. Desarrollo (sin licuefacción) a lo largo de la línea de inoculación. El desarrollo puede estar limitado a la zona de la picadura o puede haberse expandido.

2. Licuefacción de la gelatina: se puede presentar desde arriba suavemente o adquirir aspectos varidos de embudos al licuar la gelatina.


6 REFERENCIASBIBLIOGRAFÍA BASICA:




















PRÁCTICA NÚMERO


DURACIÓN

2 E SIEMBRA EN MEDIO INCLINADO 2 sesiones1 INTRODUCCIÓN

Esta técnica esta empleada para mantenimiento de cultivos puros y caracterización.

o .El agar inclinado se utiliza para pruebas de mantenimiento de un cultivo por estría para caracterización por estría recta se utiliza para pruebas bioquímicas, puede sen en pico de flauta o mas inclinado.

o Agar vertical El agar vertical se siembra por picadura con agujas o asa de punta, se hace de dos terceras partes del medio hasta el fondo. Se utiliza para pruebas bioquímicas, motilidad y caracterización.

2 OBJETIVOSMediante esta práctica el alumno lograra.

Compara el desarrollo microbiano de cultivos puros Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar contaminaciones. Manipular adecuadamente los cultivos puros.


3 FUNDAMENTOUn cultivo microbiano en agar inclinado se utiliza fundamentalmente para conservar cultivos bacterianos puros .


mechero bunsen asas bacteriológicas de platino tubos de ensaye medio de cultivo( agar nutritivo) cepa bacteriológica


B DESARROLLO DE LA PRÁCTICA1. Esterilizar el asa a la flama2. Con la mano izquierda tomar el tubo que contiene el cultivo por su extremo inferior 3. Introducir el asa y enfriarla apoyándola en la pared interna del tubo.4. Tomar una asada del cultivo de Escherichia coli y sacar el asa del tubo manteniéndola

cerca de la flama.5. Flamear el algodón, la boca del tubo y taparlo.6. Colocar el tubo en la gradilla y tomar el tubo que va a sembrar7. Destapar, flamear y mantener el tubo en la forma indicada.8. Introducir el asa y depositar el inoculo dentro del medio con estría recta 9. Sacar el asa y flamearla10. Flamear el algodón, la boca del tubo y taparlo11. Repetir el procedimiento inoculando los otros tubos .

C CÁLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOSDESARROLLO EN AGAR (INCLINADO) POR ESTRÍAS:

1. Cantidad: escaso, moderado o abundante.,medio2. Margen o borde de desarrollo: uniforme o presentando varias irregularidades. 3. Consistencia de la masa desarrollada: mantecosa o de mantequilla, fácilmente removibles con

una aguja de siembras. 4. Desarrollo del medio :

filiforme, equinulada, perlada, risoide difusa arborescente

Cromogénesis o pigmentación: colonias pueden estar coloreadas o sin color


ANEXOS

CUESTIONARIO

1. Por que no crecen las bacterias (especialmente las formas móviles) por todo el medio de agar que contiene el 97% de agua?

2. Cuando se utilizan cultivos inclinados para estudiar las características del cultivo, es mejor inocular con aguja que con asa?¿por que?

3. Cual es la utilidad de cada una de las técnicas utilizadas?4. Que son las bacterias y como se encuentran distribuidas en la naturaleza?5. Cuales son los criterios empleados para caracterizar bacterias?6. por que es importante esterilizar el asa a la flama?7. Por que el crecimiento de algunos microorganismos origina la formación de un velo o

película?8. Como se les clasifica a las bacterias de acuerdo a las temperatura de desarrollo?9. Como se clasifican a las bacterias de acuerdo a sus exigencias de Oxigeno?


ATLAS R. M.MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES

EDITORIAL CECSA


















PRÁCTICA NÚMERO


DURACIÓN

3

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS(PRUEBAS DE PUREZA)

AISLAMIENTO POR MÉTODOS FÍSICOS2 sesiones

1 INTRODUCCIÓN

La separación de microorganismos presentes en una población mixta puede lograrse de varias maneras: separando a los microorganismos físicamente mediante diluciones, o por agotamiento de un pequeño inoculo en un medio de cultivo sólido : utilizando medios de cultivo selectivos para inhibir a los microorganismos no deseados; aprovechando las características particulares de algunos microorganismos, como la formación de esporas, el metabolismo anaerobio y/o facultativo, la capacidad de utilizar sustratos poco comunes, etc.Con mucha frecuencia, se emplean combinaciones de estas técnicas para facilitar el proceso y para obtener mejores resultados.

La elección de la técnica y del medio de cultivo depende del origen de la muestra y de las características del microorganismo que se desea aislar. Por ejemplo, para muestras con poblaciones muestras con poblaciones muy grandes siempre se recomiendan hacer diluciones, en tanto que para muestras en donde los microorganismos se han sometido a condiciones adversas, como desecación, congelación o falta de nutrientes, conviene hacer un enriquecimiento antes de aislar.

