抗体検査結果解析

移植学会連携全血クロス

福岡赤十字病院 検査部 移植検査課/輸血細胞治療部橋口　裕樹

The 21st JSHI HLA-QC Workshop meeting: Oct 29, 2017:Hirosima

概略

JapaneSociety for Histocompatibility and Immunogenetics　JSHI

移植検査関連委員会 健常者ドナー全血

QCWS部会 21stQCWS 血清

クロスマッチ CDC, FCXM,ICFA

クロスマッチ検査の精度管理

申込方法2017.02 2017.04 2017.04　　　

21stQCWSの参加申込 組織適合性学会 QCWS部会 血清発送 日本移植学会 検査関連委員会 全血発送

参加施設数 QCWS参加施設全血クロス参加施設

17stQCWS

18stQCWS

19stQCWS

20stQCWS

21stQCWS 43

42

40

34

39

77

71

69

73

57（全血クロス 第1回）

（全血クロス 第2回）

（全血クロス 第3回）

（全血クロス 第4回）

（全血クロス 第5回）

参加施設●北海道大学病院● 市立札幌病院● 岩手医科大学附属病院● 秋田大学医学部附属病院● JCHO仙台病院● 福島県立医科大学附属病● 獨協医科大学病院● 自治医科大学附属病院● 千葉東病院亀田総合病院赤十字社 中央血液研究所帝京大学医学部附属病院

● 東京女子医大● 東邦大学 大森病院● 北里大学病院● 東海大学医学部付属病院

● 金沢医科大学病院● 岐阜大学医学● 静岡県立総合病院愛知医科大学

● 名古屋第二赤十字病院JCHO中京病院東海北陸BCC三重大学医学部附属病院

● 京都府立医科大学附属病院京都大学医学部附属病院HLA研究所

● 国立循環器病研究センター● 大阪府立急性期・総合医療広島大学病院

● 県立広島病院● NHO 米子医療センター

● 岡山医療センター中四国BCC

● 愛媛県立衛生環境研究所九州大学病院

● 福岡赤十字病院 熊本赤十字病院

● 熊本大学医学部附属病院● 沖縄県立中部病院

湧永製薬株式会社リプロセルビー・エム・エル

N=43

●日本臓器移植ネットワーク検査センター

参加施設 内訳

日本臓器移植NW 検査センター（27）

移植関連病院（9）

血液センター（3）検査センター（2）メーカー・研究所（各1）

63％

-日本臓器移植ネットワークHLA検査施設-　 全国51施設

47% 53%参加 （27）

不参加 （24）

第2類型移植検査センター 脳死・心停止下移植検査

3施設

第2類型移植検査センター 脳死・心停止下移植検査

15施設

Sample組織適合性学会QCWS　 SH2904　各血清 1ml

日本移植学会 移植関連委員会　　 ACD-A 全血8ml

採血から検査までの日数 N=43

1日目 112日目 203日目 104日目 1無回答 1

生存率 N=37

100% 990% 680% 3確認していない 16無回答 3

（ICFA法 6施設を除く）

細胞分離方法 N=43

免疫磁気ビーズ法 19フィコール比重遠心法 14免疫磁気ビーズ法+フィコール法 3その他 2分離しない（ICFA法） 5

検査方法 -方法別実施率- (重複あり)

21%

79%

53% 47%65%

35%

CDC (18施設)

FCXM (34施設)

ICFA (14施設)

N=43

検査方法 -Tcell , Bcell- (重複あり)

FCXM

N=43

Bcell (n=29)

21%

79%

33%

67%53% 47%

65%

35%

CDC

Tcell (n=34)

Tcell (n=20)

Bcell (n=15)

検査方法 -方法の組合せ- N=43

3

1

4

14

2

6

131法

(21施設)

2法 (19施設)

3法 (3施設)

FCXM

ICFA

CDC

CDC,FCXM

FCXM,ICFA

CDC,ICFA

CDC,FCXM,ICFA

Donor HLA vs. Recipient HLA-AbDonor HLA SH2904 (MFI)

HLA-Ag Allele IgG IgM C1qA24 A*24:02 882 94 0A31 A*31:01 92 172 0B60 B*40:01 34 90 0B61 B*40:02 17 199 0Cw10 C*03:04 25 584 0DR9 DRB1*09:01 220 494 3DR12 DRB1*12:01 18,078 423 1,691

