MÉTODOS DE INOCULAÇÃO DE Alternaria alternata & A. dauci EM SEMENTES DE SALSA E SUA INFLUÊNCIA NA QUALIDADE FISIOLÓGICA

DANIELE CARDOSO PEDROSO, VANESSA OCOM MENEZES, MARLOVE FÁTIMA BRIÃO MUNIZ, GRAZIELA PIVETA, LILIAN MADRUGA DE TUNES, JUCELI MULLER, NILSON LEMOS DE MENEZES.

Revista Brasileira de Sementes, vol. 32, nº 3 p. 79-85, 2010

ResumoAvaliar o efeito da associação de Alternaria alternata e A. dauci na qualidade fisiológica de sementes de salsa inoculadas sob dois métodos: Suspensão de conídios & restrição hídrica. Na suspensão: Preparadas soluções contendo 105 conídios de A. alternata, A. dauci e ambas as espécies (A. alternata + A. dauci)- sementes por 30 min. Inoculação por restrição hídrica: meio BDA acrescido com manitol, sementes mantidas nas placas por 48 horas. Avaliação da qualidade fisiológica das sementes com testes realizados em condições controladas de laboratório e em casa de vegetação. As sementes de salsa tiveram a sua qualidade fisiológica prejudicada pela associação com A. alternata e A. dauci especialmente em relação à germinação, primeira contagem de germinação, % de plântulas anormais e % de sementes mortas e ao teste de frio.

• A salsa - Petroselinum crispum, planta pertencente à família Apiaceae.

• Popularmente, a salsa é conhecida como salsinha.• Importância utilização como condimento e também

para fins medicinais.

Introdução

• Hortaliças - entre outros aspectos → estabelecimento das plântulas no campo.

• Fator relacionado com a germinação e vigor das sementes.

• Obtenção de sementes de alta qualidade é busca constante dos produtores envolvidos na cadeia produtiva de hortaliças (Nascimento, 2000).

→ Qualidade sanitária da semente.

• Avaliação desta característica, já que a associação: patógenos X sementes – não só perdas diretas de população no campo, pode implicar danos a todo sistema agrícola.

• Potencial fisiológico das sementes: Ferramentas como os métodos de inoculação de sementes.

• Método tradicional para fungos : Inoculação por meio do método da embebição das mesmas em suspensão de inóculo, como conídios.

• Inoculação sobre meio de cultura batata-dextrose-ágar (BDA), utilizando a técnica de restrição hídrica, baseada no princípio de controle de germinação.

• As alternarioses : doenças fúngicas + comuns e importantes entre as culturas hortícolas. Para cultura da salsa, a mancha de alternaria.

• Laboratório e casa de vegetação - Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), Santa Maria, RS.

• Sementes de salsa - cultivar Lisa Comum, da marca comercial Bionatur® produzidas em Candiota - RS. Sementes, não tratadas.

Submetidas à avaliação inicial de qualidade: Teor de água - Determinado pelo método de estufa, de acordo

com as Regras para Análise de Sementes (Brasil, 1992). Teste de germinação - Segundo os critérios estabelecidos pelas

Regras para Análise de Sementes (Brasil, 1992). Análise sanitária - foi realizada através do método do papel filtro

ou “blotter test”, conforme metodologia proposta por Brasil (1992).

Material e Métodos

Obtenção do inóculo:

• Alternaria alternata - obtido a partir de sementes de salsa submetidas ao teste inicial de sanidade

• A. dauci foi oriundo de folhas de cenoura com sintomas de doença.

• Isolamento em placas de Petri contendo meio de cultura BDA - placas incubadas a 25 ºC com fotoperíodo de 12 horas.

• Colônias puras foram utilizadas para a inoculação das sementes.

Métodos Inoculação das sementes:Suspensão de conídios•A suspensão conidial foi obtida através de leituras em câmara de Neubauer e ajustadapara 105 conídios/mL .

•Sementes desinfestadas com álcool e hipoclorito (1%) por 1 minuto, permaneceram imersas na suspensão por 30 minutos. •Secagem, por 30 minutos, em condições ambiente, e submetidas aos testes para avaliação da qualidade fisiológica.

Alternaria alternata

Fonte: The University of Adelaide - AUSTRALIA.

Alternaria dauci

Fonte: University of Arizona,Pryor Lab.

Fonte: Pblequipo - Labs

Método de restrição hídrica: meio BDA acrescido do soluto regulador do pontecial osmótico manitol (C6 H14 O6) na concentração 33,10 g/L - segundo Coutinho et al. (2001).

