mikrobiologi

5/19/2018 mikrobiologi

1/14

mikrobiologi file:///D:/Mikrobiologi/mikrobiologi.html

1 of 14 05-May-14 8:30 AM


2/14

y

dihasilkan oleh perpaduan antara teori dan Praktik (Jawetz, etc. 2001), dalam hal ini

mikrobiologi merupakan ilmu yang mendalami mikroorganisme untuk penerapannya

dalam kehidupan agar ditemukan cara-cara terbaik dalam penyelesaian masalah-

masalah yang timbul dalam kehidupan dalam hal ini semakin banyaknya penyakit

yang disebabkan oleh bakteri, jamur, virus dan kuman yang menyebabkan semakin

kompleksnya permasalahan yang menyangkut mikroorganisme. Namun, selain

akibat yang tidak menguntungkan tersebut banyak mikroorganisme yang dapat

dimanfaatkan misalnya fermentasi.

Untuk mempelajari seluk beluk tentang mikroorganisme ini, tentunya

menggunakan teknik atau cara-cara khusus untuk mendapatkan informasi ilmiah

mengenai mikroorganisme baik sifat dan karakteristiknya. Untuk itu tentu

diperlukan peralatan untuk menunjang kegiatan tersebut. Sehingga pengenalan akan

alat-alat laboratorium mikrobiologi beserta teknik/cara penggunaan alat-alat mutlak

diperlukan. Alat-alat yang digunakan dalam praktikum mikrobiologi harus bebas

dari kontaminan baik bakteri, virus mapun jamur atau dalamkeadaan steril.

Pengetahuan tentang cara- cara atau teknik sterilisasi mutlak diperlukan mengingat

alat- alat yang digunakan pada laboratorium mikrobiologi memiliki karakteristik

yang berbeda-beda yang tentunya akan membedakan pula teknik sterilisasinya.

Untuk mendapatkan informasi ilmiah dari mikroorganisme seringkali kita

perlu menumbuhkannya terlebih dahulu. Penumbuhan mikroorganisme tersebut

tentunya memerlukan media yang tepat. Media pertumbuhan mikroorganisme

merupakan suatu bahan yang terdiri dari campuran zat makanan (nutrien) untuk

menumbuhkan jasad renik di atas atau di dalamnya. Dengan media pertumbuhan itu

juga dapat dipelajari aktivitasnya dengan melihat perubahan-perubahan yang terjadi

pada media. Media pertumbuhan juga dapat membantu dalam melakukan isolasi

jasad renik.

Di dalam pekerjaan mikrobiologi dibutuhkan alat yang khusus untuk melihat

mikroorganisme. Salah satu alat yang sering digunakan adalah mikroskop.

Mikroskop merupakan alat bantu yang memungkinkan kita dapat mengamati objek

yang berukuran kecil. Mikroskop dalam bahasa Yunani dari micron yaitu kecil dan

scopos yaitu tujuan. Jadi, mikroskop adalah sebuah alat untuk melihat objek yang

terlalu kecil. Ilmu yang mempelajari benda kecil dengan menggunakan alat ini

disebut mikroskopi, dan kata mikroskopik berarti sangat kecil, tidak mudah terlihat

oleh mata. Daya pembesaran mikroskop menyebabkan kita dapat melihat struktur

mikroorganisme yang tidak dapat terlihat dengan mata telanjang. Pembesaran yang

dapat mikroskop adalah sekitar 100 kali sampai 400.000 kali. Ada dua jenis

mikroskop berdasarkan pada kenampakan objek yang diamati, yaitu mikroskop dua

dimensi (mikroskop cahaya) dan mikroskop tiga dimensi (mikroskop stereo).

Sedangkan berdasarkan sumber cahayanya, mikroskop dibedakan menjadi

mikroskop cahaya dan mikroskop electron.

Perbesaran yang dicapai oleh suatu mikroskop adalah hasil kerja dua sistem

lensa yaitu lensa objektif dan lensa okuler. Lensa objektif yang terdekat dengan

spesimen, dan lensa okuler, terletak pada ujung atas mikroskop, terdekat dengan

mata. Sistem lensa objektif memberikan perbesaran mula-mula dan menghasilkan

bayangan nyata yang kemudian diproyeksikan ke atas lensa okuler. Bayangan nyata

tersebut, pada gilirannya, diperbesar oleh okuler untuk menghasilkan bayangan pada

mikroskop

Pada mikroskop cahaya atau mikroskop monokuler mempunyai perbesaran

maksimum 1000 kali. Mikroskop ini mempunyai kaki yang berat dan kokoh dengan

tujuan agar dapat berdiri dengan stabil. Mikroskop cahaya memiliki tiga sistem lensa

yaitu lensa objektif, lensa okuler, dan kondensor. Lensa okuler bisa berbentuk lensa

tunggal (monokuler) atau ganda (binokuler). Pada ujung bawah mikroskop terdapat

tempat dudukan lensa objektif yang bisa dipasangi tiga lensa atau lebih. Di bawah


2 of 14 05-May-14 8:30 AM


3/14

y

tabung mikroskop terdapat meja mikroskop yang merupakan tempat preparat. Sistem

lensa yang ketiga adalah kondensor. Kondensor berperan untuk menerangi objek dan

lensa-lensa mikroskop yang lain.

1.2Tujuan Praktikum

Mahasiswa dapat membedakan jenis-jenis mikroskop yang sering digunakan dalam

kerja laboratorium

Mahasiswa mampu menyiapkan dan mengoperasikan mikroskop optic cermin

maupun listrik sesuai dengan prosedur.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

Mikroskop pertama kali ditemukan oleh Antony Van Leuwenhoek (1632-1723)yang berkebangsaan Belanda, dengan mikroskop yang masing-masing terdiri ataslensa tunggal hasil gosokan rumah yang ditanam dalam kerangka kuningan dan

perak. Kekuatan perbesaran tertinggi yang dapat dicapainya hanyalah 200-300 kali,mikroskop ini sedikit sekali persamaannya dengan mikroskop cahaya majemuk yangada sekarang (Purba, 1999).

