BAB IPENDAHULUANb. Latar Belakang Teknik Mikropropagasi
merupakan cara perbanyakan tanaman dengan menggunakan bagian-bagian
kecil dari organ atau tanaman. Bagian tersebut dapat ditanam dalam
media yang cocok dengan sifat tanamannya. Bagian-bagian tersebut
akan tumbuh menjadi organ atau terlebih dahulu menjadi kalus. Kalus
merupakan kumpulan sel anorphous yang terjadi dari sel-sel jaringan
yang membelah diri secara terus-menerus. Kalus tersebut dapat
diinisiasi pada media padat maupun cair. Inisiasi kalus pada media
cair biasa juga disebut kultur suspensi. Pada kesempatan kali ini
penulis ingin sedikit berbagi pengalaman tentang praktikum inisiasi
wortel untuk menghasilkan kalus. Yang nantikan akan digunakan untuk
kultur suspensi.
Kultur jaringan tanaman merupakan teknik menumbuh-kembangkan
bagian tanaman, baik berupa sel, jaringan, atau organ dalam kondisi
asebtik secara in-vitro. Teknik ini dicirikan oleh kondisi kultur
yang asebtik, pengggunaan media kultur buatan dengan kandungan
nutrisi lengkap dan ZPT (zat pengatur tumbuh), serta ruang kultur
yang suhu dan pencahayaannya terkontrol. Sel-sel penyusun kalus
berupa sel parenkim yang mempunyai ikatan yang renggang dengan
sel-sel lain. Dalam kultur jaringan, kalus dapat dihasilkan dari
potongan organ yang telah steril, di dalam media yang mengandung
auksin dan kadang-kadang juga sitokinin. Organ tersebut dapat
berupa kambium vaskular, parenkim cadangan makanan, perisikle,
kotiledon, mesofil daun dan jaringan provaskular. Kalus mempunyai
pertumbuhan yang abnormal dan berpotensi untuk berkembang menjadi
akar, tunas dan embrioid yang nantinya akan dapat membentuk
plantlet. Beberapa kalus ada yang mengalami pembentukan lignifikasi
sehingga kalus tersebut mempunyai tekstur yang keras dan kompak.
Namun ada kalus yang tumbuh terpisah-pisah menjadi fragmen-fragmen
yang kecil, kalus yang demikian dikenal dengan kalus remah
(friable). Warna kalus dapat bermacam-macam tergantung dari jenis
sumber eksplan itu diambel, seperti warna kekuning-kuningan, putih,
hijau, kuning kejingga-jingaan (karena adanya pigmen antosianin ini
terdapat pada kalus kortek umbi wortel).
b. tujuanuntuk mengetahui teknik budidaya atau perbanyakan
secara kultur in vitro dengan eksplan wortel.BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
Dalam kultur kalus, kalus homogen yang tersusun atas sel-sel
parenkim jarang dijumpai kecuali pada kultur sel Agave dan Rosa
(Narayanaswany (1977 dalam Dodds & Roberts, 1983). Untuk
memperoleh kalus yang homogen maka harus menggunakan eksplan
jaringan yang mempunyai sel-sel yang seragam. Dalam pertumbuhan
kalus, citodiferensiasi terjadi untuk membentuk elemen trachea,
buluh tapis, sel gabus, sel sekresi dan trikoma. Kambium dan
periderm sebagai contoh dari proses hitogenesis dari kultur kallus.
Anaman kecil dari pembelahan sel-sel membentuk meristemoid atau
nodul vaskular yang nantinya menjadi pusat dari pembentukan tunas
apikal, primordial akar atau embrioid.
Pada umumnya untuk eksplan yang mempunyai kambium tidak perlu
penambahan ZPT untuk menginduksi terbentuknya kalus karena secara
alamiah pada jaringan berbambium yang mengalami luka akan tumbuh
kalus untuk menutupi luka yang terbuka. Namun pada jkasus lain,
menurut Kordan (1959 dalam Dodds & Robert, 1983) keberadaan
kambium di dalam eksplan tertentu dapat menghambat pertumbuhan
kalus bila tanpa penambahan zat pengatur tumbuh eksogen. Penambahan
ZPT tersebut dapat satu macam atau lebih tergantung dari jenis
eksplan yang digunakan. Pembelahan sel di dalam eksplan dapat
terjadi tergantung dari ZPT yang digunakan, seperti: 1) auxin; 2)
sitokinin; 3) auxin dan sitokinin dan 4) ekstrak senyawa organik
komplek alamiah.Tujuan utama dari propagasi secara in-vitro tahap
ini adalah pembuatan kultur dari eksplan yang bebas mikroorganisme
serta inisiasi pertumbuhan baru (Wetherell, 1976). Ditambahkan pula
menurut Yusnita, 2004, bahwa pada tahap ini mengusahakan kultur
yang aseptik atau aksenik. Aseptik berarti bebas dari
mikroorganisme, sedangkan aksenik berarti bebas dari mikroorganisme
yang tidak diinginkan. Dalam tahap ini juga diharapkan bahwa
eksplan yang dikulturkan akan menginisiasi pertumbuhan baru,
sehingga akan memungkinkan dilakukannya pemilihan bagian tanaman
yang tumbuhnya paling kuat,untuk perbanyakan (multiplikasi) pada
kultur tahap selanjutnya (Wetherell, 1976).
