PENUNTUN PRAKTIKUM
Penuntun PraktikumB I O K I M I A
BLOK VIMetabolisme Karbohidrat, Lipid dan Protein
Oleh
Drs. Sadakata Sinulingga, Apt. M.Kesdr. Yanti Rosita M.Kesdr. H.
Safyuddin, M.BiomedFAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PALEMBANG2010UJI HASIL Metabolisme
Karbohidrat, Lipid dan ProteinTEORI Hasil-hasil pemecahan pada
metabolisme, terbanyak dikeluarkan dari tubuh lewat ginjal bersama
urine. Ini terutama berlaku untuk akhir metabolisme protein yang
mengandung nitrogen. Pada keadaan sakit, sebagian metabolisme
terganggu, ginjal mengeluarkan hasil-hasil pemecahan metabolisme
yang terganggu tersebut, dan asalkan fungsi ginjal cukup baik.
Demikian Juga banyak racun-racun dan obat-obat yang dikeluarkan
lewat urine, baik dalam keadaan tak di ubah atau hasil
pemecahannya. Sehingga dapat ditarik kesimpulan penting dari
pemeriksaan urine. Pemeriksaan urine tidak hanya memberikan
gambaran tentang ada tidaknya penyakit-penyakit ginjal dan
saluran-saluran pembuangannya, namun pada fungsi ginjal yang
baikpun dapat juga diperoleh data penting mengenai
penyakit-penyakit yang terdapat ditempat-tempat lain dalam tubuh.
Karena dari setiap pasien untuk pemeriksaan kimiawi selalu dapat
diperoleh jumlah urine yang cukup banyak. Pemeriksaan urine
seharusnya diutamakan daripada pemeriksaan kimiawi darah, yang
selalu hanya tersedia jumlah sample yang sedikit.
Pengeluaran bahan-bahan kebanyakan boleh dikata tidak tergantung
dari diuresis contoh : seseorang mengeluarkan setiap jam 25 ml
urine dengan kadar protein 10%. Sesudah minum air terjadilah
diuresis air dan urin jernih banyak dikeluarkan dengan berat jenis
rendah, dalam urin ini kadar protein akan turun sampai 0,5%, karena
pengeluaran protein per jam tetap misalnya dalam contoh ini
gram.
Pengeluaran hasil-hasil pemecahan rupanya sepanjang hari
konstan. Hal ini berlaku untuk kreatinin, sepanjang kadarnya dalam
darah konstan, Bahan lain seperti glukosa, protein, kalsium dan
fosfor menunjukkan irama, pada malam hari pengeluaran bahan-bahan
tersebut lebih sedikit dari pada siang hari. CARA MENGAMBIL
URIN
Untuk pemeriksaan rutin laki-laki, urin dapat diambil dengan
jalan biasa , yaitu orang tersebut disuruh kencing, sebaiknya porsi
urin yang dikeluarkan awal dibuang, dan porsi selanjutnya
ditampung.
Untuk wanita juga berlaku hal yang sama, porsi urin yang
dikeluarkan awal dibuang dan baru porsi akhir ditampung.
Semua ini dmaksudkan untuk menghindarkan pencemaran yang berasal
dari saluran kencing sendiri. Pengambilan urin dengan kateter hanya
dilakukan bila ada indikasi karena resiko infeksi saluran kencing
yang besar pada kateterisasi1. Uji glukosa dalam urin secara
BenedictTujuan :
Menetapkan kadar gula urin secara semikuantitatif
Dasar :
Gula mereduksi yaitu gula yang mempunyai gugus aldehid atau
keton bebas, senyawa ini akan merduksi ion kupri menjadi
kuprooksida yang tidak larut dan berwarna merah. Banyaknya endapan
merah yang terbentuk sesuai dengan kadar gula yang terdapat dalam
urin.
Bahan:
1. Urin normal 24 jam dan urin yang mengandung glukosa
2. Larutan Benedict
Cara kerja :
1. Campurlah dalam tabung reaksi 2,5 ml larutan Benedict dan 4
tetes urin
2. Panaskan dalam tangas air mendidih selama 5 menit atau
panaskan langsung hingga mendidih selama 2 menit
3. Dinginkan perlahan-lahan
4. Perhatikan endapan yang terbentuk
5. Simpulkan sesuai table berikut
Warna Penilaian Konsentrasi gula
Biru/hijau keruh - -
Hijau/hijau kekuningan + 1 kurang dari 0,5%
Kuning kehijauan/kuning + 2 0,5 1,0 %
Jingga + 3 1,0 2,0 %
Merah +4 lebih dari 2,0 %
2. Uji Obermeyer
Tujuan : Memeriksa adanya indikan dalam urin
Dasar : Gugus indoksil dioksidasi oleh pereaksi Obermeyer yang
mengandung FeCl3 dala HCl pekat membentuk warna biru indigo yang
larut dalam kloroform.
Bahan dan pereaksi :
1. Urin normal 24 jam
2. Pereaksi Obermeyer
3. KloroformCara kerja1. Masukkan dalam tabung reaksi 8 ml
urin
2. Tambahkan 8 ml pereaksi Obermeyer, diamkan beberapa menit
3. Tambahkan 3 ml kloroform, campur dengan membalik-balik tabung
10 X (jangan dikocok)dapat terjadi emulsi. Kloroform akan
mengekstraksi biru indigo 3. Uji Protein Urin menurut HellerTujuan
:
Memeriksa adanya protein dalam urinDasar : Protein dalam urin
mengalami denaturasi oleh asam nitrat yang tampak sebagai cincin
putih pada perbatasan kedua cairan
Bahan:
1. Urin normal 24 jam dan urin patologis
2. Asam nitrat pekat masukkan dalam buret
Cara kerja :
1. Alirkan dari buret 3 ml asam nitrat pekat perlahan-lahan
kedalam tabung reaksi
2. Dengan memakai pipet Mohr, pelan-pelan tambahkan 3 ml urin
normal atau patologis melalui dinding tabung sehingga kedua cairan
tidak bercampur
3. Perhatikan cincin putih yang terjadi antara dua lapisan
Catatan :
Urea asam urat dan garamnya dapat menghasilkan cincin putih,
tetapi hal ini dapat dibedakan dengan memakai urin yang telah
diencerkan 3 4 X sehingga pengaruh ini dapat dihilangkan.4. Uji
koagulasi protein dalam urin
Tujuan:
Untuk identifikasi protein dalam urinDasar:
Pembentukan presipitat akibat pemanasan urin. Presipitat yang
hilang pada pengasaman menyatakan fosfat, sedangkan presipitat yang
disebabkan oleh protein akan tetap atau bertambah. Pada kelebihan
asam juga akan menyebabkan larutnya protein yang telah
mengendap
Bahan:
1. asam asetat 2%
2. urin jernih
Metode:
- Panaskan 5 ml urin hingga mendidih selama 1-2 menit
- Bila terbentuk endapan, tambahkan 3-5 tetes asam asetat 2%.
