7
˚–·«‡»² Œ f ˛¸ ˛ l«»²–› •fi»› Œ LL ˝˝ ºØŒL ˝ —˛ ¸˝˝ ˛ ¸ ¸ ‚˝ ˚¸ ˛ ˛˛ ˛˛ ——˝ ˛ ˛ˇ¸ ¸˛ —¸˝ ˛ ˛ ˛ —˛ ¸˝ ˝ ˙˛ ˛»›«‡»² · ‰?²‰»fi ‰–·–fifi»‰‹¿· ‚»fi»…•‹¿fi•– ²– –·•–›– l— »› ·¿ ”–fi‡¿ ‡?› ‰–‡&² …» ‰?²‰»fi …» ‰–·–² ‚»fi»…•‹¿fi•– § «²¿ …» ·¿› ¿”»‰‰•–²»› ¿«‹–›-‡•‰¿› …–‡•²¿²‹»› ‡?› ”fi»‰«»²‹»› ·3²•‰¿‡»²‹» ›» ‰¿fi¿‰ ‹»fi•ƒ¿ –fi ›« ‹»‡fi¿²¿ ¿¿fi•‰•-² l º ¿/–› ·¿ ·–‰¿·•ƒ¿‰•-² fi–¤•‡¿· …» ·–› ‹«‡–fi»› ‰–·-²•‰–› § «² ¿·‹– fi•»›„– …» …»›¿fifi–··¿fi ‹«‡–fi»› ‰–·–fifi»‰‹¿·»› fi•‡¿fi•–› ‡&·‹•·»› § »¤‹fi¿‰–·-²•‰–› ¿ »²”»fi‡»…¿… »› ‰¿«›¿…¿ –fi …•”»fi»²‹»› ‡«‹¿‰•–²»› »² ¿·„«²– …» ·–› –fi ·– ‡»²–› ‰«¿‹fi– „»²»› fi»¿fi¿…–fi»› …» …•›‰–fi…¿²‰•¿› …»· l„»²»› ˛ ‚˝ ‚ ‚—˝ § ‚—˝ ˝» ‰¿·‰«·¿ fl«» ¿”»‰‹¿ ¿ »fi›–²¿› …» ·¿ –·¿‰•-² –‰‰•…»²‹¿· ¿ •…»²‹•”• ‰¿‰•-² …» »›‹–› „»²»› fi»›–²›¿·»› …» — ‚¿ »fi‡•‹•…– ·¿ &›fl«»…¿ …» ‡«‹¿‰•–²»› „»fi‡•²¿·»› »² •²…•“•…«–› ¿”»‰‹¿…–› ² «²¿ ”¿‡•·•¿ ‡»²…–‰•²¿ ‰–² ‰?²‰»fi …» ‰–·–² ‚»fi»…•‹¿fi•– ›» fi»¿·•ƒ- ·¿ &›fl«»…¿ …»· „»² ¿”»‰‹¿…– ¿ ‹fi¿“7› …» «² ‰»²‹fi– ‚–·¿²…7› …» …•¿„²-›‹•‰– …» — …–²…» …»‹»‰‹¿fi–² «²¿ ‡«‹¿‰•-² »² »· »¤-² …»· „»² ‚˝ ¿ ‡«‹¿‰•-² •²‹fi–…«‰» «² ‰–…-² …» ”•²¿·•ƒ¿‰•-² ‹»‡fi¿²– ·– fl«» fi–“–‰¿ ·¿ »¤fi»›•-² …» «²¿ fi–‹»3²¿ ‹fi«² ‰¿…¿ ›‹¿ ‡«‹¿‰•-² »² ¿fi‹•‰«·¿fi ²– »›‹¿¿ fi»„•›‹fi¿…¿ »² ·¿ ¿›» …» …¿‹–› …» ‡«‹¿‰•–²»› fi»·¿‰•–²¿…¿› ‰–² — «»„– …» ·¿ …»‹»‰‰•-² »² »· ¿‰•»²‹» 3²…•‰» …»›¿fifi–··¿‡–› »² ²«»›‹fi– ·¿–fi¿‹–fi•– «² fi–‰»…•‡•»²‹– fi?•…– § »”• ‰•»²‹» ¿fi¿ …»‹»‰‹¿fi ‡«‹¿‰•–²»› »² »· fi»›‹– …» ·–› ”¿‡•·•¿fi»› ¿ ‡»‹–…–·–„3¿ ‰–²›•›‹•- »² ·¿ ¿‡·•”•‰¿‰•-² …»· »¤-² …»· „»² ‚˝ ‡»…•¿²‹» «² ‰»¿…–fi ¿fi¿ »· »¤‹fi»‡– ºø fl«» ·•²…¿ ‰–² »· ›•‹•– …» ·¿ ‡«‹¿‰•-² «²‹«¿· » •²‹fi–…«‰» ¿fi‹» …» ·¿ ›»‰«»²‰•¿ …» ‰–fi‹» ¿fi¿ ·¿ »²ƒ•‡¿ ¿»·· fl«» »› ‰–‡·»‹¿…¿ ›-·– »² »· ¿·»·– ›¿²– ›‹» ¿²?·•›•› „»²7‹•‰– ²–› »fi‡•‹•- ‚¿›‹¿ ·¿ ”»‰‚¿ …•¿„²–›‹•‰¿fi Ø •²…•“•…«–› …» ·–› ‰«¿·»› fi»›«·‹¿fi–² ¿”»‰‹¿…–› § »›‹?² »²‹fi¿²…– »² «² fi–„fi¿‡¿ …» ›»„«•‡•»²‹– ‰·3²•‰– § ‰–²›«·‹–fi3¿ „»²7‹•‰¿ ›‹fi¿‰‹ »fi»…•‹¿fi§ ²–²–·§–›•› ‰–·–fi»‰‹¿· ‰¿²‰»fi l— •› ‹‚» ‡–›‹ ‰–‡‡–² ”–fi‡ –” •²‚»fi•‹»… ‰–·–² ‰¿²‰»fi ¿²… –²» –” ‹‚» ‡–›‹ ”fi»fl«»²‹ ¿«‹–›–‡¿· …–‡•²¿²‹ …•›–fi…»fi› — fi»›»²‹› ¿² »¿fi·§ –²›»‹ –” ‰–·–fi»‰‹¿· ‰¿²‰»fi l º §»¿fi› fi–¤•‡¿· ·–‰¿·•ƒ¿‹•–² –” ‹‚» ‰–·–²•‰ ‹«‡–fi› ¿²… ‚•„‚ fi•› –” …»“»·–•²„ ‡«·‹•·» fi•‡¿fi§ ‰–·–fi»‰‹¿· ‹«‡–fi› ¿› '»·· ¿› »¤‹fi¿‰–·–²•‰ ‹«‡–fi› ‚•› …•›»¿›» •› ‰¿«›»… § ‡«‹¿‹•–²› •² ¿‹ ·»¿›‹ ”–«fi ‡•›‡¿‹‰‚ fi»¿•fi „»²»› l‚˝ ‚ ‚—˝ ¿²… ‚—˝ ¿²… »›‹•‡¿‹•–²› •²…•‰¿‹» ‹‚¿‹ •‹ ¿””»‰‹› »–·» •² ‹‚» »›‹»fi² –«·¿‹•–²› ‚» •…»²‹•”•‰¿‹•–² –” ‹‚» „»²»› fi»›–²›•·» ”–fi — ‚¿› fi–‡‹»… ‹‚» ›»¿fi‰‚ ”–fi ‡«‹¿‹•–²› •² ¿””»‰‹»… •²…•“•…«¿·› ”fi–‡ ¿² ¿””»‰‹»… ‡»‡»fi –” ¿ ”¿‡•·§ '¿› ›»²‹ ‹– ¿ «‹‰‚ — •¿„²–›•› »²‹fi» ‚•› »²‹fi» fi»–fi‹»… ¿ „»fi‡•²¿· ‡«‹¿‹•–² '‚•‰‚ •²‹fi–…«‰»› ¿ fi»‡¿‹«fi» ›‹–‰–…–² ¿²… ‰¿«›»› ‹‚» fi–…«‰‹•–² –” ¿ ‹fi«²‰¿‹»… fi–‹»•² ‚•› ¿fi‹•‰«·¿fi ‡«‹¿‹•–² ‚¿› ²–‹ »»² fi»“•–«›·§ fi»„•›‹»fi»… •² ‹‚» …¿‹¿¿›» –” ‡«‹¿‹•–²› fi»·¿‹»… ‹– ‹‚•› …•›»¿›» ”‹»fi ‹‚» •…»²‹•”•‰¿‹•–² –” ‹‚» ‡«‹¿‹•–² •² ‹‚» •²…»¤ ¿‹•»²‹ '» ‚¿“» …»“»·–»… ¿ fl«•‰ ¿²… »””•‰•»²‹ fi–‰»…«fi» ”–fi …»‹»‰‹•²„ ‡«‹¿‹•–²› •² ‹‚» fi»›‹ –” ‹‚» ”¿‡•·§ ‚» ‡»‹‚–…–·–„§ •› ¿›»… –² ‹‚» ¿‡·•”•‰¿‹•–² –” ‹‚» »¤–² •² ‹‚» ‚˝ „»²» «›•²„ ¿ ”–fi'¿fi… fi•‡»fi ‹‚¿‹ ¿«‹› ‹‚» ‡«‹¿‹•–² ›•‹» ¿²… •²‹fi– …«‰»› ‹‚» ‰«‹‹•²„ ›»fl«»²‰» –” ‹‚» »²ƒ§‡» ¿»·· –²·§ •² ‹‚» '•·… ‹§» ¿··»·» ‹ fi»›»²‹ ›»“»²‹»»² ‡»‡»fi› –” ‹‚» ”¿‡•·§ ‚¿“» »»² …•¿„²–›»… ¿²… ²•²» ‚¿“» »»² ”–«²… ‹– » ¿””»‰‹»… ‚» ‡»‹‚–…–·–„§ •› ›•‡·» ›»‰•”•‰ ›»²›•‹•“» •²»¤»²›•“» ¿²… ¿·•‰¿·» •² ·–' ‰–‡·»¤•‹§ ·¿–fi¿‹–fi•»› »§ '–fi…› ‚»fi»…•‹¿fi§ ‰¿²‰»fi ‰–·–² ‰¿²‰»fi ¿«‹–›–‡¿· …–‡•²¿²‹ …•›–fi…»fi —˛ …•¿„²–›•› ˛»‰••…– ˚ ‰»‹¿…– ¨ •fi»‰‰•-² –›‹¿· fi¿ ¿fi3¿ ˛–fl«7 ¿–fi¿‹–fi•– …» •–·–„3¿ »·«·¿fi § –·»‰«·¿fi ¿‰«·‹¿… …» •»²‰•¿› 7…•‰¿› ¸²•“»fi›•…¿… ¿‰•–²¿· …» «§– —¿fifl«» »²»fi¿· ˝¿² ¿fi‹3² ºº »²…–ƒ¿ ¿¤ lºŒ Ø »‡¿•· ‡fi–fl«»”‡»…«²‰«»…«¿fi “¿fi•–› •²“»›‹•„¿…–fi»› •²…•‰¿² fl«» ¿”»‰‹¿ ¿ »fi›–²¿› »² ·¿ –·¿‰•-² –‰‰•…»²‹¿· ¿ ‡¿§–fi3¿ …» ·–› ˛ ›–² »›–fi?…•‰–› ¿”»‰‹¿²…– ¿ «² ›–·– ‡•»‡fi– …» «²¿ ”¿‡•·•¿ ˝•² »‡¿fi„– »²‹fi» »· º § »· ß …» ·–› ‰¿›–› ›–² ‚»fi»…•‹¿fi•–› § ›» ·–› …»²–‡•²¿ ‰?²‰»fi ‰–·–fifi»‰‹¿· ‚»fi»…•‹¿fi•–› l · ›» …•“•…» »² …–› ‹•–› –·•–›– l«²¿ ‡»²–fi ¿fi‹» § ²––·•–›– l·¿ ‡¿ §–fi3¿ fi»›‹¿²‹» · ··¿‡¿…– — l?²‰»fi …» –·–² »fi»…•‹¿fi•– –—–·•–›– »› –fi ·– ‹¿²‹– ·¿ ‰–²…•‰•-² „»²7‹•‰¿ ‡?› ‰–‡&² fl«» …»‹»fi‡•²¿ ·¿ ›«›‰»‹••·•…¿… ¿ ·¿ ”–fi‡¿‰•-² …» ‹«‡–fi»› ‰–·–fifi»‰‹¿·»› ˝» ‰¿fi¿‰‹»fi•ƒ¿ ² «² „fi¿² ²&‡»fi– …» ¿3›»› –‰‰•…»²‹¿·»› ·¿ •²‰• …»²‰•¿ …»· ‰?²‰»fi ‰–·–fifi»‰‹¿· l˛ »›‹? »² ›»„«²…– ·«„¿fi »²‹fi» ·¿› ‡«¶»fi»› l…»›«7› …»· ‰?²‰»fi …» ‡¿‡¿ § »² ‹»fi‰»fi ·«„¿fi »²‹fi» ·–› ‚–‡fi»› l…»›«7› …»· ‰?²‰»fi …» «·‡-² § fi-›‹¿‹¿ ¿› »›‹•‡¿‰•–²»› fi»¿·•ƒ¿…¿› –fi

