NeuMoDx™ HV Quant Test Str ip 201300 KASUTUSJUHISED · 2020-01-17 · B-hepatiit võib põhjustada kas ägedat hepatiiti või võib areneda krooniliseks seisundiks, mille tulemuseks

NeuMoDx™ HBV Quant Test Strip KASUTUSJUHISED

201300

NeuMoDx Molecular, Inc. KONFIDENTSIAALNE P/N 40600136-ET_Rev B Aprill 2019

Lk 1/18 Levitamiseks vaid väljaspool USA-d

201300 NeuMoDx™ HBV Quant Test Strip Rx only HOIATUS: Mitte saadaval tarbemüügiks USA-s.

Kasutamiseks in vitro diagnostikas süsteemides NeuMoDx™ 288 ja NeuMoDx™ 96 Molecular Systems

Täpsemaid kasutusjuhiseid vt süsteemi NeuMoDx™ 288 Molecular System käitaja käsiraamatust; p/n 40600108 Täpsemaid kasutusjuhiseid vt süsteemi NeuMoDx™ 96 Molecular System käitaja käsiraamatust; p/n 40600317

SIHTOTSTARVE Analüüs NeuMoDx™ HBV Quant Assay on automatiseeritud, in vitro nukleiinhapete amplifitseerimise analüüs B-hepatiidi viiruse (Hepatitis B Virus, HBV) DNA kvantifikatsiooniks inimese plasmaproovides. NeuMoDx HBV Quant Assay analüüs kasutatuna süsteemides NeuMoDx™ 288 Molecular System ja NeuMoDx™ 96 Molecular System (NeuMoDx™ System(s)) ühendab automaatse DNA ekstraheerimise sihtmärk-nukleiinhapete isoleerimiseks proovidest ja reaalaja polümeraasi ahelreaktsiooni (polymerase chain reaction, PCR), et tuvastada B-hepatiidi viiruse genoomi kõrgelt konserveerunud X-valgu ja pre-C-valgu piirkondi. NeuMoDx HBV Quant Assay analüüs on ettenähtud kasutamiseks HBV infektsiooniga patsientidele sobiva ravi kindlaks määramise abistamiseks. NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi tuleks kasutada koos kõigi kliiniliste ja laboratoorsete leidudega õige ravi leidmisel ja pole ettenähtud kasutamiseks iseseisvalt diagnoosimise eesmärgil või vere skriiinimisel.

KOKKUVÕTE JA SELGITUSED Inimese täisvere proovid kogutakse steriilsesse verekogumise katsutisse, mis sisaldavad kas etüleendiamiintetraäädikhapet (Ethylenediaminetetraacetic

Acid, EDTA) või happelist tsitraatdekstroosi (Acid Citrate-Dextrose, ACD) antikoagulandina plasma ettevalmistamiseks. Analüüsimiseks ettevalmistumiseks laaditakse NeuMoDx Systems süsteemiga ühilduvas katsutis plasmaproov NeuMoDx System süsteemi kasutades töötlemiseks vastavat proovikatsutikandjat. Iga proovi kohta segatakse 550 µl plasmaproovi alikvoot NeuMoDx™ Lysis Buffer 1 lüüsimispuhvriga ja NeuMoDx System teeb automaatselt kõik sihtmärk nukleiinhapete ekstraheerimiseks vajalikud etapid, valmistab ette isoleeritud DNA reaalaja PCR-iga amplifitseerimiseks ning, selle olemasolul, amplifitseerib ja tuvastab amplifitseerimise saadused. (HBV genoomi sihtmärk lõigud on kõrgelt konserveerunud piirkonnad, mis kodeerivad X-valku ja pre-C-valku). NeuMoDx HBV Quant Assay sisaldab DNA proovi töötlemise kontrollproovi (Sample Process Control, SPC1), mis aitab jälgida nii võimalike inhibeerivate ainete esinemist kui ka süsteemi NeuMoDx System või reaktiivi tõrkeid, mis võivad esineda ekstraheerimise ja amplifitseerimise protseduuride kestel. B-hepatiidi viirus (Hepatitis B Virus, HBV) on B-hepatiidi maksa infektsiooni põhjustaja ja ülemaailmne terviseprobleem. B-hepatiit võib põhjustada kas ägedat hepatiiti või võib areneda krooniliseks seisundiks, mille tulemuseks on tsirroos või maksavähk. Kroonilise seisundi väljaarenemise risk on peamiselt seotud vanusega; kui viirus kantakse üle sünnihetkel, siis esineb >90% võimalus kroonilise seisundi tekkeks, samas kui täiskasvanu nakatumisel viirusega on 2–6% võimalus kroonilise seisundi tekkeks1. HBV ülekanne toimub kas verega või nakatunud inimesega kontaktis olles, seksuaalsel teel, nakatunud inimesega süstalde jagamisel intravenoossete (IV) narkootikumide tarbimisel või vertikaalselt emalt lapsele sünnitamisel. Ühendriikides elab ligikaudu 850 000 inimest HBV infektsiooniga, millest enamus on nakatunud seksuaalsel teel või süstaldega narkootikumide tarbimisel2. Aafrikas ja Vaikse ookeani läänepiirkonnas on kuni 5% populatsioonist teada oleva infektsiooniga. Ülemaailmselt põhjustas HBV infektsioon 2015. aastal 885 000 surma, peamiselt tsirroosi või maksarakulise kartsinoomi kujul4. HBV infektsiooni vastu on 95% efektiivsusega vaktsiin, mille tulemusel esineb igal aastasel vähem diagnoositud haigusjuhte3.

HBV infektsiooni ravistandard on hetkel viirusvastane teraapia, mis nõuab patsiendi pidevat jälgimist veendumaks, et ravi kulgeb vastavalt soovidele. Ravi jälgimine NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsiga võimaldab arstidel saada vajalikku teavet HBV infektsiooniga patsientide seisundi kohta ja aitab seisundit kontrolli all hoida.

PROTSEDUURI PÕHIMÕTE NeuMoDx HBV Quant Assay analüüüs kombineerib automatiseeritud DNA ekstraheerimise, amplifitseerimise ja reaalaja PCR-iga tuvastamise. Plasma ettevalmistamiseks kogutakse täisvere proovid EDTA või ACD katsutitesse. NeuMoDx System süsteemiga ühilduvas proovikatsutis plasmaproovid asetatakse proovikatsutikandjasse, mis seejärel laaditakse töötlemiseks NeuMoDx System süsteemi. Edaspidist kasutajapoolset sekkumist pole vaja. NeuMoDx System kasutab soojuse, lüütiliste ensüümide ja ekstraheerimisreaktiivide kombinatsiooni automaatseks rakkude lüüsimiseks, DNA ekstraheerimiseks ja inhibiitorite kõrvaldamiseks. Vabanenud nukleiinhapped püütakse magnethelmeste poolt. Seotud nukleiinhapetega helmed laaditakse NeuMoDx™ Cartridge kassetti, kus seondumata, mitte-DNA komponendid pestakse NeuMoDx™ Wash Reagent pesulahusega välja ning seotud DNA elueeritakse reaktiiviga NeuMoDx™ Release Reagent. NeuMoDx System kasutab seejärel elueeritud DNA-d NeuDry™ amplifitseerimisreaktiivide rehüdreerimiseks, mis sisaldavad kõiki HBV-spetsiifilisi ja SPC1 sihtmärkide amplifitseerimiseks vajalikke elemente. Pärast NeuDry PCR reaktiivide lahustamist vabastab NeuMoDx System ettevalmistatud PCR-i valmissegu NeuMoDx Cartridge kassetti. Kontrolli ja sihtmärk (kui see on olemas) DNA sekvineerimise amplifitseerimine ja tuvastamine toimuvad NeuMoDx Cartridge kasseti PCR-i kambris. NeuMoDx Cartridge on loodud hoidma amplikoni pärast reaalaja PCR-i toimumist ja seega vähendama amplifitseerimise järgset saastumisohtu.

REF


201300



Joonis 1: TaqMan® keemia töömehhanism

Võimendatud sihtmärgid tuvastatakse reaalajas, kasutades sondi hüdrolüüsi keemiat (tihti nimetatud ka TaqMan®-keemiaks) fluorogeensete oligonukleotiidide sondimolekulidega, mis on spetsiifilised amplikoni vastava sihtmärgi suhtes.

TaqMan-i sondid koosnevad fluorofloorist, mis on ühendatud kovalentselt oligonukleotiidi 5’-otsaga, ja kustutist 3’-otsas (Joonis 1). Kui sond on seondunud, on fluorofoor ja kustutaja lähestikku, mille tulemusel kustutav molekul surub maha fluorofoori fluorestsentsi läbi FRET-i (Förster Resonance Energy Transfer, Föster resonantsenergia ülekande mehhanismi).

TaqMan sondid on sellise kujundusega, et need tugevnevad praimerite kindla komplektiga võimendatud DNA piirkonnas. Siis kui Taq DNA polümeraas pikendab praimerit ja sünteesib uut ahelat, degradeerib Taq DNA polümeraasi 5'–3' eksonukleaasi aktiivsus matriits-DNA-ga seondunud sondi. Sondi degradeerimine vabastab fluorofoori ja katkestab kustutaja läheduse ning katkestades seega FRET-ist tuleneva maha surumise efekti ja võimaldades fluorofoori fluorestsentsi. NeuMoDx System süsteemi pooltkvantitatiivse PCR-i termotsükleris tuvastatud fluorestsentssignaal on otseselt proportsionaalne vabastataud fluorofooriga ja seda saab korreleerida olemasoleva sihtmärk DNA kogusega.

