Material Y Métodos

1600 × g durante 20 min .

1,5 ml en tubos de ensayo de polipropileno estériles y se congeló a -15 ºC.

Se deja secar a temperatura ambientes y se almacenaron a 2-8 ºC hasta su análisis en bolsas de plástico

Para evaluar la linealidad, la precisión y la sensibilidad del ensayo con sangre total de DBS también obtuvimos, utilizando EDTA como anticoagulante, a partir de un paciente con una VL de plasma de 4,2 × 10 5 copias / mL.

Se prepararon diluciones seriales sobre una base de 5, de 1: 5 a 1:15 625

Se utilizó como un diluyente y se aplico para el secado y preservación

Linealidad fue evaluada por tres ensayos. 

 El VL se cuantificó en la muestra DBS puro y en los seis diluciones en serie preparadas a partir de ella

Tres repeticiones de todas las concentraciones utilizadas fueron probados, y los ensayos se realizaron en diferentes días, por lo que los resultados podrían ser utilizados para analizar la precisión y determinar la sensibilidad.

Para el procesamiento de la muestra DBS

dos manchas se cortaron (equivalente a 100 l)

se colocaron en un tubo de ensayo de polipropileno estéril

Se añadieron para la elución de sangre para 2 h, a 2-8 ºC;

Un total de 1,2 ml de la solución reguladora Tris-EDTA

Más tarde, 1 ml se recuperó a partir del contenido del tubo de ensayo, para su análisis

Esta prueba, centradas en las regiones gag y LTR del genoma del VIH-1, para su amplificación y detección, y con una sensibilidad de 20 copias. se llevó a cabo en la plataforma para la PCR en tiempo real

El Cobas®Ampliprep / Cobas®Taqman