2 OBJETIVOS

Al finalizar esta práctica, los alumnos serán capaces de: Explicar el fundamento de las técnicas mas utilizadas para el aislamiento de

microorganismos: agotamiento, diluciones, medios selectivos y aprovechamiento de características especiales.

Obtener cultivos puros de macroorganismos a partir de muestras con poblaciones mixtas. Comprobar la pureza de los cultivos obtenidos y conservarlos adecuadamente durante el

resto del curso.

3 FUNDAMENTOAl someter una mezcla de M.O. a un método de aislamiento no garantiza que este se logre . es necesario verificar cuidadosamente si se ha obtenido un cultivo puro antes de conservarlo como tal, para ello es necesario realizar pruebas de pureza después del aislamiento


muestra con población mixta mechero asa y porta asa gradilla tubos de ensayode22x 175 con 18 ml de agar nutritivo,

fundido y mantenido portaobjetos cajas de petri

baño a temperatura 45 º C


B DESARROLLO DE LA PRÁCTICA Por agotamiento

1- Con el lápiz graso, marcar cuadrantes en la base de las dos cajas que contienen agar nutritivo2.-Tomar una asada de la muestra y sembrar, en el primer cuadrante de la caja, mediante una estría muy cerrada, del perímetro hacia el centro.3.-Manteniendo el asa dentro de la zona aséptica, cerrar la caja y girarla para colocar el siguiente cuadrante en posición adecuada, sembrar en igual forma.3.- Con la misma asada repetir la operación para inocular los otros dos cuadrantes y los cuatro de la otra caja.4.- Incubar las placas invertidas durante 24 a 48 horas, a la temperatura optima del microorganismo que se desea aislar.

Por diluciones

1.-Marcar los dos tubos con el medio fundido y mantenido a 45 º C, con los números 1 y 2; Marcar de igual forma las cajas de petri estériles.2.- Tomar una asada de la muestra y sembrar en el tubo 1 , transferir al tubo 2 y mezclar el contenido.3.-En la zona aséptica, vaciar el contenido de los tubos 1 y 2 en las respectivas cajas de petri estériles, homogeneizar y dejar solidificarnota: esterilizar los tubos vacíos antes de lavarlos.4.- Incubar las placas invertidas durante 24 a 48 horas, a la temperatura optima del macroorganismo que se quiera aislar




INGRHAM J. L. Y G. A. INGRHAM

INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA I y IIEDITORIAL REVERTE S.A.


















PRÁCTICA NÚMERO


DURACIÓN

3 b AISLAMIENTO EN MEDIOS SELECTIVOS Indefinido

1 INTRODUCCIÓN

Medios selectivos. Son aquellos que favorecen por su diseño el crecimiento específico de un microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una población microbiana mixta. Ejemplo: CO2 como fuente de carbono es selectivo para autotrofos; adiccionando cristal violeta se inhibe el crecimiento de los Gram (+); utilizando maltosa como única fuente de carbono sólo crecerán los que usen maltosa. Un medio selectivo favorece el crecímiento de ciertos microorganismos, mientras suprime el crecimiento de otros. Los medios selectivos se utilizan para aislar especies particulares a partir de una mezcla compleja. Por ejemplo, se utiliza un medio selectivo, para aislar Salmonella typhi, agente causal de la fiebre tifoidea, a partir de heces donde existen cientos de microorganismos diferentes. Algunos medios son selectivos porque contienen un producto químico, como la azida sódíca, el telurito potásico o el cristal violeta, que inhiben el desarrollo de algunos microorganismos pero no de otros. El agar SPS (denominado de esta forma porque contiene sulfadiacina y sulfato de polimixina) se utiliza para identificar Clostridium botulinum, agente causal de una grave intoxicación alimentaria. El medio SPS permite el crecimiento de esta bacteria, pero inhibe el de otras especies de Clostridium. otros medios de cultivo selectivos utilizan un valor extremo de pH o una fuente de carbono poco comun.

2 OBJETIVOS

Al finalizar esta práctica, los alumnos serán capaces de: Explicar el fundamento de las técnicas mas utilizadas para el aislamiento de

microorganismos: agotamiento, diluciones, medios selectivos y aprovechamiento de características especiales.

Obtener cultivos puros de macroorganismos a partir de muestras con poblaciones mixtas. Comprobar la pureza de los cultivos obtenidos y conservarlos adecuadamente durante el

resto del curso.