Apakah presipitat tersebut hilang atau bertambah? 5. REAKSI
JAFFE
Tujuan:
Untuk identifikasi kreatinin dalam urinBahan :
1. Larutan asam pikrat jenuh, 2. larutan NaOH 10 % larutan HCl
dan 3. larutan glukosa.4. Urin
Metoda :
- Masukkan 5 ml urine kedalam sebuah tabung reaksi dan 5 ml
kedalam tabung lain. - Tambahkan masing-masing 1 ml larutan asam
pikrat jenuh dan 1 ml NaOH 10 %, perhatikan warna merah yang
terbentuk.
- Tambahkan HCl pada salah satu tabung, bandingkan hasilnya pada
tabung yang tidak ditambah HCl. - Bandingkanlah percobaan ini
terhadap larutan glukosa yang ditambah asam pikrat alkalis.
Apakah senyawaan yang terbentuk itu sama ?
Hasil : Terbentuk warna merah bata
Keterangan :Reaksi ini terbentuk berdasarkan pembentukan
tautomer kreatinin pikrat yang berwarna merah, bila kreatinin
direaksikan dengan larutan pikrat alkalis, warna ini akan berubah
menjadi warna kuning apabila larutan diasamkan.Selain asam pikrat,
kreatinin dapat juga diendapkan oleh asam fosfowolframat dan
garam-garam logam berat.
Kreatinin dapat mereduksi pereaksi Fehling, tetapi tidak dapat
mereduksi pereaksi Benedict.
6. UJI MUREKSIDATujuan:
Untuk identifikasi asam urat dalam urin
Bahan :
Larutkan HNO3 pekat, kristal asam urat, larutan amoniak encer
(1/100)
Metoda :
- Letakkan sedikit (0,1 gr) kristal asam urat dalam sebuah cawan
penguap. - Tambahkan 3 tetes asam nitrat, lalu panaskan sehingga
kering pada penangas uap. Perhatikan warna merah yang timbul -
Setelah dingin tambahkan 1 tetes amonik encer (1/100). -
Perhatikanlah warna yang terbentuk.
Hasil : Terbentuk warna merah
Keterangan :
Asam urat dioksidasi oleh asam nitrat pekat membentuk asam
dialurat dan alloksan. Zat-zat terkondensasi dengan amoniak
membentuk mureksida (amonium furfurat) yang berwarna ungu
kemerahan.7. TEST NITROPRUSSIDA (ROTHERA)
Tujuan:
Untuk identifikasi benda keton dalam urinBahan :
1. Kristal amonium sulfat,
2. larutan Na nitroprussida 5%
3. larutan NH4OH pekat dan
4. urin.
Metoda :
- Bubuhkan pada 5 ml urin, kristal amonium sulfat sampai
jenuh.
- Tambahkan 2-3 tetes Na-nitroprussida 5 % yang baru dibuat dan
1-2 ml amonium hidroksida pekat, campur dan biarkan selama setengah
jam.
- Terbentuknya warna ungu permanganat menyatakan adanya zat-zat
keton. Warna coklat tidak berarti positif.Hasil :
Warna ungu yang lambat laun menjadi lebih tua.
BIOKIMIA DARAH
TEORI :Darah merupakan jaringan tubuh yang berbentuk cair, yang
beredar dalam system pembuluh darah. Jumlah darah didalam tubuh
kira-kira 5 7 % dari berat badan atau pada orang dewasa kira-kira
4,5 5 liter. Darah terdiri dari berbagai sel seperti eritrosit atau
sel darah merah (SDM) , sel darah putih (lekosit) dan trombosit.
Eritrosit adalah sel yang terbanyak didalam darah, jumlahnya
mencapai 5 juta butir/ ml , trombosit jumlahnya 250.000 400.000
butir/ml dan lekosit 5.000 10.000 /ml . Fungsi ketiga macam sel ini
berbeda. Sel darah merah berfungsi mengikat dan membawa oksigen
dari paru paru ke seluruh tubuh, serta membawa dan melepaskan CO2
dari seluruh tubuh ke paru. Untuk itu SDM dilengkapi dengan molekul
khusus yang melaksanakan fungsi tersebut dan sekaligus memberi
warna merah pada darah, yaitu hemoglobin (HB).
Hemoglobin adalah suatu protein dengan berat molekul 64.450
didalam hemoglobin terdapat atom besi dalam keadaan tereduksi (
Fe2+) . Dengan bantuan Fe2+ ini hemoglobin dpat mengikat oksigen.
Hemoglobin yang mengikat oksigen disebut hemoglobin teroksidasi
atau oksihemoglobin (HBO2 ) , sedang hemoglobin yang sudah melepas
oksigen disebut hemoglobin tereduksi atau deoksihemoglobin
(deoksiHb )
Peristiwa tersebut dapat dituliskan dengan reaksi sbb :
paru
Hb + O2 =============== HbO2 jaringan
Atom besi dalam hemoglobin dapat teroksidasi bila muatan positif
atom besi menjadi 3 + (Fe3+ ) Hemoglobin dengan besi teroksidasi (
Fe3+) disebut hemoglobin teroksidasi atau methemoglobin (metHb)
atau Hb(Fe3+) . Dalam keadaan ini hemoglobin tidak dapat lagi
mengikat oksigen. Hemoglobin yang ter oksidasi menjadi
methemoglobin akan kehilangan fungsinya. Perubahan Hb menjadi metHb
dapat terjadi karena adanya senyawa peng oksidasi . Bila ini
terjadi dalam tubuh maka dapat timbul akibat yang fatal, misalnya
karena pemberian obat-obatan tertentu terutama pada orang yang
berbakat untuk keadaan tersebut . Selain itu hemoglobin juga dapat
berikatan dengan suatu gas hasil pembakaran tidak sempurna dari
dari suatu bahan bakar yaitu CO (karbon monoksida ) sehingga
terbentuk HbCO . Ikatan hemoglobin dan CO ini 200 kali lebih kuat
dari pada ikatan Hb dengan O2 akibatnya hemoglobin tidak dapat lagi
mengikat membawa dan mendistribusikan O2.
Hemoglobin juga mempunyai sifat seperti enzim peroksidase, ini
berarti hemoglobin dapat mengkatalisis reduksi H2O2 bila ada suatu
reduktor. Berbeda dengan enzim pada hemoglobin sifat ini tidak
hilang setelah pemanasan. Sifat ini dapat digunakan untuk melacak
adanya darah dalam suatu bahan uji. Sifat seperti peroksidase ini
disebabkan oleh adanya gugus hem dalam hemoglobin.
