Práctica 1: Uso de un microscopio compuesto y un estereoscopio.

Introducción: El microscopio ha sido y sigue siendo el instrumento más importante en el desarrollo de la biología como ciencia. Los microscopios ópticos magnifican la imagen y aumentan la capacidad para ver detalles que de otro modo no se podrían percibir. El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes: el lente ocular y lente objetivo, estos montados en los extremos opuestos de un tubo cerrado.Los lentes objetivos están compuestos de varios elementos ópticos que crean una imagen real y aumentada del objeto examinado. Cuando se mira a través del lente ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real.

Algunos descubrimientos interesantes sobre la microscopia a lo largo de la historia son: 1674 Leeuwenhoek informó su descubrimiento de los protozoos. Nueve años más

tarde observó bacterias por primera vez. 1838 Schleiden and Schwann propusieron la teoría celular, afirmando que la célula

nucleada es la unidad estructural y funcional de las plantas y animales. 1879 Flemming describió con gran claridad el comportamiento de los cromosomas

durante la mitosis de las células animales. 1881 Retzius describió muchos tejidos animales con una precisión que todavía no ha sido

superada por ningún especialista de microscopia óptica. En las dos décadassiguientes, tanto él como Cajal y otros histólogos diseñaron métodos de tinción yestablecieron las bases de la anatomía microscópica.

1882 Koch utilizó colorantes de anilina para teñir microorganismos e identificó lasbacterias que causan la tuberculosis y el cólera. En las dos décadas siguientes otrosbacteriólogos como Klebs y Pasteur identificaron los agentes causantes de otrasmuchas enfermedades examinando al microscopio preparaciones teñidas.

Para poder manejar este instrumento eficientemente y mantenerlo en buena condición, depende del conocimiento que usted tenga de él.

Fig. 1 Alumna utilizando un microscopio compuesto. Fig. 2 Alumnos utilizando un estereoscopio binocular.

Objetivos de la práctica: Conocer el uso y funcionamiento del microscopio compuesto y el estereoscopio. Aprender a manejar las partes mecánicas de los aparatos y así poder enfocar con precisión

los materiales de origen biológico de interés en el transcurso de las prácticas de laboratorio.

Aprender a preparar placas temporales con material fresco. Practicar técnicas sencillas que permitan apreciar el tamaño y la forma de una variedad de

células y microorganismos.

Lista de materiales:- Estereoscopio - Microscopio óptico compuesto- Lámpara de iluminación - Porta y cubre-objetos - Frascos con agua destilada - Goteros - Flores e insectos (aportados por el alumno) - Regla plástica- Suspensión de levaduras - Granos de sal- Granos de azúcar - Hoja de afeitar (Gillette)

Procedimientos: 1. Reconocimiento de las partes del microscopio y estereoscopio: Identifique las siguientes

partes y rotule las ilustraciones del microscopio y estereoscopio. Estos son los instrumentos ópticos a usar cada semana en el desarrollo de las prácticas de laboratorio de este curso. Las partes a identificar y entender su función son:

Parte o pieza: Su función o utilidad:

Base

Brazo

Tubo ocular

Plataforma

Revolver

Condensador

Diafragma

Lentes oculares

Lentes objetivos

Tornillo macro métricoTornillo micro métricoFuente de luz

Fig.3 Esquema de un microscopio compuesto.

2. Indicaciones para usar un microscopio compuesto: Observe a través del instrumento (lente ocular), y ajuste la fuente de luz de manera que se

obtenga la mayor cantidad de luz. Coloque el lente objetivo de 4X en posición de observación dando vuelta al revolver. Para

hacer esto gire el tornillo macro métrico una o dos vueltas hacia arriba. Obtenga una placa o porta-objetos preparada (o prepárese una) y centrarlo sobre el

orificio de la plataforma. Mirando al instrumento lateralmente, gire con cuidado el tornillo macro métrico hasta que

el lente objetivo se halle aproximadamente a unos 4 ó 6 mm por encima del porta-objetos.

Fig. 4 y 5 Alumnos ajustando de forma correcta (observando lateralmente el instrumento)

Para enfocar, vuelva a observar por el lente ocular y gire el tornillo para desplazar la plataforma siempre hacia abajo, hasta que el objeto aparezca claramente. No enfoque nunca moviendo la plataforma hacia arriba.

Al usar el lente objetivo de 40X, se debe proceder con especial cuidado. Mirando a través del microscopio es imposible apreciar a que distancia se halla el lente objetivo de la porta-objetos, y si se enfoca hacia arriba éste puede romperse.

Para cambiar el lente objetivo de 4X por el de 40X, debe usar el siguiente procedimiento: Enfoque con el lente objetivo de 4X en posición de observación. (Véase Fig. 5) Coloque el objeto a examinar exactamente en el centro del campo visual. Utilice el diafragma y condensador para adecuar la luz. Gire el revólver hasta que el lente objetivo de 40X quede en posición de observación. Ahora gire el tornillo micrométrico en sentido contrario a las agujas del reloj (para

desplazar la plataforma hacia abajo, o en dirección hacia abajo) hasta conseguir una imagen clara de la muestra que intenta observar.

Recuerde que la regulación de la luz es muy importante. Es malo usar demasiada luz y también muy poca. Cuando tiene el objeto bien enfocado, experimente con el diafragma hasta encontrar la apertura que suministra una cantidad de luz óptima para hacer sus observaciones.

Fig. 5 Fotografía de un microscopio compuesto.

