7/26/2019 Metodologias Para Celulas CAEC
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METODOLOGIAS PARA CULTIVO PRIMARIO DE CELULAS ENDOTELIALES
AUTORES METODOLOGIAPaola Romina Montecinos Lopetegui, !""
UNIVERSIDAD AUTRAL DE C#ILE, $ACULTAD DE CIENCIAS
CARACTERI%ACION DE LOS RECEPTORE DE ADENOSINA ENC&LULAS DE
ENDOTELIO CORONARIO DE RATA'
T(a)a*o +e tesis +e licenciatu(a'
Pa(a (ealia( el culti-o p(ima(io +e c.lulas en+oteliales +e
a(te(ias co(ona(ias +e (ata, p(ime(o se p(oce+i/ a mata( la (ata
con .te( et0liLuego se coloc/ la (ata en una ta)la +e +isecci/n 1
se p(oce+i/ a e2t(ae( el co(a/n a)(i.n+ole el pec3o' El co(a/n
e2t(a0+o, se coloc/soluci/n +e 4(e)s5 #enseleit 64#7 6en mM8 ""9
NaCl, "' MgSO:, "' 4#PO:, ; Na#CO< 1 "" glucosa7 =(0a sin CaCl,
mantenien+o ea/(tico intacto' >a*o la c?ma(a +e @u*o lamina(, se
p(oce+i/ a limpia( el co(a/n +e la (ata +el te*i+o g(aso conecti-o,
1 =ue t(aspasa+onue-a placa Pet(i con soluci/n 4# sin CaCl limpia'
La ao(ta =ue co(ta+a a la altu(a +e la ca(/ti+a comn +e(ec3a, pa(a
po+e( inse(ta( ama((a( una c?nula, la cual esta)a conecta+a a una
*e(inga, contenien+o una soluci/n +e 4# sin CaCl, p(ecalenta+a a S,
1 la c.lulas =ue(on se+el te*i+o 1 el (esto +e m1ocitos me+iante
cent(i=ugaci/n a ;!! (pm +u(ante ; minutos' El so)(ena+ante =ue
cent(i=uga+o a ",!! (pm+u(ante 9 minutos pa(a o)tene( las c.lulas
en+oteliales' La c.lulas =ue(on (esuspen+i+as en "! ml +e DMEM
suplementa+o con ! $penicilina 6;!,!!! UI7 1 est(eptomicina 6;!
gl7' Las c.lulas =ue(on sem)(a+as en ;!! Hl +e me+io completo en
placas +e : pocillos 1incu)a(on a ETIC INSULIN RESISTANCE8 T#E EARL
ROLE O$
REACTIVE OGEN SPECIES
Am K P31siol En+oc(inol Meta) JSS7 pa(a sepa(a( los
ca(+iomiocitos 1 ot(as c.lulas' El se+imento +e te*i+o (esi+ual se
empleo pa(aaislamiento +e CMEC' El pellet =ue +ige(i+o t(es -eces
6"! minutos ca+a una7 con 9 ml +e solucion +e aislamiento ue
contenia !'!; t(ipsina, " Hgml DNase, !'" mmoll EDTA, 1 < mgml
+e glucosa en #>SS incu)a+o a S' Despu.s +e pica( 1 +ige(i( el
te*i+o 6con !,! +e colagenasa tipo II +u(ante "! min 1 !,!; +e
t(ipsina +u(min a S 1 +espu.s =ue(on sem)(a+as en placas'
Ga)(iel Ma(celin Kimene, I(ais Ce*a Oc3oa, Ascencion Las c.lulas
en+oteliales se o)tu-ie(on +e ao(tas to(?cicas =(escas +e (atas
ista( mac3o con un peso p(ome+io +e ;! g, po( +isecci/
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#e(nan+e Pe(e, >(uno Escalante AcostaEL "B5> ESTRADIOL
INDUCE LA EPRESION DE LA SINTASADE OIDO NITRICO TIPO III EN CELULAS
ENDOTELIALES EN
CULTIVO!!"
con+iciones as.pticas 1 poste(io( +igesti/n con colagenasa,
incu)an+o a al "! 1 penicilinaest(eptomicina, +on+e se (asp/ la lu
+e la ao(ta pa(a +esp(en+e( el en+otelio, +esec3an+o el mliso
so)(ante' La suspensi/n celula( se la-/ +os -eces con P>S
est.(il, cent(i=ugan+o a !!! (pm"! min' Las c.lulas =ue(on
(esuspen+D5MEM, S$> "!, anti)i/ticos, 1 se sem)(a(on en placas
+e poliesti(eno pa(a culti-o 6