Sel darah merah seperti sel lainnya akan mengkerut dalam larutan
dengan tekanan osmotic yang lebih tinggi (hipertonik) dari tekanan
osmotic plasma. Dalam larutan dengan tekanan osmotic lebih rendah
(hipotonik) maka SDM akan membengkak karena cairan dari luar sel
akan masuk kedalam sel dan kemudian terjadi lisis membran
(hemolisis) . Hemoglobin dari SDM yang mengalami lisis larut dlam
plasma sehingga memberi wrna merah pada plasma. SDM normal akan
mulai mengalami lisis bila dimasukkan dalam NaCl 0,48% dan pada
larutan NaCl 0,33 % terjadi lisis sempurna. SDM juga dapat
mengalami lisis oleh obat-obatan . Struktur membran SDM mengandung
lipid be layer , bila SDM dimasukkan dalam pelarut organic misalnya
: eter, toluene, maka membran SDM akan mengalami lisis karena
larutnya lipid membran sehingga hemoglobin terlepas kedalam
pelarutnya.
1. Uji Oksihemoglobin dan deoksihemoglobin
Tujuan :
Membuktikan bahwa hemoglobin dapat mengikat oksigen menjadi HbO2
dan senyawa ini dapat terurai kembali deoksi Hb dan O2Dasar :
Dalam keadaan tereduksi Fe dalam Hb dapat mengikat dan
melepaskan O2
Dalam lingkungan udara biasa, Hb segera mengikat O2 menjadi Hb
O2 didalam tabung reaksi HbO2 akan melepas O2 pada penambahan
pereaksi Stokes (pereduksi)
Bahan dan pereaksi :
1. Suspensi darah
2. Pereaksi Stokes
3. Larutan Amonium Hidroksida (NH4OH)
Cara kerja :
A. Oksihemoglobin
1. Kedalam tabung reaksi masukkan 2 ml darah dan 6 ml air
suling, campur dengan baik , perhatikan dan catat terbentuknya HbO2
yang berwarna merah , kareana bereaksi dengan oksigen
2. Bagilah menjadi 2 tabung masing-masing 4 ml, tabung yang satu
digunakan sebagai kontrol.
B. Pembentukan deoksihemoglobin
1. Pipetkan kedalam tabung reaksi 2 ml pereaksi Stokes dan
tambahkan NH4OH secukupnya untuk melarutkan endapan yang
terbentuk
2. Pada salah satu tabung yang berisi HbO2 dari percobaan A
teteskan beberapa tetesperekasi Stokes dari percobaan (B 1.)
perhatikan dan catat warna deoksi Hb yang terbentuk dan bandingkan
dengan warna HbO2 dalam tabung yang satu lagi pada percobaan (A.
2.) (tabung kontrol).
C. Pembentukan kembali HbO2 dari deoksi Hb
1. Kocok kuat-kuat tabung yang berisi deoksi Hb tersebut (hasil
percobaan B.2.)
Perhatikan dan catat warna HbO2 yang kembali terbentuk.
O2 yang di ikat oleh Hb berasal dari udara . De oksigenasi dan
re oksigenasi dapat dilakukan berulang-ulang.
2. Pengaruh pelarut organik pada SDM
Tujuan percobaan :Memperlihatkan bahwa membran sel darah merah
dapat mengalami lisis dalam pelarut organik
Dasar Percobaan :Membran sel darah merah (SDM) antara lain
mengandung lipid. Bila SDM dimasukkan ke dalam larutan yang
mengandung pelarut organic, maka membran lipid akan larut, sehingga
terjadi hemolisis.
Bahan dan Pereaksi :
1. Suspensi darah
2. NaCl 0,9%
3. Kloroform
4. Eter
5. Aseton
6. Toluen
7. Alkohol
Cara Percobaan :
1. Kedalam 6 tabung reaksi masing-masing dimasukkan 10 ml NaCl
0,9%
2. Tabung pertama digunakan sebagai kontrol, dan pada ke 5
tabung lainnya tambahkan masing-masing 6 tetes ; kloroform ; eter ;
aseton ; toluene dan alcohol secara ber urutan.
3. Tambahkan ke dalam tiap tabung 2 tetes suspensi darah ,
campur dengan membaliknya perlahan lahan, biarkan setengah jam
(jangan di kocok ). Perhatikan warna yang terbentuk pada larutan
bagian atas dan bandingkan dengan kontrol.
3. Pengaruh pelarut kimia terhadap membran sel darah merahTujuan
Percobaan :Memperlihatkan pengaruh larutan hiper/hipotonik terhadap
membran sel darah merahDasar Percobaan :
SDM akan mengkerut bila berada dalam larutan hipertonik terhadap
tekanan osmotic plasma. Dalam larutan yang hipotonik, cairan dari
luar sel akan masuk ke dalam sel sehingga SDM akan membengkak , dan
akhirnya terjadi hemolisis. Hemoglobin dalam SDM akan larut dalam
larutan, sehingga memberi warna merah jernih pada larutan.
Bahan dan Pereaksi :1. Suspensi darah
2. NaCl 2%
Cara Percobaan :1. Kedalam 10 tabung reaksi isikan campuran
sebagai berikut :
Nomor tabung Air suling (ml) NaCl 2% (ml) % NaCl
1. 10 0
2. 9 1
3. 8 2
4. 7,5 2,5
5. 7 3
6. 6,5 3,5
7. 6 4
8. 5,5 4,5
9. 5 5
10. 4,5 5,5
2. Campur dengan baik
3. Tambahkan 2 tetes suspensi darah ke dalam setiap tabung dan
campur dengan membalikanya perlahan-lahan, diamkan selama 1
jam.
4. Perhatikan dan catat derajat hemolisis pada tiap-tiap tabung
reaksi
4.Pemeriksaan Enzim Katalase dalam Darah
Prinsip :
Enzim katalase ada dalam darah dimana katalase akan memecah H2O2
menjadi air dan O2 , O2 diperlukan oleh tubuh, di klinik H2O2
digunakan untuk membersihkan luka, O2 berfungsi untuk membunuh
kuman-kuman anaerob, sedangkan air untuk membersihkan luka.
Reaksi :katalase2 H2O2 2 H2O + O2
Bahan :
H2O2 10 % , darah
Metoda :
2 3 tetes darah + 1 - 2 tetes H2O2Hasil:
Reaksi positif maka akan tampak busa karena terbebasnya O2 oleh
enzim katalase.SASARAN PEMBELAJARAN
I. PERCOBAAN ENZIM
Mahasiswa mampu ;
1. Mengetahui pengaruh konsentrasi enzim terhadap kecepatan
reaksi
2. Mengetahui pengaruh konsentrasi subtrat terhadap kecepatan
reaksi
3. Mengetahui pengaruh dehidrogenisasi pada reaksi oksidasi
subtrat
4. Mengetahui pengaruh Cl dan pH terhadap aktifitas Ptyalin.
ENZIM
TEORI :Enzim adalah sekelompok protein yang berfungsi sebagai
katalisator untuk berbagai reaksi kimia dalam sIstem biologik.