HBV DNA tuvastamiseks kasutatakse TaqMan®-i sondi, mis on 5’ otsas märgistatud fluorofooriga (stimuleerimine: 490 nm ja emissioon: 521 nm) ja 3’ otsas pimendava kustutajaga. SPC1 tuvastamiseks on TaqMan®-i sond märgistatud 5’ otsas teistsuguse fluorestsentsvärviga (stimuleerimine: 535 nm ja emissioon: 556 nm) ja 3’ otsas pimendava kustutajaga. Süsteemi NeuMoDx System tarkvara jälgib TaqMan-i sondide poolt emiteeritud fluorestsentssignaali iga amplifitseerimise tsükli lõpus. Kui amplifitseerimine on lõpetatud, siis analüüsib süsteemi NeuMoDx System tarkvara andmed ja kuvab lõpliku tulemuse (POSITIVE / NEGATIVE / INDETERMINATE / UNRESOLVED (POSITIIVNE / NEGATIIVNE / MÄÄRAMATU / LAHENDAMATA)). Kui tulemus on olekus POSITIVE (positiivne), siis kuvab süsteemi NeuMoDx System tarkvara prooviga seotud kvantitatiivse väärtuse või aruande, mis näitab kas arvutatud kontsentratsioon jääb kvantifitseerimispiiridesse.

REAKTIIVID/KULUTARVIKUD

Kaasasolevad materjalid

Vajalikud, kuid mitte tarnitud NeuMoDx™ Reagents ja Consumables

REF Sisukord Analüüsi üksuse kohta Analüüsi pakendi kohta

201300 NeuMoDx™ HBV Quant Test Strip Kuivanud PCR-i reaktiivid, mis sisaldavad HBV-spetsiifilisi TaqMan® sonde ja praimereid ning lisaks SPC1-spetsiifilisi TaqMan® sonde ja praimereid.

16 96

REF Sisukord

100200 NeuMoDx™ Extraction Plate Kuivanud magnethelmed, lüütilised ensüümid ja proovi töötlemise kontrollid

800100 NeuMoDx™ HBV Calibrators Ühekordselt kasutatavad HBV kõrged ja madalad kalibraatorid, et määrata kalibreerimiskõvera kehtivus

900101 NeuMoDx™ HBV External Controls Ühekordseks kasutamiseks mõeldud positiivsete ja negatiivsete kontrollproovide komplekte tagamaks NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi igapäevast kehtivust

400400 NeuMoDx™ Lysis Buffer 1

400100 NeuMoDx™ Wash Reagent

400200 NeuMoDx™ Release Reagent

100100 NeuMoDx™ Cartridge

235903 Filtriga otsakud Hamilton CO-RE Tips (300 µl) (saadaval ettevõttest NeuMoDx või Hamilton)

235905 Filtriga otsakud Hamilton CO-RE Tips (1000 µl) (saadaval ettevõttest NeuMoDx või Hamilton)

Edaspidine PCR praimer Fluorofoor Kustutaja

Sond TaqMan Probe

Polümerisatsioon

Tagasipööratud PCR-i praimer

Amplifitseerimise analüüs

Fluorestseerimine

Sondi nihe ja lõhustumine

Tulemus

PCR-i saadused

Fluorestseerimine

Lõhustumise saadused

https://en.wikipedia.org/wiki/Covalent_bond

https://en.wikipedia.org/wiki/Oligonucleotide

https://en.wikipedia.org/wiki/Förster_resonance_energy_transfer

https://en.wikipedia.org/wiki/Förster_resonance_energy_transfer

https://en.wikipedia.org/wiki/Taq_polymerase

https://en.wikipedia.org/wiki/Primer_(molecular_biology)

https://en.wikipedia.org/wiki/Exonuclease

https://en.wikipedia.org/wiki/Quantitative_PCR

https://en.wikipedia.org/wiki/Quantitative_PCR

https://en.wikipedia.org/wiki/Thermal_cycler


201300



Vajalikud, kuid tarnekomplekti mittekuuluvad varustus ja materjalid NeuMoDx 288 Molecular System [REF 500100] või NeuMoDx™ 96 Molecular System [REF 500200]

HOIATUSED JA ETTEVAATUSABINÕUD • NeuMoDx HBV Quant Test Strip testriba on kasutamiseks in vitro diagnostikas ainultsüsteemidega NeuMoDx Systems.

• Mitte kasutada reaktiive või kulutarvikuid pärast neil märgitud aegumistähtaega.

• Ärge kasutage reaktiive, mille turvariba on katki või mille pakend on saabumisel kahjustunud.

• Mitte kasutada kulutarvikuid või reaktiive, mille kaitsvad ümbrised on avatud või saabumisel katki.

• Enne kliiniliste proovide tulemuste saamist peab esmalt olema saadaval kehtiv analüüsi kalibreering (mis saavutatakse kõrgete ja madalate kalibraatorite NeuMoDx HBV Calibrators töötlemisel).

• NeuMoDx HBV External Controls [REF 900101] kontrolle tuleb töödelda iga 24 tunni tagant.

• Minimaalne proovikatsuti maht on 1 ml EDTA/ACD plasmat; alla 1 ml proovimaht võib põhjustada süsteemi NeuMoDx System viga.

• HBV analüüsi tegemine proovidel, mida on säilitatud valedel temperatuuridel või kauem kui ettenähtud säilitusaeg, võivad anda kehtetu või vigase tulemuse NeuMoDx HBV Quant Test Strip testribaga.

• Vältige koguaeg kõigi reaktiivide ja kulutarvikute mikroobidega ja desoksüribonukleaasiga (DNaasiga) saastumist. Soovitatakse kasutada DNaasita ühekordseid pipette. Kasutage iga prooviga uut pipetti.

• Patsiendi proovide ja labori saastumise vältimiseks ärge käsitsege või võtke kassetti NeuMoDx Cartridge lahti, kui see on automaatselt süsteemi NeuMoDx System bioohtlike jäätmete nõusse kõrvaldatud. Mitte mingil juhul ei tohi kasutada Biohazardous Waste Container jäätmemahutist pärit NeuMoDx Cartridge kassette. NeuMoDx Cartridge kassett on loodud saastumise ära hoidmiseks.

• Juhul kui laboris viiakse läbi avatud katsutitega PCR-i analüüse, tuleb jälgida, et NeuMoDx HBV Quant Test Strip testribad, analüüsimiseks vajalikud lisa kulutarvikud ja reaktiivid, isikukaitsevahendid nagu kindad ja laborikitlid ja NeuMoDx System ei saastuks.

• NeuMoDx-i reaktiivide ja kulutarvikute käsitsemisel tuleks kasutada puhtaid, puudrivabasid nitriilkindaid. Tuleks vältida NeuMoDx Cartridge kasseti pealmise osa, testriba NeuMoDx HBV Quant Test Strip või plaadi NeuMoDx™ Extraction Plate fooliumist sulguri ning lüüsimispuhvri NeuMoDx Lysis Buffer 1 ülemise osa katsumist; kulutarvikute ja reaktiivide käsitsemisel tuleks katsuda vaid küljepindu.

• Iga reaktiiviga on kaasas ohutuskaardid (Safety Data Sheets, SDS).

• Pärast analüüsi tegemist pesta hoolikalt käsi.

• Mitte pipeteerida suuga. Mitte suitsetada, juua või süüa piirkondades, kus käsitsetakse proove või reaktiive.

• Käidelge proove alati nakkusohtlikena ja vastavalt ohututele laboriprotseduuridele, mida on kirjeldatud sellistes väljaannetes nagu „Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories“ 4 ja CLSI dokument M29-A3.5

• Vabanege kasutamata jäänud reaktiividest ja jäätmetest kooskõlas riiklike ja kohaliku omavalitsuse määrustega.

TOOTE SÄILITAMINE, KÄSITSEMINE JA STABIILSUS

• Kõik NeuMoDx Reagents ja Consumables (välja arvatud välised kontrollid ja kalibraatorid) on stabiilsed esmases pakendis temperatuuril 18–28 °C kuni vahetul tooteetiketil märgitud kõlblikkusajani.

• Süsteemi NeuMoDx System laaditud testriba NeuMoDx HBV Quant Test Strip on stabiilne 62 päeva; süsteemi NeuMoDx System tarkvara käivitab reaktiivide eemaldamise, mis on püsinud süsteemis NeuMoDx System enam kui 62 päeva, ning seejärel tuleb avada ja laadida süsteemi NeuMoDx System uued testribad NeuMoDx HBV Quant Test Strips.

• Pärast kasutamist vabanege NeuMoDx-i välistest kontrollidest ja kalibraatoritest.

PROOVIKOGUMINE/TRANSPORTIMINE/SÄILITAMINE

1. Käsitlege kõiki proove, kalibraatoreid ja kontrollproove võimaliku nakkusohu allikatena.

2. Mitte külmutada täisverd ega esmases proovivõtu katsutis proove.

3. Täisveri tuleks koguda steriilsetesse, EDTA või ACD antikoagulandiga katsutitesse. Järgige proovi kogumiskatsutite tootjapoolseid juhiseid.