Mikroskop pada prinsipnya adalah alat pembesar yang terdiri dari dua lensacembung yaitu sebagai lensa objektif (dekat dengan mata) dan lensa okuler (dekatdengan benda). Baik objektif maupun okuler dirancang untuk perbesaran yang

berbeda. Lensa objektif biasanya dipasang pada roda berputar,yang disebut gagangputar (Volk, 1984).Bila kita ingin perbesaran sudut yang lebih besar daripada pembesaran kaca

pembesar, oleh karena itu keberadaan mikroskop sangat diperlukan. Benda O yangakan diteliti diletakkan pada titik fokus pertama F dari lensa objektif, yangmembentuk bayangan nyata dan diperbesar yaitu I. Bayangan ini terletak tepat padatitik fokus pertama F1 dari okuler yang membentuk bayangan semu dari I pada I

Mikroskop adalah instrument yang paling banyak digunakan dan paling

bermanfaat di laboratorium mikroskopi. Dengan alat ini diperoleh perbesaran

sehingga memungkinkan untuk melihat organisme dan struktur yang tak tampak

dengan mata telanjang. Mikroskopmemungkinkan perbesaran dalam kisaran luas

dari seratus kali sampai ratusan ribu kali.

Kedua kategori mikroskop yang ada ialah mikroskop cahaya (atau optis) dan

mikroskop electron. Keduanya berbeda dalam prinsip yang mendasari perbesaran.

Mikroskop cahaya yang kesemuanya menggunakan system lensa optis, mencakup

mikroskop :

1) Mikroskop medan-terang

2) Mikroskop medan-gelap

3) Mikroskop fluoresensi

4) Mikroskop kontras-fase

Mikroskop electron menggunakan berkas electron sebagai pengganti

gelombang cahaya untuk memperoleh bayangan yang diperbesar. (Gerhadt, P.1980)

Tipe-tipe mikroskopi digunakan untuk penelitian. Untuk prosedur dalam

laboratorium mikrobiologi diagnostic, dan untuk tujuan-tujuan khusus lainnya.

Setiaptipe terutama berguna untuk pemeriksaan beberapa cirri morfologi khusus, dan

dipaparkan sebagai berikut.

1. Mikroskopi Medan Terang

Dalam mikroskop medan-terang, daerah yang diamati diterangi dengan

benderang sehingga objek yang ditelaah tampak lebih gelap dar i latar belakangnya.

Perbesaran maksimum 1,000-2,000. Pada waktu pengamatan, bakteri biasanya

diwarnai dan menampakkan warna zat pewarnanya. Mikroskopi ini biasanya

digunakan untuk bakteri, khamir, kapang, algae, dan protozoa.

2. Mikroskopi Medan Gelap

Mikroskopi medan-gelap diperoleh dari macam mikroskop yang sama seperti

yang digunakan untuk mikroskopi medan-terang, kecuali bahwa alat itu dilengkapi

dengan kondensor medan gelap dan suatu objektif ber-NA rendah. Perbesaran

maksimum 1,000-2,000 dan tidak diwarnai karena bercahaya.

3. Mikroskopi Fluoresensi

Mikroskopi fluoresensi digunakan untuk memeriksa specimen yang telah

diwarnai denganzat pewarna fluorokom sehingga memungkinkan identifikasi

mikroorganisme dengan cepat. Perbesaran maksimum 1,000-2,000 dan cerah serta

berwarna sehingga dapat membantu identifikasi mikroorganismenya.4. Mikroskopi Kontras Fase

Mikroskopi kontras fase adalah suatu tipe mikroskopi cahaya yang

memungkinkan kontras yang lebih besar antara substansi dengan berbagai ketebalan

atau berbagai indek bias. Perbesaran maksimum yaitu 1,000-2,000 dengan specimen

derajat kegelapan dan digunakan untuk pemeriksaan struktur selular pada sel hidup

mikroorganisme berukuran besar, contohnya khamir, algae, protozoa, dan beberapa

bakteri.

5. Mikroskopi Elektron


3 of 14 05-May-14 8:30 AM


4/14

y

Mikroskopi electron memberikan perbesaran berguna yang jauh lebih besar

daripada yang mungkin diperoleh dengan mikroskopi cahaya. Perbesaran maksimum

200.000-400.000 dengan specimen cerah pada layar fluoresen dan digunakan untuk

objek kecil, contohnya virus dan struktur ultra sel microbe. (Wilson,M.B.1976)

BAB III

ALAT DAN BAHAN

3.1 ALAT

Alat yang digunakan pada praktikum ini adalah:

-Mikroskop Optik Lampu Listrik

3.2 CARA KERJA

Mikroskop Optik Cermin Pantul

Prosedur Kerja

Cermin pada mikroskop diarahkan ke sumber cahaya sedemikian rupa sehingga

pantulan cahaya tepat jatuh melalui lubang diafragma kondensor.

Lensa objektif pada pembesaran yang dikehendaki ditempatkan pada kedudukan

seporos dengan lensa okuler, dengan cara memutar revolver.

Lensa-lensa diamati dengan cara mengintip pada lensa okuler untuk memastika

kebersihan lensa maupun intensitas cahaya yang masuk.

Jika terlihat ada kotoran, lensa dibersihkan dahulu dengan hati-hati menggunakan

lap lunak yang tidak mudah terlepas bahan seratnya.. Jika intensitas cahaya tidak

sesuai dengan pandangan mata, posisi kondensor atau luas lubang diafrgmanya

diubah.

Preparat atau specimen dipasang diatas meja benda dan objek diletakkan tepat

diatas lubang meja benda serta tersorot cahaya dari cermin mikroskop.

Tubus diturunkan dengan memutar sekrup pengatur tubus sampai lensa objektif

pada kedudukan paling dekat dengan objek, dengan hati-hati agar lensa objektif

tidak menabrak preparat.

Preparat diamati melalui lensa okuler dan diatur kembali masuknya cahaya ke

dalam mikroskop, sehingga diperoleh bidang pemandangan yang cukup terang dan

merata, dengan cara mengatur kedudukan kondensor dan lubang diafragma.

