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María Cecilia Arango Jaramillo
Colección, conservación y Colección, conservación y transportetransporte
de muestras de muestras microbiológicasmicrobiológicas
María Cecilia Arango Jaramillo
El propósito del estudio Los objetivos Las metodologías Las variables Los procedimiectos de
análisis Las metas a alcanzar.
Para desarrollar un estudio microbiológico es necesario que previamente se conozcan:
María Cecilia Arango Jaramillo
TIPOS DE ESTUDIOS
Los estudios microbiológicos se clasifican de acuerdo con sus objetivos y el tiempo de ejecución en tres tipos:
– Estudios baseEstudios base
– Estudios de monitoreoEstudios de monitoreo
– Estudios de evaluaciónEstudios de evaluación
María Cecilia Arango Jaramillo
Estudios base
Permite un conocimiento global del sistema y de las comunidades de microorganismos.
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Se considera que los ecosistemas dulceacuícolas tropicales manifiestan cambios ambientales y biológicos considerables, dependientes de las temporadas de sequía y lluvia.
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CONDICIONES AMBIENTALESFLUCTUANTES
Estrategia r
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CONDICIONES AMBIENTALESESTABLES
EstrategiaK
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MONITOREOMONITOREO
Se extiende en el tiempo ( a través de los años)
Su propósito: observar periódicamente ecosistemas susceptibles de cambios (positivos o negativos), por alteraciones de origen natural o antrópicas, tanto puntuales como continuos.
María Cecilia Arango Jaramillo
Permiten definir: Si la capacidad ambiental de un
ecosistema se está superando O si los tensores están siendo
asimilados adecuadamente por estos– (disolución, dispersión, mezcla,
descomposición, biodegradación, oxidación u otros).
Así mismo, su implementación puede darse para observar la recuperación de ecosistemas deteriorados.
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Los programas de monitoreo pueden llevarse a cabo para:Valorar planes de manejo ambientalEvaluar efectos ambientalesSeguimiento continuo a procesos industriales.
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Muestreos no programados deben hacerse:
Cuando ocurran cambios importantesimportantes En caso de presentarse condiciones
anómalas que puedan conducir a variaciones en la calidad del medio (positivas o negativas).
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A lo largo del programa de monitoreo, se debe mantener contacto contacto permanente con el ecosistema bajo permanente con el ecosistema bajo estudioestudio
Para no llegar a conclusiones erróneas o falsas interpretaciones
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El cotejo de resultados de un tiempo con los ya existentes, permite inferir cuales serán las condiciones futuras.
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Estudios de evaluaciónEstudios de evaluación
Estos estudios tienen lugar cuando condiciones de contaminación de origen natural o antrópico, se producen en forma esporádica pero en magnitudes importantes, causando un cierto deterioro del ecosistema con cambios en la cambios en la comunidad de microorganismoscomunidad de microorganismos..
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DISEÑO DE ESTUDIOSDISEÑO DE ESTUDIOSMICROBIOLÓGICOSMICROBIOLÓGICOS
Evaluación preliminarElección de los microorganismos a muestrearElección de variables físico químicas MuestreoUbicación de estacionesTipo y número de muestras
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Evaluación preliminarEvaluación preliminar
La evaluación preliminar es la etapa en la cual se realiza la planificación del estudio y requiere del tiempo necesario para aclarar todos los interrogantes que se presenten.
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Paralelamente se debe llevar a cabo un reconocimiento del área con el propósito de:– Precisar los principales gradientes
ambientales naturales– Las variables antropogénicas
presentes– Un premuestreo es necesario para
definir los análisis que se harán y los equipos de muestreo
– Definir el tratamiento numérico que habrá de implementarse con cada variable
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La planeación de detallada del estudio evitará resultados inútiles, inútiles, sesgados o erróneossesgados o erróneos, o incrementos no programados de esfuerzo, esfuerzo, costos y tiempo.costos y tiempo.
