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OTRAS TÉCNICAS DE AMPLIFICACIÓN
SISTEMA DE AMPLIFICACIÓN BASADO EN LA TRANSCRIPCIÓN, REACCIÓN EN CADENA DE LA LIGASA
SISTEMA DE AMPLIFICACIÓN BASADO EN LA TRANSCRIPCIÓN
• TMA es un sistema de amplificación basado en la transcripción del ARN con dos enzimas para producir la reacción– ARN polimerasa– transcriptasa inversa (o reversa).
• TMA es isotérmica, toda la reacción se lleva a cabo a la misma temperatura en un baño de agua o bloque de calor.
• Esto está en contraste con otras reacciones de amplificación como la PCR o LCR que requieren un instrumento termociclador para cambiar rápidamente la temperatura para producir la reacción.
REACCIÓN EN CADENA DE LA LIGASA
• La técnica de la ligasa no está tan desarrollada y es más compleja que la de la polimerasa, además requiere mínimo 1000 fragmentos para poder amplificar, pero este mínimo es suficiente para su aplicación en el diagnóstico prenatal.
• La técnica se utiliza principalmente para el diagnóstico de enfermedades víricas y genéticas.
PROCESO DE LCR
• Cuatro cebadores se alinean en regiones inmediatamente adyacentes al molde.
• Dos de ellos se alinean con la cadena superior.• El segundo par de cebadores es
complementario del primero y se alinea con la cadena opuesta.
• La hibridación entre los cebadores se evita incluyendo ADN portador y una cola 3' en cebadores opuestos.
• Estos cebadores se mezclan con el molde y la ligasa termoestable, y se incuban a 95 °C durante 1 minuto para la desnaturalización, y a continuación a 65 °C durante 4 minutos, para la alineación del cebador y la ligazón.
• Los pasos de desnaturalización y alineación/ligazón se repiten 10-20 ciclos.
• Cuatro cebadores se alinean en regiones inmediatamente adyacentes al molde.
• Dos de ellos se alinean con la cadena superior.• El segundo par de cebadores es complementario
del primero y se alinea con la cadena opuesta.• La hibridación entre los cebadores se evita
incluyendo ADN portador y una cola 3' en cebadores opuestos.
• Los pasos de desnaturalización y alineación/ligazón se repiten 10-20 ciclos.
Estos cebadores se mezclan con el molde y la ligasa termoestable, y se incuban a 95 °C durante 1 minuto para la desnaturalización, y a continuación a 65 °C durante 4 minutos, para la alineación del cebador y la ligazón.
Proceso de amplificación de la reacción en cadena de la ligasa