Mikroskop Optik Lampu Listrik

Prosedur Kerja

Stecker dimasukkan ke sambungan listrik dan lampu dihidupkan dengan menekan

kontak on.

Lensa objektif pada pembesaran yang dikehendaki ditempatkan pada kedudukan

seporos dengan lensa okuler, dengan cara memutar revolver.

Lensa-lensa diamati dengan cara mengintip pada lensa okuler untuk memastikan

kebersihan lensa maupun intensitas cahaya yang masuk. Jika terlihat ada kotoran, lensa dibersihkan dahulu dengan hati-hati menggunakan

lap yang lunak yang tidak mudah terlepas bahaya seratnya. Jika intensitas cahaya

tidak sesuai dengan pandangan mata, posisi kondensor atau luas lubang

diafragmanya diubah.

Preparat atau specimen dipasang di atas meja benda dan objek diletakkan tepat di

atas lubang meja benda serta tersorot cahaya dari lampu listrik mikroskop.

Meja benda dinaikkan dengan memutar sekrup pengatur sampai objek pada

kedudukan yang paling dekat dengan lensa objektif, dengan hati-hati supaya preparat

tidak menabrak lensa objektif.

Preparat diamati melalui lensa okuler dan diatur kembali masuknya cahaya ke

dalam mikroskop, sehingga diperoleh bidang pemandangan yang cukup terang dan

merata, dengan cara mengatur kedudukan kondensor dan lubang diafragma.

Prosedur Operasi Mikroskop Stereo

1. Letakkan spesimen / preparat di stage plate (5), jepit bila perlu.

2. Atur perbesaran pada perbesaran terkecil dengan memutarZoom Control Knob(3)

kemudian dicari fokusnya dengan memutar Focusing Knob (4).

3. Jika ingin mendapatkan bayangan yang lebih besar, putarZoom Control Knob(3) ke

perbesaran yang lebih tinggi kemudian dicari fokusnya.


4 of 14 05-May-14 8:30 AM


5/14

y

Prosedur Operasi Autoklaf

1. Sebelum melakukan sterilisasi, cek dahulu banyaknya air dalam autoklaf. Jika

air kurang dari batas yang ditentukan, maka dapat ditambah air sampai batas

tersebut. Gunakan air hasil destilasi, untuk menghindari terbentuknya kerak dan

karat.

2. Masukkan peralatan dan bahan. Jika mensterilisasi botol bertutup ulir, maka tutup

harus dikendorkan.

3. Tutup autoklaf dengan rapat lalu kencangkan baut pengaman agar tidak ada uap

yang keluar dari bibir autoklaf. Klep pengaman jangan dikencangkan terlebih

dahulu.

4. Nyalakan autoklaf, dia tur timerdengan waktu minimal 15 menit pada suhu 121C.

5. Tunggu sampai air mendidih sehingga uapnya memenuhi kompartemen autoklaf dan

terdesak keluar dari klep pengaman. Kemudian klep pengaman ditutup

(dikencangkan) dan tunggu sampai selesai. Penghitungan waktu 15 dimulai sejak

tekanan mencapai 2 atm.

6. Jika alarm tanda selesai berbunyi, maka tunggu tekanan dalam kompartmen turun

hingga sama dengan tekanan udara dilingkungan (jarum pada peisure gauge

menunjuk ke angka nol). Kemudian klep-klep pengaman dibuka dan dikeluarkan isi

autoklaf dengan hati-hati.

Prosedur OperasiBiological Safety Cabinet

1. Hidupkan lampu UV selama 2 jam, selanjutnya matikan segera sebelum mulai

bekerja.

2. Pastikan kaca penutup terkunci danpada posisi terendah.

3. Nyalakan lampu neon dan blower.

4. Biarkan selama 5 menit.

5. Cuci tangan dan lengan dengan sabun gemisidal / alkohol 70%.

6. Usap permukaan interior BSC dengan alkohol 70% atau desinfektan yang cocok dan

biarkan menguap.

7. Masukkan alat dan bahan yang akan dikerjakan, jangan terlalu penuh (overload)

karena memperbesar resiko kontaminan.

8. Atur alat dan bahan yang telah dimasukkan ke BSC sedemikian rupa sehingga

efektif dalam bekerja dan tercipta areal yang benar-benar steril.

9. Jangan menggunakan pembakar Bunsen dengan bahan bakar alkohol tapi gunakan

yang berbahan bakar gas.

10. Kerja secara aseptis dan jangan sampai pola aliran udara terganggu oleh aktivitas

kerja.

11. Setelah selesai bekerja, biarkan 2-3 menit supaya kontaminan tidak keluar dari BSC.

12. Usap permukaan interior BSC dengan alkohol 70% dan biarkan menguap lalu tanga

ndibsuh dengan desinfektan.

13. Matikan lampu neon dan blower.

Prosedur Operasi Mikropipet (Micropippete) dan Tip

1. Sebelum digunakan Thumb Knob sebaiknya ditekan berkali-kali untuk memastikan

lancarnya mikropipet.

2. Masukkan Tip bersih ke dalamNozzle / ujung mikropipet.

3. Tekan Thumb Knobsampai hambatan pertama /first stop, jangan ditekan lebih ke

dalam lagi.

4. Masukkan Tip ke dalam cairan sedalam 3-4 mm.

5. Tahan pipet dalam posisi vertikal kemudian lepaskan tekanan dari Thumb Knob

maka cairan akan masuk kedalam Tip.

6. Pindahkan ujung Tip ke tempat penampung yang diingingkan.

7. Tekan Thumb Knobsampai hambatan kedua / second stopatau tekan semaksimal


5 of 14 05-May-14 8:30 AM


6/14

y

mungkin maka semua cairan akan keluar dari ujung Tip.

8. Jika ingin melepas tip, putar Thumb Knobsearah jarum jam dan ditekan maka tip

akan terdorong keluar dengan sendirinya, atau menggunakan alat tambahan yang

berfungsi mendorong tip keluar.

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Pengamatan

NO GAMBAR MIKROSKOP FUNGSI

1

mikroskop monokuler cermin pantul Fungsi Mikroskop stereo

adalah untuk mengamati

benda-benda yang tidak terlalu

kecil.