Mutagenesis Dirigida Articulo

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: Mutagenesis Dirigida Articulo

ó ʱ´«³»² êð ó Òf îô îðððïèè

ßÎÌ×ÝËÔÑ ÑÎ×Ù×ÒßÔ ÓÛÜ×Ý×Òß øÞ«»²±­ ß·®»­÷ îðððå êðæ ïèèóïçì

×ÍÍÒ ððîëóéêèð

Ü×ßÙÒÑÍÌ×ÝÑ ÐÑÎ ÓËÌßÙÛÒÛÍ×Í Ü×Î×Ù×Üß ÜÛ ËÒß ÓËÌßÝ×ÑÒ ÛÒ ÛÔ ÙÛÒ ¸ÓÍØî Ê×ÒÝËÔßÜß

ß ÝßÒÝÛÎ ÝÑÔÑÎÎÛÝÌßÔ ØÛÎÛÜ×ÌßÎ×Ñ ÒÑ ÐÑÔ×ÐÑÍÑ

ÓßÎ×ß ÎÑÏËÛïô ÛÜËßÎÜÑ ÐËÍ×ÑÔîô ÙßÞÎ×ÛÔß Ù×Î×ÞÛÌîô ØÛÝÌÑÎ ÐÛÎ×ÒÛÌÌ×îô ÔË×Í Íò ÓßÇÑÎÙßï

ï î

λ­«³»² Û´ ½?²½»® ½±´±®®»½¬¿´ ¸»®»¼·¬¿®·± ²± °±´·°±­± øØÒÐÝÝ÷ »­ ´¿ º±®³¿ ³?­ ½±³&² ¼» ½?²½»® ¼» ½±´±²¸»®»¼·¬¿®·±ô § «²¿ ¼» ´¿­ ¿º»½½·±²»­ ¿«¬±­-³·½¿­ ¼±³·²¿²¬»­ ³?­ º®»½«»²¬»­ò Ý´3²·½¿³»²¬» ­» ½¿®¿½ó

¬»®·¦¿ °±® ­« ¬»³°®¿²¿ ¿°¿®·½·-² øä ëð ¿/±­÷ô ´¿ ´±½¿´·¦¿½·-² °®±¨·³¿´ ¼» ´±­ ¬«³±®»­ ½±´-²·½±­ § «² ¿´¬± ®·»­¹± ¼»¼»­¿®®±´´¿® ¬«³±®»­ ½±´±®®»½¬¿´»­ °®·³¿®·±­ ³&´¬·°´»­ § »¨¬®¿½±´-²·½±­ò Ô¿ »²º»®³»¼¿¼ »­ ½¿«­¿¼¿ °±® ¼·º»®»²¬»­³«¬¿½·±²»­ »² ¿´¹«²± ¼» ´±­ °±® ´± ³»²±­ ½«¿¬®± ¹»²»­ ®»°¿®¿¼±®»­ ¼» ¼·­½±®¼¿²½·¿­ ¼»´ ßÜÒ ø¹»²»­ ÓÓÎæ ¸ÓÍØîô¸ÓÔØïô ¸ÐÓÍï § ¸ÐÓÍî÷ò Í» ½¿´½«´¿ ¯«» ¿º»½¬¿ ¿ ïæîððóïæîòððð °»®­±²¿­ ¼» ´¿ °±¾´¿½·-² ±½½·¼»²¬¿´ò Ô¿ ·¼»²¬·º·ó½¿½·-² ¼» »­¬±­ ¹»²»­ ®»­°±²­¿¾´»­ ¼» ØÒÐÝÝ ¸¿ °»®³·¬·¼± ´¿ ¾&­¯«»¼¿ ¼» ³«¬¿½·±²»­ ¹»®³·²¿´»­ »² ·²¼·ª·¼«±­¿º»½¬¿¼±­ò Û² «²¿ º¿³·´·¿ ³»²¼±½·²¿ ½±² ½?²½»® ¼» ½±´±² ¸»®»¼·¬¿®·± ­» ®»¿´·¦- ´¿ ¾&­¯«»¼¿ ¼»´ ¹»² ¿º»½¬¿¼± ¿¬®¿ª7­ ¼» «² ½»²¬®± ¸±´¿²¼7­ ¼» ¼·¿¹²-­¬·½± ¼» ØÒÐÝÝ ¼±²¼» ¼»¬»½¬¿®±² «²¿ ³«¬¿½·-² »² »´ »¨-² ïí ¼»´ ¹»²¸ÓÍØîò Ô¿ ³«¬¿½·-² ·²¬®±¼«½» «² ½±¼-² ¼» º·²¿´·¦¿½·-² ¬»³°®¿²± ´± ¯«» °®±ª±½¿ ´¿ »¨°®»­·-² ¼» «²¿ °®±¬»3²¿ ¬®«²ó½¿¼¿ò Û­¬¿ ³«¬¿½·-² »² °¿®¬·½«´¿® ²± »­¬¿¾¿ ®»¹·­¬®¿¼¿ »² ´¿ ¾¿­» ¼» ¼¿¬±­ ¼» ³«¬¿½·±²»­ ®»´¿½·±²¿¼¿­ ½±² ØÒÐÝÝòÔ«»¹± ¼» ´¿ ¼»¬»½½·-² »² »´ °¿½·»²¬» 3²¼·½»ô ¼»­¿®®±´´¿³±­ »² ²«»­¬®± ´¿¾±®¿¬±®·± «² °®±½»¼·³·»²¬± ®?°·¼± § »º·ó½·»²¬» °¿®¿ ¼»¬»½¬¿® ³«¬¿½·±²»­ »² »´ ®»­¬± ¼» ´±­ º¿³·´·¿®»­ò Ô¿ ³»¬±¼±´±¹3¿ ½±²­·­¬·- »² ´¿ ¿³°´·º·½¿½·-² ¼»´ »¨-²ïí ¼»´ ¹»² ¸ÓÍØî ³»¼·¿²¬» «² ½»¾¿¼±® °¿®¿ »´ »¨¬®»³± ëù ¯«» ´·²¼¿ ½±² »´ ­·¬·± ¼» ´¿ ³«¬¿½·-² °«²¬«¿´ » ·²¬®±¼«½»°¿®¬» ¼» ´¿ ­»½«»²½·¿ ¼» ½±®¬» °¿®¿ ´¿ »²¦·³¿ Ø¿»×´´ ¯«» »­ ½±³°´»¬¿¼¿ ­-´± »² »´ ¿´»´± ­¿²±ò Û­¬» ¿²?´·­·­ ¹»²7¬·½±²±­ °»®³·¬·- ¸¿­¬¿ ´¿ º»½¸¿ ¼·¿¹²±­¬·½¿® ïé ·²¼·ª·¼«±­ ¼» ´±­ ½«¿´»­ ç ®»­«´¬¿®±² ¿º»½¬¿¼±­ § »­¬?² »²¬®¿²¼± »² «²°®±¹®¿³¿ ¼» ­»¹«·³·»²¬± ½´3²·½± § ½±²­«´¬±®3¿ ¹»²7¬·½¿ò

ß¾­¬®¿½¬Ø»®»¼·¬¿®§ ²±²°±´§°±­·­ ½±´±®»½¬¿´ ½¿²½»® øÒØÐÝÝ÷ ·­ ¬¸» ³±­¬

½±³³±² º±®³ ±º ·²¸»®·¬»¼ ½±´±² ½¿²½»® ¿²¼ ±²» ±º ¬¸» ³±­¬ º®»¯«»²¬ ¿«¬±­±³¿´ ¼±³·²¿²¬ ¼·­±®¼»®­ò ØÒÐÝÝ °®»­»²¬­¿² »¿®´§ ±²­»¬ ±º ½±´±®»½¬¿´ ½¿²½»® øä ë𠧻¿®­÷ô °®±¨·³¿´ ´±½¿´·¦¿¬·±² ±º ¬¸» ½±´±²·½ ¬«³±®­ô ¿²¼ ¸·¹¸ ®·­µ ±º ¼»ª»´±°·²¹³«´¬·°´» °®·³¿®§ ½±´±®»½¬¿´ ¬«³±®­ ¿­ ©»´´ ¿­ »¨¬®¿½±´±²·½ ¬«³±®­ò ̸·­ ¼·­»¿­» ·­ ½¿«­»¼ ¾§ ³«¬¿¬·±²­ ·² ¿¬ ´»¿­¬º±«® ÜÒß ³·­³¿¬½¸ ®»°¿·® ¹»²»­ô ø¸ÓÍØîô ¸ÓÔØïô ¸ÐÓÍï ¿²¼ ¸ÐÓÍî÷ ¿²¼ »­¬·³¿¬·±²­ ·²¼·½¿¬» ¬¸¿¬ ·¬ ¿ºº»½¬­ïæîððóïæîòððð °»±°´» ·² ¬¸» É»­¬»®² °±°«´¿¬·±²­ò ̸» ·¼»²¬·º·½¿¬·±² ±º ¬¸» ¹»²»­ ®»­°±²­·¾´» º±® ØÒÐÝÝ ¸¿­ °®±³°¬»¼¬¸» ­»¿®½¸ º±® ³«¬¿¬·±²­ ·² ¿ºº»½¬»¼ ·²¼·ª·¼«¿´­ò ÜÒß º®±³ ¿² ¿ºº»½¬»¼ ³»³¾»® ±º ¿ º¿³·´§ ©¿­ ­»²¬ ¬± ¿ Ü«¬½¸ØÒÐÝÝ Ü·¿¹²±­·­ Ý»²¬®»ò ̸·­ Ý»²¬®» ®»°±®¬»¼ ¿ ¹»®³·²¿´ ³«¬¿¬·±²ô ©¸·½¸ ·²¬®±¼«½»­ ¿ °®»³¿¬«®» ­¬±°½±¼±² ¿²¼½¿«­»­ ¬¸» °®±¼«½¬·±² ±º ¿ ¬®«²½¿¬»¼ °®±¬»·²ò ̸·­ °¿®¬·½«´¿® ³«¬¿¬·±² ¸¿­ ²±¬ ¾»»² °®»ª·±«­´§ ®»¹·­¬»®»¼ ·² ¬¸»¼¿¬¿¾¿­» ±º ³«¬¿¬·±²­ ®»´¿¬»¼ ¬± ¬¸·­ ¼·­»¿­»ò ߺ¬»® ¬¸» ·¼»²¬·º·½¿¬·±² ±º ¬¸» ³«¬¿¬·±² ·² ¬¸» ·²¼»¨ °¿¬·»²¬ô ©» ¸¿ª»¼»ª»´±°»¼ ¿ ¯«·½µ ¿²¼ »ºº·½·»²¬ °®±½»¼«®» º±® ¼»¬»½¬·²¹ ³«¬¿¬·±²­ ·² ¬¸» ®»­¬ ±º ¬¸» º¿³·´§ò ̸» ³»¬¸±¼±´±¹§ ·­ ¾¿­»¼±² ¬¸» ¿³°´·º·½¿¬·±² ±º ¬¸» »¨±² ïí ·² ¬¸» ¸ÓÍØî ¹»²» «­·²¹ ¿ º±®©¿®¼ °®·³»® ¬¸¿¬ ¿¾«¬­ ¬¸» ³«¬¿¬·±² ­·¬» ¿²¼ ·²¬®±ó¼«½»­ ¬¸» ½«¬¬·²¹ ­»¯«»²½» ±º ¬¸» »²¦§³» Ø¿»×´´ ±²´§ ·² ¬¸» ©·´¼ ¬§°» ¿´´»´»ò ߬ °®»­»²¬ô ­»ª»²¬»»² ³»³¾»®­ ±º ¬¸»º¿³·´§ ¸¿ª» ¾»»² ¼·¿¹²±­»¼ ¿²¼ ²·²» ¸¿ª» ¾»»² º±«²¼ ¬± ¾» ¿ºº»½¬»¼ò ̸» ³»¬¸±¼±´±¹§ ·­ ­·³°´»ô ­°»½·º·½ô ­»²­·¬·ª»ô·²»¨°»²­·ª» ¿²¼ ¿°°´·½¿¾´» ·² ´±© ½±³°´»¨·¬§ ´¿¾±®¿¬±®·»­ò