4. Enne plasma ettevalmistamist võib eelpool nimetatud katsutisse kogutud täisverd säilitada ja/või transportida kuni 24 tundi temperatuuridel 2 °C kuni 25 °C. Plasma ettevalmistamine tuleks teha vastavalt tootjapoosetele juhistele.

5. Ettevalmistatud plasmaproove tuleks säilitada temperatuuridel 2 °C kuni 8 °C mitte enam kui 7 päeva enne analüüsimist ja maksimaalselt 8 tundi toatemperatuuril.

6. Ettevalmistatud plasmaproove võib säilitada temperatuuril < –20 °C kuni 6 kuud enne töötlemist; enne kasutamist tuleks piirduda maksimaalselt 2 külmutamise/sulatamise tsükliga.

a. Kui proovid on külmutatud, laske proovidel toatemperatuuril (15–30 °C) täielikult üles sulada ja segage, et saada ühtlaselt jaotunud proov.


201300



b. Kui külmutatud proovid on sulanud, tuleks analüüs läbi viia 8 tunni jooksul või proove tuleks säilitada temperatuuril 2–8 °C mitte kauem kui 24 tundi.

7. Kui proove transporditakse, siis tuleks need pakkida ja märgistada kooskõlas riigisiseste ja/või rahvusvaheliste eeskirjadega.

8. Märgistage proovid selgelt ja märkige, et need on HBV analüüsimiseks.

9. Liikuge edasi jaotisse „Analüüsi ettevalmistamine“.

Analüüsi NeuMoDx HBV Quant Assay rakendamise protsessi ülevaade on võetud kokku allolevas vooskeemis [Joonis 2].

Joonis 2: NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi rakendamise töövoog

KASUTUSJUHISED Analüüsi ettevalmistamine

1. Kleepige süsteemiga NeuMoDx System ühilduvale proovikatsutile proovi vöötkood.

2. Segage proove ettevaatlikult vortexil ühtlase konsistentsi saavutamiseks.

3. Kasutades ülekandepipetti, kandke ≥ 1 ml plasmat vöötkoodiga varustatud proovi (teise) katsutisse. Tuleks jälgida, et proovikatsutisse ei kanta üle klompe plasmaproovist. Kasutage iga prooviga erinevat ülekandepipetti. Tütarkatsuti peab vastama järgnevatele katsuti spetsifikatsioonidele ühilduva NeuMoDx System süsteemiga vastavalt töötlemiseks kasutatud proovi katsuti kandurile.

• 32 katsuti kandja: diameetriga vahemikus 11 mm ja 14 mm ning kõrgus vahemikus 60 mm ja 120 mm

• 24 katsuti kandja: diameetriga vahemikus 14,5 mm ja 18 mm ning kõrgus vahemikus 60 mm ja 120 mm

NEUMODX HBV QUANT ASSAY KASUTAMINE

Laadige analüüsiks vajalikud reaktiivid• NeuMoDx Lysis Buffer 1

lüüsimispuhver• NeuMoDx HBV Quant Test Strips

testribad

Tarkvara NeuMoDx Software käivitamisel laadige nõutud kulutarvikud

Töödelge kalibraatorid

NeuMoDx HBV Calibrators

Kas kalibraatorid

kehtivad?

Töödelge NeuMoDx HBV External

Controls

Kas kontrollproovid

kehtivad?

Korrake iga 90 päeva pärast VÕI uue NeuMoDx HBV Quant Test Strip testribade partii kasutusele võtmisel

Korrake iga 24 tunni järgselt

TÖÖDELGE RUTIINSED PROOVID

JAH

JAH


201300



Süsteemide NeuMoDx Systems käitlemine Täpsemaid juhiseid vt süsteemide NeuMoDx 288/96 Molecular System käitaja käsiraamatu(te)st (p/n 40600108 & 40600317).

1. Täitke üks või enam süsteemi NeuMoDx System testribakandjat testriba(de)ga NeuMoDx HBV Quant Test Strip ja kasutage puuteekraani, et laadida testribakandja(d) süsteemi NeuMoDx System.

2. Süsteemi NeuMoDx System tarkvara viiba kuvamisel lisage süsteemi NeuMoDx kulutarvikute kandjatesse vajalikud kulutarvikud ja kasutage puuteekraani, et laadida kandja(d) süsteemi NeuMoDx System.

3. Süsteemi NeuMoDx System tarkvara algatusel asendage pesulahus NeuMoDx Wash Reagent , reaktiiv NeuMoDx Release Reagent, tühjendage praimingujäätmete nõu või bioohtlike jäätmete nõu.

4. Süsteemi NeuMoDx System tarkvara algatusel töödelge NeuMoDx HBV Calibrators kalibraatorid ja/või NeuMoDx HBV External Controls kontrollid. Rohkem teavet kalibraatorite ja kontrollproovide kohta on toodud lõigus Tulemuste töötlemine.

5. Laadige proovi/kalibraatori/kontrollproovi katsuti(d) standardsesse 32 katsuti kandjasse ja veenduge, et kõigilt proovikatsutitelt oleks kork eemaldatud.

6. Asetage proovikatsutikandja automaatlaadija riiulile ja kasutage puuteekraani, et laadida kandja süsteemi NeuMoDx System. Sellega käivitatakse laaditud proovide määratud analüüsi(de) töötlemise.

PIIRANGUD

1. NeuMoDx HBV Quant Test Strip testriba saab kasutada vaid NeuMoDx Systems süsteemidega.

2. NeuMoDx HBV Quant Test Strip testriba töötamist on kontrollitud EDTA/ACD antikoagulandiga täisvere proovidest ettevalmistatud plasmaproovidel.

3. NeuMoDx HBV Quant Test Strip testriba kasutamist teiste kliiniliste näidiste tüüpide puhul pole hinnatud ja analüüsi töötamistingimused teiste proovitüüpide puhul pole teada.

4. Kuna HBV tuvastamine sõltub proovis olevate organismide hulgast, sõltub usaldusväärsete tulemuste saamine õigest proovi kogumisest, käsitsemisest ja säilitamisest.

5. NeuMoDx Calibrators ja External Controls tuleb töödelda vastavalt pakendi infolehe soovitustele ja süsteemi NeuMoDx System tarkvara algatusel enne rutiinsete kliiniliste proovide töötlemist.

6. Ebaõige proovikogumine, käsitsemine, säilitamine, tehniline viga või proovide segamini ajamine võivad põhjustada vigaseid tulemusi. Lisaks võivad vale-negatiivsed tulemused esineda, sest proovis olevate organismide arv on allapoole NeuMoDx HBV Quant Assay määramispiiri.

7. Süsteemi NeuMoDx System käitlemise piiranguks on vaid NeuMoDx System süsteemil väljaõppe saanud personali poolne kasutamine.

8. Kui nii HBV sihtmärk kui SPC1 sihtmärk ei amplifitseeru, siis kuvatakse kehtetu tulemus (Indeterminate (määramatu) või Unresolved (lahendamata)) ning analüüsi tuleks korrata.

9. Kui NeuMoDx HBV Quant Assay tulemus on Positive (positiivne), kuid kvantifitseerimisväärtus on üle kvantifitseerimispiiri, kuvab NeuMoDx System kas tuvastatud HBV oli alla alumise kvantifitseerimispiiri (Lower Limit of Quantitation, LLoQ) või üle ülemise kvantifitseerimispiiri (Upper Limit of Quantitation, ULoQ).

10. Juhul kui tuvastatud HBV oli alla LLoQ, võib (soovi korral) analüüsi korrata proovi teise alikvoodiga.

11. Juhul kui tuvastatav HBV oli üle ULoQ, tuleks analüüsi korrata proovi lahjendatud alikvoodiga. Soovitatud on 1:1000 lahjendatud HBV negatiivne plasma või Basematrix 53.

12. Positiivne tulemus ei pruugi tähendada eluvõimeliste organismide esinemist. Siiski on positiivse tulemuse saamisel eelduste kohaselt proovis olemas B-hepatiidi viiruse DNA.

13. X valgus või pre C piirkonnas esinev deletsioon või mutatsioon võib mõjutada tuvastamist või anda vigase vastuse NeuMoDx HBV Quant Test Strip testriba kasutamisel.

14. NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi tulemusi tuleks kasutada kliiniliste näidustuste ja muu arstile saadaoleva teabe lisana; analüüs pole ettenähtud infektsiooni diagnoosimiseks.

15. Saastamise vältimiseks on soovitatud järgida head laboritava k.a patsiendiproovide käsitsemise vahel kinnaste vahetamine.

TULEMUSTE TÖÖTLEMINE

Saadaolevaid tulemusi saab vaadata või printida süsteemi NeuMoDx System puuteekraani Results (Tulemused) akna vahekaardil „Results“ (Tulemused). Süsteemi NeuMoDx System tarkvara loob automaatselt NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi tulemused kasutades otsuse langetamise algoritmi ja tulemuste töötlemise parameetreid, mis on täpsustatud failis NeuMoDx HBV Assay Definition File (HBV ADF). Analüüsi NeuMoDx HBV Quant Assay


201300



tulemus võib olla Negative (Negatiivne), Positive (Positiivne) koos HBV kontsentratsiooniga, Positive above ULoQ (Positiivne üle ULoQ), Positive below LLoQ (Positiivne alla LLoQ), Indeterminate (Määramatu) või Unresolved (Lahendamata) vastavalt sihtmärgi ja proovi töötlemise kontrollproovi amplifitseerimise olekule. Tulemused esitatakse vastavalt otsustusalgoritmile tabelis Tabel 1.