3 FUNDAMENTO

Para muchos microorganismos de importancia medica existen medios de cultivo selectivos comerciales, en tanto que para aislar microorganismos quimiolitotrofos se utilizan medios cuya única fuente de energía es la asimilable para la especie de interés

4 PROCEDIMIENTO

A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO muestra con población mixta mechero asa y porta asa gradilla tubos de ensayode22x 175 con 18 ml de agar nutritivo,

fundido y mantenido portaobjetos cajas de petri baño a temperatura 45 º



METODO

1. sembrar una asada de muestra en el medio selectivo 2. hacer una estría muy cerrada, en una parte muy pequeña de la caja, para descargar el asa.3. esterilizar el asa y continuar las estrías pero tomando muestra únicamente de la zona de

descarga.

incubar las placas invertidas, a la temperatura optima del microorganismo


CÁLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

Con base a los resultados obtenido indicar cual de los métodos fiscos resulto mas eficiente para lograr el aislamiento de microorganismos

.Describir las características de las bacterias que aisló en los diferentes medio selectivos y con base en estas y en las del medio empleado indicar que tipo de bacterias aisló.

Reportar en una tabla las características coloniales observadas en cada medio (anexos)

6 ANEXOS

Consistencia

Viscosa, Mantecosa, Friable (se disgrega al tocarla)

Densidad (con luz a través de la colonia)Opaca, Transparente, Traslúcida

Forma

Elevación

Puntiforme Circular Filamentosa Irregular Rizoide Lanceolada

Margen














Chata Elevada Convexa Cúpula Umbonada Umbilicada

Entero Ondulado Lobado Ondeado Filamentoso








PRÁCTICA NÚMERO


DURACIÓN

3 D PREPARACIONES FIJAS Y TEÑIDAS 2 sesiones

1 INTRODUCCIÓN

TINCIONES:

Son procedimientos par teñir las bacterias; permitiendo observar coloreadas las bacterias que

normalmente no serían visibles al microscopio óptico, por ser transparentes.

Las tinciones se efectúan generalmente sobre bacterias desecadas y calentadas para coagular

sus proteínas (fijación).

Es la más importante y la que más se emplea para observar a las bacterias; utiliza un colorante

(violeta), un mordente ó fijador de colorante (yodo), un decolorante (alcohol) y otro colorante para

teñir de diferente color a las bacterias que se decoloran en la primer fase de la tinción con el

alcohol (normalmente un colorante rojo).

TINCIÓN SIMPLE: Consiste en aplicar UN solo colorante a la preparación para observar la

agrupación y la morfología de los microorganismos. Se usan colorantes básicos como el azul de

metileno, cristal violeta y safranina.

2 OBJETIVOS

Que el alumno aprenda a prepara especimenes para observación a microscopio. Aprenderá el manejo adecuado del microscopio, Diferenciará bacterias Gram + y Gram- así, como la morfología celular bacteriana.

3 FUNDAMENTO

Debe aclararse que el procedimiento de la tinción de gram es una tinción positiva. La

designación de gram positivo y gram negativo se refiere a la capacidad de un organismo

especifico para resistir la decoloración y no al tipo de procedimiento empleado.

Gram – se tiñen de rojo

Gram + se tiñen de azul-violeta


mechero asa y portasa portaobjetos cultivo de microorganismos. Equipo de Tincian de Gram


B DESARROLLO DE LA PRÁCTICAMETODO

1. Colocar las gradillas, tubos cajas portaobjetos y todo lo necesario, sin movimientos bruscos a fin de evitar accidentes contaminación de los cultivos.

2. Lavar los portaobjetos meticulosamente con agua y jabón, enjuagar varias veces con alcohol al 95%, ponerlos a secar y flamearlos 2 o 3 veces.

3. En los portaobjetos limpios y desengrasados colocar la muestra del microorganismo a estudiar, para ello.

4. Esterilizar el asa en la flama del mechero, tomar el tubo de la muestra por su extremo inferior con la mano izquierda para destaparlo, sujetar la torunda de algodón entre el meñique y la palma de la mano derecha y girar el tubo hasta que salga la torunda, flamear la boca del tubo manteniéndola cerca de la flama del mechero.

5. Introducir el asa en el tubo, apoyarla en la pared del tubo hasta que se enfrié proceder a tomar una asada del cultivo y sacarla del tubo

6. Flamear la boca del tubo, taparlo y colocarlo en la gradilla.7. Aplicar el asa al portaobjetos marcado y extenderla muestra en la zona centra, si el cultivo esta

en medio sólido, colocar antes una gota de agua destilada en el centro del portaobjetos y suspender en ella la asada del cultivo.

8. Esterilizar el asa.9. Dejar secar al aire el frote y fijarlo a la flama, pasándolo 4 o 5 veces a ella. el frote esta listo

para teñir.