Hampir semua reaksi kimia dalam sIstem biologis dikatalisis oleh
enzim. Sintesis enzim terjadi di dalam sel dan sebagian besar enzim
dapat di ekstraksi dari sel tanpa merusak fungsinya.
Kepentingan medis enzim : Enzim terdistribusi di tempat-tempat
tertentu didalam sel lebih kurang sesuai dengan golongannya dan
juga fungsinya, sebagai contoh enzim yang berperan dalam sintesis
dan reparasi DNA terletak didalam inti sel. Enzim yang
mengkatalisis berbagai reaksi yang menghasilkan energi secara aerob
terletak dalam mitokondria. Enzim yang berhubungan dengan
biosintesis protein berada bersama ribosom. Dengan demikian reaksi
kimia dalam sel berjalan sangat terarah dan efisien.
Ada beberapa penyakit yang disebabkan oleh abnormalitas sintesis
enzim tertentu, misalnya pada defisiensi enzim glukosa 6 fosfat
dehidrogenase (G6PDH/G6PD). Sel darah merah (SDM) penderita
defisiensi G6PDH ini sangat rentan terhadap pembebanan oksidatif,
misalnya pada pemakaian obat-obatan tertentu dan obat malaria dapat
terjadi hemolisis intravaskuler.
Analisis enzim dalam serum dapat dipakai untuk deteksi penyakit
seperti infark otot jantung, kerusakan jaringan hati, bendungan
saluran empedu, penyakit prostat dll. Dasar penggunaan enzim
sebagai dasar penunjang diagnosis ialah :
1. Pada dasarnya sebagian besar enzim berada dalam sel
2. Enzim tertentu adanya intrasel, bila enzim berada dalam serum
berartiI terjadi kerusakan pada jaringan asalnya.
Penggolongan enzim :
Jumlah enzim ada ribuan macam tapi dapat digolongkan menjadi 6
golongan
1. Oksidoreduktase, kelompok enzim ini mengkatalisis
reaksireaksi redoks.
2. Transferase, kelompok enzim ini mengkatalisis reaksi
pemindahan berbagai gugus misal, amina , karboksil, metil, asil
dll.
3. Hidrolase, kelompok enzim ini mengkatalisis pemutusan ikatan
kovalen sambil mengikat air.
4. Liase, kelompok enzim memutus ikatan kovalen tanpa mengikat
air
5. Isomerase, kelompok enzim ini mengkatalisis reaksi
isomerisasi.
6. Ligase(sintase), kelompok enzim ini mengkatalisis pembentukan
ikatan kovalen.
Kespesifikan enzim dibedakan dalam : kespesifikan optik dan
gugus
Kespesifikan optik tampak pada enzim yang bekerja pada
karbohidrat dan misal hanya bekerja terhadap isomer D bukan L, juga
pada di asam amino dan protein misal hanya bekerja pada isomer
amino L bukan isomer D.
Kespesifikan gugus, hanya pada gugus tertentu misal enzim
alcohol dehidrogenase tidak dapat mengkatalisis reaksi
dehidrogenasi pada senyawa bukan alcohol.
Faktor faktor yang mempengaruhi kerja enzim, seperti protein
lainnya sifat biologis enzim sangat dipengaruhi oleh berbagai
faktor fisika kimia. Enzim bekerja pada kondisi tertentu yang
relatif ketat. Adapun faktor yang mempengaruhi kerja enzim anatar
lain: suhu, pH, oksidasi udara atau senyawa lain, penyinaran UV,
sinar X, alfa beta dan gama.
Disamping itu kecepatan reaksi enzimatik dipengaruhi pula oleh
konsentrasi enzim maupun substratnya.
Pengaruh suhu :
Suhu rendah mendekati titik beku tidak merusak enzim namun enzim
tidak dapat bekerja. Kenaikan suhu lingkungan akan meningkatkan
energi kinetik enzim dan meningkatkan frekuensi benturan antar
molekul enzim dan substrat dan pada suhu tertentu akan mencapai
kecepatan reaksi maksimum, bila suhu ditingkatkan terus maka jumlah
enzim yang aktif akan berkurang karena mengalami denaturasi.
Kecepatan reaksi enzimatik berlangsung maksimal pada suhu optimum.
Enzim pada suhu 37o C optimum dalam tubuh manusia . Sebagian besar
enzim tidak aktif pada pemanasan sampai 60o C karena mengalami
denaturasi.
Pengaruh pH :
Enzim bekerja pada kisaran pH tertentu. Bila dilakukan
pengukuran aktivitas enzim pada beberapa macam pH yang berlainan
maka sebagian besar enzim akan menunjukkan aktivitas maksimum
antara pH 5,0 9,0. Kecepatan reaksi enzimatik berlangsung maksimal
pada pH optimum.
Ada enzim yang mempunyai pH optimum sangat rendah yaitu pepsin,
pH optimum pepsin adalah 2. Pada pH yang jauh diluar pH optimum
enzim akan terdenaturasi. Selain itu pada keadaan ini baik enzim
maupun substrat dapat mengalami perubahan muatan listrik yang
mengakibatkan enzim tidak dapat berikatan dengan substrat.Pengaruh
konsentrasi enzim
Peningkatan konsentrasi enzim akan meningkatkan reaksi
enzimatik. Dapat dikatakan bahwa kecepatan reaksi enzimatik (v)
berbanding lurus dengan konsentrasi enzim (E) makin besar
konsentrasi enzim reaksi enzimatik makin cepat
Pengaruh konsentrasi substrat :
Pada suatu reaksi enzimatik bila konsentrasi substrat diperbesar
sedangkan konsentrasi lainnya tetap, maka kecepatan reaksi (v) akan
meningkat samapai suatu batas kecepatan maksimum (V). Pada titik
maksimum ini enzim telah jenuh dengan substrat.
Dalam suatu reaksi enzimatik, enzim akan mengikat substrat
membentuk komplek enzim substrat (ES) kemudian komplek ini akan
terurai menjadi enzim (E) dan produk (P) makin banyak komplek (ES)
terbentuk makin cepat reaksi berlangsung sampai batas kejenuhan
(ES). Pada konsentrasi substrat (S) melampaui batas kejenuhan
kecepatan reaksi akan konstan, dalam keadaan ini seluruh enzim
sudah berada dalam bentuk komplek (ES) artinya penambahan jumlah
(S) tidak menambah jumlah (ES).
1. Pengaruh konsentrasi enzim Terhadap kecepatan reaksi
Tujuan :
Membuktikan bahwa kecepatan reaksi enzimatik berbanding lurus
dengan konsentrasi enzim Dasar :
Pada konsentrasi substrat tertentu, penambahan enzim dengan
konsentrasi bertingkat akan meningkatkan terbentuknya jumlah
komplek enzimsubstrat, sehingga jumlah produk yang terbentuk juga
meningkat.