Õ»§ ©±®¼­æ ¸»®»¼·¬¿®§ ½¿²½»®ô ½±´±² ½¿²½»®ô ¿«¬±­±³¿´ ¼±³·²¿²¬ ¼·­±®¼»®ô ÐÝÎ ¼·¿¹²±­·­

λ½·¾·¼±æ îîóÊ××óïççç ß½»°¬¿¼±æ îðóÈóïççç

Ü·®»½½·-² °±­¬¿´æ Ü®¿ò Ó¿®3¿ α¯«7ô Ô¿¾±®¿¬±®·± ¼» Þ·±´±¹3¿ Ý»´«´¿®§ Ó±´»½«´¿®ô Ú¿½«´¬¿¼ ¼» Ý·»²½·¿­ Ó7¼·½¿­ô ˲·ª»®­·¼¿¼ Ò¿½·±²¿´ ¼»Ý«§±ô п®¯«» Ù»²»®¿´ Í¿² Ó¿®¬3²ô ëëðð Ó»²¼±¦¿Ú¿¨æ øëìóðîêï÷ ììçìïïé »ó³¿·´æ ³®±¯«»àº³»¼îò«²½«ò»¼«ò¿®

ª¿®·±­ ·²ª»­¬·¹¿¼±®»­ ·²¼·½¿² ̄ «» ¿º»½¬¿ ¿ ïæîððóïæîòððð

°»®­±²¿­ »² ´¿ °±¾´¿½·-² ±½½·¼»²¬¿´ïò Ô¿ ³¿§±®3¿ ¼» ´±­

ÝÎÝ ­±² »­°±®?¼·½±­ ¿º»½¬¿²¼± ¿ «² ­±´± ³·»³¾®± ¼»

«²¿ º¿³·´·¿ò Í·² »³¾¿®¹±ô »²¬®» »´ ë § »´ ïðû ¼» ´±­

½¿­±­ ­±² ¸»®»¼·¬¿®·±­ § ­» ´±­ ¼»²±³·²¿ ½?²½»®

½±´±®®»½¬¿´ ¸»®»¼·¬¿®·±­ øØÝÝ÷ò Û´ ØÝÝ ­» ¼·ª·¼» »² ¼±­

¬·°±­æ °±´·°±­± ø«²¿ ³»²±® °¿®¬»÷ § ²±ó°±´·°±­± ø´¿ ³¿ó

§±®3¿ ®»­¬¿²¬»÷ò Û´ ´´¿³¿¼± ØÒÐÝÝ øÝ?²½»® ¼» ݱ´±²

Ø»®»¼·¬¿®·± Ò±óб´·°±­±÷ »­ °±® ´± ¬¿²¬± ´¿ ½±²¼·½·-²

¹»²7¬·½¿ ³?­ ½±³&² ¯«» ¼»¬»®³·²¿ ´¿ ­«­½»°¬·¾·´·¼¿¼ ¿

´¿ º±®³¿½·-² ¼» ¬«³±®»­ ½±´±®®»½¬¿´»­ò Í» ½¿®¿½¬»®·¦¿

Û² «² ¹®¿² ²&³»®± ¼» °¿3­»­ ±½½·¼»²¬¿´»­ô ´¿ ·²½·ó

¼»²½·¿ ¼»´ ½?²½»® ½±´±®®»½¬¿´ øÝÎÝ÷ »­¬? »² ­»¹«²¼±

´«¹¿® »²¬®» ́ ¿­ ³«¶»®»­ ø¼»­°«7­ ¼»´ ½?²½»® ¼» ³¿³¿÷ §

»² ¬»®½»® ´«¹¿® »²¬®» ´±­ ¸±³¾®»­ ø¼»­°«7­ ¼»´ ½?²½»®

¼» °«´³-² § °®-­¬¿¬¿÷ò Ô¿­ »­¬·³¿½·±²»­ ®»¿´·¦¿¼¿­ °±®

Page 2: Mutagenesis Dirigida Articulo

ïèç

¹»²7¬·½¿³»²¬» °±® «² °¿¬®-² ¼» ¸»®»²½·¿ ¿«¬±­-³·½±

¼±³·²¿²¬» § «²¿ ¿´¬¿ °»²»¬®¿²½·¿îò Ý´3²·½¿³»²¬» ­«­

®¿­¹±­ °®»°±²¼»®¿²¬»­ ­±² ´¿ ¬»³°®¿²¿ ¿°¿®·½·-² ¼»´

½?²½»® ½±´±®®»½¬¿´ øä ëð ¿/±­÷ô ´¿ ´±½¿´·¦¿½·-² °®±¨·³¿´

¼» ´±­ ¬«³±®»­ ½±´-²·½±­ô § «² ¿´¬± ®·»­¹± ¼» ¼»­¿®®±´´¿®

¬«³±®»­ ½±´±®®»½¬¿´»­ °®·³¿®·±­ ³&´¬·°´»­ ½±³± ¬¿³¾·7²

¬«³±®»­ »¨¬®¿½±´-²·½±­ïò

Ø¿½» °±½±­ ¿/±­ ­» ¸¿ ¼»³±­¬®¿¼± ¯«» ØÒÐÝÝ ­»

¼»¾» ¿ ³«¬¿½·±²»­ ¹»®³·²¿´»­ »² «²± ¼» ´±­ °±® ´± ³»ó

²±­ ½«¿¬®± ¹»²»­ ®»°¿®¿¼±®»­ ¼» ¼·­½±®¼¿²½·¿­ ¼»´ ßÜÒ

ø¹»²»­ ÓÓÎæ ¸ÓÍØîô ¸ÓÔØïô ¸ÐÓÍï § ¸ÐÓÍî÷îò Ô¿

·²¿½¬·ª¿½·-² ¼» »­¬±­ ¹»²»­ ´´»ª¿ ¿ «²¿ ·²»­¬¿¾·´·¼¿¼

¹»²-³·½¿ ½¿®¿½¬»®·¦¿¼¿ °±® ´¿ ½±²¬®¿½½·-² ± »¨°¿²­·-²

¼» ´±­ ³·½®±­¿¬7´·¬»­ô § »­ »­¬¿ º±®³¿ ¼» ·²»­¬¿¾·´·¼¿¼ ´¿

¯«» ®»­«´¬¿ »² «²¿ ®?°·¼¿ ¿½«³«´¿½·-² ¼» ³«¬¿½·±²»­

­±³?¬·½¿­ »² ¼·º»®»²¬»­ ±²½±¹»²»­ § ¹»²»­ ­«°®»­±®»­

¼» ¬«³±®»­ô ¯«» ¶«»¹¿² «² °¿°»´ ½®«½·¿´ »² ´¿ ·²·½·¿½·-² §

°®±¹®»­·-² ¼» ´±­ ¬«³±®»­íò Ô¿ ³¿§±®3¿ ¼» ´¿­ ³«¬¿½·±ó

²»­ ­» ¸¿² ¼»¬»½¬¿¼± »² ̧ ÓÍØî § ¸ÓÔØïò Û´ ¹»² ̧ ÓÍØî

­» »²½«»²¬®¿ »² »´ ½®±³±­±³¿ î°ïê § ¬·»²» «²¿ »¨¬»²ó

­·-² ¼» ¿°®±¨·³¿¼¿³»²¬» éí µ¾å ­» ¸¿² ¼»¬»®³·²¿¼± ¬±ó

¼¿­ ´¿­ ­»½«»²½·¿­ ¼» ´¿­ «²·±²»­ ·²¬®-²ó»¨-² § ­» ¸¿²

»²½±²¬®¿¼± ïê »¨±²»­å ­« »­°»½¬®± ¼» ³«¬¿½·±²»­ »­ ³«§

¸»¬»®±¹7²»±ô ²± »²½±²¬®?²¼±­» ¿&² «²¿ ®»´¿½·-² »²¬®» »´

­·¬·± ¼» ´¿ ³«¬¿½·-² § »´ ¬·°± ¼» ¬«³±®ò Í» ¸¿ ½®»¿¼± ¸¿½»

«²±­ ¿/±­ «²¿ ¾¿­» ¼» ¼¿¬±­ ¼±²¼» »­¬?² ®»¹·­¬®¿¼¿­

¹»² °±® ¹»²ô »¨-² °±® »¨-²ô ¬±¼¿­ ´¿­ ³«¬¿½·±²»­ ¼»¬»½ó

¬¿¼¿­ ¸¿­¬¿ »´ ³±³»²¬±ô ®»´¿½·±²¿¼¿­ ½±² ØÒÐÝÝò

п®¿ ´¿ ±®·»²¬¿½·-² ¼»´ ¼·¿¹²-­¬·½± ½´3²·½± ­» °«»¼»

«¬·´·¦¿® »´ Ý®·¬»®·± ¼» ß³­¬»®¼¿³ô »­¬¿¾´»½·¼± °±® »´

ײ¬»®²¿¬·±²¿´ ݱ´´¿¾±®¿¬·ª» Ù®±«° ±² ØÒÐÝÝô § ¯«» ­¿ó

¬·­º¿½»² ´¿ ³¿§±®3¿ ¼» ´±­ ´·²¿¶»­ ØÒÐÝÝå »­¬± »­æ ·÷ °±®

´± ³»²±­ í °¿®·»²¬»­ ¿º»½¬¿¼±­ »² ­«½»­·ª¿­ ¹»²»®¿½·±ó

²»­ô ­·»²¼± «²± ¼» »´´±­ °¿®·»²¬» »² °®·³»® ¹®¿¼± ¼» ´±­

±¬®±­ ¼±­å ··÷ °±® ´± ³»²±­ «²± ¼» »­¬±­ °¿®·»²¬»­ ½±²

¼·¿¹²-­¬·½± ¼» ½?²½»® ¼» ½±´±² °®»ª·± ¿ ´±­ ëð ¿/±­ ¼»

»¼¿¼å ···÷ ÝÎÝ °±´·°±­± ¿«­»²¬» »² ¬±¼±­ ´±­ ³·»³¾®±­

»² ®·»­¹± ¼» ´¿ º¿³·´·¿îò Í·² »³¾¿®¹±ô ½¿¼¿ ª»¦ ³?­ ­»

½±²º·®³¿ ́ ¿ ²»½»­·¼¿¼ ¼» ½±²­·¼»®¿® ½®·¬»®·±­ ½´3²·½±­ ³?­

¿³°´·±­ °¿®¿ ¼»¬»½¬¿® ½¿­±­ ¼» ØÒÐÝÝò

Û² »­¬» »­¬«¼·± ³±­¬®¿³±­ ́ ±­ ¿²?´·­·­ ¹»²7¬·½±­ »º»½ó

¬«¿¼±­ ¿ «²¿ º¿³·´·¿ ³»²¼±½·²¿ ½±² ¿²¬»½»¼»²¬»­ ­±­ó

°»½¸±­±­ ¼» ½?²½»® ½±´±®®»½¬¿´ ¸»®»¼·¬¿®·±ò ß °»­¿® ¼»