METODO DE TINCION DE GRAM

1. hacer un frote de cada uno de los microorganismos en estudio marcando con su nombre.2. Cubrir la preparación fija con cristal violeta de Gram. y dejarlo actuar durante un minuto,

moviendo suavemente el portaobjetos para favorecer el contacto del colorante con las células.3. Cubrir la preparación con lugol de Gram. y dejarlo actuar durante un minuto escurrir el exceso

de reactivo y lavar.4. Decolorar agregando mezcla de alcohol- acetona a la preparación, mientras se sostienen

ligeramente inclinada para que el colorante resbale lentamente por ellos.5. Cubrir la preparación con safranina y dejarlo actuar durante un minuto escurrir el exceso de

reactivo y lavar.1. Observar con objetivo de 1,000 X y describir los resultados.

C CÁLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS1. Con base en los resultados obtenidos, indicar cual de los métodos físicos resulto mas eficiente

para lograr el aislamiento de macroorganismos

2. Describir las características de las bacterias que aisló en los diferentes medios selectivos e

indicar que tipo de bacterias aisló.

3. Cual de los métodos empleados para el aislamiento resulta ser más eficiente.

Identificar de acuerdo al esquema siguiente la morfología celular


6 ANEXOS

CUESTIONARIO.1. ¿Cuáles son las técnicas de aislamiento más comunes?

2. Citar ejemplos de medios de cultivos selectivos, fundamentar la aplicación de cada uno de ellos

3. ¿En que consisten las pruebas de pureza de un cultivo?

4. ¿Cuáles son los cuidados preliminares para el aislamiento de un microorganismo?

5. ¿Qué diferencia existe entre un medio de cultivo selectivo y un medio de cultivo diferencial




















PRÁCTICA NÚMERO


DURACIÓN

4SIEMBRA Y ESTUDIO DE HONGOS

MICROSCOPICOS(Microcultivo)

2 seiones

1 INTRODUCCIÓN

. Los hongos son células eucariota, carecen de clorofila y tienen una pared celular rígida; pueden ser unicelulares o multicelulares, microscópicos o microscópicos. Se reproducen sexual o asexualmente. Presentando cuerpos fructíferos distintos, asi como estructuras fácilmente observables al microscopio como hifas y esporas.

Los hongos tienen hábitat muy diversos, algunos son acuáticos viviendo principalmente en agua dulce, pero también se conocen algunos cuantos marinos, la mayoría son terrestres y habitan en el suelo, sobre materia orgánica muerta (saprofito), otros muchos son parásitos, algunos son parásitos de animales incluyendo el hombre.Al cuerpo de los hongos se le denomina talo y este puede ser unicelular, de forma ameboidea u ovoide; ejemplo: ejemplo las levaduras; o bien puede ser pluricelular con aspecto filamentoso, esponjoso o carnoso; a los filamentos se les conoce como mohos.

Algunos hongos presentan dimorfismo, es decir bajo ciertas condiciones ambiéntales se desarrollan como levaduras, en tanto que cuando se cambia la temperatura, o la concentración o tipo de algún nutriente, se desarrollan en forma filamentosa.

2 OBJETIVOSMediante esta práctica el alumno lograra: Manejar las técnicas básicas para el cultivo e identificación de hongosAplicar las técnicas de preparación y tinción adecuadas para el estudio microscópico, así como reconocer y describir las características morfológicas y estructurales de hongo

3 FUNDAMENTO Los microcultivos permiten hacer el seguimiento del desarrollo de hongos en estudio.

Los cultivos en placa se obtienen sembrando por picadura el centro de las cajas que contienen diferentes medios.


2 cajas de pedir conteniendo: un disco de papel filtro, una varilla de vidrio en forma de V, debe quedar ajustada a los bordes de la caja y dos portaobjetos(esterilizar)

Agua glicerinada 1 caja de petri con agar Sabouraud. Asa mitológica Bisturí estéril y Pinzas 1 frasco de alcohol Cubreobjetos Solución de formol al 10% Azul de algodón. 3 cajas de koplin Xilol, alcohol, acetona Microscopio

Cultivos de 7 días de los siguientes hongos: Aspegillus Níger,m Penicillum sp., Rhizopus sp., Alternaria sp., y Geotrichum


B DESARROLLO DE LA PRÁCTICAMETODO1. En una zona aséptica, con el bisturí estéril costar el Agar Sabouraud en cuadros de

aproximadamente de 1 cm. 2. Colocar en el centro de uno de los portaobjetos contenidos en la caja de Petri, un cuadro de

Agar Sabouraud.3. Con el asa sicológica(o con el asa bacteriológica recta), inocular cada uno de los lados del

cuadro.4. Con ayuda de unas pinzas flameadas, colocar sobre esta preparación el segundo portaobjetos

estéril.5. Para mantener la humedad, agregare aproximadamente 10 ml de agua glicerinada, teniendo

cuidado de saturar el papel, evitando la inundación para que el liquido no inunde el cultivo.6. Incubar durante 7 días.7. En condiciones de asepsia, sacar los portaobjetos de la caja.

