Industrial Microbial Testing (IMT)  OneStep Total Bacteria Count (TBC) Protocol 

1.  Sample Collection and Preparation‐Standard methods 

2.  Rehydration of IMT’s OneStep TBC‐85 µl of molecular grade water into TBC tube 

3.  Combination of Sample and TBC per tube‐5 µl of sample ‐5 µl of negative control ‐20 µl of IMT OneStep TBC  

5.  Start New Run in SmartCycler Software‐Stage 1:  95C, 150 sec, off ‐Stage 2:  3‐step setup ‐95C/5 sec, 58C/15 sec “on”, 74C/10 sec for 33 cycles. ‐Stage 3:  Melt Curve default. ‐Set the cycle threshold (ct) value at 30 

6.  Insert Reaction Tubes into SmartCycler‐About 30 minute run time. ‐Presence/Absence and Quantitation 

02182010 03182010  Form: IMT‐1STBC‐Exp 12‐31‐2010 

4.  Spin down Reaction Tubes‐10 seconds