2 Mikroskop biokuler lampu listrik

Mikroskop cahaya adalah

mikroskopyang digunakan

dengan bantuan cahaya

matahari dan mikroskop

elektron adalah mikroskop

yang digunakan dengan

bantuan listrik.

4.2 Pembahasan

Mikroskopmerupakan alat yang digunakan untuk melihat benda yang

sangat kecil yang tidak dapat dilihat atau diamati dengan mata telanjang.

Berikut gambar mikroskop dan bagian-bagian pada mikroskop:

LENSA OKULER, yaitu lensa yang dekat dengan mata pengamat lensa ini berfungsi

untuk membentuk bayangan maya, tegak, dan diperbesar dari lensa objektif

LENSA OBJEKTIF, lensa ini berada dekat pada objek yang di amati, lensa ini

membentuk bayangan nyata, terbalik, di perbesar. Di mana lensa ini di atur oleh

revolver untuk menentukan perbesaran lensa objektif.

TABUNG MIKROSKOP (TUBUS), tabung ini berfungsi untuk mengatur fokus dan

menghubungan lensa objektif dengan lensa okuler.

MAKROMETER (PEMUTAR KASAR),makrometer berfungsi untuk menaik turunkan

tabung mikroskop secara cepat.

MIKROMETER (PEMUTAR HALUS),pengatur ini berfungsi untuk menaikkan dan

menurunkan mikroskop secara lambat, dan bentuknya lebih kecil daripada

makrometer.

REVOLVER, revolver berfungsi untuk mengatur perbesaran lensa objektif dengan

cara memutarnya.

REFLEKTOR, terdiri dari dua jenis cermin yaitu cermin datar dan cermin cekung.

Reflektor ini berfungsi untuk memantulkan cahaya dari cermin ke meja objek

melalui lubang yang terdapat di meja objek dan menuju mata pengamat. Cermindatar digunakan ketika cahaya yang di butuhkan terpenuhi, sedangkan jika kurang

cahaya maka menggunakan cermin cekung karena berfungsi untuk mengumpulkan

cahaya.

DIAFRAGMA, berfungsi untuk mengatur banyak sedikitnya cahaya yang masuk.

KONDENSOR, kondensor berfungsi untuk mengumpulkan cahaya yang masuk, alat

ini dapat putar dan di naik turunkan.

MEJA MIKROSKOP, berfungsi sebagai tempat meletakkan objek yang akan di amati.

PENJEPIT KACA, penjepit ini berfungsi untuk menjepit kaca yang melapisi objek

agar tidak mudah bergeser.

LENGAN MIKROSKOP, berfungsi sebagai pegangang pada mikroskop.

KAKI MIKROSKOP, berfungsi untuk menyangga atau menopang mikroskop.


6 of 14 05-May-14 8:30 AM


7/14

y

SENDI INKLINASI (PENGATUR SUDUT), untuk mengatur sudut atau tegaknya

mikroskop.

Dari bagian-bagian mikroskop tersebut memiliki fungsi dan cara perawatan

yang berbeda-beda dan dari bagian-bagian alat tersebut suatu praktikum bisa berhasil

atau tidaknya, seandainya terdapat kerusakan pada salah satu bagian-bagian

mikroskop tersebut dapat mempengaruhi hasil kerja di laboratorium, jadi bagian-

bagian tersebut saling berkesinambungan. Pada mikroskop terdapat beberapa jenis

mikroskop yang memiliki ketajaman penelitian yang berbada-beda sesuai dengan

kebutuhan.

Mikroskopterdiri dari dua bagian, yaitu:

1.Bagian mekanik

Pada bagian mekanik terdiri dari:

Kaki mikroskop berfungsi untuk menyangga mikroskop.

Pilar atau sendi inklinasi sebagai penghubung antara kaki dengan lengan

mikroskop.

Pengatur kondensor berfungsi untuk menarik turunkan kondensor.

Kondensor berfungsi untuk memfokuskan cahaya ke benda yang sedang

diamati

Lengan mikroskop berfungsi sebagai pegangan mikroskop.

Engsel penggerak berfungsi sebagai penghubung lengan dengan kaki

mikroskop

Meja preparat berfungsi untuk meletakkan preparat yang akan diamati.

Penjepit preparat atau pemegang sediaan berfungsi untuk menjepit

preparat yang akan diamati agar tidak bergeser.

Tabung berfungsi menghubungkan antara lensa objektif dan lensa okuler.

Revolver berfungsi untuk menempatkan lensa objektif.

Sekrup pemutar kasar berfungsi untuk menggerakkan tabung mikroskop

secara cepat dari atas ke bawah.

Sekrup pemutar halus berfungsi untuk menggerakkan tabung ke arah atas

dan bawah secara lambat. Alat ini dipakai jika objek telah terfokus dengan

memutar pemutar kasar.

2.Bagian optik

Pada bagian optik terdiri dari:

Dua buah cermin, yaitu sebuah cermin datar dan sebuah cermin cekung.

Fungsi cermin adalah untuk mencari, mengumpulkan, dan mengarahkansinar pada objek yang diamati. Cermin datar untuk sumber cahaya yang

cukup terang dan cermin cekung untuk sumber cahaya yang kurang terang

.

Diafragma, berfungsi untuk mengatur banyak sedikitnya sinar yang

dipantulkan cermin menuju ke mata.

Lensa objektif, berfungsi untuk memperbesar bayangan objek, terletak

pada revolver.

Lensa okuler, ber

A. Menyiapkan mikroskop.

Keluarkan mikroskop dari kotaknya atau tempat menyimpannya di dalam lemari.

Peganglah mikroskop itu dengan erat pada lengannya yaitu bagian yang

melengkung, dengan satu tangan, sedang tangan yang lain pakailah untuk

menyangga kaki mikroskop. Gunakanlah selalu cara ini apabila mengangkat

mikroskop. Letakkan mikroskop dengan hati-hati di atas meja laboratorium,sedemikian hingga lengannya mengarah ke tempat duduk kita, sedangkan meja

objek menghadap ke arah yang berlawanan. Letak kakinya jangan terlalu ke tepi

meja, supaya mikroskop tidak jatuh.

