PEMERIKSAAN BILIRUBIN DIRECT DAN BILIRUBIN TOTAL

A.    Tujuan                   : Untuk mengetahui kadar Bilirubin Direct (D) dan Bilirubin Total (T)

B.     Metode                  : Jendrassik / Grof

C.     Prinsip                   :          

Bilirubin bereaksi dengan Diazotized Sulphanilic Acid (DSA) membentuk zat warna merah

azo. Absorbans zat warna ini pada 546 nm sebanding dengan konsentrasi bilirubin dalam

sampel. Glucuronides bilirubin yang larut dalam air bereaksi langsung dengan DSA yang

mana albumin yang terkonjugasi dalam bilirubin indirect hanya akan bereaksi dengan DSA,

dibantu adanya accelerator (zat pemercepat).

Bilirubin total = bilirubin direct + bilirubin indirect.

D.    Reaksi                   : Asam sulfanilic + natrium nitrit                                DSA

  Bilirubin +DSA                                                         DIRECT azobilirubin

  Bilirubin + accelerator                                               TOTAL azobilirubin

E.     Bahan                    : Serum atau plasma heparin.

  Hindari hemolisis. Sampel harus terlindungi dari sinar.

  Stabilitas : Bilirubin stabil selama 3 hari bila disimpan terlindung dari  sinar pada 2-8°C.

F.      Reagen                  :

1.      1 x 100 ml reagen Bilirubin Total (tutup putih)

Asam sulfanilic                                               14 mmol/l

Asam hydroclorit                                            250 mmol/l

Caffeine (accelerator)                                     200 mmol/l

Natrium benzoate                                            420 mmol/l

2.      1 x 9 ml reagen T-Nitrit (tutup putih)

untuk pengukuran Bilirubin Total

Natrium nitrit                                                  14 mmol/l

3.      1 x 100 ml reagen Bilirubin Direct (tutup merah)

Asam sulfanilic                                               14 mmol/l

Asam hydroclorit                                            250 mmol/l

4.      1 x 9 ml reagen D-Nitrit (tutup merah)

untuk pengukuran Bilirubin Direct

Natrium nitrit                                                  0.9 mmol/l

G.    Alat                       :

1.      Micropipet

2.      Tip biru dan tip kuning

3.      Tabung reaksi

4.      Fotometer

H.    Cara Kerja             :

a.       Persiapan reagen dan stabilitas

1.      Kedua reagen dan larutan nitrit siap pakai.

2.      Stabil sampai tanggal kadaluarsa bila tidak dibuka dan disimpan pada 15-25°C.

b.      Pemeriksaan

Panjang gelombang     : 546 nm

Celah optik                  : 1 cm

Suhu                            : 20-25°C

Pengukuran                 : terhadap blanko sampel

c.       Prosedur

1.      Bilirubin Total

Pipet ke dalam cuvet Blanko sampel Sampel

Reagen, bilirubin total (1)

Reagen T-Nitrit

1000 µl 1000 µl

- 40 µl

Campur dengan baik, inkubasi selama 5 menit.

Sampel 100 µl 100 µl

Campur, inkubasi pada suhu kamar selama 10 sampai 30 menit.

Ukur absorbans sampel terhadap blanko sampel (∆A546)

2.      Bilirubin Direct

Pipet ke dalam cuvet Blanko sampel Sampel

Reagen, bilirubin direct (3)

Reagen D-Nitrit

1000 µl 1000 µl

- 40 µl

Campur dengan baik, inkubasi selama 2 menit.

Sampel 100 µl 100 µl

Campur, inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit tepat.

Ukur absorbans sampel terhadap blanko sampel (∆A546)

I.       Interpretasi Hasil   :

Linearitas : Pemeriksaan linear sampai 25 mg/dl. Untuk konsentrasi bilirubin melebihi 25

mg/dl, encerkan sampel 1 + 4 dengan garam fisiologis (0.9%) dan ulangi pemeriksaan.

Kalikan hasil dengan 5.

J.       Perhitungan           :

Hitung konsentrasi bilirubin total dan direct dengan menggunakan faktor 13.0

Konsentrasi bilirubin (mg/dl) = ∆A546  x 13.0

(mg/dl) x 17.1 = (µmol/l)

K.    Nilai Rujukan        :

Bilirubin total mg/dl µmol/l

Pada kelahiran, sampai

5 hari, sampai

1 bulan, sampai

Dewasa, sampai

5

12

1.5

1.1

85.5

205.0

25.6

18.8

Bilirubin direct

Dewasa, sampai 0.25 4.3