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Métodos em Fitopatologia
Esterilização
Esterilização: processo que visa eliminar todos osmicroorganismos presentes em um material / meio de cultura;
Assepsia: Conjunto de processos (técnicas) utilizados para impedira entrada de microrganismos em local que não os contenha
Descarte e lavagem
Placas contendo meio cultura:
Descarte de meios com patógeno comum (lixo);
Descarte de meios com patógeno exótico (autocIavagem / lixo);
Lavagem de placas com água e detergente;
Enxaguar muito bem e secar ao ar;
Embalar 3 a 3 em papel;
Esterilizar em estufa;
Armazenar em local livre de poeira.
Descarte e lavagem
Vidraria:
Provetas/Beckers:lavar / enxaguar / secar / esterilizar / cobertura alumínio
Vidros c/ tampas rosca:lavar / enxaguar / secar / esterilizartampar frouxamente para esterilização (autoclave)
Pipetas:imersão em solução desinfetante (água, detergente, hipoclorito sódio)
enxaguar / secar / embalar / esterilizar
ESTERILIZAÇÃO
Calor úmido
- Autoclavagem: meios de cultura a 121ºC durante 20 minutos
- Temperaturas de autoclavagem :
- vapor + 0,5 atm = 111ºC
- vapor + 1,0 atm = 121ºC
- vapor + 1,5 atm = 128ºC
- vapor + 2,0 atm = 135ºC
- Tindalização : vapor sem pressão, esterilização fracionada (15'/três dias)
- Autoclavagem : Esterilização do solo para fins experimentais (campo)
Autoclavagem = calor + pressão
Resistência coberta por água e suporte da cesta
Cesta interna da autoclaveAutoclave
Válvula de exaustão e manômetro (bolsa de ar)
Calor úmidoMecanismo de ação: coagulação de proteínas
Alta eficiência: alta capacidade de penetração
Modelos de autoclavesEsterilização pelo calor úmido
ESTERILIZAÇÃOCalor seco: Mecanismo de ação: oxidação constituintes químicos da célulaEficiência: baixa capacidade de penetração
- Estufas ou fornos: vidraria envolta em jornal (placas e pipetas),Temperatura de 180ºC por 2 horas
- Bico de Bunsen e lamparinas: instrumentos metálicos do tipo pinças,agulhas, alças, tesouras, escalpelos.. imersão em álcool e queima na chama. queima direta na chama até atingir o rubro. flambagem de tubos de ensaio e de placas antes e após a repicagem.
DESINFESTANTES:
- Álcool (70-96%) : para desinfestação de superfícies: mesas, balcões,câmaras de assépticas e material vegetal para isolamento depatógenos. Ação: desnaturação lipídios e proteínas.
- Hipoclorito de sódio (1-2%): 3 partes de água: 1 parte de hipoclorito5%: desinfestação de material vegetal para isolamento de patógenos,lavagem de ferramentas como canivetes de enxertia e tesouras depoda. Ação: Oxidação componentes celulares.
- Amônia quaternária : eficiente e não corrosiva, princípio ativo: cloreto deamônio. Concentração do produto comercial: 50% do princípio ativo.Usar solução 0,1%. Aplicar em superfície limpa e aguardar 3-10 min. Sehouver uso imediato enxaguar a superfície. Indicado p/ imersão oupulverização. Ação: inativação enzimática, desnaturação protéica edestruição das membranas celulares.
ESTERILIZAÇÃO
Filtração:
- Membranas filtrantes (Filtros Millipore - 0.20 ou 0.45 micrômetros)
- Usadas em conjunto de kitasato ou em seringas.
- Filtros de algodão hidrofóbico / lã de vidrousados em câmaras assépticas.
ESTERILIZAÇÃO Gás:
- Óxido de etileno. puro é inflamável, porém com CO2 como veículo se torna seguro. usado geralmente na forma de gás. promove esterilização de placas de vidro ou de poliestireno. câmara (saco plástico especial ou tambores) é usada para expor os
materiais à ação do gás. ação: desnaturação de proteínas e ácidos nucléicos
ESTERILIZAÇÃO
Radiação
Radiação ultravioleta : utilizada para criação e manutenção de ambienteasséptico. Esterilização do interior de câmaras assépticas
Tempo de 5-10 minutos, podendo a câmara ser usada imediatamente.
Radiação UV é fornecida por lâmpada que emite comprimentos de onda na faixa ~260nm
- Radiação baixa penetração (baixa energia)
- Mecanismo ação: danos ao DNA
Câmara Asséptica ou de Fluxo Laminar
Câmara Asséptica ou Fluxo Laminar
O COLETOR SOLAR
- Caixa de madeira, medindo 1,0 m X 1,5 m
- Contém seis tubos metálicos de 15 cm diâmetro
- Material: ferro, chapa galvanizada, alumínio, cobre , outro
- Caixa coberta por filme plástico transparente p/ permitir entrada raios solares
-Tubos são preenchidos com substrato por cima e retirado por baixo
-Volume solo desinfestado por tratamento: 120 litros/caixa
- Tempo do tratamento: 1-2 dias
Fonte: Ghini, R. – EMBRAPA - Jaguariuna
Fonte: Ghini, R. – EMBRAPA -Jaguariuna
Esterilização química por brometo de metila
Tratamento térmico por solarização