Nº 142

Pág. 1: Evaluación de la performancedel reactivo MicroalbúminaTurbitest AA de Wiener lab.

Pág. 3 : Anticoagulantes y su efecto enel hemograma

Año XLII - Diciembre 2008

Director: Gustavo A. Capriotti - Redactor: Cristina M. Crepaldo - Editor Responsable: Wiener Laboratorios S.A.I.C. - 2000 - Rosario - Argentina

Boletín del Servicio Bibliográfico de Wiener Laboratorios S.A.I.C.http//:www.wiener-lab.com.ar

Evaluación de la

performance del reactivo

Microalbúmina Turbitest AA

de Wiener lab.

La microalbuminuria es un parámetro importante en el seguimiento de pacientes diabéticos ya que permite ladetección temprana de complicaciones renales en una etapa en la cual no existen evidencias clínicas de nefropatíay el proceso puede revertirse si se implementan medidas terapéuticas adecuadas. Constituye además un factor deriesgo independiente de enfermedad cardiovascular en pacientes con y sin diabetes.El reactivo Microalbúmina Turbitest AA Wiener lab. se basa en un método inmunoturbidimétrico cuantitativoen donde la albúmina presente en la muestra (orina) reacciona con el anticuerpo específico formandoinmunocomplejos insolubles. La turbidez causada por los mismos es proporcional a la concentración de albúminay se puede medir espectrofotométricamente.

Meichtry, V.; Tallano, C.; Capriotti, G.A.; Torruella, M.Centro de Investigación y Biotecnología, Wiener lab., Rosario, Argentina.

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Objetivo

valuar la performance analíti-ca del reactivo Microalbúmi-na Turbitest AA Wiener lab.

para la determinación cuantitativa demicroalbúmina (MAlb) en orina.

Materiales y métodos

La evaluación fue realizada en analiza-dores Konelab 20 y 60i utilizando unacurva de calibración no lineal de seispuntos. Las diferentes concentraciones delos mismos se obtuvieron a partir de dilu-ciones seriadas de un único calibrador (Mi-croalbúmina Calibrador Turbitest AA).En el estudio de linealidad y efecto

prozona se utilizaron protocolos internosde evaluación realizando diluciones apartir de una muestra de elevada con-centración de albúmina. En cuanto a laprecisión, se siguió el protocolo EP15-Adel Clinical and Laboratory StandardsInstitute (CLSI), empleando muestrasde orina con diferentes concentracionesde albúmina.La comparación de métodos se realizósegún el protocolo EP9 del CLSI. Se eva-luaron muestras de pacientes con con-centraciones que cubrieran todo el ran-go de medición. Se eligieron dos méto-dos de referencia: Tina quant Albúmi-na (Roche) y Quantex Microalbúmina(Biokit). Se evaluaron además diferen-tes controles comerciales. Para un con-

tinuo seguimiento del reactivo se parti-cipa actualmente en el programa de ca-lidad externo del College of AmericanPathologists (CAP).

Resultados

Linealidad

El sistema mostró un comportamientolineal en todo el rango de medición (0 a230 mg/l).

Efecto Prozona

No se evidenció fenómeno de prozonahasta una concentración de 2400 mg/lde microalbúmina.

PrecisiónSe obtuvieron coeficientes de variación

1234567890112345678901123456789011234567890112345678901123456789011234567890112345678901123456789011234567890112345678901

E

§ Evaluación de la performance del

reactivo Microalbúmina Turbitest AA

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total (CVT) aceptables para los diferen-tes niveles de MAlb evaluados. Para mues-tras normales el CVT fue menor al 10% ypara muestras patológicas menor al 5%.

Evaluación de controles comerciales

Para los controles ensayados, los desvíosrelativos porcentuales (DRP) respectodel valor teórico fueron menores al 10%.

Comparación de métodos

Se observó una buena correlación conlos dos métodos comparativos utilizados.

Conclusión

El reactivo Microalbúmina TurbitestAA Wiener lab. mostró una adecuadaperformance analítica con resultadosconfiables y precisos que se correlacio-nan muy bien con los métodos compa-rativos utilizados.

EVALUACION DE CONTROLES COMERCIALES

Valor Valor

CONTROLES teórico medidoDRP

(mg/l) (mg/l)(%)

Microalbúmina Control nivel 150,0 47,8 -4,4

Turbitest AA Wiener lab.