Tabel 1. NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi otsuse langetamise algoritm

Tulemus HBV Proovi töötlemise kontroll

(Sample Process Control, SPC1) Ct

Positive (positiivne)

[2 ≤ Ct < 9 AND (JA) EPR ≥ 2 AND (JA) EP ≥ 1000]

OR (VÕI) [9 ≤ Ct ≤ 42 AND (JA) EP ≥ 1000]

N/A (mitte kohaldatav)

Positiivne, üle ülemise kvantifitseerimispiiri [Upper Limit of

Quantitation, ULoQ] (Log10 IU/ml) Quant > 9,02 N/A (mitte kohaldatav)

Positiivne, alla alumise kvantifitseerimispiiri [Lower Limit of

Quantitation, LLoQ] (Log10 IU/ml) Quant < 0,88 N/A (mitte kohaldatav)

Negative (negatiivne)

N/A (mitte kohaldatav) OR (VÕI) (2 ≤ Ct< 9 AND (JA) EPR < 2)

OR (VÕI) [9 ≤ Ct ≤ 42 JA EP ≥ 1000]

OR (VÕI) Ct > 42

28 ≤ Ct ≤ 34 JA EP ≥ 2000

Indeterminate (määramatu) NOT AMPLIFIED (AMPLIFITSEERIMATA) / System Errors Noted

(Süsteemivead märgitud)

Unresolved (lahendamata) NOT AMPLIFIED (AMPLIFITSEERIMATA)/ No System Errors Noted

(Süsteemivigu pole märgitud)

EP = End Point Fluorescence (lõpp-punkti fluorestsents) (pärast algväärtuse korrigeerimist); EPR = End Point Fluorescence Ratio (lõpp-punkti fluorestsentsi suhe); Ct = Cycling Threshold (tsükli lävi); Quant = HBV arvutatud hulk, mis on esitaud kujul Log10 IU/ml. Vt allolevat analüüsi arvutust.

Analüüsi arvutus

1. Proovide puhul, mis on NeuMoDx HBV Quant Assay kvantifitseerimise piirides, arvutatakse HBV DNA kontsentratsioon põhinedes kalibreerimisel salvestatud standardkõveral/võrrandil.

a. Kalibraatorite NeuMoDx HBV Calibrators tulemustel põhinedes arvutatakse ka „kalibreerimiskoefitsient“, et tõestada standardkõvera kehtivust teatud NeuMoDx HBV Quant Test Strip testriba partii puhul teatud NeuMoDx System süsteemil.

b. Kalibreerimiskoefitsienti arvestatakse lõplikul HBV DNA kontsentratsiooni määramisel.

2. NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi tulemused kuvatakse kujul Log10 IU/ml.

3. Tundmatute proovide kvantifitseerimise tulemus lähtub WHO 4. HBV rahvusvahelisest standardist.

Analüüsi kalibreerimine

Standardkõveral (või võrrandil) põhinev kehtiv kalibreering on vajalik HBV DNA kvantifitseerimiseks proovides. Kehtivate tulemuste saamiseks tuleb analüüs kalibreerida, kasutades ettevõtte NeuMoDx Molecular, Inc poolt pakutavaid välimisi kalibraatoreid. Välimised kalibraatorid

1. NeuMoDx HBV Calibrators kalibraatoreid pakutakse komplektina [REF 800100] ja need sisaldavad Basematrix 53-s lahjendatud terviklikku HBV-d.

2. HBV kalibraatorite kogu tuleb töödelda enne iga uue NeuMoDx HBV Quant Test Strips testribade partii kasutusele võtmist, uue HBV analüüsi definitsiooni faili laadimisel süsteemi NeuMoDx System, kui kasutusesolev kalibraatorite kogu on ületanud kehtivuse piiri (hetkel seatud 90 päevaks) või kui süsteemi NeuMoDx System tarkvara muudetakse.

3. Süsteemi NeuMoDx System tarkvara teavitab kasutajat sellest, millal kalibraatoreid tuleb töödelda. Tavapärase töö puhul ei saa enne uut testribade partiid kasutada, kui kalibraatorid on edukalt töödeldud.

4. Kalibreeringu kehtivus kehtestatakse järgmiselt:

a) Kehtivuse määramiseks tuleb töödelda kaks kalibraatorite komplekti: kõrge ja madal.

b) Kehtivate tulemuste saamiseks peab vähemalt 2 3-st replikaadist andma eelmääratletud parameetrite sisese tulemuse. Madala kalibraatori nominaalne sihtväärtus on 3,7 Log10 IU/ml ja kõrge kalibraatori nominaalne sihtväärtus on 5,7 Log10 IU/ml.


201300



c) Kalibreerimiskoefitsient arvutatakse, et arvestada kvantifitseerimisel esinevaid kõrvalekaldeid; seda kalibreerimiskoefitsienti kasutatakse lõplikul HBV kontsentratsiooni määramisel.

5. Kui üks või mõlemad kalibraatorid kukuvad kehtivuskontrolli läbi, korrake nurjunud kalibraatori(te) töötlust uue viaaliga. Juhul kui üks kalibraator kukub kehtivuskontrolli läbi, on võimalik korrata vaid nurjunud kalibraatorit, kuna süsteem ei nõua kasutajalt mõlema kalibraatori kordamist.

6. Kui kalibraator(id) kukuvad kehtivuskontrolli teistkordsel järjestikkusel korral läbi, võtke ühendust ettevõttega NeuMoDx Molecular, Inc.

Kvaliteedikontroll Vastavalt kohalikele regulatsioonidele vastutab labor kontrollprotseduuride eest, mis jälgivad kogu analüütilise protsessi täpsust, ning määrab kontrollmaterjalide arvu, tüübi ja analüüsimissageduse kasutades valideeritud, töötlemise spetsifikatsioone modifitseerimata, heaks kiidetud analüüsisüsteemi. Välised kontrollid

1. Ettevõte NeuMoDx Molecular, Inc. pakub välise kontrolli materjale, mis sisaldavad terviklikku HBV viirust Basematrix 53 lahuses positiivsete kontrollidena, komplektina NeuMoDx HBV External Controls [REF 900101].

2. Positiivseid ja negatiivseid väliseid kontrolle tuleb töödelda iga 24 tunni tagant. Kui kehtiv väliste kontrollide komplekt puudub, teavitab süsteemi NeuMoDx System tarkvara kasutajat, et enne proovide tulemuste kuvamist tuleb töödelda kontrollid.

3. Kui on vaja kasutada väliseid kontrolle, siis sulatage neid toatemperatuuril (15–30 °C), kuni need on täielikult üles sulanud. Segage ettevaatlikult vortexil tagamaks ühtlase konsistentsi.

4. Laadige positiivsete ja negatiivsete kontrollide katsutid NeuMoDx System süsteemi kasutades puuteekraani ja automaatlaadija riiulile asetatud proovikatsutite kandjat. NeuMoDx System tunneb ära vöötkoodi ja alustab proovikatsutite töötlemist, v.a juhul, kui töötlemiseks vajalikud reaktiivid või kulutarvikud pole saadaval.

5. NeuMoDx System hindab väliste kontrollide kehtivust eeldatavate tulemuste põhjal. Positiivne kontroll peaks andma tulemuse HBV Positive (HBV-positiivne) ja negatiivne kontroll tulemuse HBV Negative (HBV-negatiivne).

6. Väliste kontrollide vastukäivate tulemuste käsitsemine peaks toimuma järgnevalt.

a) Negatiivsele kontrollproovile saadud tulemus Positive (Positiivne) viitab proovi saastumisele. b) Positiivse kontrollproovi tulemus Negative (Negatiivne) võib viidata reaktiivi või seadmega seotud probleemile. c) Mõlemal juhul korrake neid kontrolle NeuMoDx HBV External Controls, mis kukuvad kehtivuse analüüsi läbi, uute kontrollproovi(de)

viaalidega. d) Kui positiivne NeuMoDx HBV External Control annab jätkuvalt tulemuse Negative (Negatiivne), võtke ühendust NeuMoDx

klienditeenindusega. e) Kui negatiivne NeuMoDx HBV External Control annab jätkuvalt tulemuse Positive (Positiivne), proovige eemaldada kõik võimalikud

saastamise allikad, k.a KÕIGI reaktiivide asendamine enne NeuMoDx klienditeenindusega ühenduse võtmist.

Proovide ettevalmistamine (sisekontrollid)

NeuMoDx Extraction Plate plaadile on kaasatud eksogeenne Sample Processing Control (Sample Process Control, SPC1), mis läbib kogu nukleiinhapete ekstraheerimise protsessi ja reaalaja PCR amplifitseerimise iga prooviga. Igale NeuMoDx HBV Quant Test Strip testribale on kaasatud SPC1 spetsiifilised praimerid ja sond, mis võimaldavad SPC1 ja sihtmärk HBV DNA (kui see on olemas) tuvastamist läbi multipleks reaalaja PCR-i. SPC1 amplifitseerimise tuvastamine võimaldab süsteemi NeuMoDx System tarkvaral jälgida DNA ekstraheerimise ja PCR-i amplifitseerimise protsesside efektiivsust.