Cuando utiliza un microscopio monocular es importante aprender a mirar a través del microscopio con ambos ojos abiertos, lo cual requiere práctica, pero a fin de cuentas, es mucho más cómodo que tener un ojo abierto y el otro cerrado durante varios minutos de trabajo.

Fig. 6 Alumno observando a través del microscopio con ambos ojos

3. Haciendo preparaciones temporales: Ahora está listo para comenzar a hacer observaciones con el microscopio, pero primero se necesita saber cómo hacer una preparación temporal. Las siguientes instrucciones detallan el procedimiento correcto:

Porta objetos Cubre objetos Muestra

Fig. 7 Montaje de una placa temporal. Limpiar y secar completamente un porta-objetos y un cubre-objetos. Colocar en el centro del porta-objetos el material biológico u objeto que va a observar. Añadir una gota de agua (u otra solución cuando sea el caso) sobre el material colocado en

la placa y aplanar o aplastar esto con el cubre-objetos. Dibuje cada muestra observada con el microscopio con el mayor realismo posible.

Algunos consejos en preparar muestras y usar el microscopio:

No use demasiada agua en preparar su muestra. A veces durante la observación de protozoarios y otros organismos vivos, será necesario añadir más agua a causa de la evaporación.

Siempre hay que colocar un cubre-objeto sobre muestras con agua u otro líquido. Debe de bajar lentamente el cubre-objeto sobre la muestra con cierto ángulo de inclinación. Puede usar una aguja o pinzas para ayudar. Este procedimiento evita la formación de burbujas de aire entre la porta y cubre-objeto.

4. Preparación y observación de una letra impresa: Tome o recorte de una hoja de papel periódico una letra mayúscula y coloque ésta sobre

un porta-objetos. Luego coloque el cubre-objetos sobre la letra. Ahora, enfoque sobre la letra con el microscopio usando el objetivo de 10X. Habiendo

observado atentamente conteste:¿Cuál es la orientación de la imagen de la letra vista a través del microscopio? ¿En qué sentido es diferente a su ubicación en la placa a simple vista?

Ahora mueva lentamente el tornillo de la plataforma en distintas direcciones. Habiendo observado atentamente conteste:¿Cuándo usted mueve la plataforma con la placa, de la izquierda a la derecha, en qué dirección se mueve la letra vista a través del microscopio?

Luego mueva la placa, utilizando siempre el tornillo de la plataforma, hacia adelante y hacia atrás. Anote en qué dirección se mueve la letra cuando está observando a través de los lentes del microscopio.

5. Estimación de las dimensiones del campo visual: Coloque una regla de plástico sobre la plataforma del microscopio y enfoque hasta lograr

ver las líneas que indican los centímetros, utilizando los lentes objetivos de 4X, l0X y 40X. Estime el diámetro del campo visual con cada uno de los lentes objetivos anotando su

estimación en mm.

Fig. 8 Regla plástica vista a través de un microscopio.

Fig. 9 Montaje de una regla plástica utilizada para obtener el campo visual de un microscopio.

Examine con el microscopio otros materiales que tenga curiosidad de observar. Estime las dimensiones de este (os) material (es) observado (os), tomado como ejemplo

los resultados del procedimiento anterior donde calculó las dimensiones del campo visual.

6. Preparación una placa temporal con una muestra de suspensión de levadura: Agregue una gota de la suspensión de levaduras en un porta-objetos limpio y coloque el

cubre-objetos encima. Ahora observe la levadura con los diferentes lentes objetivos del microscopio (4X, 10X y

40X). Haga una estimación del número de células por mm2 del campo visual con cualquiera de los lentes objetivos.

7. El Estereoscopio: El estereoscópico (también llamado microscopio o lupa de disección) es un aparato con dos lentes oculares (binocular) y un lente objetivo que proveen una visión estereoscópica, ó sea, tridimensional. Puede usarse para observar objetos con luz reflejada o con luz transmitida.

Fig.10 fotografía de un estereoscopio.

Coloque una tira de papel impreso, de aproximadamente 10 cm de longitud y 1 cm de ancho sobre la plataforma del instrumento.

Girando el tornillo, haga descender el cuerpo del estereoscopio altope. Ahora observando a través de los lentes oculares, suba el cuerpo del instrumento hasta que obtenga una imagen nítida.

A continuación ajuste la iluminación y la distancia de separación entre los lentes oculares. Mueva la tira de papel impreso hacia adelante y hacia atrás. ¿En qué dirección se mueve la

imagen vista a través del estereoscopio? Observe el filo de una hoja para afeitarse, los granos de azúcar y sal, y las partes de una

flor. Haga dibujos de cada una de las muestras observadas. Rotule la ilustración a continuación con las partes más importantes del estereoscopio.

Fig. 11 Esquema de un estereoscopio.

8. Recomendaciones importantes: No golpear o arrastrar el aparato obre la mesa de trabajo. Use siempre ambas manos cuando traslade su microscopio o estereoscopio de un lugar a

otro.

Fig. 12 Alumno sosteniendo de forma correcta el microscopio.

Inspeccionar siempre el microscopio antes de usarlo, cualquier irregularidad repórtela a su instructor del laboratorio.

No desmontar ninguna pieza del microscopio. Usar siempre solo los microscopios disponibles en su mesa de trabajo y guardarlo en su

sitio. Al terminar su práctica de laboratorio, deje desconectado el instrumento, limpio, seco y

cubierto.

Fig. 13 Alumno guardando en un lugar seguro el microscopio.

9. Preguntas de investigación:

¿Quién inventó el microscopio? ¿Cuál es la utilidad o funcionamiento de cada tipo de microscopio? ¿En qué objetivo usted obtiene el campo visual de menor área? De mayor área?