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Validez de los resultados del análisis de aguas
Dependen de El número de muestras que
adecuadamente representen el cuerpo de agua o el efluente.– Calidad estándar– Límites permisibles
Sitios de muestreo y registros previamente planeados y conocidos
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Recipientes para la toma de muestras Frascos de muestreoFrascos de muestreo: 125 ml
como mínimo, tapa metálica hermética.
Limpieza:Limpieza:
1. Lavado con detergente y agua caliente
2. Enjuague con agua caliente 3 veces
3. Enjuague con agua destilada
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Agente desclorinizador.Agente desclorinizador.– Para muestras tratatadas con cloro.– Tiosulfato de Na al 10%, 0,1 ml por
frasco de 125 mlsuficiente para neutralizar 15 mg de cloro.
Cobertura del frascoCobertura del frasco: papel Kraft, aluminio o película plástica
Esterilización:Esterilización: – Autoclave: 121°C por 15 minutos– Calor seco 170°C por 2 horas
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Técnicas de muestreo
Primero las muestras de estaciones menos contaminadas evitar contaminación cruzada
Nunca muestras compuestas Aguas profundas: Botella Kemerer
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Aguas superficiales: 15 - 30 cm de profundidad
Siempre en contra de la corriente
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Abrir el frasco sólo en el momento del muestreo
Llenado de frascos hasta 2-3 cm antes de la tapapara agitar
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Identificación y manejo de muestrasCaracterísticas de las etiquetas: Limpias Impermeables Indelebles Fijas, pero fáciles de remover Tamaño suficiente para consignar los
datos
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Muestras sin etiqueta o con etiquetas deficientes no son aceptadas en el laboratorio.
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Secretaría de Salud Municipio de El CarmenEstaciónNo. 4
Fecha11-08-01
Hora13:00
Muestra No.2
Antes de la bocatoma Jairo PérezColimetría completa Preservativo:
Tiosulfato de Na 10%Simple Cultivos abonados
con gallinaza hasta laorilla de la quebrada
Nombre de la entidad o del estudioEstaciónNo.
Fecha Hora Muestra No.
Localización de la estación ColectorTipo de análisis a practicar PreservativoTipo de muestra Comentarios
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Registro de datos de campo
Registro de datos de campoHoja No. Colectores:
HoraEstación Númerode la
muestra
Fecha decolección Toma Entrega
Otros
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Registro de datos de campoHoja No.2/2
Colectores:J avier Trujillo y Sandra Peláez
HoraEstación Númerode la
muestra
Fecha decolección Toma Entrega
Otros
Antesde laescuela
1/3 28- 08- 01 8:00 14:35 Epoca de lluviaBasuras en ellechoAlrededoresabonados congallinazaAgua turbiaRiberaserosionadas
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Selección de sitios de muestreo
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Lago o represa (recreación)
Piscinasdiariamenteentemporadasde máximouso
AB
C
CC
C
B E
D
B
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Abastecimiento de agua
C, a la profundidad de la toma
D
DD
A
A
B
ED
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Río de orden mayor
60 m
1 Km
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Muestreos en la red
Frecuencia de la toma de muestras:
Tablas de la EPA Legislación vigente Standard Method
Se necesita una cobertura sistemática para:
Detectar averías Contaminación
cruzada
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Frecuencia del muestreo:Decreto 475 de 1998, Calidad del agua potable
Población servida Númeromínimo demuestraspor mes
Intervalomáximo por
muestrasconsecutivas
25 a 1.000 1 Mensual1.001 a 2.500 2 Quincenal2.501 a 3.300 3 C/10 días
320.001 a 450.000 180 6 por día450.001 a 600.000 450 7 por día
1.230.001 a 1.520.000 330 11 por día1.230.001 a 1.520.000 360 12 por día
3.020.001 a 3.960.000 450 15 por día3.960.001 o más 480 16 por día
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Toma de muestras en la red
FlamearDejar correr el agua
Tomar la muestra
Si utiliza preservativo, no la deje rebosar
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Dónde tomar las muestras de la red?