¬»²»® ·²·½·¿´³»²¬» ­-´± ·²º±®³¿½·-² ½´3²·½¿ ¼» «²¿ ¹»²»ó

®¿½·-²ô ´¿ ­±­°»½¸¿ ­» ¾¿­- »² ´¿ ½¿²¬·¼¿¼ ¼» ¿º»½¬¿¼±­

»¨·­¬»²¬»­ § ´¿ »¼¿¼ ¼» ³¿²·º»­¬¿½·-² ³»²±® ¼» ëð ¿/±­ò

Í» ½±²º·®³- ´¿ °®»­»²½·¿ ¼» «²¿ ³«¬¿½·-² »² »´ »¨-² ïí

¼»´ ¹»² ¸ÓÍØî ¯«» ²± ¸¿¾3¿ ­·¼± ¼»­½®·°¬¿ ²· ®»¹·­¬®¿ó

¼¿ ¿²¬»®·±®³»²¬» »² ØÒÐÝÝò Û´ ½±²±½·³·»²¬± ¼» ´¿ º¿ó

³·´·¿ ½±³°´»¬¿ô °»®³·¬·- ª»®·º·½¿® ¯«» ­¿¬·­º¿½3¿² »´ ½®·¬»ó

®·± ¼» ß³­¬»®¼¿³ò ß ½±²¬·²«¿½·-² ­» ¼»­¿®®±´´- «²¿ ¬7½ó

²·½¿ ®?°·¼¿ § ­»²½·´´¿ °¿®¿ ́ ¿ ¼»¬»½½·-² ¼» »­¬¿ ³«¬¿½·-²

»² »´ ®»­¬± ¼» ´±­ º¿³·´·¿®»­ «¬·´·¦¿²¼± ³«¬¿¹7²»­·­ ¼·®·ó

¹·¼¿ °±® ÐÝÎò Û­¬» ³7¬±¼± ¸¿ ­»®ª·¼± ¸¿­¬¿ ´¿ º»½¸¿

°¿®¿ ¼·¿¹²±­¬·½¿® ïé ·²¼·ª·¼«±­ ¼» ´¿ º¿³·´·¿ »² »­¬«¼·±ò

Ó¿¬»®·¿´»­ § ³7¬±¼±­

Í» ±¾¬«ª± ßÜÒ ¹»²-³·½± ¼»´ °¿½·»²¬» 3²¼·½» ¿ °¿®¬·® ¼» ­¿²ó¹®» »²¬»®¿ »¨¬®¿3¼¿ ½±² ÛÜÌß °±® »´ ³7¬±¼± ¼» »¨¬®¿½½·-²­¿´·²¿ìô § ­» »²ª·- ´¿ ³«»­¬®¿ ¿´ Ü»°¿®¬³»²¬ ±º Ø«³¿² Ù»²»¬·½­¼»´ Ó»¼·½¿´ Ù»²»¬·½­ Ý»²¬®» ¼» Ô»·¼»² »² ر´¿²¼¿ô °¿®¿ ­«¿²?´·­·­ °±® Ü»²¿¬«®·²¹ Ù®¿¼·»²¬ Ù»´ Û´»½¬®±°¸±®»­·­ øÜÙÙÛ÷ò

Ü» «² ¬±¬¿´ ¼» íé ·²¬»¹®¿²¬»­ ¼» ´¿ º¿³·´·¿ ³»²½·±²¿¼¿ øÚ·¹ò í÷­-´± ïé ·²¼·ª·¼«±­ ¿½»°¬¿®±² ½±´¿¾±®¿® ½±² »´ »­¬«¼·±ò Í» ´»­®»¿´·¦- «² ·²¬»®®±¹¿¬±®·± ½«·¼¿¼±­± ¿ ´¿ ³¿§±® ½¿²¬·¼¿¼ °±­·¾´»¼» ³·»³¾®±­ô ¬»²·»²¼± »² ½«»²¬¿ ´¿ °±­·¾·´·¼¿¼ ¼» ½±²º«­·-² «±½«´¬¿³·»²¬± ¼» ´¿¦±­ ¼» ½±²­¿²¹«·²·¼¿¼ò Ü» ´¿­ °»®­±²¿­ §¿¿º»½¬¿¼¿­ ­» ®»½±´»½¬- ·²º±®³¿½·-² ®»­°»½¬± ¿´ ¬·°± § ´±½¿´·¦¿ó½·-² ¼»´ ½?²½»®ô ´±­ ¼·¿¹²-­¬·½±­ ¸·­¬±°¿¬±´-¹·½±­ ¼» ´±­ ¬«³±ó®»­ ·²¼·ª·¼«¿´»­ô § ´¿ »¼¿¼ ¼» ³¿²·º»­¬¿½·-²ò ß ­« ª»¦ ­» ¼±ó½«³»²¬¿®±² ´±­ ¼¿¬±­ °»®­±²¿´»­ ¼» ½¿¼¿ «²± ¼» ´±­ °¿®·»²ó¬»­ ¿ ®·»­¹± ·²½´«·¼±­ »² »´ »­¬«¼·±ò

Ô«»¹± ¼» ±¾¬»²»® »´ ½±²­»²¬·³·»²¬± ¼» ´±­ °¿½·»²¬»­ô ­» ±¾¬«óª± ßÜÒ ¹»²-³·½± ¼» ´±­ ³·­³±­ °±® »´ ³7¬±¼± §¿ ³»²½·±²¿ó¼±ò Ý¿¼¿ »²­¿§± ­» ¸·¦± °±® ¼«°´·½¿¼± ¿ °¿®¬·® ¼» ¼±­ ³«»­ó¬®¿­ ¼» ­¿²¹®» ·²¼»°»²¼·»²¬»­ò

Û´ ßÜÒ ®»­«­°»²¼·¼± »² ¿¹«¿ º«» ¿³°´·º·½¿¼± ³»¼·¿²¬» ´±­ ­·ó¹«·»²¬»­ ½»¾¿¼±®»­æ °¿®¿ »´ »¨¬®»³± ëùô ù¬¬¹¬¹¹¿½¬¹½¿¬½¬¬¿¹¹½ §°¿®¿ »´ »¨¬®»³± íùô ¬¬¬½¬¿¬½¬¬½¿¿¹¹¹½½¬¿¹¹¿¹ô ± ¿¹¬¬¬½½¿¿½¿¬¬¬ó½¿¹½¬¿ò п®¿ ¿³¾±­ °¿®»­ ¼» ½»¾¿¼±®»­ »´ °®±¹®¿³¿ ¼» ¿³ó°´·º·½¿½·-² ­» ½±³»²¦- ½±² «²¿ ·²½«¾¿½·-² ¼» í ³·²«¬±­ ¿ çîpÝô­» °®±­·¹«·- °®·³»®± ½±² í ½·½´±­ ¼» çîpÝóíð ­»¹«²¼±­ô ëëpÝóïîð ­»¹«²¼±­ § éìpÝóíð ­»¹«²¼±­ô °¿®¿ ·²¬®±¼«½·® ´¿ ³«¬¿½·-²òß ½±²¬·²«¿½·-² îî ½·½´±­ ¼» çîpÝóíð ­»¹«²¼±­ô êìpÝóíð ­»¹«²ó¼±­ § éìpÝóíð ­»¹«²¼±­ô °¿®¿ ¿³°´·º·½¿® »´ °®±¼«½¬± ¿²¬»®·±®òÍ» ½»®®- ´¿ ¿³°´·º·½¿½·-² ½±² «²¿ ·²½«¾¿½·-² ¼» í ³·²«¬±­ ¿éìpÝò

п®¿ ´¿ ¼·¹»­¬·-² »²¦·³?¬·½¿ô «²¿ ¿´3½«±¬¿ ¼» ïð k´ ¼»´ °®±ó¼«½¬± ¼» ¿³°´·º·½¿½·-² ­» ·²½«¾- ½±² íòë k´ ¼» ¿¹«¿ ³·´·Ïô ï k´¼» ¾«ºº»® ïðÈ ½±®®»­°±²¼·»²¬» ¿ ´¿ »²¦·³¿ § ðòë k´ ¼» »²¦·³¿¼» ®»­¬®·½½·-² Ø¿»´´´ øïð Ëñk´ô Ù×ÞÝÑ ÍÎÔ÷ ¾¿¶± «²¿ ¹±¬¿ ¼» ¿½»·ó¬» ³·²»®¿´ ¿ íépÝ °±® î ¸­ò ݱ³± ½±²¬®±´ ­» ®»¿´·¦- ´¿ ³·­³¿·²½«¾¿½·-² ®»»³°´¿¦¿²¼± ´¿ »²¦·³¿ °±® ðòë k´ ¼» ¿¹«¿ ³· ·́Ïò Ô¿­³«»­¬®¿­ ­» ½±®®·»®±² »² «² ¹»´ ¼» °±´·¿½®·´¿³·¼¿ ²±¼»­²¿¬«®¿´·¦¿²¬» ¿´ ïðû ½±² «²¿ ¼·º»®»²½·¿ ¼» °±¬»²½·¿´ ¼» ïîðÊ ¼«®¿²¬» êð ³·²«¬±­ò Ô±­ ¹»´»­ º«»®±² ¬»/·¼±­ ½±² ¾®±³«®± ¼»»¬·¼·± °±® ïð ³·²«¬±­ § ±¾­»®ª¿¼±­ ¾¿¶± ´«¦ «´¬®¿ª·±´»¬¿ò

λ­«´¬¿¼±­

Û´ Ü»°¿®¬³»²¬ ±º Ø«³¿² Ù»²»¬·½­ ¼»´ Ó»¼·½¿´ Ù»²»¬·½­

Ý»²¬®» ¼» ´¿ ˲·ª»®­·¼¿¼ ¼» Ô»·¼»² »² ر´¿²¼¿ ·²º±®³-

«²¿ ³«¬¿½·-² »² »´ »¨-² ïí ¼»´ ¹»² ̧ ÓÍØîô ¼±²¼» »² »´

½±¼-² éïï «²¿ ß®¹·²·²¿ øÝÙß÷ ¸¿¾3¿ ½¿³¾·¿¼± ¿ «²

½±¼-² ¼» ¬»®³·²¿½·-² øÌÙß÷ò Û­¬¿ ³«¬¿½·-² °®±¼«½» «²

°®±¼«½¬± °®±¬»·½± ¬®«²½¿¼± § °±® ´± ¬¿²¬± ·²¿½¬·ª±ò Ô¿

³«¬¿½·-² º«» ®»¹·­¬®¿¼¿ °±® ²«»­¬®± ¹®«°± »² ´¿ ¾¿­» ¼»

¼¿¬±­ ¼» ³«¬¿½·±²»­ °¿¬±¹7²·½¿­ ®»´¿½·±²¿¼¿­ ½±²

ØÒÐÝÝ ø©©©ò²º¼¸¬ò²´ñ¼¿¬¿¾¿­»ñ³¼¾½¸±·½»ò¸¬³÷ò

Page 3: Mutagenesis Dirigida Articulo

ó ʱ´«³»² êð ó Òf îô îðððïçð

Ü»­°«7­ ¼» ½±²±½»® »´ ­·¬·± ¼» ´¿ ³«¬¿½·-² »² »´ ½¿­±

3²¼·½» § ½±² »´ ±¾¶»¬± ¼» »¨¬»²¼»® »´ »­¬«¼·± ¸¿½·¿ »´

®»­¬± ¼» ´±­ º¿³·´·¿®»­ »² ®·»­¹±ô ­» ¼·­»/- «²¿ »­¬®¿¬»ó

¹·¿ ¼» ³«¬¿¹7²»­·­ ¼·®·¹·¼¿ ¯«» ½±²­·­¬·- »² ·²¬®±¼«½·®

¼«®¿²¬» ´¿ ÐÝÎ «²¿ ³«¬¿½·-² »² »´ °®±¼«½¬± ¼» ¿³°´·º·ó

½¿½·-² ¼»´ »¨-² ïí ³»¼·¿²¬» »´ ½»¾¿¼±® ¼»´ »¨¬®»³± ëùò

Û­¬» ½¿³¾·± ¼» ¾¿­» ·²¬®±¼«½·¼±ô ¶«²¬± ½±² ´±­

²«½´»-¬·¼±­ ¯«» ´·²¼¿² ½±² »´ »¨¬®»³± íù ¼»´ ½»¾¿¼±®ô

¹»²»®¿ «² ­·¬·± ¼» ®»­¬®·½½·-² °¿®¿ ́ ¿ »²¦·³¿ Ø¿» ×´´ »² »´

¿´»´± ­¿²± øëùÙÙÝÝíù÷ò Û² »´ ¿´»´± ³«¬¿¼± ́ ±­ ²«½´»-¬·¼±­

¯«» ´·²¼¿² ½±² »´ »¨¬®»³± íù ¼»´ ½»¾¿¼±® ­±² ¼·º»®»²¬»­ô

§ °±® ́ ± ¬¿²¬± ²± ­» º±®³¿ »´ ­·¬·± ¼» ®»­¬®·½½·-² øëùÙÙÝÌíù÷

øÚ·¹ò ï÷ò

п®¿ »´ ¼·­»/± ¼»´ ½»¾¿¼±® íùô »² «²¿ °®·³»®¿ ·²­¬¿²ó

½·¿ô ­» ´± «¾·½- »² »´ ·²¬®-² ´·²¼¿²¬» § ­» ¾«­½- ½®»¿®

³»¼·¿²¬» »´ ³·­³± «² ­·¬·± ¼» ½±®¬» »² ¿³¾±­ ¿´»´±­

°¿®¿ ¯«» ­·®ª·»®¿ ½±³± ½±²¬®±´ ·²¬»®²± ¼» ´¿ ¿½¬·ª·¼¿¼ ¼»

´¿ »²¦·³¿ ¼» ®»­¬®·½½·-²ò Í» ¬®¿¬¿®±² ¼» ¼»¬»®³·²¿® ´¿­

½±²¼·½·±²»­ -°¬·³¿­ ¼»´ »²­¿§± «¬·´·¦¿²¼± ½«®ª¿­ ¼»