DQA1*03:02 0 0 0DQ9 DQB1*03:03

DP5 DPA1*02:02 83 0 2DPB1*05:01

＊MFIは21stQCWS LABScreen Single Antigen解析用集計データ使用

Donor HLA vs. Recipient HLA-Ab

＊MFIは21stQCWS LABScreen Single Antigen解析用集計データ使用

Tcell クロスマッチ, 陰性 Bcell クロスマッチ, 強陽性

を想定した組合せ

DR12, DSA,MFI=18,078

Results,CDC

100%

CDC-T, N=20

100%

CDC-B, N=15

0-5%

6-10%

11-15%

Positive reaction　（％dead cell）N=19

1

4

14 Score 1

Score 2

Positive reaction　（Score）N=18

1

17

Serum,SH2904

Score 6Score 8

Positive reaction　（Score）N=13

103

41-49%

50-79%

80-100%

Positive reaction　（％dead cell）N=14

11

1

2

●Pos ●Neg●Hold

CDC問題点判定基準がScore（1,2,4,8）と死細胞（％）が混在　

対策判定基準の表記を統一

スコア 死細胞率（％） 判定

1 0-10 陰性2 11-20 偽陰性4 21-40 弱陽性6 41-80 陽性8 8-100 強陽性0 判定不能

リンパ球細胞障害試験の判定基準 移植・輸血検査学より引用

Results,FCXM

3%

97%

FCXM-T, N=33

4%7%

89%

FCXM-B, N=27

<1.0

1.1-1.5 188

Serum,SH2904

<10.010.1-20.020.1-40.0＞40.1 5

57

6

●Pos ●Neg●Hold

LAB No,H2932 Weak Positive

Ratio Sample Median/NC Median

N=26

Ratio Sample Median/NC Median

N=23 No, Ratio cutoff Judhe

H2902 1.73 2.0 Neg

H2915 解析不能 保留

H2926 サンプル不足 保留

FCXM ,Reanalysis

H2902,FCXM-B

Negative → PositiveSample Median /NC Median

Cutoff 2.0 86.6/18.5=4.68

-Flow Jo-

FCXM問題点

判定の使用する値　Median（中央値）, Mean (平均値) 判定の計算方法　　Ratio（割り算）, Subtraction （引き算）　

判定基準の施設間差あり（判定に影響） 技術的要因　

対策

QCWSクロスマッチプロトコル（案）

細胞調整　　　 2.0×103/μLに調整　

補体、染色液　 指定なし 結果　　　　　 陰性コントロールと比較し死細胞の％を結果とする

CDC

FCXM

細胞分離分離方法　　　　 指定なし　 細胞種類　　　　 全血から全リンパ球、Tリンパ球、Bリンパ等 陰性コントロール ドナー血清（血漿）,

細胞取込数　　 　T細胞 5.0x103個以上、B細胞 2.5x103個以上 抗体 　指定なし 機器設定　 内部精度管理を実施後、ルーチンと同じ設定で測定

QCWSプロトコル（案）

CDC-T, N=20 CDC-B, N=15

CDC-T, N=17 CDC-B, N=11

FCXM-T, N=33 FCXM-B,N=27

FCXM-T, N=30 FCXM-B, N=24

各施設プロトコル

一致率比較

100% 100%

100% 100%

7%7%

86%

3%

97%

4%7%

89%

17%

83%

Results,ICFA

100%

ICFA-ClassⅠ, N=15

100%

Serum,SH2904●Pos ●Neg●Hold

ICFA-ClassⅡ, N=13

100%ClassⅡ-1, N=13

100%DR-1, N=8

12%

88%DR-2, N=8

100%

DQ-1, N=13

100%

100%

DQ-2, N=13

DP-1, N=8

DQ DPDRClassⅡ

ClassI

100%

100%

ClassⅠ-1, N=15

ClassⅠ-2, N=15

ClassⅡ MFI, Index

0

100

200

300

400

500

600

700

H2901 H2903-2 H2907 H2909 H2917 H2926 H2938 H2939

MFI�

DR-1,MFI�

0

5

10

15

20

25

H2901 H2903-2 H2907 H2909 H2917 H2926 H2938 H2939

Inde

x�

DR-1,Index�

0

50

100

150

200

250

300

350

400

H2901 H2903-2 H2907 H2909 H2917 H2926 H2938 H2939

MFI�

DR-2,MFI�

0

2

4

6

8

10

12

H2901 H2903-2 H2907 H2909 H2917 H2926 H2938 H2939

Inde

x�

DR-2,Index�

T0A V0A

0

200

400

600

800

1000

1200

1400

H2903-1

H2910

H2921

H2933

H2942

H2901

H2903-2

H2907

H2909

H2917

H2926

H2938

H2939

MFI�

classII-1,MFI

Lot

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

H2903-1

H2910

H2921

H2933

H2942

H2901

H2903-2

H2907

H2909

H2917

H2926

H2938

H2939

Inde

x�

classII-1,Index

Cutoff Index 2.0

1.9

ICFA

原因

問題点

機械間差（キャリブレーションなども含む）　 手技（溶血操作）　

MFI値, Indexを比較すると施設間差は大きい.　 弱陽性の検体で判定に差が出る可能性がある.

対策溶血操作（ACD採血）が不十分 → MFIは低下傾向 PBS洗浄で回避.