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Nuevos Retos en Seguridad
Alimentaria:
Preparación de Muestras y Selección
de Columna adecuada
Julian de la Mata
31 de Mayo de 2012
Tendencias de la Industria
Relevancia actual de la Preparación de Muestras
Mayor
Monitorización de
alimentos y medio
ambiente
Se requiere
mayor
rendimiento
de la muestra
Se requiere un método
más simple, robusto y
económico. Laboratorios
acreditados con métodos
validados
Incremento de
la lista de
contaminantes
emergentes y
matrices
Límites de
detección cada
vez más bajos
Uso de sistemas
de LC y GCMS
más sensibles
Dependiente de mayores
grados de clean up en la
etapa de Preparación de
Muestras
Interferencias
difíciles y
necesidad de
detección múltiple
Técnicas genéricas de alta
recuperación . Mínimas
interferencias y supresión
iónica
Bond Elut
SPE
Polimérico
Bond Elut
Plexa
Chem Elut
QuEChERS
Bond Elut
SPE
QuEChERS
Efectos de las interferencias Endógenas
• Cromatografía Pobre
• Problemas mecánicos (partículas, bloqueos)
• Problemas de vida media de Columnas de Líquidos
• Avería del Equipo
• Contaminación Cruzada
• Incremento en el tiempo de análisis/ coste
• Supresión Iónica
• Pérdida global de sensibilidad
¿Métodos de extracción ? ¿Por dónde empezar?
Consideraciones del analito?
•El analito parece polar o apolar
•Los analitos se disuelven en la matriz
•Los analitos contienen grupos iónicos
• Son los compuestos inestables en ácido
o bases
•Cual es el método de análisis ?
• Cual es la concentración del analito en
la muestra
Consideraciones de la matriz?
•La matriz es polar o apolar: (aceite de
oliva u orina?)
• Tiene la matriz alto contenido orgánico o
iónico? (será necesaria la dilución de la
muestra)
• Cual es el tamaño de la muestra?
• Requiere la muestra ajuste de pH?
• Se necesita patrón interno?
• Es necesario filtración o centrifugación?
Triángulo SPE
Analito
Matriz Sorbente
Considerar la Teoría LC
•Los mismos procesos físicos de la cromatografía líquida ocurren en SPE
•Pensar en SPE como un proceso de LC digital
– Analito es ON (retención)
– Analito es OFF (elución)
•No estamos mirando a la separación
•Fase Normal o Reversa?
•Modificador iónico?
Menor cantidad de Partículas: reduce los problemas de presión
Menor formación de material endógeno
Menores LOQs posibles
Métodos fácilmente automatizables
Menos precesos fallidos/menos repeticiones
Menos interrupción del equipo/mantenimiento
Menos coste de disolventes (incluido la eliminación!)
Mayor calidad de datos obtenidos
Ventajas de la preparación de muestra
Determinaciones en alimentos por GC/GCMS
Pesticidas volátiles
PHA’s
PCB’s
PCT’s
PBDE’s
Disolventes residuales
Ácidos grasos
Análisis de volátiles (caracterización de aromas)
Seguridad e higiene en el trabajo(captación activa y pasiva)
Determinaciones en alimentos por HPLC/LC-MS
Pesticidas
Toxinas Bacterianas
Contaminantes
Identificación de desconocidos
Materiales en contacto con los alimentos
Colorantes naturales y artificiales
Antibióticos
Vitaminas Lipo e hidrosolubles
Conservantes y Antioxidantes
Azucares y edulcorantes
Grupos de analitos determinados en alimentos
PCB´s
PDBE´s
Dioxinas
PHA´s
Nitrofuranos
Benzo a pireno
PFO´s
Nitrosaminas
PCT´s
Melamina
3 MCPA
Acrilamida
Contaminantes en alimentación
Nicarbacina
Lasalocid A
Sulfamidas
Sulfonamidas
Ivermectina
Tetraciclinas
Penicilina G
Dexametasona
Virginiamicina
Cloranfenicol
Verde malaquita
Quinolonas
Estreptomicina
Trisolina
Cipro y Norfloxacina
Nitrofuranos
Enrofloxacina
Antibióticos
Putrescina
Cadaverina
Triptamina
Histamina
Agmatina
Tiramina
Aminas heterociclicas:
Quinolina / Quinoxalina
/derivados
Aminas biogénicas
Reglamentos de análisis de contaminantes en
Alimentos cada vez más exigentes
Reglamento (UE) nº 10/2011 de la Comisión de 14 de enero de 2011 sobre materiales y objetos plásticos destinados a entrar en contacto con alimentos.