Kalus adalah suatu kumpulan sel amorphous yang terjadi dari
sel-sel jaringan yang membelah diri secara terus menerus.
Penelitian pembentukan kalus pada jaringan terluka pertama kali
dilakukan oleh Sinnott pada tahun 1960. Pembentukan kalus pada
jaringan luka dipacu oleh zat pengatur tumbuh auksin dan sitokinin
endogen (Dodds & Roberts, 1983). Secara in vivo, kalus pada
umumnya terbentuk pada bekas-bekas luka akibat serangan infeksi
mikro organisme seperti Agrobacterium tumefaciens, gigitan atau
tusukan serangga dan nematoda. Kalus juga dapat terbentuk sebagai
akibat stress (George & Sherrington, 1984). Kalus yang
diakibatkan oleh hasil dari infeksi bakteri Agrobacterium
tumefaciens disebut tumor.
Tujuan kultur kalus adalah untuk memperoleh kalus dari eksplan
yang diisolasi dan ditumbuhkan dalam lingkungan terkendali. Kalus
diharapkan dapat memperbanyak dirinya (massa selnya) secara terus
menerus. Sel-sel penyusun kalus berupa sel parenkim yang mempunyai
ikatan yang renggang dengan sel-sel lain. Dalam kultur jaringan,
kalus dapat dihasilkan dari potongan organ yang telah steril, di
dalam media yang mengandung auksin dan kadang-kadang juga
sitokinin. Organ tersebut dapat berupa kambium vaskular, parenkhim
cadangan makanan, perisikle, kotiledon, mesofil daun dan jaringan
provaskular. Kalus mempunyai pertumbuhan yang abnormal dan
berpotensi untuk berkembang menjadi akar, tunas dan embrioid yang
nantinya akan dapat membentuk plantlet. Beberapa kalus ada yang
mengalami pembentukan lignifikasi sehingga kalus tersebut mempunyai
tekstur yang keras dan kompak. Namun ada kalus yang tumbuh
terpisah-pisah menjadi fragmen-fragmen yang kecil, kalus yang
demikian dikenal dengan kalus remah (friable). Warna kalus dapat
bermacam-macam tergantung dari jenis sumber eksplan itu diambil,
seperti warna kekuning-kuningan, putih, hijau, atau kuning
kejingga-jingaan. (karena adanya pigmen antosianin ini terdapat
pada kalus kortek umbi wortel).
Kalus dapat diinisiasi dari hampir semua bagian tanaman, tetapi
organ yang berbeda menunjukkan kecepatan pembelahan sel yang
berbeda pula. Jenis tanaman yang menghasilkan kalus, meliputi
dikotil berdaun lebar, monokotil, gymnospermae, pakis dan moss.
Bagian tanaman seperti embrio muda, hipokotil, kotiledon dan batang
muda merupakan bagian yang mudah untuk dediferensiasi dan
menghasilkan kalus. Suatu sifat yang diamati dalam jaringan yang
membentuk kalus adalah bahwa pembelahan sel tidak terjadi pada
semua sel dalam jaringan asal, tetapi hanya sel di lapisan perisfer
yang membelah terus menerus sedangkan sel-sel di tengah tetap
quiscent. Faktor-faktor yang menyebabkan inisiasi pembelahan sel
hanya terbatas di lapisan luar dari jaringan kalus.
BAB III
METODE PRAKTIKUM
a. waktu dan tempatpraktikum ini di laksanakan di lab.
Agroteknologi dan lab. biologib. alat dan bahan Alata. Laminar air
flow
b. Alat diseksi
c. Cawan petri
d. Erlenmeyer ukuran 250 ml dan 500 ml
e. Lampu bunsen
Bahana. Akar/umbi wortel
b. Larutan alkohol 70%
c. Larutan sunclin/bayclin 20%
d. Akuades steril
e. Kertas saring steril
f. Media induksi kalus MS + 0.1 mg/l 2,4-Dc. cara kerja1. Akar
wortel yang tidak cacat dicuci dalam air mengalir untuk
menghilagkan kotoran pada permukaan akar.2. Potong kedua bagian
ujungnya, buat potongan akar menjadi ukuran 6-10 cm lalu masukkan
ke dalam erlenmeyer3. Di dalam laminar air flow, rendam potongan
akar tersebut dengan larutan alkohol 70% selama 5 menit sambil
dikocok4. Buang larutan alkohol dan bilas dengan akuades steril.
Kemudian masukkan larutan sunclin atau bayclin 20%. Rendam selama
15-25 menit sambil dikocok.5. Buang larutan sunclin/bayclin,
kemudian bilas dengan akuades steril 3-5 kali.6. Dengan menggunakan
pinset, angkat potongan akar dan simpan di atas cawan petri yang
diberi alas kertas saring steril.7. Potong melintang akar setebal
3-5 mm, kemudian buat potongan eksplan 5 x 5 mm. Pastikan jaringan
kambium (bagian dalam akar) menjadi bagian potongan eksplan.8.