Mikroskop sangat penting dalam penelitian, khsusnya untuk melihat objek yang

sangat kecil yang tidak dapat dilihat dengan mata, oleh karena itu alat ini di namakan

Mikroskop. Diantara kita mungkin masih ada yang belum tahu cara penggunaan

mikroskop yang baik dan benar. Nah, sebelum melakukan praktikum dengan

menggunakan mikroskop cahaya maka perhatikan langkah-langkah berikut:

1. Letakkan mikroskop di atas meja dengan cara memegang lengan

mikroskop sedemikian rupa sehingga mikroskop berada persis di

hadapan pemakai !

2. Putar revolver sehingga lensa obyektif dengan perbesaran lemah

berada pada posisi sa tu poros dengan lensa okuler yang ditandai

bunyi klik pada revolver

3. Mengatur cermin dan diafragma untuk melihat kekuatan cahaya

masuk, hingga dari lensa okuler tampak terang berbentuk bulat

(lapang pandang).

Cara Menggunakan Mikroskop Saat Praktikum


7 of 14 05-May-14 8:30 AM


8/14

y

4. Tempatkan preparat pada meja benda tepat pada lubang preparat

dan jepit dengan penjepit obyek/benda!

5. Aturlah fokus untuk memperjelas gambar obyek dengan cara

memutar pemutar kasar, sambil dilihat dari lensa okuler. Untuk

mempertajam putarlah pemutar halus !

6. Apabila bayangan obyek sudah ditemukan, maka untuk

memperbesar gantilah lensa obyektif dengan ukuran dari 10 X,40 X

atau 100 X, dengan cara memutar revolver hingga bunyi klik.

7. Apabila telah selesai menggunakan, bersihkan mikroskop dan

simpan pada tempat yang tidak lembab.

BAB V

PENUTUP

5.1 Kesimpuan

Mikroskop adalah alat yang sangat penting dalam praktikum mikrobiologi

karena dalam praktikum mikrobiologi, kita selalu menggunakan alat ini untuk

mengamati mikroorganisme yang tidak dapat diamati dengan mata telanjang.Terdapat beberapa jenis mikroskop yaitu mikroskop biasa, mikroskop medan gelap,

mikroskop fase kontras, mikroskop ultraviolet dan mikroskop elektron dari kesemua

mikroskop tersebut memiliki fungsi dan cara penggunaanya yang berbeda baik

tingkat ketelitian maupun ukuran. Dengan mempelajari dan mengerti cara penggunaa

mikroskopik ini, maka kita akan lebih mudah mempelajari pada praktikum

berikutnya, karena tanpa ki ta mengetahui mikroskopi, maka kita akan semakin sulit

mengerti pada praktikum yang selanjutnya.

5.2 Saran

Saya selaku praktikan menyarankan agar prosedur dalam penggunaan

mikroskop baik mikroskop biasa, mikroskop medan gelap, mikroskop fase kontras,

mikroskop ultraviolet dan mikroskop elektron dapat dijelaskan secara lebih rinci dan

dengan menggunakan alatnya sendiri.

DAFTAR PUSTAKA

Purnomo, Bambang, 2011. Penuntun Praktikum Mikrobiologi. Fakultas Pertanian UNIB. Bengkulu.

Purba, M dan kawan-kawan. 1999. Kimia. Erlangga. Jakarta.

Volk dan Wheeler. 1984.Mikrobiologi Dasar Edisi Kelima Jilid I. Erlangga. Jakarta.Zaifbio, 2009. Pengertian mikroskop. zaifbio.wordpress.com/2009/10/30/mikroskop. Diakses tanggal

29 september 2011, pukul 14.30 WIB.


8 of 14 05-May-14 8:30 AM


9/14

y

BAB I

Pendahuluan

1.1 Dasar Teori

Medium kultur merupakan suatu bahan yang terdiri dari campuran nutrient (zat

makanan pada tingkat sel) yang digunakan untuk menumbuhkan (kultivasi)

mikroorganisme. Medium kultur dapat dibedakan berdasarkan atas susunankimianya, konsistensinya, maupun fungsinya. Supaya mikroorganisme tumbuh

dengan baik, maka medium kultur harus mengandung semua nutrient yang

diperlukan dalam keadaan seimbang, tidak mengandung zat-zat penghambat, dalam

keadaan steril, mempunyai tekanan osmose yang sesuai, dan mempunyai keasaman

(pH) yang sesuai pula.

Pada prinsipnya medium dapat dibuat dari beberapa bahan bernutrien.

Bahan-bahan yang bernutrien diekstraksi dengan air, sehingga melarutkan larutan

nutrient. Agar-agar digunakan untuk memadatkan larutan nutrient bagi

mikroorganisme yang membutuhkan medium padat dalam pertumbuhannya. Setelah

bahan-bahan tercampur homogen, kemudian disaring dan diatur keasamannya.

Bahan yang telah tercampur homogen dan diketahui keasamannya dimasukkan

dalam gelas Erlenmeyer atau dalam tabung-tabung reaksi masing-masing sebanyak

yang diperlukan dan disumbat rapat. Medium disterilkan sesuai dengan sifatnya.

Medium yang tahan panas disterilkan dengan uap air panas yang bertekanan

(otoklaf), sedangkan medium-medium cair yang tidak tahan panas disterilkan dengan

penyaringan super halus (saringan bakteri) .

1.2 Tujuan Praktikum

Mahasiswa dapat membedakan resep beberapa medium yang berbeda.

Mahasiswa mampu menyiapkan dan membuat medium berdasarkan resep yang

ada.

Mahasiswa mampu mensterilkan medium sehingga medium kultur siap dipakai.

BAB II

Tinjauan Pustaka

Populasi mikroba di alam sekitar kita besar lagi kompleks. Beratus-ratus

spesies berbagai mikroorganisme biasanya menghuni bermacam-macam bagian

tubuh kita, termasuk mulut, saluran pencernaan, dan kulit. Mereka terdapat dalam

jumlah yang luar biasa besarnya. Sebagai contoh, sekali bersin dapat menyebarkan

beribu-ribu mikroorganisme. Satu gram tinja dapt mengandung jutaan bakteri. Alam

sekitar kita antara lain tanah, udara, air juga dihuni kumpulan mikroorganisme.