³¿¹²»­·± °¿®¿ ´¿ ®»¿½½·-² ¼» ÐÝÎô ½«®ª¿­ ¼» ¬»³°»®¿ó

¬«®¿­ ¼» ¿²²»¿´·²¹ô ¬·»³°± ¼» ¿²²»¿´·²¹ô ¿¹®»¹¿¼± ¼» ´¿

Ì¿¯ °±´·³»®¿­¿ ´«»¹± ¼» ´¿ ¬»³°»®¿¬«®¿ ¼» ¼»­²¿¬«ó

®¿´·¦¿½·-²ô ¼·­³·²«½·-² ¼» ´¿ ½¿²¬·¼¿¼ ¼» ½»¾¿¼±®»­ §

²«½´»-¬·¼±­ ´·¾®»­ô »¬½ò ß ­« ª»¦ô ®»¼·­»/¿³±­ »´ °®±¹®¿ó

³¿ ¼» ¿³°´·º·½¿½·-²ô ¼·ª·¼·7²¼±´± »² ¼±­ °¿®¬»­æ ´±­ °®·ó

³»®±­ í ½·½´±­ ½±² «²¿ ¬»³°»®¿¬«®¿ ¼» ¿²²»¿´·²¹ ³?­

¾¿¶¿ øëëpÝ÷ °¿®¿ ·²¬®±¼«½·® ´¿ ³«¬¿½·-²ô § ´±­ ­·¹«·»²¬»­

îî ½·½´±­ô ½±² «²¿ ¬»³°»®¿¬«®¿ ¼» ¿²²»¿´·²¹ ³?­ ¿´¬¿

øêìpÝ÷ °¿®¿ ®»¼«½·® ´¿­ °±­·¾´»­ ¿³°´·º·½¿½·±²»­

·²»­°»½3º·½¿­ò ß °»­¿® ¼» ´±­ »­º«»®¦±­ ®»¿´·¦¿¼±­ ²± ­»

´±¹®- »´·³·²¿® ¼±­ ¾¿²¼¿­ ½±²¬¿³·²¿²¬»­ ¯«» »²¬±®°»ó

½3¿² »´ ¿²?´·­·­ ¼¿¼± ¯«» ¬»²3¿² ¬¿³¾·7² ­·¬·±­ ¼» ½±®¬»

°¿®¿ Ø¿»´´´ øÚ·¹ò î¿÷ò Ü» ¬±¼±­ ³±¼±­ ­» °«¼± ·¼»²¬·º·½¿®

´¿ ¾¿²¼¿ ¼» ïïé °¾ ¯«» »­¬? °®»­»²¬» »² »´ ·²¼·ª·¼«±

3²¼·½» § ²± »² ´±­ ²±®³¿´»­ øÚ·¹ò î ¿ § ½÷ò Û² ´¿ Ú·¹ò î ½

­» °«»¼» ±¾­»®ª¿® ¯«» »´ °®±¼«½¬± ¼» ¿³°´·º·½¿½·-² ¼»

Ú·¹ò ïò� ¿ò Û­¯«»³¿ ¼» ´¿ ³»¬±¼±´±¹3¿ «¬·´·¦¿¼¿ ·²·½·¿´³»²¬» °¿®¿ ´¿ ¼»¬»½½·-² ¼» ´¿ ³«¬¿½·-²éïï »² »´ ¹»² ¸ÓÍØîò Û´ ³7¬±¼± ·²¬®±¼«½» «² ­·¬·± ¼» ½±®¬» ³»¼·¿²¬» »´ ½»¾¿¼±® ¼»´ »¨¬®»ó³± ëù °¿®¿ ´¿ »²¦·³¿ Ø¿»´´´ »² »´ ¿´»´± ­¿²±ô § ±¬®± ­·¬·± ¼» ½±®¬» °¿®¿ ´¿ ³·­³¿ »²¦·³¿³»¼·¿²¬» »´ ½»¾¿¼±® ¼»´ »¨¬®»³± íù »² ¿³¾±­ ¿´»´±­ò Û­¬¿ ¼·º»®»²½·¿ ¸¿½» ¯«» »´ °®±¼«½¬±¼» ¿³°´·º·½¿½·-² ¼» ïíí °¾ ´«»¹± ¼»´ ½±®¬» ½±² ´¿ »²¦·³¿ ­»¿ ïç °¾ ³?­ °»¯«»/± »² »´¿´»´± ­¿²± ¯«» »² »´ »²º»®³±ò Û´ ½±²¬®±´ ¼» ½±®¬» ¼» ´¿ »²¦·³¿ô ´·¾»®¿ «² ­»¹³»²¬± ¼» ïê°¾ò Ô¿­ ´»¬®¿­ ­«¾®¿§¿¼¿­ ·²¼·½¿² ³«¬¿½·±²»­ ·²¬®±¼«½·¼¿­ ³»¼·¿²¬» ½»¾¿¼±®»­ò ¾ò Û­¯«»ó³¿ ¼» ´¿ ³»¬±¼±´±¹3¿ «¬·´·¦¿¼¿ »² ­»¹«²¼¿ ·²­¬¿²½·¿ °¿®¿ ´¿ ¼»¬»½½·-² ¼» ´¿ ³«¬¿½·-² éïﻲ »´ ¹»² ¸ÓÍØîò Û­¬¿ ª»¦ »´ ³7¬±¼± ­-´± ·²¬®±¼«½» «² ­·¬·± ¼» ½±®¬» ³»¼·¿²¬» »´ ½»¾¿¼±®¼»´ »¨¬®»³± ëù °¿®¿ ´¿ »²¦·³¿ Ø¿»´´´ »² »´ ¿´»´± ­¿²±ò Û­¬¿ ¼·º»®»²½·¿ ¸¿½» ¯«» »´ °®±¼«½¬±¼» ¿³°´·º·½¿½·-² ¼» èê °¾ ´«»¹± ¼»´ ½±®¬» ½±² ´¿ »²¦·³¿ ­»¿ ïç °¾ ³?­ °»¯«»/± »² »´ ¿´»´±­¿²± ¯«» »² »´ »²º»®³±ò

Page 4: Mutagenesis Dirigida Articulo

ïçï

ïíí °¾ »­ ½±®¬¿¼± »² ¿³¾±­ ¿´»´±­ °±® Ø¿»´´´ ¼¿¼± ¯«»

»´ ½»¾¿¼±® °¿®¿ »´ »¨¬®»³± íù ·²¬®±¼«½» «² ­·¬·± ¼» ®»½±ó

²±½·³·»²¬± °¿®¿ ´¿ »²¦·³¿ øÚ·¹ò ï¿÷ò Û­¬» ­·¬·± ­·®ª» ¼»

½±²¬®±´ ·²¬»®²± °¿®¿ ´¿ ¿½¬·ª·¼¿¼ ¼» ´¿ »²¦·³¿ò Û´ ¿´»´±

­¿²± °®»­»²¬¿ «² ­»¹«²¼± ­·¬·± ¼» ½±®¬» ¯«» ¸¿½» ¯«»

­» ¼·º»®»²½·» ¼»´ ³«¬¿¼± ø¾¿²¼¿­ ¼» çè °¾ § ïïé °¾ô

®»­°»½¬·ª¿³»²¬»÷ò Ô±­ ®»­«´¬¿¼±­ ±¾¬»²·¼±­ ½±² »­¬»

»²­¿§± »®¿² ½±¸»®»²¬»­ ½±² »´ ?®¾±´ º¿³·´·¿® § ½±² »´

°¿¬®-² ¼» ¸»®»²½·¿ ¼±³·²¿²¬»ô ­·² »³¾¿®¹± ²± »®¿² ´±

­«º·½·»²¬»³»²¬» ½±²º·¿¾´»­ ½±³± °¿®¿ »­¬¿¾´»½»® «² ¼·¿¹ó

²-­¬·½± ¼»º·²·¬·ª±ò Ô¿ ½¿²¬·¼¿¼ ¼» ¾¿²¼¿­ ·²»­°»½3º·½¿­

²± °»®³·¬3¿ «²¿ ½´¿®¿ ·²¬»®°®»¬¿½·-² ¼» ´±­ ®»­«´¬¿¼±­ò

ͱ­°»½¸¿³±­ ¯«» ´± ¯«» ·³°±­·¾·´·¬¿¾¿ ³»¶±®¿® ´¿

¼»º·²·½·-² ¼»´ »²­¿§± »®¿ ¼»¾·¼± ¿ «²± ¼» ´±­ ½»¾¿¼±®»­ò

б® »­¬¿ ®¿¦-² ¼»½·¼·³±­ ®»¼·­»/¿® »´ ½»¾¿¼±® °¿®¿ »´

»¨¬®»³± íùô «¾·½?²¼±´± ¿¼»²¬®± ¼»´ »¨-² ïíô § ­·² ·²¬®±¼«ó

Ú·¹ò îò� λ­«´¬¿¼±­ ¼»´ ¿²?´·­·­ ³»¼·¿²¬» ³«¬¿¹7²»­·­ ¼·®·¹·¼¿ ½±² ¼±­ °¿®»­ ¼» ½»¾¿¼±®»­ ¼·º»®»²¬»­ò Ù»´»­ ¿ § ½æ ®»­«´¬¿¼±­½±² ½»¾¿¼±® °¿®¿ »´ »¨¬®»³± íù ¯«» ·²¬®±¼«½» ³«¬¿½·-²å Ù»´»­ ¾ § ¼æ ®»­«´¬¿¼±­ ½±² ½»¾¿¼±® °¿®¿ »´ »¨¬®»³± íù ­·² ·²¬®±¼«½·®³«¬¿½·-²ò Û´ ½±²¬®±´ »­ «² ·²¼·ª·¼«± ­¿²±å »´ 3²¼·½» »­ »´ °¿½·»²¬» ½±² ½?²½»® ½±´±®®»½¬¿´ò Ý¿¼¿ ³«»­¬®¿ ¼» °®±¼«½¬± ¼» ÐÝκ«» ·²½«¾¿¼¿ ½±² øõ÷ § ­·² øó÷ ´¿ »²¦·³¿ Ø¿»´´´ô § ­» ­»³¾®¿®±² »² «² ¹»´ ¼» °±´·¿½®·´¿³·¼¿ ²± ¼»­²¿¬«®¿´·¦¿²¬» ¿´ ïðûò Ù»´ »æλ­«´¬¿¼±­ ¼» ¹»´»­ ¼·¿¹²-­¬·½± ¼» «²¿ º¿³·´·¿ ½±² ØÒÐÝÝò Ý¿´´»­ óæ °®±¼«½¬± ¼» ¿³°´·º·½¿½·-² ­·² Ø¿»´´´ò Ý¿´´»­ õæ °®±¼«½¬±¼» ¿³°´·º·½¿½·-² ½±² Ø¿»´´´ò Í ã °¿½·»²¬»­ ­¿²±­å Ó ã °¿½·»²¬»­ ³«¬¿¼±­ò ݬ®±´ ã ½±²¬®±´ ­¿²±ò ײ¼·½» ã °¿½·»²¬» ï ½±² ½?²ó½»® ½±´±®®»½¬¿´ò

½·® ²·²¹&² ½¿³¾·± ¼» ¾¿­»ò ݱ² »­¬±­ ½¿³¾·±­ ±¾¬«ª·ó

³±­ «²¿ &²·½¿ ¾¿²¼¿ ¼» ¿³°´·º·½¿½·-² ¯«» ¼¿¾¿ «² °¿ó

¬®-² ½¿®¿½¬»®3­¬·½± ¼» ½±®¬» ¯«» °»®³·¬3¿ º?½·´³»²¬» ¼·­ó

¬·²¹«·® »²¬®» ¸±³±½·¹±¬¿­ ­¿²±­ § »´ °¿½·»²¬» 3²¼·½»

¸»¬»®±½·¹±¬¿ øÚ·¹ò î ¾ § ¼÷ò ݱ² »­¬» ½±²¶«²¬± ¼» ½»¾¿¼±®»­

²± »¨·­¬» «² ½±®¬» ¯«» ­·®ª¿ ½±³± ½±²¬®±´ ·²¬»®²± ¼» ´¿

¿½¬·ª·¼¿¼ ¼» Ø¿»´´´ò п®¿ »´ ¼·¿¹²-­¬·½± ¼» ïé °¿½·»²¬»­ô

­» ¿³°´·º·½- »´ »¨-² ïí ½±² »´ ­»¹«²¼± ½±²¶«²¬± ¼»