Pindahkan/tanam eksplan tersebut pada media induksi kalus yang
sudah disiapkan. Setiap botol kultur berisi 4 potongan eksplan.9.
Tutup botol dengan rapat dan simpan diruang inkubasi dalam keadaan
gelap.10. Amati perkembangannya setiap minggunya.BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASANa. hasildari paraktikum yang telah di
lakukan bahwasanya hasil yang di dapat tidak sesui dengan
keinginan. Dari 22 Wortel yang di pakai sebagai eksplan ternyata
tidak tubuh seluruhnya dikarenakan terkontaminasi.b.
pembahasanSebelum mengkulturkan kalus wortel terlebih dahulu
dilakukan pemilihan ekplan. Eksplan yang digunakan untuk induksi
kalurs adalah umbi akarnya, tetapi akan lebih baik lagi jika
menggunakan jaringan kambium sekitarnya. Umbi wortel yang langsung
diambil dari lapangan jauh lebih baik dari pada umbi dari wortel
yang dibeli di pasar. Sterilisasi terhadap umbi wortel yang akan
dipakai sebagai eksplan dalam kultur jaringan sangat penting karena
umbi yang berasal dari tanah umumnya mudah sekali terkontaminasi
dan biasanya sterilsasinya agak sulit. Kontaminasi yang terjadi
pada wortel diakibatkan oleh ruangan yang kurang bersih, media yang
kurang steril atau penutup media kurang rapat, air yang digunakan,
alat-alat yang digunakan dan orang yang melakukan kegiatan. Salah
satu faktor pembatas dalam keberhasilan kultur jaringan adalah
kontaminasi yang dapat terjadi setiap saat dalam masa kultur.
Kontaminasi dapat dari eksplan baik internal maupun eksternal,
organisme kecil yang masuk dalam media, air yang digunakan, botol
kultur atau alat-alat tanaman yang kurang steril, lingkungan kerja
dan ruang kultur yang kotor (spora di udara), kecerobohan dalam
pelaksanaan. Dengan demikian sterilisasi merupakan hal yang sangat
penting dalam kegiatan kultur jaringan. Sterilisasi yang utama
harus dilakukan adalah sterilisasi ruang, alat dan bahan karena
sterilisasi alat dan bahan sangat pengaruh sekali, adapun alatalat
yang perlu di sterilkan sebelum penanaman adalah pinset, gunting,
gagang scapel, petridhis, botol kosong. Kontaminasi oleh jamur
ditandai dengan munculnya benang-benang yang berwarna putih, yang
merupakan miselium jamur. Jamur dapat menginfeksi jaringan secara
sistemik (umum tersebar diseluruh organ) terlihat setelah jaringan
tersebut dipotong dan akan menyebar sehingga jaringan tersebut akan
mati. Sedangkan kontaminasi oleh bakteri ditandai dengan munculnya
bercak-bercak putih pada medium terlihat agak berlendir. Bakteri
lebih sulit dideteksi dibanding jamur, karena selain menginfeksi
secara sistemik bakteri juga akan masuk kedalam ruang antar
sel.
BAB V
KESIMPULANHal terpenting yang harus diperhatikan pada tekhnologi
kultur jaringan tumbuhan ini adalah mempersiapkan medium kultur
dimana medium kultur merupakan faktor terpenting yang menentukan
keberhasilan kultur jaringan tumbuhan. Sebuah medium kultur harus
mengandung makronutrien, mikronutrien, air, gula, asam amino,
vitamin, dan zat pengatur tumbuh. Hal lain yang harus diperhatikan
selain medium kultur adalah sterilisasi bahan-bahan dan alat yang
akan digunakan. Kondisi steril ini mutlak diperlukan untuk mencegah
kultur eksplan tanaman terkontaminasi bakteri atau jamus yang dapat
menghambat perkembangan eksplan.DAFTAR PUSTAKA Muslim, Ahmadi.
2010. Artikel [online] Perbanyakan (Mikropropagasi) Wortel Secara
Kultur Jaringan (In Vitro). Tersedia di
http://mediakulturjaringan.blogspot.com/ diunduh pada Selasa, 22
Maret 2011 pukul 12.10 WIB Permana, Angga. 2008. Skripsi Efek
Diuretik Ekstrak Etanol 70% Daun Wortel (Daucus carota L.) Pada
Tikus Putih Jantan Galur Wistar. Fakutas Farmasi, Universitas
Muhammadiyah Surakarta. Yusuf, Andi.R.F. 2010. Artikel [online]
Kultur Kalus. Tersedia di http://fheeyraredzqiiy.wordpress.com/
diunduh pada Selasa, 22 Maret 2011 pukul 12.20 WIB. Yuwono,
Triwibowo. 2008. Bioteknologi Pertanian. Yogyakarta : Gadjah Mada
University Press.