Banyak dilakukan penelitian yang layak mengenai mikroorganisme dalam

berbagai habitat ini memerlukan teknik pemisahan populasi campuran yang rumit

ini, atau biakan campuran, menjadi spesies yang berbeda-beda sebagai biakan murni.

Biakan murni terdiri dari suatu populasi sel yang semuanya berasal dari satu sel

induk. (Gerhardt, 1980)

Mikroorganisme dibiakkan di laboratorium pada bahan nutrient yang disebut

medium. Terdapat banyak sekali medium yang tersedia; macamnya yang dipakai

bergantung kepada banyak factor, salah satu diantaranya adalah macam

mikroorganisme yang akan ditumbuhkan. Contohnya pada medium PDA (Potato

Dextrose Agar) yang berasal dari bahan berupa kentang dan NA (Nutrien Agar) yang

berasal dari bahan agar-agar.

Seperti yang telah kita ketahui, biakan ini dimanfaatkan untuk berbagai

maksud di laboratorium-laboratorium mikrobiologi. Sebagai contoh, kultur

mikroorganisme yang telah dikenal (biakan acuan) dari Pusat Pengawasan Penyakit

digunakan para mikrobiologiwan di laboratorium klinik untuk menilai cara-cara

kerja yang digunakan di sana.

Banyak prosedur digunakan untuk mengawetkan dan memelihara biakan

mikroorganisme. Metode yang dipilih bergantung pada keadaan yang bertalian

dengan biakannya. Apakah biakan itu hanya perlu disimpan untuk waktu pendek

(bebulan-bulan), ataukah ingin disimpan selama tak berhinga (beratus-ratus tahun).

Untuk pemeliharaan jangka pendek, biakan dapat disimpan pada suhu lemari

es (0-10C), sedangkan untuk pemeliharaan jangka panjang, disimpan dalam

nitrogen cair pada suhu -196C. Atau, dapat juga didehidrasi dalam tabung selagi

dibekukan dan ditutup rapat dalam ruangan hampa. Proses ini dinamakan liofilisasi.

(Wilson, 1976)


9 of 14 05-May-14 8:30 AM


10/14

y

BAB III

Metodelogi

3.1 Pembuatan Medium Potato Dextrose Agar (PDA)

Bahan dan Alat

1) Bahan : Kentang 200 g, dextrose 20 g, tepung agar-agar 20 g, aquades 1000 ml, 10

ml asam asetat 1%, 10 ml KOH 1%, 10 ml larutan NaCl 1% dan 10 ml Na2CO

30.1

%, 4 batang lakmus pH 1-14.

2) Alat : 1 buah gelas piala 1000 ml, penangas, 1 batang pengaduk, 1 buah pisau, 1

lembar kain saring, 1 buah corong 7,5 cm, 1 buah timbangan kapasitas skala 1 gram,

2 buah gelas Erlenmeyer 250 ml, 20 buah tabung reaksi, otoklaf, 1 gelas piala 200

ml, 1 pipet ukur 25 ml, 1 labu Erlenmeyer, 1 buah otoklaf.

Prosedur Kerja

1) Kentang dikupas dan dicuci lalu dipotong-potong kecil berukuran 0,5 cm3.

2) Timbang potongan-potongan kentang seberat 200 g, kemudian rebus dengan 1000

ml air bersih sampai mendidih.

3) Ekstrak kentang (air rebusan) dipisahkan dengan kain saring.

4) Ekstrak dipanaskan kembali, kemudian ditambahkan 20 g dektrose dan 20 g

agar-agar sambil diaduk.

5) Jika volumenya kurang dari 1000 ml perlu ditambahkan air lagi sampai volume

1000 ml dan teru diaduk sampai agar-agarnya benar-benar homogen.

6) Keasaman pH diukur, jika kurang dari 7 tambahkan KOH dan jika lebih dari 7

tambahkan asam asetat.

7) Medium dimasukkan ke dalam gelas erlenmayer 200 ml atau tabung-tabung reaksi

sebanyak 12 ml atau 15 ml kemudian disumbat dengan kapas.

8) Medium disterilkan dengan menggunakan otoklaf pada suhu 121C 15 psi selama

20-30 menit.

9) Setelah sterilisasi, tabung-tabung reaksi yang berisi 5 ml medium kultur diletakkan

miring terhadap bidang horizontal dan dibiarkan sampai padat.

10) Medium disimpan dalam tempat penyimpanan khusus.

3.2 Pembuatan Medium Nutrien Agar (NA)

Bahan dan Alat

1) Bahan : ekstrak daging 3 g, pepton 5 g, agar-agar 20 g, aquades 1000 ml.

2) Alat : 1 buah gelas piala 1000 ml, 1 buah penangas, 1 batang pengaduk, 1 unit

timbangan analis, 1 lembar kain saring, 1 buah corong, 2 buah gelas Erlenmeyer 250

ml, 20 buah tabung reaksi, 200 g kapas, 1 unit otoklaf.

Prosedur kerja

1) Menyiapkan pepton 5 g, agar-agar 20 g dan ekstrak daging 3 g.

2) Semua bahan dimasukkan ke dalam gelas piala dan ditambah air bersih sampai

volumenya 1000 ml, kemudian dipanaskan sambil diaduk-aduk.

3) Setelah homogen, diukur pH-nya, jika kurang dari 7 tambahkan basa dan jika lebih

dari 7 tambahkan asam.

4) Langkah selanjutnya sama dengan langkah 7 sampai 10 pada pembuatan PDA.

BAB IV

Hasil dan Pembahasan

4.1. Analisis Prosedur


10 of 14 05-May-14 8:30 AM


11/14

y

4.1.1. Pembuatan Media

4.1.1.1. Media Agar Nutrient ( Nutrien Agar / NA)

Nutrien agar bubuk dilarutkan sebanyak 23 gram dalam 1000 ml akuades,

dipanaskan dengan penangas air hingga mendidih, diaduk terus hingga semua larut.