½»¾¿¼±®»­ò Ô±­ °®±¼«½¬±­ º«»®±² ·²½«¾¿¼±­ ½±² ´¿ »²¦·ó

³¿ ¼» ®»­¬®·½½·-² Ø¿»´´´ § ´±­ º®¿¹³»²¬±­ º«»®±² ¿²¿´·¦¿ó

¼±­ »² «² ¹»´ ¼» °± ·́¿½®·´¿³·¼¿ ¿´ ïðû øÚ·¹ò î »÷ò Í» °«»ó

¼» ±¾­»®ª¿® «² °®±¼«½¬± ¼» ¿³°´·º·½¿½·-² ¼» èê °¾ô ¯«»

»­ ½±®¬¿¼± »² ­« ¬±¬¿´·¼¿¼ »² ´±­ ·²¼·ª·¼«±­ ­¿²±­ ø°¿ó

½·»²¬»­ Í÷ ¿ «² °®±¼«½¬± ¼» êé °¾ò Û² ´±­ ·²¼·ª·¼«±­

¸»¬»®±½·¹±¬¿­ ­» ª» ½´¿®¿³»²¬» ́¿ ¼·º»®»²½·¿ ¼» ïç °¾ »²¬®»

»´ ¿´»´± ­¿²± ½±®¬¿¼± § »´ ³«¬¿¼± ­·² ½±®¬»­ ø°¿½·»²¬»­

Page 5: Mutagenesis Dirigida Articulo

ó ʱ´«³»² êð ó Òf îô îðððïçî

Ú·¹ò íò� Ú¿³·´·¿ ¼» ½«¿¬®± ¹»²»®¿½·±²»­ ½±² ØÒÐÝÝò Ô±­ °¿½·»²¬»­ »­¬?² ²«³»®¿¼±­ô ­»¹&² »´ ±®¼»² »² ¯«» ­» º«»®±² ¸¿½·»²ó¼± ´±­ »­¬«¼·±­ò Í3³¾±´±­ ­±³¾®»¿¼±­ ·²¼·½¿² °±®¬¿¼±®»­ ¼» ´¿ ³«¬¿½·-²ô § ­3³¾±´±­ »² ²»¹®·¬¿ ·²¼·½¿² ´±­ °¿½·»²»­ ¯«»º«»®±² ¼·¿¹²±­¬·½¿¼±­ò

Ó÷ò Ô¿ ³«»­¬®¿ ݬ®±´ ½±®®»­°±²¼» ¿ «² ·²¼·ª·¼«± ­¿²± § ´¿

³«»­¬®¿ ײ¼·½» »­ »´ °¿½·»²¬» 3²¼·½»ò Ø«¾± «²¿ ¬±¬¿´ ½±·²ó

½·¼»²½·¿ »²¬®» ´±­ ®»­«´¬¿¼±­ ±¾¬»²·¼±­ °±® ´±­ ¼±­ ½±²ó

¶«²¬±­ ¼» ½»¾¿¼±®»­ô °»®± »´ ¼·¿¹²-­¬·½± ½±² »´ ­»¹«²¼±

½±²¶«²¬± º«» ·²½±³°¿®¿¾´»³»²¬» ³?­ ­»¹«®±ò

Ô¿ º¿³·´·¿ øÚ·¹ò í÷ô ³«»­¬®¿ »´ °¿¬®-² ¼» ¸»®»²½·¿ ¼±ó

³·²¿²¬» ½¿®¿½¬»®3­¬·½± ¼» ³«¬¿½·±²»­ »² »´ ¸ÓÍØîò Í»

°«»¼» ±¾­»®ª¿® ¯«» ´¿ ¼»­½»²¼»²½·¿ ø¹»²»®¿½·-² ××÷ ¼»

¿³¾±­ °®±¹»²·¬±®»­ ³¿­½«´·²±­ ¼» ´¿ ¹»²»®¿½·-² × »­¬?

¿º»½¬¿¼¿ô ¼» ´± ½«¿´ ¼»¼«¶·³±­ ¯«» ´¿ °±®¬¿¼±®¿ ¼» ´¿

³«¬¿½·-² ¸¿¾3¿ ­·¼± ­« ³¿¼®»ò Û² ´¿ ¹»²»®¿½·-² ×××ô ­»

·²½´«§- »² ´±­ ¿²?´·­·­ ¿ ́ ±­ ¸·¶±­ ¼» ´±­ °¿½·»²¬»­ º¿´´»½·ó

¼±­ ¿²¬»­ ¼» ½±³»²¦¿® »­¬» »­¬«¼·±ò Í»¹&² ´¿ ·²º±®³¿ó

½·-² ®»½±´»½¬¿¼¿ô ¬±¼±­ ̧ ¿¾3¿² º¿´´»½·¼± ¼» ¿´¹&² ¬·°± ¼»

½?²½»®ô ¿´¹«²±­ ¼» ½?²½»® ½±´±®®»½¬¿´ò

Ô±­ ³·»³¾®±­ ¼» ´¿ ¹»²»®¿½·-² ×Ê ½«§±­ °¿¼®»­ »­ó

¬?² ¿º»½¬¿¼±­ô ²± ¸¿² °±¼·¼± ­»® »­¬«¼·¿¼±­ ¸¿­¬¿ »´

°®»­»²¬»ò Ô±­ °¿¼®»­ ̧ ¿² ¬±³¿¼± ́ ¿ ¼»½·­·-² ¼» »­°»®¿®

¼¿¼± »´ ¾¿¶± ®·»­¹± ¯«» »­¬± ·³°´·½¿ °¿®¿ ²·/±­ ³»²±®»­

¼» îð ¿/±­ò ß­·³·­³±ô ª¿®·±­ ¼» ´±­ ·²¬»¹®¿²¬»­ ¼» ´¿

º¿³·´·¿ ²± ¸¿² ¼»³±­¬®¿¼± ·²¬»®7­ »² ®»¿´·¦¿®­» »´ »­¬«ó

¼·±ò Í» »­¬? ¬®¿¾¿¶¿²¼± ­±¾®» ´¿ ³¿²»®¿ ¼» ·²º±®³¿®´»­

­±¾®» ´±­ ¾»²»º·½·±­ ¼»´ ¼·¿¹²-­¬·½± °®»­·²¬±³?¬·½± ¬¿²ó

¬± »² ´±­ ½¿­±­ °±­·¬·ª±­ ½±³± »² ´±­ ²»¹¿¬·ª±­ò

Ü·­½«­·-²

Ü» ´±­ ½«¿¬®± ¹»²»­ ½±²±½·¼±­ ®»´¿½·±²¿¼±­ ½±² »´ ­3²ó

¼®±³» ØÒÐÝÝô ´±­ ¹»²»­ ¸ÓÔØï § ¸ÓÍØî ­±² ´±­ ¯«»

½±² ³?­ º®»½«»²½·¿ °¿®»½»² ³«¬¿®ò Û­¬«¼·±­ ³«¬¿½·±ó

²¿´»­ ·²¼·½¿² ¯«» ³?­ ¼» «² ìðû ¼» ´±­ ´·²¿¶»­ ½±²

ØÒÐÝÝ ­» ¼»¾»² ¿ ³«¬¿½·±²»­ »² »´ ¹»² ¸ÓÍØî »² »´

½®±³±­±³¿ î°ïêò ˲ ¬»³¿ ¼» ·³°±®¬¿²½·¿ °®?½¬·½¿ ½±²

®»­°»½¬± ¿ ´¿ °¿¬±¹»²·½·¼¿¼ ¼» ØÒÐÝÝ »­ ´¿ ²¿¬«®¿´»¦¿

¼» ³«¬¿½·±²»­ ·²¼·ª·¼«¿´»­ § ­« ½±®®»´¿½·-² ½±² »´ »­ó

°»½¬®± ¬«³±®¿´ ±¾­»®ª¿¼±ò Í» ¸¿ ª·­¬± ¯«» ³«¬¿½·±²»­

·²¼»°»²¼·»²¬»­ »² «² ¼»¬»®³·²¿¼± »¨-² ­» ®»´¿½·±²¿²

½±² ¼·º»®»²¬»­ ª¿®·¿²¬»­ ½´3²·½¿­ò Û­¬± ­«¹·»®» ¯«» ±¬®±­

¹»²»­ô ¶«²¬± ½±² º¿½¬±®»­ ¿³¾·»²¬¿´»­ °±¼®3¿² »­¬¿® ¶«ó

¹¿²¼± «² ®±´ ·³°±®¬¿²¬» »² ¼»¬»®³·²¿® »´ º»²±¬·°± ½´3²·½±

»² »´ °¿½·»²¬» ·²¼·ª·¼«¿´ ½±² ØÒÐÝÝò λ½·»²¬»­ »­¬«ó

¼·±­ë ¸¿² ¼»³±­¬®¿¼± ¯«» ´¿ ³¿§±®3¿ ¼» ´¿­ ³«¬¿½·±²»­

»² »´ ¹»² ¸ÓÍØî ´´»ª¿² ¿´ ¬®«²½¿³·»²¬± ¼» ´¿ °®±¬»3²¿ §

»­¬?² ¼·­°»®­¿­ ¿ ́± ́¿®¹± ¼» ¬±¼¿ ́ ¿ ­»½«»²½·¿ ½±¼·º·½¿²¬»

¼» «²¿ ³¿²»®¿ ¸»¬»®±¹7²»¿ò

Û² ²«»­¬®± ½¿­±ô ´¿ ³«¬¿½·-² ¸¿´´¿¼¿ °®±¼«½» «²¿

°®±¬»3²¿ ¬®«²½¿¼¿ ¿´ ·²¬®±¼«½·®­» «²¿ ­»/¿´ ¼» º·²¿´·¦¿ó

½·-² °®»³¿¬«®¿³»²¬» »² »´ ½±¼-² éïïò Û­¬¿ ³«¬¿½·-²

»­ ²«»ª¿ »² ½«¿²¬± ¿ ­« ®»´¿½·-² ½±² ´¿ »²º»®³»¼¿¼ô §

º«» ®»¹·­¬®¿¼¿ °±® ²«»­¬®± ¹®«°± »² ´¿ ¾¿­» ¼» ¼¿¬±­

½±®®»­°±²¼·»²¬»ò Í· ¾·»² »­¬¿ ³«¬¿½·-² ²± »­¬¿¾¿ ®»¹·­ó

¬®¿¼¿ »² º¿³·´·¿­ ½±² ØÒÐÝÝô ¸¿ ­·¼± »²½±²¬®¿¼¿ »² ´¿

´3²»¿ ½»´«´¿® Ö«®µ¿¬ ±®·¹·²¿¼¿ ¼» ½7´«´¿­ Ì ¼» «²¿

´»«½»³·¿ ¸«³¿²¿êò Ô¿ ³«¬¿½·-² ³?­ ½»®½¿²¿ § ¼»´ ³·­ó

³± ¬·°± ®»¹·­¬®¿¼¿ °¿®¿ ØÒÐÝÝ »­ »´ ½¿³¾·± ¼» ´¿

¿®¹·²·²¿ êèð °±® «² ½±¼-² ¼» ¬»®³·²¿½·-² ®»¹·­¬®¿¼¿ °±®

É·¶²»² »¬ ¿´òî Ѭ®¿ ³«¬¿½·-² ®»¹·­¬®¿¼¿ °±® É·¶²»² »¬ ¿´òë

»² »´ »¨-² ­·¹«·»²¬» ·²¬®±¼«½» «² ½±¼-² ¼» ¬»®³·²¿½·-²

§ ­» ®»´¿½·±²¿ º»²±¬3°·½¿³»²¬» ½±² ¬«³±®»­ »² ½±´±² §

»²¼±³»¬®·± °®·²½·°¿´³»²¬»ò Û² ´¿ º¿³·´·¿ »² »­¬«¼·±ô «²¿

¼» ´¿­ ³«¶»®»­ ³«¬¿¼¿­ °®»­»²¬¿ ¬¿³¾·7² «² ½?²½»® ¼»

