MÉTODOS DE ESTUDIO MÉTODOS DE ESTUDIO DEDELAS CÉLULASLAS CÉLULAS

PROBLEMAS:PROBLEMAS:

Las células son pequeñas: procariotas 1-Las células son pequeñas: procariotas 1-22µm, eucariotas 5-20µm.µm, eucariotas 5-20µm.

Las células son incoloras y translúcidas.Las células son incoloras y translúcidas. Las células eucariotas están Las células eucariotas están

compartimentizadas.compartimentizadas. Disponibilidad.Disponibilidad.

Definición de Definición de microscopio:microscopio:

RAE: Instrumento óptico destinado a RAE: Instrumento óptico destinado a observar objetos extremadamente observar objetos extremadamente diminutos, haciendo perceptible lo que diminutos, haciendo perceptible lo que no es a simple vista.no es a simple vista.

Instrumento óptico formado por un Instrumento óptico formado por un sistema de lentes que permiten la sistema de lentes que permiten la ampliación de la imagen para la ampliación de la imagen para la observación de objetos muy pequeños.observación de objetos muy pequeños.

Principales características Principales características de un microscopiode un microscopio

AmplificaciónAmplificación M.O. 500-1000xM.O. 500-1000x M.O. inmersión 2000xM.O. inmersión 2000x M.E. 100.000xM.E. 100.000x

Poder de resolución: Poder de resolución: capacidad para mostrar capacidad para mostrar separados dos puntos muy separados dos puntos muy cercanos. Depende de la cercanos. Depende de la calidad de las lentes, de la calidad de las lentes, de la longitud de onda de la luz longitud de onda de la luz empleada y del índice de empleada y del índice de refracción del medio (aire 1,0; refracción del medio (aire 1,0; aceite 1,5)aceite 1,5)

En los microscopios ópticos: En los microscopios ópticos: 300 nm; inmersión: 200 nm.300 nm; inmersión: 200 nm.

Anton van LeeuwenhoekAnton van Leeuwenhoek Robert HookeRobert Hooke

FRACCIONAMIENTO FRACCIONAMIENTO CELULARCELULAR

Conjunto de métodos y técnicas que tienen como objetivo obtener Conjunto de métodos y técnicas que tienen como objetivo obtener fracciones puras o enriquecidas en un determinado componente fracciones puras o enriquecidas en un determinado componente celular, ya sea éste un orgánulo (mitocondrias, núcleos, celular, ya sea éste un orgánulo (mitocondrias, núcleos, peroxisomas, ..) una fracción de membrana, complejos peroxisomas, ..) una fracción de membrana, complejos multiproteicos (citoesqueleto de actina, microtúbulos, poros multiproteicos (citoesqueleto de actina, microtúbulos, poros nucleares, etc..), etc...nucleares, etc..), etc...

Todo proceso de fraccionamiento subcelular tiene dos etapas :Todo proceso de fraccionamiento subcelular tiene dos etapas : rotura de las células o tejidosrotura de las células o tejidos para obtener un  para obtener un lisado celularlisado celular (o  (o

tisular) en el que la fracción deseada se encuentre en condiciones tisular) en el que la fracción deseada se encuentre en condiciones adecuadas para su purificación.adecuadas para su purificación.

separación de la fracción deseadaseparación de la fracción deseada del resto de componentes  del resto de componentes de la célula o del tejido.de la célula o del tejido.

CROMATOGRAFÍACROMATOGRAFÍA

ELECTROFORESISELECTROFORESIS

CULTIVOS CELULARESCULTIVOS CELULARES

DIFRACCIÓN DE RAYOS XDIFRACCIÓN DE RAYOS X

ISÓTOPOS RADIACTIVOSISÓTOPOS RADIACTIVOS