Pemanasan dengan penangas air agar serbuk nutrient agar cepat larut dengan adanya

panas yang dihasilkan dari penangas dan pengadukan dilakukan agar larutnya serbuk

agar merata dan tidak terjadi gumpalan ataupu larutan agar menjadi hangus.

Kemudian media dalam keadaan cair dimasukkan tabung reaksi, dibuat media tegak

dan miring. Pemasukan agar pada tabung dalam keadaan cair bertujuan agar larutan

agar yang dimasukkan belum mulai mengenyal, dapat menempati wadah dan

terbentuk agar yang baik. Tabung disumbat dengan kapas, hal ini dilakukan agar

media yang di dalam tabung tidak terkontaminasi oleh mikroba. Lalu, disterilkan

dengan autoklaf pada suhu 1210

C, tekanan 1 atm selama 15 menit. Pensterilan

media agar ini dilakukan untuk membunuh mikroba yang berpotensi untuk

mengkontaminasi. Agar miring, setelah disterilkan dimiringkan hingga beku.

Kemiringan diatur dengan batas bawah kemiringan media 1 cm dari dasar tabung

dan batas atas tidak lebih dari tinggi tabung reaksi. Kemiringan diatur untuk

mempermudah pengkulturan mikroba, tapi tidak boleh terlalu mendekati mulut

tabung untuk meminimalisir kontaminasi mikroba yang tidak diinginkan. Agar siap

digunakan.

Metode di atas menggunakan serbuk agar. Untuk pembuatan agar nutrientdengan cara konvensional adalah menambahkan komponen (agar 12g, pepton 5g,

ekstrak daging 500 g) ditambahkan pada 1 L akuades, dicampur dengan diaduk dan

dipanaskan. pembuatan agar ini dilakukan dengan pH 7,0 0,2 pada 25 C. Setelah

larut, dimasukkan ke dalam tabung selama cair, disterilkan dengan dimasukkan

autoklaf selama 15 menit pada 15 psi dengan suhu 1210C. dituangkan pada cawan

petri yang steril.

4.1.1.2 Media Agar Kentang Dekstrosa ( Potato Dextrose Agar / PDA )

Agar kentang dekstrosa bubuk dilarutkan sebanyak 23 gram dalam 1000 ml

akuades, dipanaskan dengan penangas air hingga mendidih, diaduk terus hingga

semua larut. Pemanasan dengan penangas air agar serbuk agar kentang dekstrosa

cepat larut dengan adanya panas yang dihasilkan dari penangas dan pengadukan

dilakukan agar larutnya serbuk agar merata dan tidak terjadi gumpalan ataupu

larutan agar menjadi hangus. Kemudian media dalam keadaan cair dimasukkan

tabung reaksi, dibuat media tegak dan miring. Pemasukan agar pada tabung dalam

keadaan cair bertujuan agar larutan agar yang dimasukkan belum mulai mengenyal,

dapat menempati wadah dan terbentuk agar yang baik. Tabung disumbat dengan

kapas, hal ini dilakukan agar media yang di dalam tabung tidak terkontaminasi oleh

mikroba. Lalu, disterilkan dengan autoklaf pada suhu 1210C, tekanan 1 atm selama

15 menit. Pensterilan media agar ini dilakukan untuk membunuh mikroba yang

berpotensi untuk mengkontaminasi. Agar miring, setelah disterilkan dimiringkan

hingga beku. Kemiringan diatur dengan batas bawah kemiringan media 1 cm dari

dasar tabung dan batas atas tidak lebih dari tinggi tabung reaksi. Kemiringan

diatur untuk mempermudah pengkulturan mikroba, tapi tidak boleh terlalu

mendekati mulut tabung untuk meminimalisir kontaminasi mikroba yang tidak

diinginkan. Agar siap digunakan. Metode tersebut menggunakan serbuk agar. Dan

untuk pembuatan agar kentang dekstrosa dengan cara konvensional adalah

menambahkan komponen (Kentang infusi 4,0g (pemasukan dari 200 g kentang), D

(+) glukosa 20.0g, agar-agar 15.0g) ditambahkan pada 1 L akuades, dicampur

dengan diaduk dan dipanaskan. pembuatan agar ini dilakukan dengan pH 5.6 0,2

pada 25 C. Setelah larut, dimasukkan ke dalam tabung selama cair, disterilkan

dengan dimasukkan autoklaf selama 15 menit pada 15 psi dengan suhu 1210C.

dituangkan pada cawan petri yang steril.

4.2 Hasil Pengamatan

No

Nama Medium

Kultur dan

Kegunaan

Resep Cara Membuat

1 Potato Dextrose

Agar (PDA)

200 g kentang

20 g dextrose

20 g tepung

agar-agar

1000 ml aquades

10 ml asam asetat 1

%

10 ml KOH 1 %

10 ml larutan NaCl

Kentang yang telah

dikupas,dicuci dan

dipotong-potong kecil

hingga berukuran 0,5 cm3.

Kemudian potongan

kentang seberat 200 g

ditimbang dan setelah itu

direbus dengan 1000 ml air

bersih sampai mendidih.


11 of 14 05-May-14 8:30 AM


12/14

y

1 %

10 ml Na2CO

30,1

%

4 batang lakmus

pH 1-14

Lalu, pisahkan ekstrak

kentang (air rebusan)

dengan kain saring dan

ekstrak dipanaskan

kembali. Setelah itu

tambahkan 20 g dektrose

dan 20 g agar-agar sambil

diaduk.

Jika volume kurang dari

1000 ml perlu ditambahkan

air lagi sampai volume

1000 mldan terus diaduk

sampai agar-agarnya

benar-benar homogen.

Setelah itu, ukurlah

keasaman pH (< 7, maka

tambahkan KOH dan > 7

tambahkan asam asetat).

Masukkan medium

kedalam gelas Erlenmeyer

200 ml atau tabung reaksisebanyak 12 ml atau5 ml

kemudian dengan kapas.

Setelah itu, sterilkan

dengan otoklaf pada suhu

121C 15 psi selama 20-30

menit.

