Obtención de Componentes Sanguíneos: Fraccionamiento

Enrique Girona Llobera31 de enero de 2008

Blundell J, The Lancet, 1829

Ca. 1876, Bellevue Hospital, N.Y.

1892. Adler J, “Transfusión de sangre de cabra”, detalle. (Simon Bernheim "Transfusion de sang de chevre et tuberculose pulmonaire")

Dr. Durán, 1937

Dr. Lewisohn, 1915

Fenwal, 1953

Hemoterapia

• Los progresos en la obtención y conservación de los diferentes componentes sanguíneos han hecho posible la administración separada de las distintas fracciones hemáticas

Hemoterapia Moderna

Hemoterapia

1,100Glóbulos Rojos

1,062-1,082Glóbulos Blancos

1,058Plaquetas

1,026Plasma

• Distintas configuraciones bolsas de extracción:– “Arriba-Abajo”, “Arriba-Arriba”

• Filtración prealmacenamiento• Fraccionadores automáticos

Centrifugación

Centrifugación

Suave

Media

Intensa

PRP

CH

Plasma

CLP

CHPL

Plasma

CH

Plasma

CLP

CHPL

Media

Conservación

• Como consecuencia de fraccionar la donación de sangre total.

• Componentes sanguíneos obtenidos precisan condiciones diferentes para su conservación.

Condiciones óptimas de Almacenamiento

• En el caso de componentes celulares(hematíes y plaquetas) el almacenamiento debe asegurar no solo la FUNCIÓN si no también su VIABILIDAD.

• En el caso del plasma y sus derivados, deben conservar la función de las proteínas, especialmente de los factores de coagulación.

Hematíes

Almacenamiento de los hematíes

OBJETIVO:• Mantenimiento de la viabilidad celular:

– Supervivencia de los hematíes a las 24 horas de la transfusión (≥75%).

• Mantenimiento de su función celular:– Capacidad de las células transfundidas para

transportar normalmente el oxígeno a los tejidos.

• Refrigerados a 2º C a 6º C

Conservación de los hematíes

Produce una serie de alteraciones:

“Lesión de almacenamiento”:

1. Cambios bioquímicos2. Cambios biomecánicos

Metabolismo del hematíe

• Dos fosfatos orgánicos desempeñan un papel fundamental:

– 2,3-difosfoglicerato (2,3-DPG)

– Adenosintrifosfato (ATP)

• 2,3-DPG hace que la hemoglobina tenga una mayor afinidad por el O2 cesión menor del mismo a los tejidos.

• Grupos S-nitrosotioles – S nitrosohemoglobinaAcción sobre arteriolas y capilares incremento

flujo sanguíneo

1.Cambios bioquímicos

a) Descenso progresivo en los niveles de 2,3-DPG.

b) Progresivo descenso en la concentración de ATP y cambios morfológicos en los hematíes.

c) Cambios metabólicos: • Preferencia vía glicólisis anaerobia frente a la

pentosa fosfato, perdiendo poder reductor volviéndose más sensible a ataques oxidativos.

1.Cambios Bioquímicos: 2,3-DPG

• Los niveles de 2,3-DPG disminuyenlinealmente las dos primeras semanas de almacenamiento.

• Recuperación rápida de la mitad de los niveles de 2,3-DPG a las 12 horas de transfundidos.

• A las 24 horas niveles normales de 2,3-DPG.

Metabolismo Hematíe

•Energía: ATP

•NADH: Mantiene el hierro reducido (ferroso).

•2,3-Difosfoglicerato: Regula afinidad de la hemoglobina por el oxígeno

90% vía Glicolisis anaerobia

Soluciones de almacenamiento•ACD: Acido-Citrato-Dextrosa (glucosa)

•CPD: Citrato-Fosfato-Dextrosa (glucosa).

Retrasa la pérdida de 2,3-DPG, mejorando la función y ligeramente la supervivencia al incrementar el pH.

•CPD-A: Citrato-Fosfato-Dextrosa (glucosa)-Adenina.

Adenina se desamina en inosina rápidamente →niveles aceptables de ATP.

