UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

ESCUELA DE NUTRICIN Y DIETTICA

MICROGIOLOGA

PRCTICA 2. COLORACIONES MICROBIOLGICAS

OBJETIVO

Identificar las diferencias morfolgicas de los microorganismos a travs del estudio

microscpico.

Aprender las tcnicas de preparacin de frotis y coloraciones microbiolgicas ms importantes.

INTRODUCCIN

La mayora de los microorganismos son incoloros, por esto es necesario recurrir al uso de

colorantes para observar a travs del microscopio ptico caractersticas morfolgicas. Las

tinciones aumentan artificialmente el contraste entre las clulas y el medio.

El primer paso para la observacin microscpica de microorganismos teidos es la preparacin del

frotis, que debe asegurar una distribucin de los microorganismos sobre el portaobjetos de tal

manera que estos queden lo ms separado posibles y puedan apreciarse caractersticas

particulares. Para evitar la prdida de la muestra en el proceso de tincin, este frotis debe ser

fijado al portaobjetos por calor para inactivar las clulas y adherirlas al vidrio sin alterar la

morfologa microbiana.

Las tinciones en microbiologa se pueden clasifican de la siguiente manera:

SIMPLE

Observar tamao, distribucin, forma Un solo colorante Tincin del microorganismo o del fondo de la muestra

Azul de metileno Azul de lactofenol Safranina

DIFERENCIAL

Clasificar microorganismos de acuerdo a caractersticas morfolgicas Varios colorantes

GRAM Ziehl Nielsen

ESPECFICA

Identificacin de estructuras microbianas: Flagelos, capsula, esporas

Nigrosina Verde de malaquita Rosalina

MATERIALES Y REACTIVOS

Portaobjetos

Asas de ojo

Solucin salina

Azul de lactofenol

Cristal violeta

Lugol

Alcohol acetona

Safranina

Aceite de inmersin

Mechero

Microscopio

PROCEDIMIENTO

1. Preparar el frotis a partir de un cultivo solido de microorganismos. Tomar una

gota de solucin salina y depositarla en el centro del portaobjetos,

resuspender en esta gota la porcin de la colonia que se ha tomado del

cultivo solido teniendo en cuenta todas las normas de asepsia para evitar la

contaminacin. Permitir la desecacin completa de la muestra y fijarla

sometindola por 2 segundos a la llama del mechero 3 veces.

2. Coloracin simple. Cubrir el frotis con 2 gotas de azul de lactofenol durante 1

minuto. Eliminar el exceso de colorante con agua usando un frasco lavador.

Dejar secar al aire.

3. Coloracin diferencial. Cubrir el frotis con dos gotas de cristal violeta por 1

minuto. Eliminar el exceso de colorante con la ayuda de agua y adicionar 2

gotas de lugol, mantener por 1 minuto. Eliminar el lugol y realizar la

decoloracin con alcohol acetona por 15 segundos, lavar rpidamente el

frotis y adicionar 2 gotas de safranina, mantener por 1 minuto. Lavar

completamente la muestra y dejar secar al aire.

4. Observacin al microscopio ptico en el objetivo de 100X. Microorganismos Gram positivos se

observan morados y los microorganismos gram negativos se observan rosados.

5. Descripcin microscopica y macroscopica de los microorganismos observados.

CONSULTA

1. Cul es la funcin de cada uno de los colorantes usados en la tincin de GRAM

2. Explique brevemente en que consiste la tincin de endosporas bacterianas

BIBLIOGRAFIA

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