Kehtetud tulemused

Kui NeuMoDx System süsteemis tehtud NeuMoDx HBV Quant Assay analüüs ei anna kehtivat tulemust, siis seda kuvatakse kas olekus Indeterminate (määramatu, IND) või Unresolved (lahendamata, UNR) vastavalt esinenud vea tüübile.

Kui süsteemi NeuMoDx System viga esineb proovitöötlemise ajal, kuvatakse IND tulemus. IND tulemuse esinemisel on soovitatud analüüsi korrata.

Kui ühtegi kehtivat HBV DNA või SPC1 amplifitseerimist ei tuvastata, siis kuvatakse UNR-i tulemus, mis viitab võimalikule reaktiivi tõrkele või inhibiitorite esinemisele. UNR-i tulemuse kuvamisel on soovitatud esimese sammuna kordusanalüüs. Kui kordusanalüüs nurjub võib kasutada lahjendatud proovi, et vähendada proovi inhibeerimise efekti.

TOIMIVUSNÄITAJAD

Analüütiline sensitiivsus – tuvastusmäär vastavalt WHO standardile

NeuMoDx HBV Quant Assay analüütilist sensitiivsust kasutades NeuMoDx HBV Quant Test Strip testriba hinnati analüüsides viite erinevat WHO 4. rahvusvahelise standardi tasemet ja eelnevalt skriinitud negatiivset inimese plasmaproovi NeuMoDx 288 Molecular System süsteemiga ning lühendatud analüüsipaneeli NeuMoDx 96 Molecular System süsteemiga. Uuringud tehti 3 päeva jooksul mitme NeuMoDx Systems süsteemiga, kus iga süsteem töötles igal tasemel 18 ja 24 replikaati päevas vastavalt kas NeuMoDx 288 või 96 Molecular Systems süsteemiga. Kordumatut partiid igast järgnevast: NeuMoDx HBV Quant Test Strip testriba, NeuMoDx Extraction Plate plaati ja NeuMoDx Lysis Buffer 1 lüüsimispuhvrit analüüsiti iga NeuMoDx System


201300



süsteemiga iga päev. Tuvastusmäärad on toodud tabelis Tabel 2. HBV genotüüp A [Joonis 3] määramispiiri (Limit of Detection, LoD) kindlaks määramisel kasutati Probit-stiilis analüüsi; NeuMoDx HBV Assay LoD NeuMoDx 288 Molecular System süsteemiga on 5,2 IU/ml 95% konfidentsiaalsusintervalliga (Confidence Interval, CI) vahemikus 4,1 kuni 7,6 IU/ml, mis vastab 0,72 Log10 IU/ml 95% CI vahemikus 0,61 kuni 0,88 Log10 IU/ml. NeuMoDx HBV Assay LoD NeuMoDx 96 Molecular System süsteemiga on 4,3 IU/ml (0,63 Log10 IU/ml). NeuMoDx HBV Quant Assay väidetav määramispiir on 6,2 IU/ml põhinedes erinevatel LoD tulemustel erinevate HBV genotüüpidega.

Tabel 2. LoD määramiseks kasutatud proovide positiivsed tuvastusmäärad NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsiga

IU/ml Log10

(IU/ml)

NeuMoDx 288 Molecular System NeuMoDx 96 Molecular System

Kehtivate analüüside

arv

Positiivsete analüüside

arv Tuvastusmäär

Kehtivate analüüside

arv

Positiivsete analüüside

arv Tuvastusmäär

20 1,3 108 108 100% NA NA NA

10 1 108 107 99% 24 24 100%

5 0,7 108 98 91% 24 23 96%

2,5 0,4 108 97 90% 24 20 83%

1,25 0,1 108 73 68% NA NA NA

0 0 108 0 0% 24 24 0%

Joonis 3: NeuMoDx HBV Quant Assay LoD määramiseks kasutatud Probit stiilis analüüs NeuMoDx 288 Molecular System süsteemiga (vasakul) ja NeuMoDx 96 Molecular System süsteemiga (paremal)

Kvantifitseerimispiir – alumine kvantifitseerimispiir (Lower Limit of Quantitation, LLoQ) Selleks, et määrata alumist kvantifitseerimispiiri, arvutati kogu analüütiline viga (total analytical error, TAE) iga HBV sihtmärgi taseme kohta, mis näitasid ≥ 95% määramist LoD arvutamise osana. TAE on defineeritud järgnevalt:

TAE = kõrvalekalle + 2*SH [Westgardi statistika] Kõrvalekalle on keskmise arvutatud kontsentratsiooni ja eeldatud kontsentratsiooni vahelise erinevuse absoluutväärtus. SH on proovi kvantitatiivse väärtuse standardhälve.

Mõlema NeuMoDx Systems süsteemiga koostatud LLoQ tulemused HBV proovidega on toodud tabelis Tabel 3.

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

-2 -1 0 1 2 3

SEN

SITI

VIT

Y

Log10 [CONC/mL]

Sigmoid Fit

Experimental Data

Calculated LoD

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

-4 -2 0 2 4

SEN

SITI

VIT

Y

Log10 [CONC/mL]

Curve FIT

Experimental

Calculated LoD

LoD = 5.2 IU/mL [with 95% CI of (4.1,7.6) IU/mL]

SEN

SITI

VIT

Y (S

ENSI

TIIV

SUS)

Sigmoidne kõver

Katseandmed

arvutatud LoD

LoD = 5,2 IU/ml [95% Cl (4,1;7,6) IU/ml]

LoD = 4,3 IU/ml

1,2

1

0,8

0,6

0,4

0,2

0

1,2

1

0,8

0,6

0,4

0,2

0

Log10 [KONTS/ml]

SEN

SITI

VIT

Y (S

ENSI

TIIV

SUS)

Log10 [KONTS/ml]


201300



Tabel 3. LLoQ tulemused, kõrvalekalde ja TAE-ga, iga analüüsitud taseme kohta.

SIHTMÄRGI KONTS IU/ml

SIHTMÄRGI KONTS

Log10 IU/ml

NeuMoDx 288 Molecular System NeuMoDx 96 Molecular System

Tuvastusmäär Keskmine

konts. Log10 IU/ml

SH Kõrvalekalle TAE Tuvastusmäär Keskmine

konts. Log10 IU/ml

SH Kõrvalekalle TAE

20 1,30 100% 1,29 0,23 0,16 0,63 NA NA NA NA NA

10 1,00 99% 1,07 0,25 0,20 0,71 100% 0,97 0,28 -0,03 0,60

5 0,70 91% 0,89 0,35 0,34 1,04 96% 0,86 0,32 0,17 0,81

2,5 0,40 90% 0,75 0,44 0,51 1,39 93% 0,85 0,45 0,45 1,34

1,25 0,10 68% 0,73 0,41 0,68 1,50 NA NA NA NA NA

Madalaim sihtmärgi tase, mille juures >95% määramine on saavutatud JA TAE ≤ 1,0, on defineeritud kui madalaim kvantifitseerimispiir (Lower Limit of Quantitation, LLoQ). LLoQ on 5,5 IU/ml (0,74 Log10 IU/ml) ja 4,3 IU/ml (0,63 log 10 IU/ml) kasutades 4. rahvusvahelist WHO standardit vastavalt NeuMoDx 288 või 96 Molecular Systems süsteemidega. Põhinedes kõigi genotüüpidega analüüsidel on väidetav LLoQ NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsiga 7,6 IU/ml (0,88 Log10 IU/ml).

LoD ja LLoQ erinevate HBV genotüüpidega Esialgu määrati LoD genotüüp A-ga (4. WHO rahvusvaheline standard) ja lisa analüüsimine tehti juba määratud LoD-i ümber iga ülejäänud 7 genotüübi puhul. NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsiga analüüsiti 36 replikaati, mis vastasid 2X, 1X ja 0,5X LoD ülemise määramispiiri 95% CI (~7 IU/ml) tasemetele. Iga genotüübi iga analüüsitud taseme positiivne protsentmäär tabuleeriti ja kasutati LoD-i arvutamiseks Probit-stiilis analüüsiga. Samuti arvutati nendel tasemetel kogu analüütiline viga. Genotüübi LLoQ-ks arvati madalaim tase 95% positiivse määramisega ja arvutatud TAE-ga ≤ 1,0.

Tabel 4. Analüüsitud HBV genotüübid

GENOTÜÜP LoD [Log10IU/ml] LLoQ [Log10IU/ml]

Genotüüp A 5,2 5,2

Genotüüp B 6,2 6,2

Genotüüp C 3,5 6,2

Genotüüp D 5,2 5,7

Genotüüp E 3,5 3,5

Genotüüp F 5,1 6,2

Genotüüp G 3,5 3,5

Genotüüp H 5,2 7,6

Ülemise kvantifitseerimispiiri (Upper Limit of Quantitation, ULoQ) lineaarsus ja tuvastamismäär Antud uuringu raames kasutati genotüüp A-d teiste genotüüpide esindajana. HBV proovide [analüüsipaneel] üksteist (11) taset töödeldi 6 replikaadina igal tasemel, 2 erineva NeuMoDx Systems süsteemiga ja 3 kriitilise tähtsusega reaktiivi partiiga, et katta nii 8 Log10 suurune määramise vahemik kui ka kriitiliste meditsiiniliste otsustuspunktide lähedased piirkonnad. Analüüsipaneel koosnes HBV positiivsetest kliinilistest näidistest, mis olid lahjendatud eelnevalt skriinitud ja kokku liidetud HBV-negatiivsete plasmaproovidega. 4. WHO rahvusvahelise standardi vastavus saavutati läbi paralleeljoone analüüsi enne lineaaruuringu tegemist. NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi võrdväärsust tõestati kõrgelt korreleeritud tulemustega NeuMoDx 288 Molecular System ja NeuMoDx 96 Molecular System süsteemidega.