2.Cambios biomecánicos

a) Pérdida de fosfolípidos de la membrana eritrocitaria y una distribución anómala de los mismos:

– Equinocitos y esferocitos

b) Aumento de la fragilidad osmótica:– Hemólisis de los hematíes

Soluciones aditivas

• CPDA-1; CPDA-2– Incremento cantidad de glucosa

• SAG-M:– Manitol como protector de la membrana

eritrocitaria.• ADSOL:

– Incremento dosis de adenina

Viabilidad de los hematíes Refrigerados

• ACD ó CPD: 21 días• CPDA: 35 días

Soluciones aditivas:

• SAG-M [Salina, adenina, glucosa, manitol]: 42 días.

• ADSOL: 45 días.

Futuro

• Estandarización de los CH• Alargamiento de caducidad actual• Disminución riesgo transfusional por

infección• CH universales

Estandarización

• Disminuir la variabilidad en el contenido de hemoglobina por unidad – Adaptar extracción a la volemia y

hemoglobina/hematocrito del donante.– Eritroféresis

• Conocer la cantidad de hemoglobina de los CHs ajustaría el consumo a las unidades necesarias.

Incremento Caducidad

• 1986 (Meryman, et al.): Posible almacenar hematíes viables durante 100 días.

• Soluciones Aditivas Experimentales (EAS):– NaCl– NaH-CO3

– Na2HPO4

– adenina– glucosa– manitol.

EAS76: Cambios en la concentración de NaCl } 12 semanas

(2003 Hess et al.)

haematologica 2007;92 (Extra 1) 63-66

Disminución riesgo transfusionalpor infección

• Inactivación de patógenos en CHs:– Cerus: S-303, suspendido en Fase III (2003)– Anticuerpos en 2 pacientes transfundidos con

hematíes tratados

CH universales

• Tratamiento enzimático

• PEGilación (PoliEtilenGlicol)

Acción Enzimática

Liu et al. Nature Biotechnology 2007

Plaquetas

Centrifugación

Centrifugación

Suave

Media

Intensa

PRP [PQ]

CH

Plasma

CLP

CHPL

Plasma

CH

Plasma

CLP x 5 + SAP pool

CHPL

Media

Almacenamiento de plaquetas

• El almacenamiento debe asegurar no sólo la FUNCIÓN si no también su VIABILIDAD.

• No contienen ADN ni ARN activación y liberación de sus gránulos incapaces de resintetizarlos.

• Particularmente susceptibles a dañarse si se almacenan de manera incorrecta.

Plaquetas: Cambios Morfológicos por Activación

microtúbulos

1μm

microfilamentosα δ

gránulos

Puntos críticos en la conservación de las plaquetas

• Temperatura• pH• Intercambio gaseoso

Conservación de Plaquetas

• Temperatura: – Frío produce DAÑO PLAQUETARIO las

plaquetas cambian su forma DISCOIDAL por ESFÉRICA.

• 18-24ºC

• Observación del fenómeno del remolino u “ondas muaré” (“Swirling”)

Conservación de Plaquetas

• pH:– Pérdida rápida del glucógeno intraplaquetario

Lactato pH– pH de 6,2 a 6,8 cambios reversibles– pH < 6,2 proceso irreversible:

• Hinchazón• Aglutinación• Lisis

• 6,4-7,4

Conservación de Plaquetas

Intercambio gaseoso:• Bolsa permeable a los gases:

– Oxigenación adecuada– Eliminación del dióxido de carbono resultante del

metabolismo del ácido láctico• Mantenerse en agitación contínua:

– Facilitar el intercambio gaseoso a través de la bolsa.• 24 horas sin agitación, sin daño irreversible

plaquetar.

Conservación de Plaquetas

• Viabilidad plaquetar: 7 días• Periodo máximo de conservación: 5 días

– Riesgo de sepsis en receptores por contaminación bacteriana.

• RD 1088/2005: hasta 7 días si se emplea un método de detección o reducción de contaminación bacteriana.

El Problema:

El problema: contaminación

Inactivación

• Plaquetas:

– Amotosalén (psoraleno S-59), Cerus.– Riboflavina, Gambro.

Intercept (Cerus)

Mirasol (Gambro BCT)

Automatización

Parámetros Fraccionamiento

• Extracción de 450 mL ± 45 mL [+ 63 mL de CPD, (100 mL de SAG-M)]

• Tª conservación sangre recién extraída:– Refrigerada entre +20º C y +24º C :

• Placas de 1,4 butanodiol ( de + 37º C a + 22º C)

• Hasta un máximo de 18-24 horas prefraccionamiento (mínimo 2 horas).

Moltes Gràcies!!!