REGLAMENTO (UE) No 37/2010 DE LA COMISIÓN de 22 de diciembre de 2009 relativo a las sustancias farmacológicamente activas y su clasificación por lo que se refiere a los límites máximos de residuos en los productos alimenticios de origen animal.
REGULATION (EC) No 1333/2008 OF THE EUROPEAN PARLIAMENT AND OF THE COUNCIL of 16 December 2008 on food additives.
REGLAMENTO (CE) No 124/2009 DE LA COMISIÓN de 10 de febrero de 2009 que establece los contenidos máximos de coccidiostáticos e histomonóstatos presentes en los alimentos como resultado de la transferencia inevitable de estas sustancias en los piensos a los que no están destinadas.
COMPENDIO DE MÉTODOS DE ANÁLISIS IDENTIFICADOS COMO IDÓNEOS PARA RESPALDAR LOS LMR DEL CODEX ELABORADO POR EL COMITÉ DEL CODEX SOBRE RESIDUOS DE MEDICAMENTOS VETERINARIOS EN LOS ALIMENTOS
Necesidades de instrumentación.
Se esta abriendo un campo enorme para la implantación de
instrumentos que den respuesta a los nuevos requerimientos
analíticos; que sin duda supondrá un Δ exponencial de la
necesidad de nueva instrumentación para dar respuesta a esta
necesidad, sobre todo
GC-MS(QQQ/QTOF) , HPLC-MS/MS ( QTOF /
QQQ) e ICP-MS
Técnicas de preparación de muestras en analisis
de alimentos en los ultimos 10 años
(SPDE)
LPME MESI
DSPE
(SPACE)
(SFE)
MIPs
Preparación de Muestras en Análisis alimentario
•Preparación de la Muestra
- Extracción L/L sobre soporte sólido(SLE)
- Extracción en fase sólida Estandar(SPE)
- QuEChERS (DSPE)
•Retirada de Interferencias
- Efecto de Matriz
•Extracción del analíto
Efectos de Matriz
Definición de Efectos de Matriz(Matuszewski, 2003)
1. Efecto de Matriz absoluto.
Diferencia entre la respuesta de analitos igualmente
concentrados(patrones)en el disolvente y en extractos de matriz.
Caso 1. Supresión de señal:
Las interferencias compiten con al analito por la ionización y suprimen
la señal del analito
Caso 2.. Aumento de la señal
Las interferencias contribuyen a la señal del analito.
Fase Orgánica
Matriz Acuosa
Extracción L/L clásica
Como mejorar el área de contacto entre la fase acuosa/fase orgánica?
Chem Elut
Fase Acuosa Alta área
superficial
x
x
x
x x
x x
x
x
x
x
x
x
x
Extracción L/L sobre soporte sólido (SLE)
Manual de uso de Chem Elut
PASO 1: Aplicar la
muestra acuosa
sobre el cartucho
seco de Chem Elut
Flujo por Gravedad!
No se necesita vacío !
PASO 2:
Esperar 5-15
minutos
Que ocurre en
la superficie
de Chem Elut?
PASO 3:
Añadir
disolvente
orgánico de
extracción
Que ocurre en
la superficie de
Chem Elut ?
Fase Acuosa Fase
Orgánica
Flujo por Gravedad
No se necesita vacío
Aplicaciones de alimentación (Lutz Alder)
Matrices típicas: pepino, limòn, harina de trigo, avellanas y pasas.
Flujo de trabajo
Añadir agua a 10g
de muestra. Total
presente más
añadida:10mL
Homogeneizar
con 20mL metanol
(+centrifugación)
Añadir solución NaCl a
una alicuota y empapar
en tierra de diatomeas.
Eluir con CH2Cl2
Evaporar a sequedad
y reconstituir en
metanol.
