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INTEGRANTES:

TEMA: AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS DEL MEDIO AMBIENTE

INDICE

INTRODUCCIÓN...............................................................................................................2

OBJETIVO.........................................................................................................................3

MARCO TEORICO.............................................................................................................3

MATERIALES.................................................................................................................... 6

1. Muestras...............................................................................................................6

2. Medios de cultivo:................................................................................................6

3. Equipos y Reactivos:.............................................................................................7

PROCEDIMIENTO.............................................................................................................7

FOTOS..............................................................................................................................8

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS................................................................................10

BIBLIOGRAFIA................................................................................................................11

PRACTICA Nº8

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS DEL MEDIO AMBIENTE

Moscas y cucarachas portadores de microorganismos infecto contagiosos

INTRODUCCIÓNLos insectos domésticos son portadores de una gran variedad de microorganismos muchas vacas peligrosos para la salud humana, estos insectos vectores tienen un amplio y variados ambientes como agua, aire, suelo que al recorrer captan en sus extremidades microorganismos infecto contagiosos Que al ponerse en contacto son los alimentos desprotegidos los contaminan perjudicando la salud humana. Es muy amplio el rol en los diferentes ambientes por lo que se realizaran las determinaciones en insectos domésticos

OBJETIVO

Demostrar la presencia de microorganismos infectos contagiosos en los insectos domésticos y a través de ellos puede llegar a los alimentos

MARCO TEORICO

Para aislar e identificar una especie bacteriana del medio y de otra especie que pueda confundirse morfológicamente es necesario usar medios de cultivos, ya que nos permiten diferenciar las características del crecimiento de las bacterias y establecer su identidad según el medio de cultivo que se use.

Los microorganismos se encuentran en muchos ambientes naturales como el agua, el suelo, aire, el hombre y otros seres vivos, alimentos, entre otros. Haciendo parte de los diferentes ecosistemas. Por esto se deben usar los medios de cultivo adecuados que se asemejen al ambiente si queremos posibilitar el crecimiento de la bacteria.

Un medio de cultivo está diseñado para posibilitar el desarrollo y nutrición de las bacterias por esto cuenta con una cantidad de sustancias como: carbono, agua, azufre, fosforo, nitrógeno, potasio, sodio, magnesio, entre otros. También su crecimiento depende de muchos factores entre ellos: un pH preferiblemente neutro, humedad, oxigeno, temperatura, presión osmótica, todo esto en condiciones adecuadas.

Los medios de cultivo se clasifican dependiendo de las características que se necesiten para su óptimo desarrollo los cuales según su consistencia pueden ser:

Líquidos: no contienen agar y favorecen el crecimiento bacteriano ya que las bacterias poseen una gran libertad de movimiento y al difundirse por todo el medio encuentran su componente nutritivo y requerimiento de oxigeno más óptimo con gran facilidad, por ejemplo: las aerobias estrictas crecen en los

primeros 10-15mm de la superficie del medio, las microaerofilas ligeramente por la superficie del medio, las anaerobias estrictas en los 10-20mm del fondo y las facultativas por todo el medio.

Solidos: su concentración de agar es de 1.5% a 2%, en estos las bacterias crecen con mayor dificultad, ya que los nutrientes pueden agotarse fácilmente, se utilizan para ver colonias, aislar microorganismos, características de crecimiento, color, tamaño, taxonomía, entre otros.

semi-solido: su concentración de agar es de 0.5% y se utiliza para estudiar el movimiento y algunas propiedades bioquímicas.

También según su aplicación se usa:

Simples: son apropiados para la mayoría de microorganismos ya que poseen requisitos nutricionales mínimos para desarrollarse.

Enriquecidos: permiten el crecimiento de bacterias difíciles de cultivar, puesto que se añade ciertos componentes muy ricos en nutrientes.

Selectivos: estos medios contienen componentes que inhiben el crecimiento de algunas bacterias cuyo crecimiento no interesa, permitiendo así aislar una determinada especie.

Diferenciales: en este se les adiciona sustancias para el crecimiento de determinadas bacterias y al actuar sobre dichas sustancias adquieren un color que las diferencia de otras colonias.

Enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen la multiplicación de bacterias cuando la muestra obtenida es pobre.

De acuerdo con su aplicación los componentes usuales de los medios de cultivo son:

Extracto de carne: constituye una fuente de carbono, nitrógeno, sales orgánicas y otros nutrientes.