• Repicagem de discos de colônia para o meio com manitol, e mantidos em câmara com fotoperíodo de 12 horas e temperatura de 25 ºC por 7 dias.

•Tratamento com duas espécies de Alternaria,colocados dois discos nas extremidades opostas da placa.

•Sementes distribuídas sobre o micélio do fungo, em camada única, sendo levemente prensadas - até protrusão radicular (48 horas) .

•Removidas do meio – secas em condições ambiente, por mais 48 horas. Submetidas aos testes para avaliação da qualidade fisiológica.

Tratamentos : Suspensão de conídiosT2- testemunha (água destilada e esterilizada);T3- suspensão de conídios de A. alternata; T4- suspensão de conídios de A.dauci ;T5- suspensão de conídios de ambas as espécies (A. alternata + A.dauci).Considerado como testemunha absoluta (T1), o tratamento em que as sementes não foram submetidas a qualquer procedimento.

Tratamentos : Método de restrição hídricaT6 - BDA + manitol (testemunha); T7 - BDA + manitol + A. alternata; T8 - BDA + manitol + A. dauci; T9 - BDA + manitol + A.alternata + A.dauci.

Após inoculação foi realizada a análise sanitária das sementes, onde verificou-se 100% de sementes infestadas pelos fungos estudados em cada tratamento.

Testes para a análise da qualidade fisiológica: •Germinação e primeira contagem – ambos realizados de acordo com metodologia proposta pelas Regras para Análise de Sementes (Brasil, 1992);•Comprimento de plântula – realizado conforme descrito por Nakagawa (1999)•Teste de frio – realizado conforme recomendações de Cícero e Viera (1994).

Os demais testes foram realizados em casa de vegetação:

Emergência - utilizando-se bandejas plásticas contendo substrato comercial Plantmax®. A avaliação ocorreu aos 32 dias após a semeadura (emissão de planta constante), computando-se:

A porcentagem de plantas normais emergidas; índice de velocidade de emergência (IVE) ; comprimento de plântula; número de folhas ; peso fresco e peso seco de plantas.

Análise estatística - O delineamento experimental empregado foi o inteiramente casualizado.

• Cada método de inoculação submetido à análise de variância e ao teste F.

• A comparação das médias foi realizada através do teste de Tukey a 5% de probabilidade.

• Tratamentos foram comparados, empregando-se o Software Sistema de Análises Estatísticas – SANEST (Zonta et al., 1986).

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Teor de água, germinação e sanidade não foram analisadosestatisticamente –apenas conhecimento inicial da qualidade da amostra adquirida. • Teor de água das sementes foi de 7,68% .• Porcentagem de germinação de 82%. • Análise sanitária: detectados seguintes fungos:Alternaria alternata (9%) e Cladosporium spp (8%).

Avaliação da qualidade fisiológica das sementes de salsa, inoculadas com A. alternata e A. dauci

Método de suspensão de conídios: • Verificado decréscimo na qualidade das sementes de salsa – sementes inoculadas obtiveram qualidade fisiológica inferior àquelas sem os patógenos. • A. dauci como o fungo mais prejudicial as sementes de salsa.

Método de restrição hídrica:• O método utilizando restrição hídrica implicou em resultados semelhantes ao anterior.• O método do substrato agarizado, observa-se que ocorreu uma maiorestratificação entre os tratamentos.→ Patógeno + influenciou, negativamente, na qualidade das sementes

de salsa foi A. dauci.

• A maioria das variáveis apresentou comportamento Indiferenciado em relação aos tratamentos .

• Algumas diferenças somente dos tratamentos de inoculação, em ambos os métodos, em relação à testemunha absoluta.

Laboratório x casa de vegetação:• Condições são ótimas para a realização dos testes,

• Favorecerem o desenvolvimento das sementes, também podem ter favorecido a ação dos fungos.

• Divergências encontradas entre resultados obtidos implicam na necessidade de realizar um maior número possível de testes.

Conclusões

• Sementes de salsa têm sua qualidade prejudicada pela associação com A. alternata e A. dauci. • Os resultados demonstraram que A. dauci destaca-se como Patógeno mais prejudicial a sementes de salsa.

• O patógeno A. dauci foi mais patogênico que A. alternata.

• O método da suspensão de conídios foi o mais adequado para inoculação de A. alternata e A. dauci em sementes de salsa.

Obrigado pela atenção!!

THE END

José Carlos da Costa Jr