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EVIDENCIA EX VIVO E IN VIVO DEL EFECTO PROLIFERADOR DE LA 1,25(OH)2D3 SOBRE LAS CMLV. PAPEL MEDIADOR DEL VEGF. Métodos. Concentraciones diferentes. calcitriol. CMLV de aorta de rata Sprague-Dawley. +. Factor trófico: FGF. CMLV Cultivo primario. - PowerPoint PPT Presentation
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EVIDENCIA EVIDENCIA EX VIVOEX VIVO E E IN VIVOIN VIVO DEL DEL
EFECTO PROLIFERADOR DE LA EFECTO PROLIFERADOR DE LA
1,25(OH)2D3 SOBRE LAS CMLV. PAPEL 1,25(OH)2D3 SOBRE LAS CMLV. PAPEL
MEDIADOR DEL VEGFMEDIADOR DEL VEGF
MétodosMétodos
CMLV de aorta de rata Sprague-Dawley
calcitriolcalcitriolConcentraciones
diferentes
CMLVCMLV Cultivo primario
+
Factor trófico:FGF
Efecto del calcitriol en la expresión Efecto del calcitriol en la expresión de VDRde VDR
0
100
200
300
400
500
0h 16h 24h
control 1,25(OH)2D3
VD
R e
xpre
ssio
n (
%)0 h 12 h 16 h 24 h
- - - -+ + +1,25(OH)2D3 (100nM)
51 kD
**
Efecto del calcitriol en la Efecto del calcitriol en la proliferación de las CMLV proliferación de las CMLV in vitroin vitro
0
100
200
300
100 20 10 5 0
*#
#
0
50
100
150
200
250
100 20 10 5 0 0
% o
ver
cont
rol
% o
ver
cont
rol
1,25(OH)2D3 (nM) 1,25(OH)2D3 (nM)
bFGF (ng/mL) 0 0 0 0 0 bFGF (ng/mL) 20 20 20 20 20 0
6.9%IN S PHASE
11.1%IN S PHASE
27.9%IN S PHASE
6.7%IN S PHASE
24.9%IN S PHASE
55.2%IN S PHASE
0 16 22TIME (HOURS)
WITHOUT 1,25(OH)2D3
WITH 100nM 1,25(OH)2D3
Efecto del calcitriol en la progresión Efecto del calcitriol en la progresión del ciclo celular de las CMLV del ciclo celular de las CMLV in vitroin vitro
0
5
10
15
20
25
30
1,25(OH)2D3 control
Efecto del calcitriol en la expresión Efecto del calcitriol en la expresión de VEGF en las CMLV de VEGF en las CMLV in vitroin vitro
0
40
80
120
160
0h 16h 24h
control with 1,25(OH)2D3
VE
GF
exp
ress
ion
%
**
pm
ols
/40
00
ce
lls
*
Efecto del VGA1102 en la proliferación Efecto del VGA1102 en la proliferación de CMLV inducida por calcitriolde CMLV inducida por calcitriol
0,0
50,0
100,0
150,0
VGA1102 1μM control
% o
ver
cont
rol
0
50
100
150
200
250
300
350
% o
ver
cont
rol
1,25(OH)2D3 (100nM)
VGA1102 (1M)
+ +
+ +-
- -
-
*
MTT Assay
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
% o
ver
con
tro
l
1,25(OH)2D3 (100nM) + + - -
+ + --Anti VEGF (0.6 g/mL)
*
Efecto de anticuerpos anti-VEGF en la Efecto de anticuerpos anti-VEGF en la proliferación de CMLV inducida por proliferación de CMLV inducida por
calcitriolcalcitriol
PosiblePosible VDRE en el gen del VEGF VDRE en el gen del VEGF
9721 CCTGGAGAAGCCGGGGCCCGAGAAGAGAGGGGAGAAAGAGAAGGAAGAGGAGAGGGGGCC 9780 9781 GCAGTGGGCGCTCGGCTCTCGGGAGCCGGGCTCATGGACGGGTGAGGCGGCGGTGTGCGC 9840 9841 AGACAGTGCTCCAGCCGCGCGCGCGCCCCAGGCCCCGGCCCGGGCCTCGGTTCCAGAAGG 9900 9901 GAGAGGAGCCCGCCAAGGCGCGCAAGAGAGCGGGCTGCCTCGCAGTCCGAGCCGGAGAGG 9960 9961 GAGCGCGAGCCGCGCCGGCCCCGGACGGGCCTCTGAAACCATGAACTTTCTGCTCTCTTG 1002010021 GGTGCACTGGACCCTGGCTTTACTGCTGTACCTCCACCATGCCAAGGTAAGCGGTCGTGC 10080
7201 CTGGGCCCGTAAGCATTTACTAACTACTCTCCCTGCTAAAAGAGAGCCATCCGGGAGGTG 7260 7261 ACTCAGGGCAGCTATGATAGGCCAGATGGGATGGGGTGGCTTTTTTCCTCATAAGATCCT 7320 7321 CATAACATTGCTCCATTGAAATTGGGGTTCCCAACAGGTACCAGCATCCCACGGAGCCTC 7380 7381 AGTACTGTGTGCAGAGGGATGGAGATGGTGGAGTAACCTTTTCGGGGGACCAGTAGGAAG 7440 7441 ACTGTTGGCTCCCTTTCTCAGAAGCTCAGCAGACCTGGGTGAGGGCTGGGACTGGTTGGT 7500 7501 CCCTCTCTTCCCACAGGTATCAGAGCCCCCTCTTGTTCCCAGGGGAGCCTAGGAGCAGCT 7560 7561 GGGCCAAAGCCCAACCAGGAATTTTTCCAGGCTGGTTCCTATATCCAAGGGTGGGCTGGA 7620 7621 GGTGGGGGCTTTGGGGAGCTCTTAAGGAAGACACGAGGAGGTGAAGGGGACTTTGTGGAA 7680
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
MétodosMétodos
Anillos de aorta de rata Sprague-Dawley
calcitriolcalcitriol
CMLVCMLV Ex vivo
Efecto del calcitriol en la Efecto del calcitriol en la proliferación de las CMLV proliferación de las CMLV ex vivoex vivo
A1
A2
B1
B20,0
10,0
20,0
30,0
vitd 100nM control
% o
f p
osi
tive
nu
cle
us *
MétodosMétodos
Rata Sprague-DawleyCon 5/6 de reducción de
masa renal
8 semanas
calcitriolcalcitriol
CMLVCMLV in vivo
Efecto del calcitriol en la Efecto del calcitriol en la proliferación de las CMLV proliferación de las CMLV in vivoin vivo
B
A1
A2
B1
B20,00
0,20
0,40
0,60
0,80
1,00
1,20
1,40
1,60
1,80
2,00
Controlvit D 1 g/kg
*
% o
f p
osi
tive
nu
cle
us
Efecto del calcitriol en la Efecto del calcitriol en la arquitectura de la aortaarquitectura de la aorta
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
No treatment No treatment
mm2
Area of the media Media/lumen ratio
*
Calcitriol1 g/kg
Calcitriol1 g/kg
ConclusiónConclusión
El El calcitriol induce un aumento en la calcitriol induce un aumento en la proliferación de las CMLV proliferación de las CMLV in vitroin vitro e e in in vivo. vivo. Este efecto está mediado por un Este efecto está mediado por un
aumento en la expresiónaumento en la expresión de VEGF de VEGF..
El aumento de proliferación de las El aumento de proliferación de las CMLV CMLV in vivoin vivo produce un cambio en produce un cambio en
la arquitectura vascular.la arquitectura vascular.