LC-ESI-MS/MS
Pesticidas ácidos
Pesticidas neutros
Método “antíguo”: tierra de diatomeas no
tamponada en cartucho de 5mL
Método Modificado: tierra de diatomeas
tamponada (pH 4.5) en cartucho de 3mL
>100 analitos: 23 clases de sustancias
Carbamates (incl. metabolites) Sulfonyl ureas Organophosphates Other (14 substance classes)
3,4,5-Trimethacarb (Landrin) Amidosulfuron Acephate Atrazin
3-Hydroxycarbofuran Bensulfuron-methyl Demeton-S-methyl Azoxystrobin
Bendiocarb Chlorsulfuron Demeton-S-methyl-sulfon Bromoxynil
Carbaryl Cinosulfuron Dimethoat Clethodim
Carbofuran Flazasulfuron Fosthiazate Clethodim-imin-sulfon
Desmethylformamido-pirimicarb Iodosulfuron Methamidophos Clethodim-imin-sulfoxid
Desmethyl-pirimicarb Metsulfuron-methyl Monocrotophos Clethodim-sulfon
Ethiofencarb Nicosulfuron Omethoat 5-Hydroxy-clethodim-sulfon
Ethiofencarbsulfon Primisulfuron-methyl Oxydemeton-methyl Clethodim-sulfoxid
Ethiofencarbsulfoxid Prosulfuron Vamidothion Cyprodinil
Fenoxycarb Rimsulfuron Daminozid
Furathiocarb Thifensulfuron-methyl Benzimidazoles Desmedipham
Methiocarb (Mercaptodimethur) Triasulfuron 5-Hydroxythiabendazol Fenhexamid
Pirimicarb Tribenuron-methyl Carbendazim Fenpropiomorph
Promecarb Triflusulfuron-methyl Thiabendazol Florasulam
Propamocarb Thiophanat-methyl Fludioxonil
Propoxur Benzoyl ureas Imazalil
Flufenoxuron Urea herbicides Ioxynil
Oxim-carbamates (incl. metabolites) Diflubenzuron Diuron Iprovalicarb
Aldicarb Teflubenzuron Isoproturon Isoxaflutole
Aldicarb-sulfoxid Hexaflumuron Linuron Metalaxyl
Aldoxycarb (Aldicarb-sulfon) Triflumuron Metamitron
Butocarboxim Neonicotinoids Metolachlor
Butocarboxim-sulfoxid Oxyalkanoic acids Imidacloprid Phenmedipham
Butoxycarboxim 2,4-D Thiacloprid Pymetrozin
Methomyl MCPA Pyridat
Oxamyl Mecoprop-P Pyridat Metabolit
Thiodicarb Fluazifop-P-butyl Pyrimethanil
Thiofanox Haloxyfop-ethoxyethyl Quinmerac
Thiofanox-sulfon Haloxyfop-methyl Spiroxamine
Thiofanox-sulfoxid Quizalofop-ethyl Tebuconazol
Tebufenozid
Trabajo realizado por Lutz Alder y Jeannette Klein, BgVV
Berlin
Datos de recuperación
Recoveries of 109 pesticides
Lemon without cleanup at 0.01mg/kg
33
0 1
9
15
33
16
2 0 0 0 00
10
20
30
40
n.m
.
0-2
0%
20-4
0%
40-6
0%
60-8
0%
80-1
00
%
100
-12
0%
120
-14
0%
140
-16
0%
160
-18
0%
180
-20
0%
>20
0%
nu
mb
er
of p
es
tic
ide
s
Recoveries of 109 pesticides Lemon with
ChemElut at 0.01 mg/kg
12
48 10
2116
2 1 2 0 1
40
0
10
20
30
40
n.m
.
0-2
0%
20-4
0%
40-6
0%
60-8
0%
80-1
00%
100
-120
%
120
-140
%
140
-160
%
160
-180
%
180
-200
%
>20
0%
nu
mb
er
of p
es
tic
ide
s
Trabajo desarrollado por Lutz Alder y Jeannette Klein, BgVV Berlin
Excelentes recuperaciones y bajos RSDs
Solamente dos analitos altamente ácidos no se
recuperan
Recuperaciones de 109 pesticidas
Limón sin cleanup a 0.01 mg/kg
Recuperaciones de 109 pesticidas
Limón con ChemElut a 0.01 mg/kg
SPE Polimérico: Extracción en Fase Sólida
Bond Elut Plexa
Un nueva clase de Material
Polimérico SPE
Características Únicas del material polimérico Plexa
1. Superficie Hidroxilada
2. Partículas Monodispersas
Superficie Hidroxilada
Características
• Polímero Hidroxilado (sin función amida)
Ventajas
• Menor unión de interferencias de la matriz
Beneficios:
• Menor Supresión Iónica , que proporciona:
– Precisión Mejorada
– Reproducibilidad Mejorada
– Sensibilidad Mejorada
Característica #2: Partículas Monodispersas
• Las partículas de BE Plexa presentan una distribución
homogénea y sin canaliculos.