Page 6: Mutagenesis Dirigida Articulo

ïçí

&¬»®±ò ݱ² »´ ­½®»»²·²¹ ¼» ²«»ª¿­ º¿³·´·¿­ ­» °±¼®3¿

½±³»²¦¿® ¿ º±®³¿® «²¿ ¾¿­» ¼» ¼¿¬±­ ¼»´ °¿3­ô ½±³°¿ó

®¿²¼± »´ ¬·°± ¼» ³«¬¿½·-² ½±² ´¿­ ®»¹·­¬®¿¼¿­ ¸¿­¬¿ »´

³±³»²¬± »² »´ »¨¬®¿²¶»®±ò

п®¿ »´ ¼·¿¹²-­¬·½± ½´3²·½± ¼» ØÒÐÝÝ ¸¿­¬¿ ¸¿½» «²

¬·»³°± ­» ½±²¬¿¾¿ ¬¿² ­-´± ½±² »´ ¼»¬¿´´» ¼» «²¿ ¸·­¬±®·¿

º¿³·´·¿®ò Ü» »­¬» ³±¼±ô ´±­ °¿½·»²¬»­ ¯«» ¬»²3¿² «²± ±

³?­ °¿®·»²¬»­ »² °®·³»® ¹®¿¼± ¿º»½¬¿¼±­ ½±² »´ ­3²¼®±ó

³» ¼» ØÒÐÝÝô »®¿² ­-´± ·²º±®³¿¼±­ ¼» °±­»»® «² ëðû

¼» ®·»­¹± ¼» ­»® °±®¬¿¼±®»­ ¼» «²¿ ³«¬¿½·-²ò ݱ² »´

¼»­½«¾®·³·»²¬± ¼» ´±­ ¹»²»­ ÓÓÎ »² ïççíóïççìô § »´

·²³»¼·¿¬± ¼»­¿®®±´´± ¼» ¬7½²·½¿­ ¼» ¼·¿¹²-­¬·½± ¿ °¿®¬·®

¼» ßÜÒô ­» °«»¼» ´±¹®¿® «²¿ ·¼»²¬·º·½¿½·-² ¼» ´±­ ·²¼·ª·ó

¼«±­ ¿º»½¬¿¼±­ ³«½¸± ¿²¬»­ ¼» ¯«» ¿°¿®»¦½¿² ´¿­ ³¿ó

²·º»­¬¿½·±²»­ ½´3²·½¿­ô °±­·¾·´·¬¿²¼± »´ ­»¹«·³·»²¬± § ¬®¿ó

¬¿³·»²¬± ³«§ °®»½±¦ô ´± ¯«» ¿³°´3¿ ´¿­ °±­·¾·´·¼¿¼»­ ¼»

7¨·¬± ¬»®¿°7«¬·½±ò б® ±¬®¿ °¿®¬» ­» °«»¼» ·²º±®³¿® ¿ ´±­

·²¼·ª·¼«±­ ²± ¿º»½¬¿¼±­ § ¿ ­«­ ¼»­½»²¼·»²¬»­ ¼» ¬»²»®

«² ®·»­¹± ¼» ¼»­¿®®±´´¿® »­¬¿ ²»±°´¿­·¿ô ·¹«¿´ ¿´ ¼» ´¿

°±¾´¿½·-² ¹»²»®¿´ò

Û´ ¿²?´·­·­ ¹»²7¬·½± ²± ­-´± ¾»²»º·½·¿ ¼·®»½¬¿³»²¬» ¿

´¿­ º¿³·´·¿­ ¿º»½¬¿¼¿­ô ­·²± ¯«» ½±³·»²¦¿ ¿ ¿°±®¬¿® ½±ó

²±½·³·»²¬±­ ¿´ »²¬»²¼·³·»²¬± ¼» ´¿ ½±³°´»¶¿ ®»´¿½·-²

¹»²±¬·°±óº»²±¬·°± »² ØÒÐÝÝò Ô¿ ½¿®¿½¬»®·¦¿½·-² ¼» ´¿­

³«¬¿½·±²»­ § ­« ½±®®»´¿½·-² ½±² ´¿ º·­·±°¿¬±´±¹3¿ ¼» ´¿

»²º»®³»¼¿¼ ª¿ ¿¾®·»²¼± °±½± ¿ °±½± «² °¿²±®¿³¿ ¼»

°±­·¾´» °®±²-­¬·½± ½´3²·½± ­»¹&² »´ ¬·°± ¼» ³«¬¿½·-²ò

Û´ ¿²?´·­·­ °±® ÜÙÙÛ ¼» ­»¹³»²¬±­ ·²¼·ª·¼«¿´»­ ¼»

ßÜÒ ¹»²-³·½±ô ¹¿®¿²¬·¦¿ «² ³7¬±¼± ½±³°´»¬± ¼» ¼»ó

¬»½½·-² ³«¬¿½·±²¿´ô °»®± ®»¯«·»®» «² ¿´¬± ²&³»®± ¼»

½»¾¿¼±®»­ § ®»¿½½·±²»­ ¼» ÐÝÎ ·²¼·ª·¼«¿´»­éò б® ±¬®±

´¿¼±ô ±¬®±­ ³7¬±¼±­ ½±³± »´ ¬»­¬ ¼» ´¿ °®±¬»3²¿ ¬®«²½¿ó

¼¿ øÐÌÌ÷è ¯«» ­±² ­«¹»®·¼±­ °¿®¿ ´¿ ½¿®¿½¬»®·¦¿½·-² ¼»

³«¬¿½·±²»­ô ¼»¾·¼± ¿ ¯«» °®?½¬·½¿³»²¬» ¬±¼¿­ ´¿­ ¿´¬»ó

®¿½·±²»­ »² »´ ¹»² ¸ÓÍØî ´´»ª¿² ¿ «² °®±¼«½¬± °®±¬»·½±

¬®«²½¿¼±ô ­±² ·¹«¿´³»²¬» ¼» »´»ª¿¼± ½±­¬±ò

Û² ß®¹»²¬·²¿ ¬±¼¿ª3¿ ²± ­» °«»¼»² ¿°´·½¿® ¿²?´·­·­

¼» »­¬¿ »²ª»®¹¿¼«®¿ ¼¿¼± ¯«» »´ ­»®ª·½·± ¼·¿¹²-­¬·½±

¼»¾»®3¿ ³±²¬¿®­» »² «² ´¿¾±®¿¬±®·± ¼» ¿´¬¿ ½±³°´»¶·¼¿¼

§ ½±² ³«½¸±­ ®»½«®­±­ò Ô¿ ¿´¬»®²¿¬·ª¿ ²«»­¬®¿ ¿ »­¬¿

®»¿´·¼¿¼ º«» ´¿ ¼» ³¿²¼¿® ¿ ¿²¿´·¦¿® »´ ßÜÒ ¿ «² ½»²¬®±

¼» ¼·¿¹²-­¬·½± ¼» ØÒÐÝÝ »² ر´¿²¼¿ô § ´«»¹± ­±¾®» ´¿

¾¿­» ¼» »­±­ ®»­«´¬¿¼±­ ¼·­»/¿® «²¿ »­¬®¿¬»¹·¿ ­»²½·´´¿ô

®?°·¼¿ § »º·½·»²¬» ½±³± ´± »­ ´¿ ³«¬¿¹7²»­·­ ¼·®·¹·¼¿ °±®

ÐÝÎô °¿®¿ ®¿­¬®»¿® ´¿ ³«¬¿½·-² »² »´ ®»­¬± ¼» ´¿ º¿³·´·¿ò

Û­¬» ³7¬±¼± º«» «¬·´·¦¿¼± °±® Ø¿´·¿­­±­ »¬ ¿´òç °¿®¿ ¼»ó

¬»½¬¿® ®?°·¼¿³»²¬» ³«¬¿½·±²»­ »² »´ ±²½±¹»² § ²«»­ó

¬®± ´¿¾±®¿¬±®·± §¿ ´¿ ¸¿¾3¿ «¬·´·¦¿¼± °¿®¿ ¼»¬»½¬¿® ³«¬¿ó

½·±²»­ »² »´ ¹»² ÝÚÌÎ ¼» ´¿ Ú·¾®±­·­ Ï«3­¬·½¿ò Û´ ³7¬±ó

¼± »­ ¼» ¾¿¶± ½±­¬±ô ¼» ¿´¬¿ ­»²­·¾·´·¼¿¼ § »­°»½·º·½·¼¿¼

§ ½±² ¾¿¶¿ °®±¾¿¾·´·¼¿¼ ¼» º¿´­±­ °±­·¬·ª±­ § º¿´­±­ ²»ó

¹¿¬·ª±­ò Û´ ¼»­¿®®±´´± ¼» «²¿ »­¬®¿¬»¹·¿ ¼·¿¹²-­¬·½¿ ­·³ó

°´» ²±­ ̧ ¿ °»®³·¬·¼± ®»¿´·¦¿® »´ ¼·¿¹²-­¬·½± °®»­·²¬±³?¬·ó

½¿³»²¬» ¿ ´±­ º¿³·´·¿®»­ ¼»´ °¿½·»²¬» 3²¼·½» ¯«» ²± ¸«ó

¾·»®¿ ­·¼± º¿½¬·¾´» ¸¿½»®´± ¿ ´¿ ¼·­¬¿²½·¿ô ²± ­-´± °±® ´±

½±³°´»¶± ¼»´ ³¿²»¶± ¼» ´¿­ ³«»­¬®¿­ô ­·²± °±® ´± ½±­¬±ó

­± ¯«» ¸«¾·»®¿ ®»­«´¬¿¼± °¿®¿ «²¿ º¿³·´·¿ ¬¿² ¹®¿²¼»ò

ݱ² ´¿ ³»¬±¼±´±¹3¿ ¿°´·½¿¼¿ô ¬±¼± »´ ¼·¿¹²-­¬·½± º¿³·ó

´·¿®ô ´¿ ½±²­«´¬±®3¿ ¹»²7¬·½¿ § »´ ­»¹«·³·»²¬± ½´3²·½± ­»

°«¼± ½±³»²¦¿® ¿ ¸¿½»® »² »´ °¿3­ò

ß ´±­ ·²¼·ª·¼«±­ ­·² ³«¬¿½·-² ø³«½¸±­ ¼» »´´±­ §¿ ½±²

¸·¶±­÷ ­» ´»­ °«»¼» ¼¿® ´¿ ¬®¿²¯«·´·¼¿¼ ¼» ¯«» ²± ¼»­¿ó

®®±´´¿®?² »´ ¬«³±® ²· »´´±­ ²· ­« ¼»­½»²¼»²½·¿ò Ô±­ °¿ó

½·»²¬»­ ½±² ´¿ ³«¬¿½·-² °®»­»²¬» ¼»¾»² ®»¿´·¦¿®­» «²¿

½±´±²±­½±°·¿ ½¿¼¿ ïóí ¿/±­ô ½±³»²¦¿²¼± »²¬®» ´±­ îðó

îë ¿/±­ § ¸¿­¬¿ ´±­ êðóéë ¿/±­ ¿ º·² ¼» °»®³·¬·® «² ¼·¿¹ó

²-­¬·½± °®»½±¦ò Û´ ¼·¿¹²-­¬·½± °®»­·²¬±³?¬·½± ¾®·²¼¿ «²¿

³¿§±® °±­·¾·´·¼¿¼ ¼» ½«®¿ °«»­ °»®³·¬» «²¿ ·²¬»®ª»²ó

½·-² ¬»®¿°7«¬·½¿ »º·½¿¦ »² ́ ¿ ³¿§±®3¿ ¼» ́ ±­ ½¿­±­ïðò п®¿

¼¿® »­¬±­ ¾»²»º·½·±­ ¿ ´¿ º¿³·´·¿ô ­» »­¬? º±®³¿²¼± «²

»¯«·°± ¼» ·²¬»®¿½½·-² ½±² ³7¼·½±­ ¹»²»¬·­¬¿­ô ³7¼·½±­

¹¿­¬®±»²¬»®-´±¹±­ § ³7¼·½±­ ½·®«¶¿²±­ô ¯«» º¿½·´·¬» ¯«»