Setelah dilakukan

sterilisasi, tabung-tabung

reaksi yang berisi 5 ml

medium kultur diletakkan

miring terhadap bidang

horizontal dan biarkan

sampai padat dan

simpanlah medium dalam

penyimpanan khusus .

2 Nutrien Agar (NA) Pepton 5 g

Agar-agar 20 g

Aquades 100ml

Siapkan pepton 5 g,

agar-agar 20 g,

Setelah semua bahan

dimasukkan ke dalam gelas

piala dan ditambah air

bersih sampai volumenya

1000 ml dan panaskan

sambil diaduk-aduk.

Setelah larutan homogen,

ukurlah pH-nya (jika < 7

tambahkan basa dan jika >

7 tambahkan asam).

Setelah semuanya selesai,

masukkan medium

kedalamgelas Erlenmeyer

200ml atau tabung reaksi

sebanyak 12 ml atau 5 ml

kemudian disumbat kapas.

Setelah itu, sterilkan

dengan otoklaf pada suhu

121C 15 psi selama 20-30

menit.

Setelah dilakukan

sterilisasi, tabung-tabung

reaksi yang berisi 5 ml

medium kultur diletakkanmiring terhadap bidang

horizontal dan biarkan

sampai padat dan

simpanlah medium dalam

penyimpanan khusus .

4.3 Pembahasan


12 of 14 05-May-14 8:30 AM


13/14

y

Pada percobaan dengan membuat medium kultur pada medium Potato

Dextrose Agar (PDA) dan medium Nutrien Agar (NA) terdapat perbedaan pada

resep dari masing-masing medium. Untuk medium PDA digunakan resep yang

berupa bahan dengan berbagai ukuran. Bahan resep tersebut antara lain kentang 200

g, dextrose 20 g, tepung agar-agar 20 g, aquades 1000 ml, 10 ml asam asetat 1%, 10

ml KOH 1%, 10 ml larutan NaCl 1% dan 10 ml Na2CO

30.1 %, 4 batang lakmus pH

1-14.

Setelah semua bahan tersedia, maka selanjutnya melakukan pembuatan

medium PDA. Teknik membuat medium PDA ini, yaitu kentang yang telah

dikupas,dicuci dan dipotong-potong kecil hingga berukuran 0,5 cm3. Kemudian

potongan kentang seberat 200 g ditimbang dan setelah i tu direbus dengan 1000 ml

air bersih sampai mendidih. Lalu, pisahkan ekstrak kentang (air rebusan) dengan

kain saring dan ekstrak dipanaskan kembali. Setelah itu tambahkan 20 g dektrose

dan 20 g agar-agar sambil diaduk. Jika volume kurang dari 1000 ml perlu

ditambahkan air lagi sampai volume 1000 mldan terus diaduk sampai agar-agarnya

benar-benar homogen. Setelah itu, ukurlah keasaman pH (< 7, maka tambahkan

KOH dan > 7 tambahkan asam asetat). Masukkan medium kedalam gelas

Erlenmeyer 200 ml atau tabung reaksi sebanyak 12 ml atau5 ml kemudian dengan

kapas. Setelah itu, sterilkan dengan otoklaf pada suhu 121C 15 psi selama 20-30

menit. Setelah dilakukan sterilisasi, tabung-tabung reaksi yang berisi 5 ml medium

kultur diletakkan miring terhadap bidang horizontal dan biarkan sampai padat dansimpanlah medium dalam penyimpanan khusus.

Kemudian untuk percobaan pada medium Nutrien Agar (NA), kita

menggunakan resep yang berbeda pada pembuatan medium sebelumnya, yaitu

medium Potato Dextrose Agar (PDA). Pada pembuatan medium Nutrien Agar (NA)

resepnya terdiri dari ekstrak daging 3 g, pepton 5 g, agar-agar 20 g, aquades 1000

ml.

Setelah resep yang ada telah terkumpul, maka selnjutnya adalah melakukan

proses pembuatan medium Nutrien Agar (NA), yaitu Siapkan pepton 5 g, agar-agar

20 g, dan 3 g ekstrak daging. Setelah semua bahan dimasukkan ke dalam gelas piala

dan ditambah air bersih sampai volumenya 1000 ml dan panaskan sambil

diaduk-aduk. Setelah larutan homogen, ukurlah pH-nya (jika < 7 tambahkan basa

dan jika > 7 tambahkan asam). Setelah semuanya selesai, masukkan medium

kedalam gelas Erlenmeyer 200ml atau tabung reaksi sebanyak 12 ml atau 5 ml

kemudian disumbat kapas. Setelah itu, sterilkan dengan otoklaf pada suhu 121C 15

psi selama 20-30 menit. Setelah dilakukan sterilisasi, tabung-tabung reaksi yang

berisi 5 ml medium kultur diletakkan miring terhadap bidang horizontal dan biarkan

sampai padat dan simpanlah medium dalam penyimpanan khusus.

Namun, terdapat kesamaan dalam pembuatan kedua medium ini dari cara

pembuatan, yaitu pada saat melakukan medium cairnya. Hanya saja, medium PDA

menggunakan agar-agar sedangkan medium Nutrien Agar (NA) tidak menggunakan

agar-agar.

V. Kesimpulan

Dari hasil percobaan yang telah didapatkan pada teknik pembuatan medium

kultur tenteng pembuatan medium Potato Dextrose Agar (PDA) dan medium Nutrien

Agar (NA), maka dapat disimpulkan bahwa :

Mikroorganisme dibiakkan di laboratorium dengan menggunakan bahan nutrien.

Terdapat banyaknya macam medium yang tersedia dan akan ditumbuhkan

bergantung kepada banyak factor.

Faktor-faktor tersebut salah satunya ialah macam mikroorganisme yang akan

ditumbuhkan contohnya pada pembuatan medium PDA dan NA.

Pada Nutrien Agar, kita dapat menginokulasi medium yang disebut inokulum

sehingga sel-sel akan terpisah sendiri-sendiri.


13 of 14 05-May-14 8:30 AM


14/14

y


14 of 14 05 May 14 8:30 AM

Documents

mikrobiologi