Competencia
Característica #2: Partículas Monodispersas
Características
Partículas monodispersas sin canalículos
Ventajas
• Ausencia de fibrillas
– Menor atasco
– Flujo más rápido y reproducible
• Partícula monodispersa
– Empaquetamiento más reproducible de lote a lote
– Flujo más reproducible de lote a lote
Extracción de ß-Agonistas a partir de humor vítreo y Retina en animales
Objetivo del estudio
Evaluar el método de extracción SPE de ß-
agonistas a partir de muestras de humor vítreo y
retina de cerdos con Bond Elut Plexa PCX.
Comparar los resultados con el método en fase
reversa utilizado de rutina en el Laboratorio de
l’Agencia de Salut Publica de Barcelona.
ß-Agonistas son drogas ilegales utilizados como
hormonas de crecimiento en animales. ß-
Agonistas se miden de forma rutinaria en
laboratorios de control alimentario para
comprobar que los animales no han sido tratados
con estas drogas.
Fármacos Analizados
Clenbuterol
Clenproperol
Cimbuterol
Cyclohexylclenbuterol
Brombuterol
Tulobuterol
Fenoterol
Propanolol
Terbutaline
Clenbuterol D9 (IS)
Conclusiones del método de extracción de ß-Agonistas
Recuperaciones obtenidas con Plexa PCX eran dos veces superiores que el método
en fase reversa utilizado previamente.
El ajuste a pH básico del extracto es necesario con el método en fase reversa.
En rutina el método supone 2h/día.
El método Plexa PCX no requiere ajuste de pH. El extracto ácido se aplica
directamente al cartucho.
¿Qué es QuEChERS?
• Quick, Easy, Cheap, Effective, Robust and Safe , QuEChERS
(Rápido, Fácil,Barato,Efectivo, Robusto y Seguro, RaFaBERS)
•Desarrollado conjuntamente por la USFDA (2003) y por las Agencias Reguladoras de
Alimentos Europeas (método prEn 15662: 2007)
• Metodología para una extracción simplificada de un gran número de pesticidas (>250) en
frutas y vegetales
•QuEChERS es un método de preparación de muestra rápido para hacer screening de analitos
de interés, no para concentrar muestra.
•QuEChERS está todavía en los comienzos, y se está adoptando en todo el mundo.
Page 28
Catalogo QuEChERS : Publicación #5990-3562EN
Método Luke o SPE tradicional QuEChERS Beneficio
Tiempo estimado para
procesar 6 muestras (min)
120 30 4x más rápido
Solvente usado (mL) 90 mL 10mL 9 x menos solvente
Desechos clorados (mL) 30 mL Ninguno Más seguro, más
ecológico, menos costo
Equipo especializado, material
de vidrio
Embudo, baño de agua,
contenedores de 200mL ,
evaporador, etc.
Ninguno No se necesitan
consumibles adicionales
Tres Variantes del Método QuEChERS
Dispersion
Extraction
Determinación de Pesticidas en Alimentos
Infantiles por UHPLC/MS/MS (5990-5028EN)
Preparación de Muestra mediante técnica QuEChERS
Analisis mediante UHPLC 1290 Infinity y Triple Quadrupolo
6460
Determinación de pesticidas a nivel de trazas en alimentos
infantiles. La normativa europea establece valores de MRL
(máximum residual level) de 10ug/Kg (ppb)
Los limites de detección de 40 pesticidas analizados fueron
entre 500ng/kg y 10ng/kg (ppt)
Conclusiones
•La preparación de la muestra se realiza usando los kits Agilent
Bond Elut QuEChERS AOAC para la extracción (5982-5755) y
la SPE cleanup dispersiva (5982-5158), con una duración de 20
minutos.