Edificios municipales y públicos Parques Escuelas Estaciones de gasolina Teatros Aeropuertos Restaurantes Plantas industriales Residencias privadas
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Transporte de muestras
Refrigeradas, evitar que el hielo las cubra
Fijarlas para evitar roturas
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Almacenamiento de muestras
0°C a 4°C 6-12 horas en refrigeración 30 horas aguas tratadas < 6 horas aguas residuales
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Seguridad
Parte de la confiabilidad depende de la vigilancia y vigilancia y custodia de custodia de las muestraslas muestras
Ellas son la base de obras o acciones legales
Debe demostrarse posesión física o registros
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El colector de las muestras es responsable de ellas hasta su entrega en el laboratorio
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El laboratorio: Es responsable de las
muestras que se le entreguen
Debe registrar su entrada y los resultados del análisis, la fecha de entrega de resultados y la de destrucción de la muestra
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El laboratorio debe utilizar métodos estándar de acuerdo a la legislación vigente
Los laboratorios que analicen agua para consumo humano deberán llevar un programa de aseguramiento de la calidad que garantice los resultados (Decreto 475/98)
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El coordinador del estudio debe recibir copia del registro de laboratorio.
El original queda archivado en el laboratorio
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Para tener en cuenta
Manipule la muestra lo menos posiblemuchos microorganismos sufren estrés o mueren
Las muestras deben ser manejadas por el menor número de personas posible
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Utilice técnicas de muestreo estándar Use cuaderno de campo para registrar
datos de cada muestra
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Fije las etiquetas en el campo antes de tomar antes de tomar la muestrala muestra
La de la tapita oxidada era lade la estación 2 o 3?
La estaré confundiendo conla muestra 12 que tienela tapa rayada?
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Sitios de muestreo y polución visible deben ser registrados con fotos
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El contacto con el laboratorio
Contacte un laboratorio especializado en análisis microbiológico de aguas: garantiza que tiene estandarizados los análisis
Hable con las personas encargadas sobre el tipo de análisis que necesitará, la frecuencia de muestreo, el propósito y la duración del estudio
María Cecilia Arango Jaramillo
Averigüe en el laboratorio: Los días y horas en los que el laboratorio
recibe muestras para análisis microbiológico.
El número de muestras que le pueden recibir simultáneamente
Los requerimientos del laboratorio para la entrega y procesamiento de muestras
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Análisis microbiológicos corrientes:
Microorganismos heterótrofos:ufc/100 ml Su presencia se utiliza para indicar la eficiencia en la reducción de microrganismos en procesos de sedimentación, cloración, filtración
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NMP coliformes totales: No. /100 ml
Su presencia significa que hay que tratar el agua, pero no significa necesariamente contaminación fecal.
Esta contaminación puede provenir del suelo, el agua, etc.
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NMP coliformeds fecales : No. /100 ml
Significan contaminación fecal de origen humano o animal.
Se debe buscar el origen, pero en ambos casos puede haber patógenos
Su número es igual o menos que el de los coliformes totales
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NMP enterococos : No. /100 ml
Los estreptococos confirman contaminación fecal cercana y reciente
Los estreptococos menos que los coliformes
Enterovirus : No. Ufc (calvas)/ml
En estudios limnológicos se utiliza el índice de saprobidad
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Se recomienda un valor máximo de 100 UFC /100 cm3, para microorganismos mesófilos, como prueba
complementaria de calidad microbiológica del agua
Decreto 475 de 1998, Calidad del agua potableTécnica utilizada
Microorganismosindicadores
Filtración por
membrana
Sustrato definido Tubos múltiples defermentación
“aceptable hasta elaño 2000”
Coliformestotales
0 UFC/100 cm3
0 microorganismos/100 cm3
< 2microorganismos/100 cm3 negativo
Escherichhia coli 0 UFC/100 cm3
0 microorganismos/100 cm3
Ninguna muestrade agua potable
debe contenerla enuna muestra de100
cm3
independdientemente del método
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Control de calidad microbiológica del agua potable:
Libro de registro de calidad del agua
% Aceptabilidad = Na X 100Nt
Na = Número de muestrasaceptables: cumplen conrequisitos Art 25
Nt = Número total de muestraspor mes: total de muestrasanalizadas y registradas