Bahan dan pereaksi :
1. Susu
2. Larutan enzim protease ( pepsin 0,5% , atau bromelin)
3. Penangas air
Cara :
1. Siapkan penangas air dengan suhu 37o C letakkan ke dalamnya
sebuah tabung reaksi berisi 15 ml susu
2. Selain itu letakkan juga di dalamnya 3 tabung reaksi
masing-masing berisi 1, 0 ml enzim protease, 0,5 ml enzim protease
+ 0,5 ml air , 0,25 ml enzim protease +, 0,75 ml air
3. Setelah di inkubasi selama 5 menit pipetkan masing-masing 5
ml susu hangat ke dalam 3 tabung reaksi yang berisi enzim protease
diatas
4. Lakukan satu demi satu jangan serentak, campurkan isi tabung
dengan baik dan cepat, amati penggumpalan susu dalam hitungan detik
dari tiap-tiap tabung.2. Pengaruh konsentrasi substrat terhadap
Kecepatan reaksi
Tujuan :
Membuktikan bahwa kecepatan reaksi enzimatik sampai batas
tertentu dipengaruhi oleh konsentrasi substrat.Dasar :
Penambahan substrat dengan konsentrasi meningkat sampai
konsentarsi tertentu akan meningkatkan kecepatan reaksi enzimatik
hingga mencapai kecepatan maksimum . Penambahan substrat setelah
konsentrasi tersebut tidak akan meningkatkan kecepatan reaksi
enzim, sebab telah melampaui titik jenuh enzim.Bahan dan pereaksi
:
1. Susu
2. Larutan enzim protease (pepsin 0,5% atau bromelin)
Cara :
1. Siapkan 3 tabung reaksi bersih dan kering, masukkan ke
dalamnya pada tabung pertama 5 ml susu, tabung kedua 4 ml susu + 1
ml air, tabung ketiga 3 ml susu dan 2 ml air. Siapkan juga I tabung
reaksi berisi 3 ml enzim.
2. Letakkan keempat tabung dalam penangas air 37o C selama 5
menit.
3. Pipetkan 1 ml larutan enzim ke dalam masing-masing tabung di
atas dan amati waktu penggumpal-pengumpalanan susu pada tiap
tabung, lakukan satu persatu jangan serentak.
4. Catatlah waktu yang diperlukan untuk penggumpalan susu dalam
hitungan detik.
3. Uji Schardinger
Tujuan :
1. Memperlihatkan bahwa oksidasi dapat terjadi melalui
dehidrogenasi suatu substrat, dalam hal ini formaldehida
2. Memperlihatkan adanya enzim dehidrogenase aerob, yaitu
aldehide dehidrogenase dalam susu segar
Dasar :
Aldehid dehidrogenasi mengoksidasi formaldehida dengan cara
melepas hydrogen. Hidrogen yang terbentuk dapat dipindahkan
langsung ke oksigen udara menjadi H2O2 atau suatu senyawa penerima
misalnya riboflavin atau biru metilen.
Pada akhirnya senyawa penerima yang tereduksi tersebut akan
menyerahkan hidrogen ke oksigen udara membentuk H2O2. Hal ini
tampak jelas bila menggunakan biru metilen sebagai penerima
hidrogen . Biru metilen tereduksi tidak berwarna (leuko biru
metilen). Pada permukaan larutan susu akan teroksidasi kembali
menjadi biru karena ada kontak dengan udara.Bahan dan pereaksi
:
1. Susu segar dan susu pasteurisasi
2. Larutan biru metilen 0,02%
3. Larutan formaldehida 0,4%
Cara :
1. Siapkan 2 tabung reaksi, satu tabung diisi 5 ml susu segar,
tabung kedua diisi 5 ml susu pasteurisasi
2. Kemudian tambahkan berturut-turut 1 ml biru metilen dan 1 ml
formal dehide pada masing-masing tabung.
3. Campur dengan baik dan masukkan penangas air suhu 60 65
oC
4. Catat apa yang terjadi.
Pertanyaan :
1. Tulis reaksi dehidrogenasi formal dehida menjadi asam format
!
2. Mengapa susu pasteurisasi memberi uji Schardinger berbeda
?
4. AKTIVITAS PTYALIN DENGAN ADANYA Cl
Bahan:
Lar. Amilum 1 % lar. Jodium encer, lar.liur.
Metoda:
Cara pengumpulan larutan liur:
Setelah berkumur-kumur dengan air, kunyah sedikit lilin parafin
untuk memacu sekresi saliva. Tampung saliva tsb dalam beker glas
kecil, cairkan dengan sedikit aquades kemudian disaring
Cara melakukan :
1. l NaCl 1 % + 3 ml lar. amilum 1 % + 1 tetes lar. Jodium encer
+ 1ml lar.Liur
2. l HCl 1 N+ 3 ml lar. amilum 1 % + 1 tetes lar. Jodium encer +
1ml lar Liur
3. 1 ml Aquades + 3 ml lar. amilum 1 % + 1 tetes lar. Jodium
encer + 1ml lar. Liur
Lihat ada tidaknya perubahan warna dan berapa lama terjadi
perubahan.
Keterangan :
-Air liur mengandung ptialin (amilase) yang menghidrolisis
amilum menjadi dekstrin dan maltosa
Larutan amilum bila ditetesi jodium akan berwarna biru tua yang
khas untuk amilum Hidrolisa amilum Reaksi jodium
Amilum biru
Amilodekstrin + maltosa biru
Eritrodekstrin + maltosa merah anggur
Akroodektrin + maltosa tak berwarna
Maltosa tak berwarna
Ptyalin seperti enzim-enzim lain mempunyai pH optimum, inhibitor
dan aktivatornya sendirisendiri:
- pH optimum 6-7 ( kira-kira 6,8)
- Aktivator Cl-
- NaCl menyebabkan suasana yang baik unutk aktivitas ptyalin
karena adanya aktivator ion Cl, tetapi pH tetap netral . Terlihat
pada percobaan ini hilangnya warna paling cepat.
- HCl menyebabkan larutan terlalu asam, sehingga ptyalin tidak
aktif terlihat pada percobaan warna tidak hilang.
- Aquades mengandung Cl, dan pH Aquades netral. Karena hanya
mendapatkan sedikit Cl terlihat disini diperlukan waktu lebih
lama.
Perhatian Aquades yang baru bersifat netral bila didiamkan pH
akan berubah.