Microalbúmina Control nivel 2113,6 115,8 2,0

Turbitest AA Wiener lab.

Precinorm PUC30,6 30,4 -0,8

Roche

Precipath PUC99,6 94,4 -5,2

Roche

Quantex Microalbumin39,0 39,3 0,7

Control Biokit

PRECISION

Intracorrida Total

Median

S.D. C.V. S.D. C.V.(mg/l)(mg/l) (%) (mg/l) (%)

9,6 20 0,34 3,56 0,70 7,3

38,1 20 0,26 0,69 0,86 2,3

74,6 20 0,62 0,84 1,54 2,1

161,4 20 1,80 1,11 4,64 2,9

§ Evaluación de la performance ...

§ Anticoagulantes y su efecto ...

3

§ § §

Método n Pendiente Ordenada S(y/x)

R2

comparativo al origen

BIOKIT 61 1,02 1,39 5,13 0,992

ROCHE 49 0,97 5,76 4,94 0,992

l control de las variables preana-líticas en hematología es un fac-tor crucial para asegurar resulta-

dos lo más exactos posibles. Factores prea-nalíticos como la toma de muestra, trans-porte, sustancias interferentes y el pacien-te mismo son causas comunes de resulta-dos inexactos. Una inapropiada toma y pro-cesamiento de muestra puede influenciarel resultado analítico. Minimizando loserrores en cualquier etapa de la fase prea-nalítica, el laboratorio puede mejorar lacalidad de los resultados analíticos, redu-cir el número de especímenes recolectadosnuevamente y mejorar el tiempo de proce-samiento e informe de resultados.El EDTA (ácido etilendiaminotetraacéti-co) es el anticoagulante usado por los labo-ratorios de hematología debido a que loscomponentes celulares y morfología de lascélulas son preservadas. Las sales de EDTA(disódicas, dipotásicas, y tripotásicas) sonutilizadas como anticoagulantes en tubosde colección, en lugar del ácido libre que esinsoluble en medios acuosos. El EDTA an-ticoagula la sangre quelando el calcio. Elcalcio es necesario en la cascada de coagu-lación y su remoción inhibe y detiene unaserie de eventos, tanto intrínsecos y ex-trínsecos, que causan la coagulación. ElEDTA dipotásico es el anticoagulante ac-tualmente recomendado por el Consejo In-ternacional de Estandarización en Hema-tología (ICSH) y el CLSI. El EDTA dipo-tásico es recomendado debido a su buenasolubilidad y resultados estables de hema-tocrito.En algunos individuos, el EDTA puede ge-nerar recuentos inexactos de plaquetas. Es-

Anticoagulantes

y su efecto en

el hemograma

De Vuono, D.; Capriotti G.Centro de Investigación y Biotecnología

Wiener lab., Rosario - Argentina

1234567890112345678901123456789011234567890112345678901123456789011234567890112345678901123456789011234567890112345678901E

§ Anticoagulantes y su efecto en el

hemograma

4

tas anomalías, agregados plaquetarios ysatelitismo plaquetario, pueden ser re-sultados de cambios en la estructura dela membrana, que ocurren cuando el ióncalcio es removido por el agente quelan-te, permitiendo la unión de anticuerpospreformados.El mezclado apropiado de sangre ente-ra asegura que el EDTA se disperse portoda la muestra. Los tubos de colecciónpor vacío con EDTA deben ser mezcla-dos de 8 a 10 veces por inversión inme-diatamente después de la punción. Losmicrocontenedores con EDTA 10 ve-ces o más, también por inversión y de-ben ser invertidos unas 20 veces pre-vias al análisis.En base a todo lo anterior, se realizaronpruebas recolectando muestras de pa-cientes en tubos con diferentes relacio-nes sangre / anticoagulante. Se utilizóAnticoagulante W de Wiener lab. enla proporción indicada en el manual deinstrucciones (35 ul de anticoagulantepara 4,5 ml de sangre entera) y tambiénen otras dos proporciones incorrectas(35 ul de anticoagulante para 2,5 ml desangre entera y 35 ul de anticoagulantepara 1 ml).Cada set de muestras se procesó 10 ve-ces, se calculó la media, el SD y el CV%.Luego se compararon las medias paracada combinación de muestra / anticoa-gulante, para cada parámetro, median-te una prueba t para muestras aparea-das. Este procedimiento se realizó para4 muestras diferentes.