201300



Tabel 5. NeuMoDx HBV Quant Assay lineaarsus (hinnatuna genotüüp A-ga)

Sihtmärgi konts. (IU/ml)

Sihtmärgi konts. (Log10 IU/ml)

Keskmine konts. (Log10 IU/ml)

Standardhälve Kõrvalekalle Eeldatav

Lineaarne sobivus

Hälve Mitte-lineaarne

sobivus

1,05E+09 9,02 8,99 0,08 0,06 9,02 -0,04

1,05E+08 8,02 8,05 0,07 0,05 8,02 0,03

1,05E+07 7,02 7,05 0,07 0,06 7,02 0,04

1.05E+06* 6,02 6,05 0,05 0,05 6,02 0,03

1,05E+05 5,02 5,04 0,05 0,04 5,02 0,00

2.82E+04* 4,45 4,43 0,07 0,05 4,45 -0,01

1,05E+04 4,02 3,99 0,09 0,05 4,02 -0,02

2.82E+03* 3,45 3,41 0,07 0,06 3,45 -0,03

1,05E+03 3,02 3,00 0,04 0,04 3,02 -0,03

1,05E+02 2,02 1,99 0,11 0,09 2,02 -0,01

1,05E+01 1,02 1,09 0,29 0,23 1,02 0,06

*Meditsiiniliste otsustuspunktide lähistel

NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsiga oli võimalik kvantifitseerida HBV 8 Log10 lineaarses ulatuse hälbega ±0,22 Log10 IU/ml. Veidi parema sobivusega mitte-lineaarse regressiooni kõvera maksimaalne hälve oli 0,06 Log10 IU/ml. Antud uuringu andmetel põhinedes määrati samuti ülemine kvantifitseerimispiir (Upper Limit of Quantitation, ULoQ) ning see oli 9,02 Log10 IU/ml.

Joonis 4: NeuMoDx HBV Quant Assay lineaarne vahemik. x = Expected Quantitation (eeldatav kvantifikatsioon), y = NeuMoDx Quantitation (NeuMoDx kvantifikatsioon)

y = 1x + 1E-06R² = 0,9977

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Eeldatav kontsentratsioon (Log10 IU/ml)

Neu

Mo

Dx

HB

V A

ssay

ko

nts

entr

atsi

oo

n

(Lo

g 10 IU

/ml)

NeuMoDx HBV Assay lineaarsus


201300



Lineaarsus erinevate genotüüpidega NeuMoDx HBV Assay analüüsi lineaarsust plasmaproovidega, HBV genotüüpide puhul, hinnati analüüsides vähemalt nelja (4) erinevat HBV genotüübi kontsentratsiooni kokkuliidetud HBV-negatiivsete plasmaproovidega. Antud uuringu raames sõltusid HBV sihtmärgi analüüsitud tasemed lähteproovi kontsentratsioonist ja erinesid seega genotüüpide raames. Uuring tehti 6 replikaadina, igal tasemel, iga genotüübiga.

Tabel 6. NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi lineaarsus erinevate genotüüpidega

Genotüüp Lineaarsuse võrrand

y = NeuMoDx HBV Assay analüüsi kvantifitseerimine x = Eeldatud kvantifitseerimine

R2

A y = 1x + 1E-06 0,9977

B y = 1,0129x - 0,0964 0,9975

C y = 1,0250x - 0,0898 0,998

D y = 1,0379x - 0,0896 0,9975

E y = 1,0182x - 0,096 0,9956

F y = 0,9736x + 0,276 0,9906

G y = 1,0547x - 0,0835 0,9813

Joonis 5: NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi lineaarsus erinevate genotüüpidega

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

0 2 4 6 8 10

Neu

Mo

Dx

HB

V A

ssay

ko

nts

entr

atsi

oo

n[L

og 1

0IU

/ml]

Reference HBV Assay kontsentratsioon[Log10 IU/ml]

Linear (Genotype A)

Linear (Genotype B)

Linear (Genotype C)

Linear (Genotype D)

Linear (Genotype E)

Linear (Genotype F)

Linear (Genotype G)

Lineaarne (genotüüp A)

Lineaarne (genotüüp B)

Lineaarne (genotüüp C)

Lineaarne (genotüüp D)

Lineaarne (genotüüp E)

Lineaarne (genotüüp F)

Lineaarne (genotüüp G)


201300



Analüütiline spetsiifilisus ja ristreaktiivsus Analüütilist spetsiifilisust hinnati 32 tavaliselt vere-/plasmaproovide leiduva organismi ja fülogeneetiliselt HBV sarnase organismi ristreaktiivsuse tarbeks skriinimisel. Organismid liideti kokku 4 ja 6 kaupa ning analüüsiti kõrge kontsentratsiooniga. Analüüsitud organismid on toodud tabelis Tabel 7. Ühegi analüüsitud organismi puhul ei täheldatud ristreaktiivsust, mis kinnitab NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi 100% analüütilist spetsiifilisust.

Tabel 7. Analüütilise spetsiifilisuse määramiseks kasutatud patogeenid – ristreaktiivsus

Adenoviirus 2 Dengue V1 A-hepatiit HPV 16, Ilheus (ILHV) Kollapalavik

Adenoviirus 5 Dengue V2 C-hepatiit HPV 18 A-tüüpi gripiviirus Zika viirus

Banzi viirus Dengue V3 Inimese

herpesviirus 6a HSV1 Parvo B19

BK viirus Dengue V4

Inimese herpesviirus 8

HSV 2 Rubella,

Tsütomegaloviirus Epstein-

Barri viirus HIV 1 HTLV 1 St. Louise entsefaliit

VZV Vaccinia

viirus HIV 2 HTLV 2 Lääne-Niiluse viirus

Segavad ained – kommensaalsed organismid NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi uuriti mitte-sihtmärk organismide esinemise segava faktori osas kasutades samu kokkuliidetud organismide proove kui analüütilise spetsiifilisuse analüüsimisel. Organisme uuriti üksikutena või 4–6 organismi kogumina skriinitud HBV negatiivses plasmas, mida rikastati HBV kontrollproovidega kontsentratsiooniga 3,7 Log10 IU/ml. Antud kommensaalsete organismide esinemisel ei täheldatud erilist segavat faktorit, mida väljendas minimaalne kvantifitseerimise erinevus võrreldes kontrollproovidega, mis ei sisaldanud segavaid aineid.

Tabel 8. Segava faktori analüüsimine – kommensaalsed organismid

Keskmine konts. Log10 IU/ml

Kõrvalekalle Log10 IU/ml

Rühm 1 [BK viirus, Tsütomegaloviirus, Epstein Barr-i viirus, Inimese herpesviirus 6a, Inimese herpesviirus 8]

3,51 0,10

Rühm 2 [Adenoviirus 2, Adenoviirus 5, Dengue V2,

Dengue V3, Dengue V4] 3,38 0,22

Rühm 3 [Parvo B19, HTLV 1, HTLV 2, Ilheus (ILHV), Kollapalavik,

Zika viirus] 3,62 0,06

Rühm 4 [HPV 16, HPV 18, HSV 1, HSV 2, Dengue V1]

3,57 0,04

Rühm 5 [St. Louisi entsefaliit, VZV, Vaccinia viirus,

Lääne-Niiluse viirus] 3,57 0,03

HAV 3,58 0,05

Banzi viirus 3,41 0,19

HIV-1 3,47 0,15

HIV-2 3,56 0,05

Rubella 3,16 0,44

A-tüüpi gripiviirus 3,60 0,03

HCV 3,58 0,04

Segavad ained – endogeensed ja eksogeensed ained NeuMoDx HBV Quant Test Strip testriba töötamist hinnati tüüpiliste eksogeensete ja endogeensete segavate ainete juuresolekul HBV kliinilistes plasmaproovides. Nende hulgas on ebanormaalselt kõrged verekomponentide tasemed ja tüüpilised viirusvastased ravimid, mis on klassifitseeritud tabelis Tabel 9. Iga endogeenne ja eksogeenne aine, mis on loetletud tabelis Tabel 10, lisati skriinitud HBV-negatiivsele inimplasma proovile, mida oli rikastatud 3,7 Log10 IU/ml HBV-ga, ja hinnati segava faktori andmeid. Lisaks analüüsiti tavapärase haigusolekuga B-hepatiidi infektsiooniga plasma puhul potentsiaalse segava faktori suhtes.