8. Observar el desarrollo de l hongo que se presenta alrededor de los cuadros de agarC CÁLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOSRESULTADOS

1. Elaborar un cuadro de registro de resultados, incluir la información de si guía de observación, comparar las características de los hongos estudiados con su guía de observación.

2. Hacer esquemas de cada uno de los hongos en estudio, consultar su guía y localizar en sus preparaciones estructuras características de cada uno, señalar las estructuras identificadas

3. Comparar los resultados de las observaciones, efectuadas en los micro cultivos y en las preparaciones en fresco e indicar en donde logro una mejor observación





















PRÁCTICA NÚMERO


DURACIÓN

4B SIEMBRA DE HONGOS EN PLACAS 2 sesiones1 INTRODUCCIÓN

En el aislamiento y cultivo de la mayoría d los hongos (patógenos o saprofitos) se aprovecha ciertas característica especiales, tales como; su tolerancia a pH ácido, su preferencia `por medios de cultivo con gran cantidad de azúcar fermentable.

2 OBJETIVOSMediante esta práctica el alumno lograra:

Manejar las técnicas básicas para el cultivo e identificación de hongosAplicar las técnicas de preparación y tinción adecuadas para el estudio microscópico, así como reconocer y describir las características morfológicas y estructurales de hongo

3 FUNDAMENTO

Para estudiar a los hongos se dispone de dos tipos especiales de cultivos; el cultivo en portaobjetos o micro cultivo y el cultivo en las cajas de petri.


MATERIAL 2 cajas de pedir conteniendo: un disco de papel filtro,

una varilla de vidrio en forma de V, debe quedar ajustada a los bordes de la caja y dos portaobjetos(esterilizar)

Agua glicerinada 1 caja de petri con agar Sabouraud. Asa mitológica Bisturí estéril Pinzas 1 frasco de alcohol Cubreobjetos Solución de formol al 10% Azul de algodón.


3 cajas de koplin Xilol, alcohol, acetona Microscopio

Cultivos de 7 días de los siguientes hongos: Saccharomyces cereviciae, Rhodutorula sp. Aspegillus Níger,m Penicillum sp., Rhizopus sp., Alternaria sp., y Geotrichum


1. con el asa mitológica y en condiciones de asepsia, tomar una muestra del cultivo de Aspergillus Níger, procurando tomar únicamente esporas, transferirlas a un tubo con agua estéril y agitar paras homogeneizar la muestra.

2. Con el asa en ángulo recto, tomar una muestra de la suspensión de esporas e inocular por picadura en el centro de las placas que contienen Sabouraudy y Czapek

3. Invertir las cajas e incubar a 28 ºC durante 5 – 7 días.4. Observar las características de las colonias de los diferentes hongos desarrollados, consultar

la guía de observación y describir sus resultados.5. A partir de los cultivos de levaduras, preparar Frotes fijos y teñirlos con azul de metileno.6. En un portaobjetos, colocar una gota de lactofenol azul de algodón.7. Colocar en el ultimo tercio del asa mitológica un pedacito de diurex de 1.5 cm. de largo.

Enrollado ligeramente.8. En condiciones de asepsia destapar la caja que contiene el cultivo de Aspergillus Níger,

introducir el asa con el diurex y presionar ligeramente sobre una fracción de la colonia.9. Depositar la muestra en el portaobjetos con el colorante, extender el diurex y colocar encima

de un cubreobjetos.10. Observar en un microscopio con los objetivos de 10X y 40X.

11. Repetir el procedimiento de tinción húmeda con los hongos y hacer las observaciones

correspondiente


RESULTADOS



6. Comparar los resultados de las observaciones, efectuadas en los micro cultivos y en las preparaciones en fresco e indicar en donde logro una mejor observación




















BIOLOGO2009-2009 MICROBIOLOGIA GENERALL

PRÁCTICA NÚMERO


DURACIÓN

5OBTENCION DE COLONIAS Y OBSERVACION

MICROSCOPICA DE LEVADURAS 2 sesiones

1 INTRODUCCIÓN

Las levaduras han servido al hombre durante muchos siglos para fermentar jugos de frutas, pan o elaborar muchos y nutritivos alimentos su importancia es aun mayor en la actualidad, porque se les utiliza en muchos proceso fermentadito y por sintetizar algunas vitaminas grasa y propinas partir de azucares simples y amoniaco

n2 OBJETIVOS

. Diferenciar morfológicamente ala levaduras Cultivar adecuadamente algunas levaduras de importancia industrial y clínica