•El tiempo de análisis con el UHPLC 1290 Infinity y el Triple
Cuadrupolo LC/MS 6460A fue de 10 minutos
•Todos los compuestos pueden ser detectados a 0.5ug/kg (ppb)
o inferiores en las muestras, lo que es 20 veces menor que los
MRL exigidos por la regulación europea
Analisis de PCBs en pescados mediante
extracción con QuEChERS y análisis por GC/uECD
(5990-6236)
La extracción de 19 PCBs de una muestra de pescado se
realiza mediante la técnica de QuEChERS
Se realiza un analisis dual con una columna DB-35MS y otra
columna DB-XLB y la detección se hizo con un uECD
El método se calibra con 10, 20, 50, 100, 250 y 400 ng/mL de
PCBs generando excelentes linearidad y reproducibilidad
Se obtuvieron recuperaciones entre 72 y 116% a niveles de
50 y 200 ng/mL (ppb) en la matriz de pescado
Excelente relación señal/ruido para PCBs a
nivel de trazas
Conclusiones de la extraccion de PCBs con
QuEChERS
El método de QuEChERS para muestras grasas proporciona
muestras suficientemente limpias evitando interferencias de la
matriz y manteniendo unos bajos niveles de detección
La utilización de dos columnas DB-35MS y DB-XLB permite la
identificación simultánea y la confirmación de la presencia de
PCBs
Las recuperaciones fueron mayores del 77% con RSD <3 a
50ng/mL (ppb)
Page 35
Aplicaciones QuEChERS en 2012: más alla de los Pesticidas en
Frutas y Vegetales
Aplicación Literatura Kit QuEChERS
usados
Fármacos Veterinarios(antibioticos)
en tejidos animales
5990-5085EN
5990-5086EN, 5990-5395EN
5982-5650
5982-4921
PAHs en Pescado 5990-5441EN, 5990-6668EN
5982-5755
5982-5158
Pesticidas en Aceite de Oliva 5990-5553EN 5982-5550
5982-5122
PAH’s en Suelos (sedimentos) 5990-5452EN , 5990-6324EN
5982-5755
5982-5156
Acrilamidas en Frituras 5990-5988EN , 5990-5940EN 5982-5850
5982-5022
Pesticidas en Alimentos Infantiles 5990-5028EN 5982-5755
5982-5158
PCBs en Pescados y Aceite de
Pescado
5990-6236EN 5982-5755
5982-5158
Hormonas en camarones y gambas 5990-6589EN 5982-5650
5982-4956
Page 36
Aplicaciones QuEChERS en 2012: más alla de los Pesticidas en
Frutas y Vegetales (cont)
Aplicación Literatura Kit QuEChERS
usados
Pesticidas en Te verde 5990-6400EN
5982-5650
5982-5356
Pesticidas en residuos de manzana 5990-3938EN , 5990-4468EN,
5990-3937EN, 5990-4068EN,
5990-4073EN
5982-5650
5982-5021 y 5982-5056
Universal d-SPE. Pesticidas en
lechuga y manzana
5990-6558EN
5982-5755
5982-0028
Pesticidas en Aceites Esenciales 5990-6432EN
Pesticidas planares en espinacas 5990-4247EN 5990-4248EN
5990-4305EN 5990-4395EN
5982-5755
5982-5222
5982-5258
Fármacos en sangre 5990-8789EN 5990-8789EN, 5990-
8789EN
Conclusión: Avances en QuEChERS
La metodología QuEChERS es tan fácil como 1-2-3
La metodología de QuEChERS puede ser usada para
otros residuos además de pesticidas.
Gran cantidad de posibilidades, con una técnica de
preparación de muestra muy simple, “la preparación
justa de muestra”
Técnica relativamente “ecológica” y de bajo costo
comparada con la Extracción Líquido-Líquido y la
Extración en Fase Sólida (SPE), y con altas
recuperaciones
Selección de Columna Adecuada
Criterios de Selección de Columna
Columnas de GC
Columnas de Líquidos
Nueva etapa de Columnas analíticas
Poroshell 120
JW Ultrainert
El objetivo de un análisis:
Máxima Resolución en el mínimo tiempo posible
El objetivo de la cromatografía es proporcionar la máxima
resolución en el mínimo tiempo posible, de manera reproducible
Los factores que afectan a la resolución son
N Longitud de columna, tamaño de partícula(LC), diámetro
interno(GC)
a Química de la fase estacionaria, química de la fase móvil,
temperatura
k Longitud de la columna, fuerza de la fase móvil , temperatura
Rs = √N (a – 1) k
4 a (k+1)
El objetivo de un análisis:
Máxima Resolución en el mínimo tiempo posible
Consideraciones en ColumnasGC :
Fase Estacionaria- Selectividad
Longitud de la Columna- Eficiencia y tiempo de análisis
Diámetro interno de la columna- Resolución.