Resultados

En la tabla se observa que los resulta-dos obtenidos en las 4 muestras fueronmuy similares, encontrándose en todoslos casos, diferencias estadísticamentesignificativas, según el parámetro, conmayor o menor importancia clínica.Sólo se muestran los resultados de unade las muestras.En las subpoblaciones, no tanto en lin-focitos o granulocitos como en célulasmedias, a medida que aumenta la canti-dad de anticoagulante respecto a la desangre, los desvíos relativos (DR%) res-pecto a la proporción recomendada vanaumentando. En el caso de linfocitos ygranulocitos estos desvíos relativos noson significativos ni clínica ni estadís-ticamente. En cambio, para células me-dias, vemos que van aumentando con-forme la relación anticoagulante / san-gre aumenta, hasta hacerse significati-va (DR% > 15%) clínicamente pero noestadísticamente (p > 0,05).En todos los parámetros, excepto MCV(volumen corpuscular medio) y RDW(amplitud de distribución eritrocitaria),hubo diferencias estadísticamente signi-ficativas (p < 0,05), aunque no clínicas.Tanto para MCV como RDW, p fuemayor a 0,05 y cada uno de los paráme-tros se ubicó dentro de lo especificado.

Conclusiones

Los recuentos de WBC (glóbulos blan-

cos), RBC (glóbulos rojos), PLT (plaque-tas), HGB (hemoglobina) y HCT (he-matocrito) fueron significativamentediferentes estadísticamente respecto alos obtenidos con una relación anticoa-gulante / sangre correcta. Sin embargoestas diferencias fueron mínimas (entorno al 3,5%) y sin relevancia clínica.No hubo diferencias significativas esta-dísticamente en los porcentajes de linfo-citos, granulocitos y células medias, aun-que en el caso de estas últimas la dife-rencia sí fue clínicamente relevante.La relación anticoagulante / muestra nosólo afecta los parámetros relativos alas tres subpoblaciones, sino a los de-más relacionados tanto con plaquetascomo con glóbulos rojos.La magnitud de la afectación es mayorcuanta más diferencia existe respecto ala relación apropiada.

Referencias

- Van Cott E, Lewandroski K, Patel S,Grzybek D, Patel H, Fletcher S, KratzA. - Laboratory Hematology 9:10-14(2003).

- Tyndall L, Innamoratto S. - Lab Notes

14:1-7 (2004).- Bush V, Mangan L. - Lab Notes 1 (2003)- O’ Broin S, Kelleher B, O’ Connor G,

Mc Cann S. - Clin. Lab. Haem. 19: 159-160 (1997).

- Stott R, Hortin G, Wilhite T, MillerS, Smith C, Landt M. - Clin Chem 41/2: 306-311 (1995).

Proporción 35 ul Anticoagulante W 35 ul Anticoagulante W 35 ul Anticoagulante W+ 4,5 ml sangre 2,5 ml sangre 1,0 ml sangre

Parámetro Media DR% P Media DR% P Media DR% P

WBC (x109/L) 5,61 - - 5,45 -2,9 0,0000 5,46 -2,7 0,0017

RBC (x1012/L) 4,19 - - 4,06 -3,2 0,0010 4,01 -4,3 0,0000

PLT (x109/L) 363,3 - - 340 -6,4 0,0000 332,5 -8,5 0,0000

HGB (g/dL) 13,2 - - 12,8 -3,2 0,0002 12,7 -4,1 0,0001

HCT (%) 38,7 - - 37,5 0 0,0013 37 -4,5 0,0001

MCV (fL) 92,3 - - 92,4 0,1 0,4013 92,2 -0,2 0,3419

RDW (%) 12,8 - - 12,8 -0,4 0,7390 12,9 0,6 0,5086

LYMPH % (%) 44,8 - - 45,3 1,1 0,3679 45,3 1,2 0,3106

GRAN % (%) 46,6 - - 45 -3,4 0,0548 44,6 -4,3 0,0768

MID (%) 8,6 - - 9,7 12,4 0,0977 10,1 16,9 0,0859