´±­ ·²¼·ª·¼«±­ °±®¬¿¼±®»­ ¼» ́ ¿ ³«¬¿½·-² ­» ·²½±®°±®»² ¿

«² °®±¹®¿³¿ ¼» ­»¹«·³·»²¬± ½´3²·½±ò

ß °»­¿® ¼» ´±­ ¾»²»º·½·±­ ·²¼·­½«¬·¾´»­ °¿®¿ ´±­ ·²¼·ª·ó

¼«±­ ¿²¿´·¦¿¼±­ô ­» ¼»¾» ­»® ½±²­½·»²¬» ¼» ¯«» ́ ¿ ·²º±®ó

³¿½·-² ¹»²7¬·½¿ ¼»¾» ­»® ­·»³°®» ½±²º·¼»²½·¿´ô ²± ­-´±

°¿®¿ »ª·¬¿® °±­·¾´»­ º«¬«®¿­ ¼·­½®·³·²¿½·±²»­ô ­·²± ¬¿³ó

¾·7² °¿®¿ ®»­°»¬¿® ´¿ ·²¬·³·¼¿¼ ¼» ½¿¼¿ º¿³·´·¿ò Ô¿­ ½±²ó

­»½«»²½·¿­ ¼» »­¬±­ ¼·¿¹²-­¬·½±­ ¹»²7¬·½±­ °«»¼»²

·³°¿½¬¿® »² «²¿ ª¿®·»¼¿¼ ¼» ¿­°»½¬±­ ½´3²·½±­ô ´»¹¿´»­ô

7¬·½±­ § °­·½±­±½·¿´»­ò л®± ­· ´±­ °±®¬¿¼±®»­ ¼» ³«¬¿ó

½·±²»­ ­±² ­±³»¬·¼±­ ¿ ­»¹«·³·»²¬± ½´3²·½±ô ¬®¿¬¿³·»²¬±

°®±º·´?½¬·½± § ½±²­«´¬±®3¿ ¹»²7¬·½¿ô ´¿­ »¨°»½¬¿¬·ª¿­ § ´¿

½¿´·¼¿¼ ¼» ª·¼¿ ¿«³»²¬¿²ô § ´±­ ½±­¬±­ ³7¼·½±­ ¼·­³·ó

²«§»²ïïò

ß¹®¿¼»½·³·»²¬±­æ Û´ ³7¼·½± ½·®«¶¿²± Ðò ѳ»´¿²½¦«µ ¼»´Ø±­°·¬¿´ Ô¿¹±³¿¹¹·±®» ¼» ´¿ Ý·«¼¿¼ ¼» Ó»²¼±¦¿ ¸¿ ­·¼± ¯«·»²¿°±®¬- »´ ½¿­± 3²¼·½»ò Û´ Ü®ò η½½¿®¼± Ú±¼¼» § »´ Ü®ò Ö««´ É·¶²»²¼»´ Ü»°¿®¬³»²¬ ±º Ø«³¿² Ù»²»¬·½­ô Ó»¼·½¿´ Ù»²»¬·½­ Ý»²¬®»¼» ´¿ ˲·ª»®­·¼¿¼ ¼» Ô»·¼»² »² ر´¿²¼¿ ®»¿´·¦¿®±² ´¿ ¼»¬»½½·-²¼» ´¿ ³«¬¿½·-² ¹»®³·²¿´ »² »´ °¿½·»²¬» 3²¼·½»ô ¿­3 ½±³± ¬¿³ó¾·7² ¾®·²¼¿®±² ­« ¿­»­±®¿³·»²¬± °®±º»­·±²¿´ °±­¬»®·±®ò Ô¿ Ü®¿òß²¿ Ô3¿ Ê¿®¹¿­ ¼»´ Ü»°¿®¬¿³»²¬± ¼» Ù»²7¬·½¿ ¼» ´¿ Ú¿½«´¬¿¼¼» Ó»¼·½·²¿ ¼» ´¿ ˲·ª»®­·¼¿¼ Ò¿½·±²¿´ ¼» Ý«§±ô ®»ª·­- ¼»¬¿ó´´¿¼¿³»²¬» »´ ³¿²«­½®·¬±ò Û­¬» ¬®¿¾¿¶± º«» ®»¿´·¦¿¼± ½±² «² ­«¾ó­·¼·± ¼»´ ݱ²­»¶± ¼» ײª»­¬·¹¿½·-² ¼» ´¿ ˲·ª»®­·¼¿¼ Ò¿½·±²¿´¼» Ý«§± ¼» Ó»²¼±¦¿ò

Þ·¾´·±¹®¿º3¿

ïò ̱°­ Ýò Ù»²»¬·½ ݸ¿²¹»­ Ü«®·²¹ ݱ´±®»½¬¿´ Ѳ½±¹»²»­·­òЮ»­§³°¬±³¿¬·½ ÜÒß Ü·¿¹²±­·­ ±º Ú¿³·´·¿´ ß¼»²±ó

³¿¬±«­ б´§°±­·­ò Ì»­·­ ¼±½¬±®¿´ò Ô»·¼»²ô ïççêô °ò ïðòîò É·¶²»² Öô Õ¸¿² Óô Ê¿­»² Øô »¬ ¿´ò Ø»®»¼·¬¿®§ Ò±²°±´§°±­·­

ݱ´±®»½¬¿´ Ý¿²½»® Ú¿³·´·»­ ²±¬ ½±³°´§·²¹ ©·¬¸ ¬¸»ß³­¬»®¼¿³ Ý®·¬»®·¿ ­¸±© »¨¬®»³»´§ ´±© º®»¯«»²½§ ±º³·­³¿¬½¸ó®»°¿·®ó¹»²» ³«¬¿¬·±²­ò ïççéåêïæ íîçóíëò

Page 7: Mutagenesis Dirigida Articulo

ó ʱ´«³»² êð ó Òf îô îðððïçì

íò ß¿´¬±²»² Ôô л´¬±³<µ· Ðô Ô»¿½¸ ÚÍô »¬ ¿´ò Ý´«»­ ¬± ¬¸»°¿¬¸±¹»²»­·­ ±º º¿³·´·¿´ ½±´±®»½¬¿´ ½¿²½»®ò ïççíåîêðæ èïîóêò

ìò Ó·´´»® Íßô ܧµ»­ ÜÜô б´»­µ§ ØÚò ß ­·³°´» ­¿´¬·²¹ ±«¬°®±½»¼«®» º±® »¨¬®¿½¬·²¹ ÜÒß º®±³ ¸«³¿² ²«½´»¿¬»¼ ½»´´­ò

ïçèèå ïêæ ïîïëóîðòëò É·¶²»² Öô Ê¿­»² Øô Õ¸¿² Óô »¬ ¿´ò Í»ª»² ²»© ³«¬¿¬·±²­

·² ¸ÓÍØîô ¿²¼ ØÒÐÝÝ ¹»²»ô ·¼»²¬·º·»¼ ¾§ ¼»²¿¬«®·²¹¹®¿¼·»²¬ ¹»´ »´»½¬®±°¸±®»­·­ò ïççëå ëêæïðêðóêò

êò Ô»ª¿¬· Ôô Ó¿®®¿ Ùô Ô»¬¬·»®· Ìô »¬ ¿´ò Ó«¬¿¬·±² ±º ¬¸» ³·­³¿¬½¸®»°¿·® ¹»²» ¸ÓÍØî ¿²¼ ¸ÓÍØê ·² ¿ ¸«³¿² Ìó½»´´´»«µ»³·¿ ´·²» ¬±´»®¿²¬ ¬± ³»¬¸§´¿¬·²¹ ¿¹»²¬­ò

ïççèå îíæ ïëçóêêòéò Ú±¼¼» Îô Ô±­»µ±±¬ Óò Ó«¬¿¬·±² Ü»¬»½¬·±² ¾§ ¼»²¿¬«®ó

·²¹ ¹®¿¼·»²¬ ¹»´ »´»½¬®±°¸±®»­·­ øÜÙÙÛ÷ò

ïççìå íæ èíóçìòèò Ê¿² ¼»® Ô«·¶¬ Îô Õ¸¿² Óô Ê¿­»² Øô »¬ ¿´ò ο°·¼ ¼»¬»½¬·±²

±º ¬®¿²­´¿¬·±²ó¬»®³·²¿¬·²¹ ³«¬¿¬·±²­ ¿¬ ¬¸» ¿¼»²±³¿¬±«­°±´§°±­·­ ½±´· øßÐÝ÷ ¹»²» ¾§ ¼·®»½¬ °®±¬»·² ¬®«²½¿¬·±² ¬»­¬ò

ïççìå îðæ ïóìòçò Ø¿´·¿­­±­ ßô ݸ±³»´ ÖÝô Ì»­­±² Ôô »¬ ¿´ò Ó±¼·º·½¿¬·±² ±º

»²¦§³¿¬·½¿´´§ ¿³°´·º·»¼ ÜÒß º±® ¬¸» ¼»¬»½¬·±² ±º °±·²¬³«¬¿¬·±²­ò ïçèçå ïéæ íêðêò

ïðò Ó»²µ± ÚØô É·¶²»² ÖÌô Ê¿­»² ØÚô Í·¶³±²­ ÎØô Õ¸¿² ÓòÚ¿³·´·¿´ ¿²¼ ¸»®»¼·¬¿®§ ²±²°±´§°±­·­ ½±´±®»½¬¿´ ½¿²½»®æ·­­«»­ ®»´»ª¿²¬ º±® ­«®¹·½¿´ °®¿½¬·½»ò ïççèåïìêæ îðóíïïðò

ïïò Ê¿­»² Øô Ê¿² Þ¿´´»±±·¶»² Óô Þ«­µ»²­ Ûô »¬ ¿´ò ß ½±­¬»ºº»½¬·ª»²»­­ ¿²¿´§­·­ ±º ½±´±®»½¬¿´ ­½®»»²·²¹ ±º ¸»®»¼·¬¿®§²±²°±´§°±­·­ ½±´±®»½¬¿´ ½¿®½·²±³¿ ¹»²» ½¿®®·»®­òïççèå ïæ ïêíîóéò

ó ó ó ó

Ô¿­ ½·»²½·¿­ô ¸¿ ¼·½¸± «² »­½®·¬±®ô ­±² ´¿ ·³¿¹»² ¼»´ ³±ª·³·»²¬±æ ¯«»®»® »­¬¿½·±²¿®´¿­ô »­ °®»¬»²ó

¼»® ¿°¿¹¿®´¿­ô °¿®¿ ¯«» »­¬» ³±ª·³·»²¬± ½±²¬·²&»ô »­ ·²¼·­°»²­¿¾´» ¯«» ³«½¸±­ ¸±³¾®»­ ®»«²·¼±­

´¿ ­±­¬»²¹¿²ô § ¯«» ¶«²¬¿²¼± »² «² ­±´± º±½± ­« ­¿¾»®ô ª¿´±®»² ½±² ¶«­¬·½·¿ ´±­ ¸»½¸±­ § ´±­ °»²­¿ó

³·»²¬±­ ²«»ª±­ô ´±­ »­¬«¼·»² ¾¿¶± ¬±¼¿­ ­«­ ®»´¿½·±²»­ô § ´±­ ­±³»¬¿² ¿ ¼·­½«­·±²»­ ·³°¿®½·¿´»­ §

¼»¬»²·¼¿­ ½±² ¹»²·± § ½±² ±°·²·±²»­ ¼·º»®»²¬»­ò

ÅÚ®¿²½·­½±Ã ݱ­³» ß®¹»®·½¸ § Ö«¿² ß²¬±²·± Ú»®²?²¼»¦

Åïééçóïèìçà ÅïéëèóïèéîÃ

Û² Òp ïô ïë ¼»

¿¾®·´ ¼» ïèîîô ° îìò ̱³¿¼± ¼» ´¿ ®»°®±¼«½½·-² ­3³·´ ¬·°±¹®?º·½¿ ¼» ´¿ Þ·¾´·±¬»½¿ ¼» Ó¿§±ô ̱³±

Ê×ô Í»²¿¼± ¼» ´¿ Ò¿½·-²ô Þ«»²±­ ß·®»­ô ïçêðô ° ëîêï

ÅÔ¿ ß¾»¶¿ ß®¹»²¬·²¿ º«» ´¿ °®·³»®¿ ®»ª·­¬¿ ¿®¹»²¬·²¿å »®¿ ³»²­«¿´ § -®¹¿²± ¼» ´¿ ͱ½·»¼¿¼ Ô·¬»®¿®·¿ò Û´

°®·³»® ²&³»®± ¿°¿®»½·- »´ ïë ¼» ¿¾®·´ ¼» ïèîîô »´ &´¬·³± �»´ ¼7½·³± ̄ «·²¬±� »´ ïë ¼» ¶«´·± ¼» ïèîíò Û­¬»

°»®·-¼·½± »­¬¿¾¿ ¼»¼·½¿¼± ¿ þ±¾¶»¬±­ °±´3¬·½±­ô ½·»²¬3º·½±­ô § ¼» ·²¼«­¬®·¿ô § ½±²¬»²¼®?ô ¿¼»³?­ ¬®¿¼«½ó

½·±²»­ ­»´»½¬¿­ô ´±­ ¼»­½«¾®·³·»²¬±­ ®»½·»²¬»­ ¼» ´±­ °«»¾´±­ ½·ª·́ ·¦¿¼±­å ´¿­ ±¾­»®ª¿½·±²»­ ³»¬»±®±´-ó

¹·½¿­ ¼»´ °¿3­å ´¿­ ³»¼·¼¿­ ­±¾®» ´¿ ½±²­¬·¬«½·-² ¼» ´±­ ¿/±­ô ¼» ´¿­ »­¬¿½·±²»­ô § «² ®»­«³»² ¼»

´¿­ »²º»®³»¼¿¼»­ ¼» ½¿¼¿ ³»­å «² ­«³¿®·± ¼» ´±­ ¿¼»´¿²¬¿³·»²¬±­ ¼» ´¿ °®±ª·²½·¿þò ÖßÞÃ