Consideraciones en ColumnasLC :
Fase Estacionaria- Selectividad
Tamaño de Partícula- Resolución
Longitud de la Columna- Resolución y duración del análisis.
Page 41
min 0 2 4 6 8
Columnas HPLC y UHPLC Agilent Poroshell 120
Columnas Poroshell 120 para HPLC y UHPLC:
• 80-90% de eficicacia de las sub 2um
• A presiones un ~40-50% más bajas
• Con un tamaño de partícula de 2.7um
• Con una frita de entrada de 2um
• Con el doble de resolución de una
columna de 3.5um
• Con un límite de presión de 600 bar
• La partícula tiene un núcleo sólido
(1.7um) y una cubierta exterior porosa
de 0.5um como zona de difusión
Las Columnas Poroshell 120 tienen:
Page 42
Con una frita de 2 um Poroshell 120 no se bloquea
Muestras Complejas- Plasma
Diflusinal in Plasma
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
220
240
260
280
300
320
340
360
380
400
1 501 1001 1501 2001 2501
Injections
Pre
ssu
re
0
20000
40000
60000
80000
100000
120000
140000
160000
180000
200000
Eff
icie
ncy (
N)
End Press
Plates
Columna: Poroshell 120 EC-C18, 3.0 x 50mm, 2.7um LC: Agilent 1200 RRLC (SL)
Muestra: Plasma Precipitado: 2 partes Plasma: 7 Partes 20/80 Agua-MeCN w/0.1 % Ácido Fórmico con 1 Parte de
Diflusinal en 50/50 Agua-MeCN 10 ug/ml (Concentracion Final Diflusinal 1 ug/ml) Agitado y dejado reposar 10 minutos
No Centrifugado/ No Filtrado
Volumen de Inyección: 1ul
Solvente A: Agua w/0.1 % TFA
Solvente B: MeCN w/0.08 % TFA
Flujo 1 ml/min 1 ul inyección
Tiempo % B
0 20
0.5 90
0.6 90
1.1 20
2.5 20
Page 43
'Diflunisal' es un anti-inflamatorio no esteroidal
análogo a la aspirina. desarrollado por Merck Sharp
& Dohme .
Criterios de Ajuste de Métodos USP y FDA de
dimensiones de columna
Parámetro Especificaciones Máximas Comentarios/Ejemplos
Longitud de Columna 70% 250mm 75mm
150mm 50mm
Diámetro Interno de
Columna
25% (FDA ORA-LAB 5.4.5*)
USP – 25% ID Columna puede ajustarse si la
velocidad lineal es constante**
4.6 mm 3.0 mm (-35%)
4.6 mm 2.1 mm (-54%)
3.0 mm 2.1 mm (-30%)
Flow Rate 50%
Volumen de Inyección
Reducir tanto como se necesite–
debe cumplir los límites de
detección y precisión
Si cambia a una columna más
corta , haga el cambio apropiado
en el volumen de inyección
Tamaño de Partícula Reducir hasta el 50%
(no se puede aumentar)
Puede cambiar la longitud de columna y el
tamaño de partícula para mantener la misma
Rs
5um 3.5um (-30%)
5um 2.7um (-46%) *Cambiado en 2/24/09 – Para la copia oficial y actual , ir a
http://www.fda.gov/ScienceResearch/FieldScience/default.htm
** USP 30 Second Supplement Revisions, PF34(5), en proceso.
Ver “ Stimuli article” en Pharmacopeial Forum 2009; 35(6)
Page 44
Comparación de 4.6 x 250 mm 5 um con Poroshell
120 EC-C18 4.6 x 100 mm, 2.7um
min 5 10 15 20 25 30
mAU
0
20
40
60
80
100
9.7
12
11.1
16
11.5
96
12.6
74
15.2
48
16.1
51
16.4
35
20.6
87
23.0
76
29.2
90
min 5 10 15 20 25 30
mAU
0
50
100
150
200
250
1.7
19
2.1
89
2.3
11
2.6
06
3.8
67
4.4
37 4.5
58
5.4
50
5.9
20
7.0
37
Análisis más rápido(columna más corta, flujo más alto)
Mayor sensibilidad(partícula más pequeña,pico más estrecho)
Más optimizado (un análisis más rápido permite ajustar mejor)
Ambos análisis en Agilent 1100 G1315B DAD (bajo 400 bar)
No se requiere cambio en la preparación de muestra, frita de
entrada de 2 micras en ambas columnas.