201300



Tabel 9. Segava faktori analüüsimine – eksogeensed ained (ravimite klassifikatsioonid)

Liidetud ained

Ravim Klassifikatsioon

1

Zidovudiin (ZDV) Pöördtranskriptaasi inhibiitor

Sakvinaviir HIV proteaasi inhibiitor

Ritonaviir HIV proteaasi inhibiitor

Klaritromütsiin Antibiootikum

Interferoon alfa-2a Immuunmodulaator

Interferoon alfa-2b Immuunmodulaator

2

Abakaviirsulfaat Pöördtranskriptaasi inhibiitor

Amprenaviir Proteaasi inhibiitor

Ribaviriin Immuunmodulaator

Entekaviir HBV viirusvastane

Fluoksetiin SSRI antidepressant

Valatsükloviir vesinikkloriid Viirusvastane

3

Tenofoviirdisoproksiil HBV/HIV viirusvastane

Lamivudiin HBV/HIV viirusvastane

Gantsükloviir CMV viirusvastane

Valgantsükloviir CMV viirusvastane

Nevirapiin Pöördtranskriptaasi inhibiitor

4

Efavirens Pöördtranskriptaasi inhibiitor

Lopinaviir Proteaasi inhibiitor

Enfuvirtiid HIV fusiooninhibiitor

Tsiprofloksatsiin Antibiootikum

Paroksetiin SSRI antidepressant

5

Adefoviir (dipivoksiil) Viirusvastane

Asitromütsiin Antibiootikum

Indinaviirsulfaat HIV proteaasi inhibiitor

Sertaliin SSRI antidepressant


201300



Tabel 10. Segava faktori analüüs – eksogeensed ja endogeensed ained

Endogeenne Keskmine konts.

Log10 IU/ml Kõrvalekalle Log10 IU/ml

Hemoglobiin 3,50 0,20

Triglütseriidid 3,51 0,09

Bilirubiin 3,56 0,13

Albumiin 3,51 0,17

Eksogeensed (ravimid) Keskmine konts.


Liidetud ained 1: Zidovudiin (ZDV), Sakvinaviir, Ritonaviir, Klaritromütsiin, Interferoon alfa-2a, Interferoon alfa-2b

3,58 0,08

Liidetud ained 2: Abakaviirsulfaat, Amprenaviir, Ribaviriin, Entekaviir, Fluoksetiin, Valatsükloviir vesinikkloriid

3,56 0,04

Liidetud ained 3: Tenofoviirdisoproksiil, Lamivudiin, Gantsükloviir, Valgantsükloviir, Nevirapiin

3,59 0,06

Liidetud ained 4: Efavirens, Lopinaviir, Enfuvirtiid, Tsiprofloksatsiin, Paroksetiin,

3,60 0,07

Liidetud ained 5: Adefoviir (dipivoksiil), Asitromütsiin, Indinaviirsulfaat, Sertaliin

3,56 0,19

Haigusseisund Keskmine konts.


Tuumavastane antikeha (Antinuclear Antibody, ANA) 3,61 0,10

Süsteemne erütematoosne luupus (Systemic Lupus Erythematosus, SLE) 3,63 0,10

Reumatoidartriit (RA) 3,57 0,09

HCV antikehad 3,58 0,07

HBV antikehad 3,64 0,11

Alkohoolne tsirroos 3,68 0,15

Reumatoidfaktor (RF) 3,63 0,10

Mittealkohoolne steatoos (Non-Alcoholic Steatohepatitis, NASH) 3,49 0,06

Laborisisene täpsus NeuMoDx HBV Quant Test Strip testribade täpsust analüüsiti 8-liikmelise HBV proovide paneeliga, mis katsid genotüüpe A ja C, kasutades kolme NeuMoDx Systems süsteemi 12 päeva jooksul. Hinnati töötsüklisisest, päevasisest ja süsteemi-isest täpsust ning üldine standardhälve oli ≤ 0,22 Log10 IU/ml. Kasutajast sõltuvat täpsust ei kirjeldatud, kuna kasutaja ei mängi süsteemiga NeuMoDx System proovide töötlemisel olulist rolli.

Tabel 11. Laborisisese täpsuse uuringutulemused

PANEELI LIIGE

SIHTMÄRGI KONTS.

[Log10 IU/ml]

KESKMINE KONTS.

[Log10 IU/ml] N Kõrvalekalle

Töötsüklisisene standardhälve

Päevasisene standardhälve

Süsteemisisene standardhälve

Üldine standardhälve

Genotüüp A

7,75 7,89 36 0,14 0,06 0,07 0,07 0,07

5,75 5,83 36 0,11 0,07 0,10 0,10 0,10

3,75 3,70 36 0,11 0,11 0,13 0,15 0,15

1,75 1,54 36 0,23 0,16 0,22 0,22 0,22

Genotüüp C

6,27 6,23 36 0,10 0,08 0,09 0,10 0,10

4,27 4,18 36 0,08 0,08 0,10 0,10 0,10

3,27 3,14 36 0,09 0,08 0,12 0,12 0,12

2,27 2,08 36 0,12 0,12 0,15 0,16 0,16

Partiide vaheline reprodutseeritavus NeuMoDx HBV Quant Test Strip testribade partiide reprodutseeritavust analüüsiti kolme erineva olulise reaktiivi partiiga – NeuMoDx Lysis Buffer 1 lüüsimispuhvriga, NeuMoDx Extraction Plate plaadiga ja NeuMoDx HBV Quant Test Strip testribaga. Töötamise hindamiseks kasutati 8-liikmelise HBV-genotüüpide A ja C paneeli. Analüüsmiseks kasutati kolme reaktiivipartiid kolme NeuMoDx Systems süsteemiga 6 päeva jooksul. Analüüsiti partiide sisest ja vahelist varieeruvust. Maksimaalne üldine kõrvalekalle oli 0,12 Log10 IU/ml ja maksimaalne üldine standardhälve oli 0,24 Log10 IU/ml. Partiide vahelise töö osas ei leitud olulist erinevust kuivõrd kõigi paneeli liikmete kvantifitseerimine jäi konkreetse lubatud hälbe piiridesse.


201300



Tabel 12. Partiide vahelise reprodutseeritavuse uuringutulemused

PANEELI LIIGE

SIHTMÄRGI KONTS. [Log10 IU/ml]

KESKMINE KONTS. [Log10 IU/ml]

N Kõrvalekalle Partiisisene

standardhälve Partiidevaheline standardhälve

Üldine standardhälve

Genotüüp A

8,02 7,99 36 0,03 0,15 0,09 0,17

6,02 5,96 36 0,06 0,17 0,06 0,18

4,02 3,90 36 0,12 0,14 0,09 0,17

2,02 1,92 36 0,10 0,21 0,12 0,24

Genotüüp C

6,27 6,32 36 0,05 0,06 0,08 0,10

4,27 4,31 36 0,04 0,22 0,09 0,24

3,27 3,30 36 0,03 0,20 0,07 0,21

2,27 2,32 36 0,05 0,13 0,13 0,18

Kontrollide efektiivsus NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsiga kaasatud SPC1 efektiivsust hinnati analüüsi NeuMoDx HBV Quant Assay töötlemisetappide vigade või töötlemise inhibeerimise osas kasutades kahte tavapärast HBV genotüüpi (A ja C). Analüüsitud seisundid esindavad kriitilisi töötlemisetappide vigu, mis võivad potentsiaalselt esineda proovide töötlemise ajal ja mida ei pruugita tuvastada NeuMoDx System süsteemi töötlemise jälgimisandurite poolt. SPC1 efektiivsust hinnati taoliste tõrkeseisundite simuleerimisel. Töötlemise puudujäägid, mis omasid olulist mõju HBV tuvastamisele/kvatifitseerimisele, peegeldusid SPC1 sihtmärgi töötlemiselt (inhibiitori esinemine ja pesuetapi puudumine). Seisundite puhul, mil SPC1 amplifitseerimist ei mõjutatud, amplifitseeriti HBV sihtmärki kontrollproovide kvantifkatsiooni piirides 0,2 Log10 IU/ml.

Tabel 13. Proovi töötlemise kontrolli efektiivsus Analüüsitud protsessi

etapi tõrge Proovi töötlemise kontrollproovi

amplifitseerimise olek Sihtmärk HBV

amplifitseerimise olek Analüüsi tulemus

Presence of Inhibitor (Inhibiitori esinemine)

Not Amplified (Amplifitseerimata) Not Amplified

(Amplifitseerimata) Unresolved (Lahendamata)

No Wash Delivered (Pesu puudub)

Not Amplified (Amplifitseerimata) Not Amplified

(Amplifitseerimata) Unresolved (Lahendamata)

No Wash Blowout (Läbipesu puudub)

Amplified (Võimendatud) Amplified (Võimendatud) Positive with Quantitation within 0.2 Log10 IU/mL of Control (Positiivne koos kvantifitseerimisega kontrollkontsentratsiooni 0,2 Log10 IU/ml piires)

Ristsaastumine NeuMoDx HBV Quant Assay ristsaastumise määra hinnati kolme komplekti HBV proovide analüüsimisel, mis sisaldasid kõrge positiivsusega ja negatiivseid proove. Kokku analüüsiti 144 normaalse, HBV-negatiivse inimese EDTA-plasmaproovi replikaati ja 144 kõrge-tiitriga HBV proovi replikaati kontsentratsiooniga 8,0 Log10 IU/ml. Kõik 144 negatiivse proovi replikaati olid negatiivsed, mille tulemusel oli ristsaastumise määr 0%.

