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MICROSCOPIA
DE LUZ y ELECTRÓNICA
Objetivos de la clase Establecer la utilidad de la microscopía de luz y
electrónica en el avance de la Biología celular y molecular.
Identificar las diferentes partes ópticas y mecánicas del microscopio óptico compuesto y sus funciones.
Describir las diferentes clases de microscopio óptico compuesto.
Describir las partes estructurales del microscopio electrónico y sus funciones.
Microscopio, del griego: "mikro" = pequeño y "scopeõ" = mirar (para mirar cosas pequeñas)
MICROSCOPÍA MICROSCOPÍA
DE LUZ
MICROSCOPÍA
ELECTRÓNICA
Se clasifican en:
Historia Primer microscopio
optico 1590 Z.
Jansenn
Observaciones
microscopicas
importantes Robert
Hooke, observo las
primeras celulas
Antoine Van
leeuwenhoek
microscopios
mejorados.
MICROSCOPIA Un microscopio es un
instrumento que
amplifica una imagen.
La capacidad de
aumento de un
microscopio compuesto
se calcula multiplicando
el aumento del
objetivo por la del
ocular.
Principios Ópticos de la
microscopia
• La Longitud de onda de la iluminación
establece un limite en el tamaño de los
objetos que pueden ser observados.
• 3 elementos son necesarios para formar
una imagen independientemente del
microscopio :
»Fuente de iluminación
»Muestra
»Sistema de lentes
Características Microscopio
Óptico y Electrónico
Fuente de
iluminación
es luz
visible
Sistema de
lentes de
Vidrio
Fuente de
iluminación haz
de electrones
Lentes
Electromagnetica
• En un microscopio óptico
– la fuente de iluminación es la luz visible,
– el sistema de lentes consiste serie de lentes de vidrio.
• En un microscopio electronico
– la fuente de iluminación es un haz de electrones
emitido por un filamento de tungteno calentado.
– el sistema de lentes consiste en electroimanes .
Principios de La naturaleza de
la luz • La luz es una onda electromagnética capaz de
ser percibida por el ojo humano y cuya
frecuencia determina su color.
Espectro electromagnético
ESPECTRO VISIBLE
ESPECTRO
ELECTROMAGNÉTICO
Luz visible Forma parte de una estrecha franja que va
desde longitudes de onda de 400 nm (violeta) hasta los 700 nm (rojo). (0.4 – 0.7 mm)
Las Lentes • Objetos que concentran
o hacen diverger los rayos de luz
• Existen dos tipos principales de lentes: • Convergentes: forman
imágenes reales
• Divergentes: forman imágenes virtuales
Lentes convergentes
Lentes divergentes
Formación de imagen real
• El objeto está fuera del plano focal, y la imagen
se forma detrás de la lente, se observa
aumentada e invertida.
Objeto
Lente
Punto focal Imagen
real Punto focal
Plano focal
Formación de imagen virtual
• El objeto está dentro del plano focal, la imagen se forma delante de la lente y se observa aumentada pero NO invertida.
lente
Punto focal Punto focal
Imagen
virtual
objeto
Plano focal
Resolución (D) Magnificación
Aumento que logra el
equipo
Distancia mínima a la cual
el equipo puede mostrar
dos puntos como
entidades separadas
El microscopio compuesto
• Instrumento óptico que se usa para aumentar o amplificar las imágenes de objetos y organismos no visibles a simple vista.
El microscopio compuesto
Examina objetos transparentes o cortados en láminas tan finas que se transparentan
Está conformado por tres sistemas:
1. Iluminación
2. Óptico
3. Mecánico
Partes del microscopio
compuesto • Sistema de
iluminación:
• Dirige la luz hacia el
objeto, comprende:
– Fuente de luz
– Espejo
– Condensador
(formado por lentes)
– Diafragma
• Sistema óptico:
• Reproduce y
aumenta las
imágenes,
comprende:
– Lentes oculares
– Lentes objetivos
– Prismas
– Condensador
Sistema de
iluminación • FUENTE DE LUZ:
• Lámpara halógena de
intensidad graduable.
• Situada en el pie del
microscopio
• El microscopio utiliza la
refracción de la luz para
la formación de imágenes
Sistema de iluminación
• CONDENSADOR:
• Sistema de lentes situadas bajo la platina
• Concentra la luz generada por la fuente de iluminación hacia la preparación
Sistema de iluminación • DIAFRAGMA:
• Se encuentra en el interior del condensador
• Limita el haz de rayos de luz que atraviesa el sistema de lentes eliminando los rayos demasiado desviados
Sistema óptico • OBJETIVOS:
• Insertados en el mecanismo del revólver
• Generan una imagen real, invertida y aumentada.
• Los mas frecuentes son los de 4, 10, 40, y 100 aumentos.
• Este último se llama de inmersión ya que para su utilización se necesita utilizar aceite .
Sistema óptico • OCULARES:
• Su función es la de captar y ampliar la imagen formada en los objetivos.