SASARAN PEMBELAJARAN
II. PERCOBAAN KARBOHIDRAT, LIPID DAN PROTEIN
Mahasiswa mampu ;
1. Menetapkan kadar glukosa urin secara semi kuantitatip
2. Mengetahui cara identifikasi zat keton di dalam urin
3. Mengetahui cara identifikasi kreatinin di dalam urin
4. Mengetahui cara identifikasi asam urat di dalam urin
KARBOHIDRAT, LIPID DAN PROTEIN
1. UJI BENEDICT
Tujuan : Menetapkan kadar gula urine secara semikuantitatif.
Dasar :
Gula mereduksi yaitu gula yang mempunyai gugus aldehid atau
keton bebas, senyawa ini akan mereduksi ion kupri menjadi
kuprooksida yang tidak larut dan berwarna merah. Banyaknya endapan
merah yang terbentuk sesuai dengan kadar gula yang terdapat dalam
urine.
Bahan dan alat-alat:
1. Urine normal 24 jam yang mengandung glukosa
2. Larutan Benedict
3. Pipet tetes
4. Alat pemanas air/tangas air
5. Pengatur waktu
Cara kerja:
1. Campurlah dalam tabung reaksi 2.5 ml lar. Benedict dan 4
tetes urin.
2. Panaskan dalam tangas air mendidih selama 5 menit atau
panaskan langsung hingga mendidih selama 2 menit.
3. dinginkan perlahan-lahan
4. perhatikan endapan yang terbentuk
5. simpulkan sesuai dengan tabel berikut:
WarnaPenilaianKonsentrasi
Biru/Hijau keruh
Hijau/Hijau kekuningan
Kuning kehijauan/Kuning
Jingga
Merah-
+ 1
+ 2
+ 3
+ 4-
Kurang dari 0.5 %
0.5 - 1.0 %
1.0 - 2.0 %
Lebih dari 2.0 %
2. TEST NITROPRUSSIDA (ROTHERA)
Bahan :
Kristal amonium sulfat, larutan Na nitroprussida 5% larutan
NH4OH pekat dan urin.
Metoda :
Bubuhkan pada 5 ml urin, kristal amonium sulfat sampai jenuh.
Tambahkan 2-3 tetes Na-nitroprussida 5 % yang baru dibuat dan 1-2
ml amonium hidroksida pekat, campur dan biarkan selama setengah
jam. Terbentuknya warna ungu permanganat menyatakan adanya zat-zat
keton. Warna coklat tidak berarti positif.
Hasil :
Warna ungu yang lambat laun menjadi lebih tua.
3. REAKSI JAFFE
Bahan :
Larutan asam pikrat jenuh, larutan NaOH 10 % larutan HCl dan
larutan glukosa.
Metoda :
Masukkan 5 ml urine kedalam sebuah tabung reaksi dan 5 ml
kedalam tabung lain. Tambahkan masing-masing larutan asam pikrat
jenuh dan 1 ml NaOH 10 %, perhatikan warna merah yang
terbentuk.
Tambahkan HCl pada salah satu tabung, bandingkan hasilnya pada
tabung yang tidak ditambah HCl. Bandingkanlah percobaan ini
terhadap larutan glukosa yang ditambah asam pikrat alkalis.
Apakah senyawaan yang terbentuk itu sama ?
Hasil : Terbentuk warna merah bata
Keterangan :Reaksi ini terbentuk berdasarkan pembentukan
tautomer kreatinin pikrat yang berwarna merah, bila kreatinin
direaksikan dengan larutan pikrat alkalis, warna ini akan berubah
menjadi warna kuning apabila larutan diasamkan.Selain asam pikrat,
kreatinin dapat juga diendapkan oleh asam fosfowolframat dan
garam-garam logam berat.
Kreatinin dapat mereduksi pereaksi Fehling, tetapi tidak dapat
mereduksi pereaksi Benedict.
4. ASAM URAT (Uji Mureksida) Bahan :
Larutkan HNO3 pekat, kristal asam urat, larutan amoniak encer
(1/100)
Metoda :
Letakkan sedikit (0,1 gr) kristal asam urat dalam sebuah cawan
penguap. Tambahkan 3 tetes asam nitrat, lalu panaskan sehingga
kering pada penangas uap. Perhatikan warna merah yang timbul
Setelah dingin tambahkan 1 tetes amonik encer (1/100).
Perhatikanlah warna yang terbentuk.
Hasil : Terbentuk warna merah
Keterangan :
Asam urat dioksidasi oleh asam nitrat pekat membentuk asam
dialurat dan alloksan. Zat-zat terkondensasi dengan amoniak
membentuk mureksida (amonium furfurat) yang berwarna ungu
kemerahan.
SASARAN PEMBELAJARAN
III. DARAH
Mahasiswa mampu ;
1. Mengetahui proses oksigenasi dan dioksigenasi pada sel darah
merah.
2. Mengetahui pengaruh pelarut organik pada integritas sel darah
merah.
3. Mengetahui peran enzim katalase dalam darah.
TEORI :Darah merupakan jaringan tubuh yang berbentuk cair, yang
beredar dalam sistem pembuluh darah. Jumlah darah didalam tubuh
kira-kira 5 7 % dari berat badan atau pada orang dewasa kira-kira
4,5 5 liter. Darah terdiri dari berbagai sel seperti eritrosit atau
sel darah merah (SDM), sel darah putih (lekosit) dan trombosit.
Eritrosit adalah sel yang terbanyak didalam darah, jumlahnya
mencapai 5 juta butir/ ml, trombosit jumlahnya 250.000 400.000
butir/ml dan lekosit 5.000 10.000 /ml. Fungsi ketiga macam sel ini
berbeda. Sel darah merah berfungsi mengikat dan membawa oksigen
dari paru- paru ke seluruh tubuh, serta membawa dan melepaskan CO2
dari seluruh tubuh ke paru. Untuk itu SDM dilengkapi dengan molekul
khusus yang melaksanakan fungsi tersebut dan sekaligus memberi
warna merah pada darah, yaitu hemoglobin (Hb).
Hemoglobin adalah suatu protein dengan berat molekul 64.450
didalam hemoglobin terdapat atom besi dalam keadaan tereduksi (
Fe2+) . Dengan bantuan Fe2+ ini hemoglobin dpat mengikat oksigen.
Hemoglobin yang mengikat oksigen disebut hemoglobin teroksidasi
atau oksihemoglobin (HbO2), sedang hemoglobin yang sudah melepas
oksigen disebut hemoglobin tereduksi atau deoksihemoglobin
(deoksiHb )
Peristiwa tersebut dapat dituliskan dengan reaksi sbb :
paru
Hb + O2 HbO2 jaringan
Atom besi dalam hemoglobin dapat teroksidasi bila muatan positif
atom besi menjadi 3+ (Fe3+). Hemoglobin dengan besi teroksidasi (
Fe3+) disebut hemoglobin teroksidasi atau methemoglobin (metHb)
atau Hb(Fe3+). Dalam keadaan ini hemoglobin tidak dapat lagi
mengikat oksigen. Hemoglobin yang teroksidasi menjadi methemoglobin
akan kehilangan fungsinya. Perubahan Hb menjadi metHb dapat terjadi
karena adanya senyawa pengoksidasi. Bila ini terjadi dalam tubuh
maka dapat timbul akibat yang fatal, misalnya karena pemberian
obat-obatan tertentu terutama pada orang yang berbakat untuk
keadaan tersebut . Selain itu hemoglobin juga dapat berikatan
dengan suatu gas hasil pembakaran tidak sempurna dari dari suatu
bahan bakar yaitu CO (karbon monoksida ) sehingga terbentuk HbCO .
