汇报人：张 蕾 导 师：何俏军 教授 杨 波 教授

浙江大学 药学院浙江大学 药学院药理毒理与生化药学研究所药理毒理与生化药学研究所

研究背景研究背景———— ATRAATRA

肿瘤的诱导分化疗法是肿瘤治疗学研究的新领域。诱导分化(induction of differentiation) 是指恶性肿瘤细胞在体内外分化诱导剂的作用下，向正常或接近正常细胞方向分化逆转的现象。

全反式维甲酸 (ATRA) 诱导分化治疗已成为治疗急性早幼粒细胞白血病的首选手段。

维甲酸耐药的机制可能与维甲酸分解代谢作用增强、与胞浆维甲酸结合蛋白的结合增强等作用相关。

MDM2

p53

Apoptosis

Cell cycle arrest

DNA repair

…

Degradation Nuclear export

2 3

1

研究背景研究背景———— NutlinsNutlins

MDM2

p53

Stratege1

Stratege2

Stratege3（ Nutlins）

研究结果及结论研究结果及结论 11

MTT 法 PI 单染结合流式细胞术* Nutlin-1 仅对 p53野生型的白血病细胞具有一定的增殖抑制及凋

亡诱导作用，对 p53突变或缺失的白血病细胞无细胞毒作用。

？ Nutlin-1 是否与 ATRA 具有协同诱导白血病细胞分化的作用？若

有，则其分子机制是否与 p53相关？

研究结果及结论研究结果及结论 22

CD11b%

Co

un

ts

CD11b 表面抗原检测 NBT 还原实验

CD11b 表面抗原检测

台盼蓝染色结合细胞计数

* Nutlin-1 仅对 HL60 或 NB4 细胞株（ p53突变或缺失）具有一

定的增强 ATRA 分化诱导能力的作用，而对 U937 （ p53野生型）无增强作用。

？ Nutlin-1 增强 ATRA 分化诱导能力的作用是否必须在 p53无功能

的细胞株中才能体现？

研究结果及结论研究结果及结论 33

Western Blotting 法 CD11b 表面抗原检测

* Nutlin-1 增强 ATRA 分化诱导能力的作用与 p53无关。

？ Nutlin-1 增强 ATRA 分化诱导能力的作用机制是什么？

研究结果及结论研究结果及结论 44

Real Time PCR 法

JC1 、 Rhodamine123 外排实验

MTT 法

Western Blotting 法

* ATRA 能够在 HL60 及 NB4 细胞中诱导 p-gp 的高表达，但不能

在 p53野生型或 p53缺失的 U937 细胞中诱导 p-gp 的高表达。

？ ATRA 诱导 p-gp 高表达的现象是否与 Nutlin-1 增强 ATRA 分化

诱导能力的作用相关？

研究结果及结论研究结果及结论 55

p-gp ATPase 活性检测

Nutlin-1a Nutlin-1b

Western Blotting 法

Real Time PCR 法

* Nutlin-1 与 ATRA 均为 p-gp 的底物， Nutlin-1 与 ATRA 共同作

用时能够抑制 ATRA 的外排，增强 ATRA 的分化诱导作用。

研究结论研究结论

ATRA

ATRA

ATRA

Nutlin-1

HL60/NB4 cells

p-gp ATRA

Nutlin-1 增强分化能力的作用仅在经 ATRA 诱导高表达 p-gp 的细胞株中发挥，而与 p53 通路无关。

Thank you！