325 bar
110 bar
Sulfadiazina,
Sulfatiazol
Sulfapiridina
Sulfamerazina,
Sulfametazina,
Sulfametazol,
Sulfametoxipiridazina,
Sulfacloropiridazina
Sulfametoxazol,
Sulfadimetoxina
Tiempo %B
0 8
33 33
34 33
Columna: Eclipse Plus C18
4.6 x 250mm, 5um
Flujo: 1 mL/min
Fase Móvil:
A: 0.1% Ácido Fórmico en Agua
B: 0.1% Ácido Fórmico en ACN
Tiempo %B
0 8
12 33
13.2 33
Columna: 4.6 x 100mm
Poroshell 120 EC-C18,
2.7um
Flujo: 1.85 mL/min
Page 45
Comparación de 4.6 x 250 mm 5 um con Poroshell
120 EC-C18 4.6 x 100 mm, 2.7um
min 5 10 15 20 25 30
mAU
0
20
40
60
80
100
9.7
12
11.1
16
11.5
96
12.6
74
15.2
48
16.1
51
16.4
35
20.6
87
23.0
76
29.2
90
110 bar
5
mAU
0
50
100
150
200
250
1.7
19
2.1
89
2.3
11
2.6
06
3.8
67
4.4
37 4.5
58
5.4
50
5.9
20
7.0
37
325 bar
min
Ver condiciones en diapositiva anterior
Page 46
Mejor Resolución ,
linea base!!
Análisis de Fungicidas y Metabolitos en Zumo de Manzana
por LC/MS/MS usando BE Plexa y Poroshell 120
Resultados en el Análisis de Fungicidas y Metabolitos en
Zumo de Manzana
Publication Part Number: 5991-0050EN
Columnas Agilent J&W GC Ultrainert
Glosario
• Adsorción
‒ La adhesión de los átomos, iones o
moléculas de gas, líquidos ó sólidos
disueltos en una superficie
STUCK!
• Degradación
‒ Desglose de los compuestos a través de
procesos químicos o térmicos en
compuestos más simples / fragmentos
Endrin Endrin aldehyde Endrin ketone
Columnas Agilent J&W Ul Inercia y bajo sangrado
• Las columnas Ultra Inert son las únicas columnas GC en el
mercado que han demostrado proporcionar inercia y bajo
sangrado de columna.
– Un bajo sangrado aumenta la relación señal-ruido, pero si algún
analito es adsorbido por sitios activos en la columna, los resultados
se falsearán.
– Si la columna está bien desactivada, pero el sangrado es alto,
algunas de las señales generadas por los analitos se disminuirán por
la señal del sangrado. De nuevo los resultados serán falseados.
• Solo cuando la columna exhibe bajo sangrado y baja actividad,
proporciona resultados fiables.
Columnas J&W GC/MS Agilent Ultra Inert
Características
1. Altamente inerte para
compuestos activos
2. Riguroso control de calidad
3. Formato de Alta Eficiencia
4. Identica selectividad DB/HP
Ventajas
1. Alta respuesta & mejor forma de
pico
2. Reproducibilidad Columna-a-
columna
3. Análisis rápido
4. Sin modificación del método
Beneficios
1. Mayor precisión de los datos a bajas
concentraciones
2. Seguridad & reducción de costes
3. Mayor productividad & menor coste
4. Escalar con mínima revalidación del método
Análisis de Residuos de Pesticidas en Manzana utilizando
BE Quechers y Columnas GC UI por GC/MS
Publication Part Number: 5990-4073EN
Resultados del Análisis de Residuos de Pesticidas en
Manzana
Conclusiones
Tratamiento de la Muestra Alimentaria
SPE BE Plexa-
Mayor reproducibilidad
Extractos más limpios
SLE , QuEChERS
Métodos sencillos y rápidos para una mayor productivdad
Análisis de la Muestra Alimentaria
GC – Agilent JW Ultrainert
Más inercia para análisis de trazas
Excelente para compuestos activos
LC- Poroshell 120
Fast LC en HPLC convencional
Apto para Muestras sucias
Soporte Técnico Agilent
Teléfono de Atención al Cliente:
901 11 68 90
email: [email protected]
www.agilent.com/chem