Ikatan hemoglobin dan CO ini 200 kali lebih kuat dari pada ikatan
Hb dengan O2 akibatnya hemoglobin tidak dapat lagi mengikat membawa
dan mendistribusikan O2.
Hemoglobin juga mempunyai sifat seperti enzim peroksidase, ini
berarti hemoglobin dapat mengkatalisis reduksi H2O2 bila ada suatu
reduktor. Berbeda dengan enzim pada hemoglobin sifat ini tidak
hilang setelah pemanasan. Sifat ini dapat digunakan untuk melacak
adanya darah dalam suatu bahan uji. Sifat seperti peroksidase ini
disebabkan oleh adanya gugus hem dalam hemoglobin.
Sel darah merah seperti sel lainnya akan mengkerut dalam larutan
dengan tekanan osmotik yang lebih tinggi (hipertonik) dari tekanan
osmotik plasma. Dalam larutan dengan tekanan osmotik lebih rendah
(hipotonik) maka SDM akan membengkak karena cairan dari luar sel
akan masuk kedalam sel dan kemudian terjadi lisis membran
(hemolisis). Hemoglobin dari SDM yang mengalami lisis larut dalam
plasma sehingga memberi warna merah pada plasma. SDM normal akan
mulai mengalami lisis bila dimasukkan dalam NaCl 0,48% dan pada
larutan NaCl 0,33 % terjadi lisis sempurna. SDM juga dapat
mengalami lisis oleh obat-obatan. Struktur membran SDM mengandung
lipid bi layer, bila SDM dimasukkan dalam pelarut organik misalnya:
eter, toluen, maka membran SDM akan mengalami lisis karena larutnya
lipid membran sehingga hemoglobin terlepas kedalam pelarutnya.
Hemoglobin dan derivat-derivatnya dapat dibedakan dengan
menggunakan spektroskop, yaitu berdasarkan perbedaan absorpsi
warna-warna tertentu dari cahaya putih. Bila suatu larutan berwarna
diletakkan antara alat tersebut dan sumber cahaya, akan terlihat
daerah (pita) hitam pada spektrum dimana terjadi penyerapan warna
tersebut. Oksihemoglobin yang encer menunjukkan 3 pita absorpsi
yaitu pita sempit absorpsi cahaya pada panjang gelombang 578 nm,
pita yang lebih lebar pada 542 nm, dan yang ketiga pada panjang
gelombang 425 nm. Hemoglobin tereduksi (deoksihemoglobin)
sebaliknya hanya menunjukkan satu pita absorbsi lebar pada 559 nm.
Bila pada darah ditambahkan zat peng oksidasi akan terbentuk
methemoblobin, dalam larutan asam, methemoglobin mempunyai satu
pita absorpsi dengan pusat pada panjang gelombang 634 nm.
Hemoglobin karbon monoksida menunjukkan dua pita absorpsi yang
pertama pada 570 nm yang kedua pada 542 nm.
1. UJI OKSI-HEMOGLOBIN DAN DEOKSI-HEMOGLOBIN
Bahan:Lar. NH4OH, darah dan pereaksi Stokes (20 g FeSO4 dan 30 g
asam tartrat dalam air sampai 1000 cc)
Metoda:Encerkan 2 mL darah dengan kira-kira 6 mL air dalam
sebuah tabung reaksi. Campur dengan baik. Perhatikan warna merah
terang dari oksi-hemoglobin yang terbentuk. Bagilah dua isi tabung
yang pertama digunakan sebagai kontrol tanpa ditambahkan apa-apa.
Pada tabung ke-2 masukkanlah 2 mL pereaksi Stokes dan tambahkan
NH4OH secukupnya untuk melarutkan endapan yang segera terbentuk.
Campuran ini merupakan larutan pereduksi yang kuat. Tambahkan
beberapa tetes larutan pereduksi tadi ke dalam tabung ke-2.Terlihat
perubahan warna akibat terbentuknya reduced hemoglobin. Bandingkan
dengan warna oksi-hemoglobin. Kocok tabung ini dengan kuat, maka
akan terjadi oksigenasi dengan oksigen udara. Deoksigenasi dan
reoksigenasi dapat dilakukan berulang-ulang.Apa kesimpulan
percobaan ini? Peristiwa faal apa yang ditiru pada percobaan
ini?
2. PENGARUH PELARUT ORGANIK PADA SEL DARAH MERAH
Metoda :
Isilah 6 tabung reaksi dengan 10 ml NaCl 0,9%. Tabung pertama
digunakan sebagai kontrol, dan pada kelima tabung lainnya isilah
masing-masing 3 tetes kloroform, eter, aseton, toluen dan alkohol.
Lalu kepada 6 tabung tersebut tambahkan 2 tetes eritrosit yang
telah dicuci. Kocok dan biarkan selama setengah jam. Bandingkan
warna dengan kontrol.
3. PEMERIKSAAN ENZIM KATALASE DALAM DARAH
Prinsip :
Enzim katalase ada dalam darah dimana katalase akan memecah H2O2
menjadi air dan O2, O2 diperlukan oleh tubuh, di klinik H2O2
digunakan untuk membersihkan luka, O2 berfungsi untuk membunuh
kuman-kuman anaerob, sedangkan air untuk membersihkan luka.
Reaksi :katalase2 H2O2 2 H2O + OBahan :
H2O2 10 % , darah
Metoda :
2 3 tetes darah + 1 - 2 tetes H2O2Hasil:
Reaksi positif maka akan tampak busa karena terbebasnya O2 oleh
enzim katalase.
SPEKTROFOTOMETRI
Spektrofotometri Serap adalah pengukuran serapan radiasi
elektromagnetik dengan panjang gelombang tertentu yang sempit,
mendekati monokromatis.
Analisa spektrofotometri dapat dipakai untuk analisa kualitatif
dan atau kuantitatif.