• Los mas utilizados son los de 10X (producen un aumento de 10 veces).
• Sistema mecánico:
• Posee los elementos que sostienen a las
partes del sistema óptico y de
iluminación; comprende:
Base
Brazo
Platina
Pinzas de
sujeción
Tubo del ocular
Mecanismo del revólver
Tornillos macro y micrométrico
Tornillos del carro
Sistema mecánico
• BASE:
• Sostiene al
microscopio y en
ella se integra la
fuente luminosa
Sistema mecánico
• BRAZO:
• Columna
perpendicular a la
base
• Puede ser
arqueado o vertical
y une a la base con
el tubo
Sistema mecánico
• PLATINA:
• Plataforma donde
se coloca la
preparación, posee
pinzas de sujeción
y tornillos del carro.
Sistema mecánico TUBO:
• Es una cámara oscura unida
al brazo mediante una
cremallera.
• Sostiene al mecanismo del
revolver con los objetivos en
su parte inferior y los oculares
en el extremo superior.
Sistema mecánico TORNILLO MACROMETRICO Y
MICROMETRICO:
Permiten enfocar al mover la platina hacia arriba y hacia abajo.
El macrométrico lo hace de forma rápida y el micrométrico de forma lenta.
Llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una determinada altura.
• En realidad no hay un
límite máximo de
aumentos en un
microscopio.
• La limitación fundamental
no consiste en el aumento
sino en el poder de
resolución, hasta llegar a
“amplificación vacía”
Los límites del aumento
Amplificación
Amplificación de imagen Amplificación vacía
imagen
Poder de resolución
• Distancia mínima entre dos objetos para que sean percibidos como objetos separados.
• La mayoría de células eucarióticas miden entre 3 y 10 veces menos el poder de resolución del ojo.
Ojo humano Microscopio compuesto
Microscopio electrónico
Poder de resolución
100 mm ó
0.1 mm
0. 2 mm ó 200 nm
0.2nm ó
2 Aº
Medidas microscópicas
Milímetro: milésima parte del metro (mm) Micrómetro: milésima parte del milímetro (mm) Nanómetro: milésima parte del micrómetro (nm) Angstrom: décima parte del nanómetro (Aº)
TIPOS DE MICROSCOPIOS TAMAÑOS RELATIVOS DE OBSERVACIÓN
Tipos de Microscopios de luz
• De campo claro
(brillante): el
contraste lo provee
la tinción de las
muestras
Imágenes con
microscopio de
campo claro
Tipos de Microscopios de luz • Contraste de fases
• Detecta diferencias en
el índice de refracción
y de grosor.
• Permite observar
muestras vivas, o
carentes de color Imagen con
microscopio de
contraste de fases
Tipos de Microscopios de luz • Fluorescente: utiliza luz de
longitud de onda corta para
excitar los electrones de la
muestra
• Utiliza moléculas fluorescentes
que al iluminarlas con radiación
invisible, emiten radiación
visible.
Fibroblastos teñidos con el
fluorocromo FITC
Bacillus subtilis esporulando
teñidos con FITC, DAPI y
βgalactosidasa.
Tipos de Microscopios de luz • Luz polarizada:
utiliza filtros
polarizantes para
observar
estructuras con
birrefringencia
(emite brillantez)
Cristales de ácido urico
observados con
microscopio de luz
polarizada
Tipos de Microscopios de luz
• De campo oscuro:
para muestras no
teñidas, objeto se
observa brillante
sobre un fondo
oscuro
Treponema pallidum observado con
microscopio de campo oscuro
Tipos de
Microscopios
de luz • Tridimensional Confocal:
• Combina la microscopia
fluorescente con el
análisis electronico de la
imagen para obtener
imágenes
tridimensionales.
Secuencias de microscopia confocal
Microscopio confocal.
Microscopio
electrónico Utiliza electrones en lugar de
fotones para formar imágenes de objetos muy pequeños
Funciona con un haz de electrones de alto voltaje
Utiliza lentes magnéticas para formar la imagen sobre una pantalla
Microscopía Electrónica • Aumenta la imagen desde 1000 hasta 250000
veces
• Posee mayor poder de resolución que el microscopio óptico, cerca de 2 000 veces.
• Existen dos tipos de microscopio electrónico: – MTE (microscopio de transmisión electrónica)
electrones transmitidos a través de una muestra.
– MET (microscopio electrónico tridimensional o de barrido) los electrones rebotan de la superficie de la muestra.
Recomendaciones para el uso de
microscopio óptico
• Sostenerlo firmemente del brazo y base
• No tirar del cable al desconectarlo
• Apagar la iluminación cuando no esté en
uso
• Limpiar la platina y lentes antes de
guardarlo, con limpiadores apropiados
• Cubrirlo cuando se vaya a guardar.
Gracias
• https://www.youtube.com/watch?v=70gEk
F0kj1c&feature=youtu.be