Proovi maatriksi samaväärsus Analüüsiti võrdväärsete tulemuste saamist nii etüleendiamiintetraäädikhappe (ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA) kui ka happelise tsitraatdektroosi (acid citrate dextrose, ACD) kogumiskatsutitesse kogutud HBV puhul. Lisaks uuriti värskete ja külmutatud proovide samaväärsust. Ettevõttelt BioIVT, bioloogiliste proovide pakkuja, telliti neljakümne doonori proovid. Need koguti nii EDTA kui ka ACD kogumiskatsutitesse. Need proovipaarid säilitati 4 °C juures ja tarniti analüüsimise asukohta, külmutamata. Saabumisel rikastati neid neljal tasemel HBV-ga ja analüüsiti samaväärsuse osas. Proove rikastati kas HBV genotüüp A või genotüüp C-ga. Pärast esmast rikastamist ja analüüsimist külmutati proovid minimaalselt 24 tunniks. Pärast antud perioodi vältel külmutatuna säilitamist proovid sulatati ja analüüsiti uuesti. Värkete ja külmutatud EDTA ning tsitraadiga proovide samaväärsuse tulemusi hinnati regressiooni analüüsiga. Antud andmete põhjal selgus värskete ja külmutatud proovide ning EDTA ja ACD proovide vaheline kõrgetasemeline samaväärsus.

Tabel 14. Proovitulemuste samaväärsuse regressiooni analüüs

Parameeter[Aktsepteerimise kriteeriumid] Värske vs külmutatud ACD vs K2EDTA

Tõus [0,9 - 1,1] 1,002 0,996

Lõikepunkt [<0,5] -0,031 0,018

Määramise koefitsient [R2>0,95] 0,995 0,993


201300



Proovi stabiilsus HBV-negatiivseid EDTA plasmaproove rikastati tervikliku HBV viirusega kontsentratsioonis 3,7 Log10 IU/ml ja uuriti kolmes erinevas ajapunktis – kohe (aeg 0), pärast 4 tunni möödumist NeuMoDx System süsteemis ja pärast 8 tunni möödumist NeuMoDx System süsteemis. Olulist erinevust toimimisel ei täheldatud, mis viitab sellele, et kuni 8 tunnine säilitamine NeuMoDx System süsteemis on vastuvõetav.

Sarnane analüüs viidi läbi labori külmikus (temperatuurivahemikus 2 kuni 8 °C) kuni 7 päeva säilitatud proovidega ning ka siis ei täheldatud toimimisel erinevusi.

Lõpuks hinnati enne töötlemist temperatuuril ≤ –18 °C kuni 6 kuud säilitatud proove, mis ei näidanud olulisi erinevusi võrreldes värskete proovidega. Külmutamise ja sulatamise tsüklit korrati ning jällegi ei täheldatud erinevusi toimimisel pärast 2 külmutamise/sulatamise tsüklit. Meetodi korrelatsioon NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi kvalitatiivset ja kvantitatiivset toimimist hinnati FDA/CE poolt tunnustatud võrreldavate analüüside vastu lahjendamata HBV infektsioonidega patsientide kliiniliste näidistega. Analüüsimine toimus NeuMoDx siseselt, ühepoolse pimeuuringuna, kolmest iseseisvast referentslaborist pärit kliiniliste näidistega. Ühtekokku koondati kvalitatiivseks analüüsiks 308 HBV-positiivse ja negatiivse proovi tulemused, et arvutada NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi kliiniline sensitiivsus ja spetsiifilisus. Kvalitatiivne analüüs tehti kaasates ja jättes välja positiivsed proovid, mis olid allapoole LLoQ-d kuna selliste madalate proovide klassifitseerimine võib erineda erinevate analüüside vahel. Lineaarse regressiooni loomiseks kasutati ühtekokku mõlema analüüsi jaoks tavapärast 97 HBV-positiivset lineaarsesse vahemikku jäävat kliinilist näidist, et määrata kvatitatiivset toimimist. Lisaks suurepärasele sensitiivsusele ja spetsiifilisusele omas NeuMoDx HBV Quant Test Strip testriba ka väga head kvalitatiivset korrelatsiooni võrreldavate analüüsidega. Tulemustel põhinedes, oli NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi sensitiivsus

hinnanguliselt 100% (CI 96,4–100%) ja spetsiifilisus hinnanguliselt 95,6% (CI 91,9–97,7%). Need 95% konfidentsiaalsusintervallid arvutati kasutades 95% skoori konfidentsiaalsusintervalli meetodil vastavalt juhendile EP12-A2, User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance, Approved Guideline, Vol 28, No 3.6

Tabel 15. NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi kliinilise sensitiivsuse ja spetsiifilisuse näitajad NeuMoDx 288 Molecular System süsteemil

Referentsanalüüs (POS) Referentsanalüüs (NEG) KOKKU

NeuMoDx HBV Quant Assay analüüs (POS)

103 9 112

NeuMoDx HBV Quant Assay analüüs (NEG)

0 196 196

KOKKU 103 205 308

SENSITIIVSUS = 100% 95% CI (96,4–100%) SPETSIIFILISUS = 95,6% 95% CI (91,9–97,7%)

Tabel 16. NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsi kliinilise sensitiivsuse ja spetsiifilisuse näitajad NeuMoDx 288 Molecular System süsteemil välja jäetud <LLoQ proovidega

Referentsanalüüs (POS)

Referentsanalüüs (NEG)

KOKKU


99 5 104


0 196 196

KOKKU 99 201 300

SENSITIIVSUS = 100% 95% CI (96,3–100%) SPETSIIFILISUS = 97,5% 95% CI (94,3–98,9%)


201300



Joonis 6: Kvantitatiivse meetodi korrelatsiooni uuring NeuMoDx HBV Quant Assay analüüsiga

Lisa analüüs tehti NeuMoDx 96 Molecular System süsteemiga kasutades 159 järelejäänud kliinilist plasmaproovi. Nagu ka eelnevalt tehtud NeuMoDx 288-ga analüüside puhul, võrreldi NeuMoDx 96-ga saadud tulemusi FDA ja CE poolt tunnustatud lähte laborite poolt ravistandardi tarbeks kasutatud analüüside tulemustega. Tulemused k.a tõetabelitega, mis sisaldavad sensitiivsust ja spetsiifilisust, on toodud koos 95% CI-dega tabelis Tabel 17.

Tabel 17: Kliinilise toimimise kokkuvõte –NeuMoDx HBV Quant Assay analüüs NeuMoDx 96 Molecular System süsteemiga

Referentsanalüüs (POS) Referentsanalüüs (NEG) KOKKU


60 2 62


1 95 96

KOKKU 61 97 158

SENSITIIVSUS = 98% 95% CI (90–100%) SPETSIIFILISUS = 98% 95% CI (92–100%)

VIITED

1. Mother-to-child transmission of hepatitis B virus in sub-Saharan Africa: time to act. Andersson, Monique I et al..The Lancet Global Health , Volume 3 , Issue 7 , e358 - e359

2. Schillie S, Vellozzi C, Reingold A, et al. Prevention of Hepatitis B Virus Infection in the United States: Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices. MMWR Recomm Rep 2018;67(No. RR-1):1–31. DOI: http://dx.doi.org/10.15585/mmwr.rr6701a1.

3. World Health Organization. Hepatitis B: fact sheet. April 2017. http://www.who.int (last accessed 20 November 2017)

4. Centers for Disease Control and Prevention. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 5th edition. HHS Publication No. (CDC) 21-1112, Revised December 2009

5. And Laboratory Standards Institute (CLSI). Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline – Fourth Edition. CLSI document M29-A4; May 2014

6. Clinical And Laboratory Standards Institute (CLSI). User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline – Second Edition. CLSI document EP12-A2; 2008

KAUBAMÄRGID

NeuMoDx™ on ettevõtte NeuMoDx Molecular, Inc. kaubamärk. NeuDry™ on ettevõtte NeuMoDx Molecular, Inc. kaubamärk. TaqMan® on ettevõtte Roche Molecular Systems, Inc. registreeritud kaubamärk.

Referenčni test HBV [Log10 IU/ml]

Neu

Mo

Dx

HB

V A

ssay

[L

og 1

0 IU

/ml]

y = 1,02x – 0,20 R² = 0,97

http://dx.doi.org/10.15585/mmwr.rr6701a1

http://www.who.int/


201300



SÜMBOLID SÜMBOL TÄHENDUS

Rx only Vaid ettekirjutatud kasutusalal kasutamiseks

Tootja

In vitro diagnostikaks ettenähtud meditsiiniseade

EC esindaja

Katalooginumber

Partii kood

Kõlblik kuni

Temperatuuripiirangud

Niiskuspiirangud

Mitte korduskasutada

Kontroll

Piisav „n“ analüüsi jaoks

Kasutamiseks tutvuge kasutusjuhistega

Hoiatus!

Bioloogilised ohutegurid (potentsiaalselt bioloogiliselt ohtlikud materjalid)

CE-märgis

NeuMoDx Molecular, Inc. 1250 Eisenhower Place Ann Arbor, MI 48108, USA Kontakttelefon: 1-844-527-0111

Patent: www.neumodx.com/patents

Emergo Europe B.V. Prinsessegracht 20 2514 AP, The Hague The Netherlands

2797

http://www.neumodx.com/patents

Documents

NeuMoDx™ HV Quant Test Str ip 201300 KASUTUSJUHISED · 2020-01-17 · B-hepatiit võib põhjustada kas ägedat hepatiiti või võib areneda krooniliseks seisundiks, mille tulemuseks