Pengukuran serapan dapat dilakukan pada daerah panjang gelombang
:
Ultraviolet (UV) pada panjang gelombang 190 380 nm
Cahaya tampak ( visible ) pada panjang gelombang 380 780 nm
Keuntungan metode ini :
-Dapat digunakan untuk analisa zat dalam jumlah kecil
-Pengerjaan cepat sederhana dan non destruktif
Teori :
1. Panjang gelombang ( )
Panjang gelombang cahaya didefinisikan sebagai jarak antara dua
puncak dari suatu gelombang, biasanya dinyatakan dengan symbol
lamda ( )
Satuan panjang gelombang UV VIS adalah nano meter ( nm)
1 nm = 1 mu = 10-9 m = 10-6 mm
Cahaya adalah merupakan campuran dari radiasi-radiasi yang
mempunyai panjang gelombang yang berbeda , yang dapat didespersikan
oleh suatu monokromator menjadi sinar yang monokromatis.
2. Warna Warna cahaya dapat dilihat oleh mata manusia disebut
sinar tampak (visible) yang merupakan campuran dari sinar-sinar
yang mempunyai panjang gelombang 400 700 nm
Seperti yang kita lihat pada pelangi
3.Transmitan dan AbsorbanTransmitan adalah sinar yang diteruskan
( sinar yang di transmit)
Sedangkan Absorban adalah sinar yang diserap
Misalkan suatu sinar melalui kuvet (wadah sample dari kaca) maka
sebagian sinar ada yang di teruskan dan sebagian lagi diabsorpsi
(di serap)
Sehingga secara matematik ada hubungan antara Transmitan (T) dan
Absorban (A)
Hubungannya sebagai berikut :
A = 2 log T A = Absorban
T = Transmitan (dalam %)
Contoh :
Bila T = 100 %
Maka A = 0
4. Hukum Lambert - Beer
Bila cahaya monokromatis melalui suatu larutan, jumlah cahaya
yang diserap sebanding /proporsional dengan kadar zat dalam
larutan.
Secara matematis hokum Lambert Beer dapat dirumuskan sebagai
berikut :
A = k. c . l
A= serapan/absorbansi/optical density, yaitu jumlah cahaya yang
diserap
K = koefisien ekstinsi /tetapan
C = kadar sample yang diperiksa
L = diameter kuvet/panjang larutan yang dilalui cahaya , mis = 1
Cm
Karena k dan l bilangan tetap , maka berarti A sebanding dengan
c
5. Cara menjalankan spektrofotometer :
Petunjuk operasional secara terperinci dapat di ikuti sesuai
dengan petunjuk / manual dari intrumen :
Prosedur umum dalam menjalankan spektrofotometer adalah :
1. Periksa bahwa tidak ada kuvet dalam tempat kuvet
2. Nyalakan switch power ON
3. Pilih lampu yang sesuai : Deuterium (D2) untuk daerah UV atau
Tungsten untuk daerah visible (sinar tampak)
4. Atur panjang gelombang yang dikehendaki dengan memutar tombol
pengatur panjang gelombang (seperti memilih gelombang radio)
5. Periksa % T harus menunjuk angka 100 dengan memutar tombol
yang ada pada alat tersebut / A pada angka 0
6. Letakkan kuvet berisi blangko : dapat berisi
akuadest/pelarut/pelarut tanpa sample
Dan ukur A / A dibuat 0
7. Isi kuvet dengan zat baku/standar, ukur A
8. Ganti kuvet isi zat baku dengan sample, ukur A
9. Hitung kadar sample dengan membandingkan antara A sample
dengan A standar
Kalikan kadar standar
Catatan : hidupkan spektrofotometer selama 10 menit lebih dahulu
sebagai pemanasan sehingga hasil lebih akurat
1. Pemilihan Absorbansi Maksimum
Absorbansi maksimum diperlukan untuk memperoleh puncak
absorban
Cara kerja :
1. Atur Spektrofotometri pada 400 nm, dan T = 100 atau A = 0
2. Siapkan larutan Asam salisilat sebesar 50 ppm 2ml + 2 ml
FeCl3 0,1% ,
Masukkan dalam kuvet dan periksa absorbansinya
3. Siapkan blangko 2 ml air + 2 ml FeCl3 0,1%
Masukkan dalam kuvet dan periksa absorbansinya
4. Geser panjang gelombang menjadi 410 - 420 430 - .... 550
(Lakukan cara kerja No 2 dan 3)
5. Untuk setiap menggeser panjang gelombang spektrofotometer
dibuat
A = 0 atau A Cara kerja No 3 dibuat =0
6. Hitung A sampel = A No 2 A No 3
7. Buat kurva pada kertas grafik hubungan antara A sampel dengan
panjang
Gelombang, akan diperoleh A maksimum
Pada panjang gelombang inilah digunakan untuk analisa
kuantitatif
2. Pembuatan Kurva baku
Lambert Beer
Dasar :
Jumlah cahaya yang diserap oleh suatu zat pada panjang gelombang
tertentu sebanding dengan kadar zat zat tersebut dalam larutan.
Alat dan Pereaksi :
1. Spektronic 20/ yang lain
2. Larutan asam salisilat : 10 ppm , 20 ppm ., 30 ppm , 40 ppm ,
50 ppm
Atau deret konsentrasi yang lain dengan menghasilkan A antara
0,2 0,6
Cara kerja :
1. Siapkan 2 ml larutan asam salisilat dalam masing-masing
tabung reaksi dengan urutan konsentrasi seperti diatas
2. Tambahkan pada masing-masing tabung 2 ml FeCl3 0,1%
3. Baca serapan (A) tiap-tiap tabung pada panjang gelombang
maksimum sesuai percobaan (1)
4. Buat grafik hubungan antara serapan dengan kadar larutan,
maka akan menghasilkan kurva standar
5. Buat kurva standar dalam kertas grafik dalam laporan Hasil
Praktikum
3. Pengukuran Kadar Sampel
Tujuan :
Menentukan kadar Bedak Salisil berisi 2% asam salisilat
Cara Kerja :
1. Timbang 100 mg bedak salisil
2. Tambahkan 10 ml alkohol, aduk aduk kemudian saring
3. Tambahkan 15 ml alkohol lagi dan saring
4. Tambahkan air hingga 100 ml ( 20 ppm)
5. Abil 2 ml + 2 ml FeCl3 0,1 % pada panjang gelombang
maksimum
6. Lakukan terhadap blangko 2 ml air + 2 ml FeCl3 0,1% pada
panjang gelombang
Maksimum
7. Hitung A sampel = A No 5 A No 6
8. Hitung kadar sampel
Caranya : Masukkan harga A sampel pada kurva baku Lambert
Beer
Tarik garis menuju kurva, tarik garis lurus menuju kadar,
itulah
Kadar sampel
9. Hitung kesalahan analisa :
Kadar seharusnya Kadar sampel diperoleh
Kesalahan =
----------------------------------------------------- X 100 %
=........%
Kadar seharusnya
Sampel memenuhi syarat bila kesalahan maksimum 5%
PAGE 9Penuntun Praktikum Biokimia Blok 5