3 FUNDAMENTO

En las levaduras el talo unicelular desempeña las funciones vegetativas y reproductivas estas se reproducen asexualmente por bipartición o por gemación y en la reproducción sexual 2 células levaduriformes se unen y como resultado formas ascosporas. En algunas levaduras la gema o brote formado queda como adherido a la célula madre


MATERIAL

9 Cajas de Petri con Agar Sabouraud y 9 de Agar Czapek

Mechero, Asa mitológica, Gradilla 9 Tubos de 16 X 150 con 5ml de agua esterilizada Cultivos de los siguientes hongos, Saccharomyces

cereviciae, Microscopio Portaobjetos y cubreobjetos

Lacto fenol azul de algodón



METODO

1. En condiciones de asepsia tomar una muestra de cultivo de Saccharomyces y suspenderla en un tubo que contenga agua estéril y agitar.

2. Con la suspensión de Levaduras obtenida sembrar por estría una de las cajas que contiene Sabouraudy una caja que contiene medio Czapek.

GUIA PARA EL ESTUDIO DE CULTIVO DE HONGOS Y LEVADURAS

A) Características microscópicas

- Tipo de colonias: Levaduriformes, Filamentosas.- Observar en las colonias fúngicas:

Levaduriformes Filamentosas

Características superficiales Algodonoso laxo, Algodonoso compactoAspecto: liso, rugoso, cerebrifonne. Lanoso, aterciopeladoConsistencia: cremosa seca, húmedaDesarrollo: escaso, regular, abundante radial, concéntrico, difuso.Color: verde, azul, naranja, etc.Segmento: circunscrito a la colonia o difuso en el medio.

Características del micelio profundo (observar el reverso de la caja)

Desarrollo: 1.-homogéneo 2.-por zonas (anillos concéntricos de diferente color y estructura) 3.-sectorial (colonia gigante con un sector circular diferente al . . resto de la colonia)Color: pardo, amarillo.

Modificación en el medio: color, turbiedad.

B) Característica microscópicas Tipo de hifas: cenocitica, septad uninucleada septada multinucleada.Tipo de cuerpo fructífero: oidioforo, conidioforo, esporangionoforo, zoosporangio, basidiaTipo de esporas: oidias, conidias, esporangiosporas, zoosporas, ascosporas, basidiosporas.

C) Características de las esporas:

Color: Hialinas, brillantes, amarillo verdes azuladas oscuras. Morfología: esférica, oval, cilíndrica, reniforme, fusiforme, acicular, helicoidal.Aspecto externo: lisas, punteadas, verrugosas, equinuladas, acirculadas, rugosas, estriadas.Tamaño: longitud y diámetro. C CÁLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

RESULTADOS



3. Comparar los resultados de las observaciones, efectuadas en los microcultivos y en las preparaciones en fresco e indicar en donde logro una mejor observación


6 ANEXOSCUESTIONARIO

1. ¿Cómo se clasifican los medios de cultivos para hongos?

2. Hacer una comparación de las condiciones de desarrollo entre bacterias

3. ¿Cuáles son las estructuras específicas de los hongos?

4. ¿Cuáles son los colorantes utilizados para la identificación de las estructuras . de

hongos

5. ¿Cuál es la importancia del cultivo de hongos?

6. Estructuralmente como esta constituida una levadura

7. Investigar algunos géneros de hongos patógenos

8. ¿Cuáles son los criterios para la clasificación de las levaduras?



















BIOLOGO2009 – 2009 MICROBIOLOGIA GENERAL

PRÁCTICA NÚMERO


DURACIÓN

6 EFECTO DE LAS RADIACIONES 2 sesiones

1 INTRODUCCIÓN

Muchas formas de radiación electromagnética son muy perjudiciales para los microorganismos en el caso de la radiación ionizante puede provocar que los átomos pierdan electrones.Niveles bajos de radiación ionizante producirán mutaciones que pueden causar directamente la muerte de los microorganismos mientras que niveles superiores son letales.La radiación UV puede destruir la mayor parte a los microorganismos debido a su longitud de onda corta aunque llega muy poca radiación de UV por debajo de los 2090-300 nm a la superficie terrestre, la radiación cercana del UV entre 325-400 nm también puede dañar a los macroorganismos. Aunque la luz visible es beneficiosa ya que es la fuente de energía de la fotosíntesis a una intensidad suficiente puede dañar o destruir células microbianas. Todos los microorganismos celulares poseen pigmentos como la clorofila, bacterioclorofila, citocromos y flavinas que pueden absorber energía lumínica, pueden excitarse o activarse y actúa como fotosensibilizadora.

2 OBJETIVOS

Determinar el efecto de radiaciones en bacterias

3 FUNDAMENTO

La luz UV cubre un espectro de 100-4000 A las longitudes menores a 3100 A tienen un alto poder mutagénico y germicida, se ha determinado que la de 2650 A es particularmente absorbida por el ADN y algunos ácidos aromáticos como el triptofano, tisosina y fenilalanina. En donde la activación de las moléculas origina reacciones químicas.


MATERIAL

Mechero Lápiz graso o marcador Círculos de cartón negro cuyo diámetro sea ligeramente

mayor que el de una caja de petri y a la que se le debe

Refrigerador Incubadora Esterilizador

cortar la cuarta parte de su superficie Papel aluminio Una pipeta de 1.0 ml estéril Una varilla doblada en ángulo recto y un vaso de

precipitado con 100 ml de alcohol 2 cajas de petri con gelosa simple Lámpara con longitud de onda de 2,650 Aº ( luz UV) Cultivos

Balanzas granatarias


1. Divida la parte externa de las dos cajas de petri en cuatro partes iguales. Marque los cuadrantes con T (testigo), 10, 30 y 60 segundos.

2. Con una pipeta estéril y en condiciones de asepsia, inocular las dos cajas, colocando en el centro de cada una 0.1 ml de cultivo del microorganismo.

3. Con una varilla de vidrio, previamente flameada, distribuir el cultivo en forma homogénea en las superficies de las cajas (10.4.a)

4. Dejar que el cultivo se absorba en el agar y cuando se observe la superficie seca proceder a :5. Colocar las cajas bajo las lámparas de luz ultravioleta, a 15 cm. de la fuente de luz (nota:

proteger los ojos con los lentes durante la irradiación).6. Cambiar las tapas de la caja de petri por los círculos de cartulina que deberán cubrir las ¾

partes de la caja, permitiendo incidir la luz en la parte restante, durante 10 segundos.7. Girar el circulo 45º, permitiendo que el segundo cuadrante quede expuesto a la luz durante 30

segundos8. Repita el giro del circulo 45º, e irradiar el tercer cuadrante durante 60 segundos. El cuadrante

T no debe ser expuesta a la luz UV9. Tapar las cajas con sus cajas correspondientes, envolver inmediatamente en papel aluminio

una de las cajas.10. Exponer la segunda caja irradiada a la luz solar durante 40 minuto después envolver también

en papel aluminio.11. Incube las cajas en posición invertida a la temperatura de 28 o 37 º C de acuerdo al tipo de

microorganismos en estudio.12. Registre sus resultados en la tabla correspondiente.


Comparar el desarrollo obtenido en el cuadrante sin irradiar y en aquellos irradidos por diferente periodos .

Indique de forma cualitativa el número de colonias presentes en cada cuadrante Comparar las características culturales e indicar las variaciones que observo Con base a los resultado indicar si logro comprobar el efecto de foto reactivación y como

se manifestó este proceso, Indicar en que casos se observo un efecto letal y en cuales un efecto mutagenico


6 ANEXOSCUESTIONARIO

1. ¿Qué es la radiación ionizante y cuales son sus formas?

2. Que efectos causan las radiaciones ionizantes en las células?

3. Que se entiende por foto reacción

4. Enumere los tipos de radiación electromagnética en orden decreciente o de aumento de

longitud de onda.

5. ¿Cómo se protegen los microorganismos frente al daño ocasionados por la UV y visible?



















BIOLOGO2009 – 2009 MICROBIOLOGIA GENERAL

PRÁCTICA NÚMERO


DURACIÓN

7

EFECTO DE FACTORES QUIMICOSEFECTO DE LOS ANTIBIÓTICOS 2 sesiones

1 INTRODUCCIÓN

GENERALIDADES

El control de los microorganismos es crucial para la prevención y el tratamientote las enfermedades. Los microorganismos crecen también en la superficie y el interior de otros microorganismos y la colonia microbiana puede causar enfermedades.La mayoría de los agentes son antibióticos, productos microbianos o sus derivados que pueden matar a los microorganismos sensibles i inhibir su crecimiento.

Características generales de los fármacos antimicrobianos.

El éxito de un antimicrobiano depende de su toxicidad selectiva, debe matar al microorganismo patógeno causando el menor daño posible en el huésped el grado de toxicidad selectiva se puede expresar en términos de:

1.- dosis terapéutica o nivel de fármaco necesario para el tratamiento clínico de una infección determinada.

2.- la dosis toxica o nivel de fármaco al que el agente se vuelve excesivamente toxico para el huésped.Los fármacos pueden clasificarse basándose en el grupo general de microorganismos contra el que actúan.

1.- antibacterianos 2.- antimicóticos3.- antiprotozoarios 4.- antivirales

Algunos agentes pueden emplearse contra mas de un gripo, ejemplo: las sulfonamidas, antimicrobianos, bacteriostáticos y bactericidas.La concentración mínima inhibidora (CMI) proporciona cierta concentración mas baja de un fármaco que impide el crecimiento de un determinado patógeno.

Propiedades de un antibiótico útil

Para que un antibiótico sea útil como agente quimiotarapeutico debe reunir las siguientes cualidades:

1. Ser capaz de destruir inhibir muchas especies de microorganismos patógenos.2. debe impedir la aparición de formas resistentes del parásito.3. No debe producir efectos colaterales indeseables en el huésped, como reacciones de

insensibilidad o alergia.4. no debe eliminar la flora normal del huésped.

Tipos de antibióticos

Los antibióticos se pueden dividir en bactericidas, (capaces de eliminar bacterias) o bacteriostáticos (bloquean el crecimiento y reproducción celular)Los antibióticos que lesionan la membrana celular producen una liberación de los metabolitos celulares al exterior y por tanto su muerte. Tales compuestos como las penicilinas o cefalosporinas, son por tanto bactericidas.

Inhibición por antibióticos

Los antibióticos inhiben o matan a los microorganismos por diversas vías:

1. inhiben la formación de la pared celular 2. dañan la membrana celular3. interfieren en la síntesis de las proteínas4. inhiben el metabolismo del ácido nucleótido

Pruebas de susceptibilidad

La susceptibilidad de un microorganismo a un antibiótico y otros agentes quimioterapeuticos se determina por la técnica de dilución en tubo o por la de discos en placa.Por la técnica de dilución en tubo se puede determinar la cantidad mas pequeña del agente quimioterapeutico requerida para inhibir el desarrollo del organismo in Vitro.El método de disco en placa se agar es la que se usa comúnmente para determinar la susceptibilidad de los microorganismos a los agentes quimioterapéuticos.

2 OBJETIVOS

Determinar la sensibilidad de algunas bacterias a sustancias químicas. Probar la asistencia y sensibilidad de algunas bacterias diferentes antibióticos Comparar R y S de bacterias Gram + y Gram – a sustancias químicas y antibióticos

3 FUNDAMENTO

Gran número de compuestos químicos en concentraciones apropiadas son capaces de matar o inhibir los M.O. Estos productos tienen muchas aplicaciones algunos son usados para sencillos lavados bucales y otros para descontaminar algún vehiculo debido alas grande variaciones en el ambiente y a la magnitud y diversidad de organismos no es posible prescribir un solo agente para eliminar o reducir la flora microbiana. Por ello es importante conocer las sustancias químicas con que contamos, para cada propósito, sus características y eficacia como agentes antimicrobianos


MATERIAL

Mechero Gradilla Pinzas de disección de punta roma Marcador Varilla acodada 1 pipetas de 1.0 ml estéril 6 cajas petri con discos de papel filtro estériles 6 tubos de 22 x 175 con 20 ml de gelosa 6 cajas petri con discos de papel filtro estériles.

Antibióticos a probar (erytromicina, ampicilina 100mcg Gram, neomicina 30 mcg, Clornfenicol 30 mg Gram, amoxicilina 25 mcg, Ciprofloxacin 5 mcg, Carbenicilina 100 mcg Gram, nitrofurantoina 300 mgGram.


B DESARROLLO DE LA PRÁCTICAMETODO1. Utilizar las placas anteriormente realizadas.

2. Esterilizar con alcohol y a la flama del mechero las pinzas.

3. Enfriar las pinzas y en condiciones de asepsia tomar un disco del papel filtro e impregnarlo

con el agente químico a probar, eliminar el exceso de solución por escurrimiento y depositar el

disco impregnado en el centro de uno de los segmentos de las cajas inoculadas previamente.

4. Con las pinzas, presionar ligeramente el disco sobre la superficie del agar.

5. Repetir los incisos 1, 2 y 3 con cada uno de los agentes químicos a evaluar.

6. Invertir las cajas e incubar a 28 o 37 º C durante 24 o 48 horas

7. Registrar los resultados en la tabla correspondiente.






BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA

BROCK, SMITHMICROBIOLOGIA EDITORIAL P. H. HISPANOAMERICANA

DULVECCO DAVISTRATADO DE MICROBIOLOGIAEDITORIAL SALVAT

KONEMAN ALLEN DOWELLDIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO

TEXTO ATLAS COLOREDITORIAL PANAMERICANA

MAC FADDIN, J. F. PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS DE IMPORTANCIA CLÍNICAEDICIÓN MEDICA PANAMERICANA, S. A. DE C. V. MEXICO

MADIGAN, M. T., J. M. MARTINKO Y J. PARKERBIOLOGIA DE LOS MICROORGANISMOS 8 EDICIÓN PRENTICE HALL IBERIA ESPAÑA

PELCZAR Y COL.MICROBIOLOGIA GENERALEDITORIAL Mc. GRAW HILL









Documents

Manual de Practicas Quimico Farmaceutico 4 q.f.b. a y b