Peptonas: son proteínas degradadas, ricas en nitrógeno y carbono. Cloruro de sodio: importante para proporcionar un adecuado equilibrio

osmótico. Tampones estabilizadores del pH: necesarios para contrarrestar las variaciones

del pH debido a los productos del metabolismo bacteriano.

Nutrientes para medios de enriquecimiento:

Extracto de levadura: rico en vitaminas del complejo B, proteínas y ácidos nucleicos.

Extracto de glóbulos rojos: suministra los factores X (hemina) y V (difosfopiridin-adenin-nucleotido o coenzima I) imprescindibles para el crecimiento bacteriano de algunos microorganismo.

Infusión de hígado o corazón y cerebro: son infusiones ricas en aminoácidos azufrados que reducen el potencial de óxido reducción.

Agentes reductores:

Se adicionan tioglicolato sódico, cisteína, ácido ascórbico a los medios de cultivo para promover la anaerobiosis.

Agentes selectivos: Colorantes: el cristal violeta, azul de metileno, el verde brillante y otras

sustancias usadas por su efecto toxico sobre las Gram positivas. Cloruro sódico a altas concentraciones. Bilis o Sales biliares Antibióticos Cicloheximida o actidiona: se añade para impedir el crecimiento de hongos

ambientales en los medios de cultivo.

Azucares: Se puede adicionar para fines nutritivos o para investigar la actividad metabólica.

Indicadores de pH: Es esencial para detectar variaciones en la acidez o alcalinidad del medio causadas por el metabolismo bacteriano. Los medios de cultivo usados en el laboratorio fueron:

Agar nutritivo: está compuesto de extracto de carne, peptona, ClNa, agar y agua destilada. Se usa como medio de cultivo general para la mayor parte de los microorganismos y como base para la preparación de medios selectivos y enriquecidos.

Agar sangre: compuesto por extracto de carne, peptona, ClNa, sangre, agra y agua destilada. Lleva como base el agar nutritivo y se le adiciona sangre desfibrinada en una porción del 5-10%, principalmente sangre de conejo, carnero y caballo ya que ofrecen buenas reacciones hemolíticas. No se usa sangre humana procedente de banco puesto que contiene citrato que puede inhibir el crecimiento de algunos microorganismos y glucosa que falsea las reacciones de hemolisis, aparte de anticuerpos y agentes antimicrobianos. Aquí crecen la mayoría de bacterias patógenas y algunas levaduras. Este medio es adecuado para el cultivo y aislamiento de microorganismos exigentes, también para estudiar la actividad hemolica.

La hemolisis puede ser de 3 tipos: α hemolisis: clarificación parcial de la sangre en una colonia, que produce un cambio de color gris verdoso o pardusco en el medio; β hemolisis: zona de clarificación completa de la sangre alrededor de las

colonias debido una lisis completa de eritrocitos que produce una eliminación de la sangre del medio debajo de las colonias y a su alrededor; γ hemolisis: sin lisis o cambio de color en los eritrocitos.

Agar MacConkey: está compuesto por peptona, lactosa, ClNa, sales biliares, cristal violeta, rojo neutro, agar y agua destilada. Los medios usados para el aislamiento selectivo de enterobacterias se caracterizan por contener lactosa y un indicador de cambio de pH que detecta la actividad fermentadora sobre este azúcar. Además estos medios de cultivos llevan sustancias inhibidoras de Gram positivos. Las sales biliares y el cristal violeta actúan como inhibidores. El indicador vira a rojo ladrillo en medio acido. Las bacterias que fermentan la lactosa producen colonias de color rojo que pueden estar rodeadas de una zona opaca debida a la precipitación de sales biliares; las no fermentadoras dan colonias incoloras más o menos transparentes.

Agar EMB (Eosina azul de metileno): compuesto por peptona, fosfato dipotásico, lactosa, eosina azul de metileno, agar y agua destilada. Su uso es prácticamente el mismo del agar MacConkey. El azul de metileno actúa como indicador e inhibidor al mismo tiempo. Las colonias fermentadoras de lactosa presentan un tono violeta más o menos intenso. Por ejemplo Escherichia Coli origina colonias muy oscuras, frecuentemente con brillo verde metálico que facilita su detección en aguas contaminadas con materias fecales.

Agar AMS (Manitol sal): es un medio de cultivo altamente selectivo, pues tiene una alta concentración de cloruro de sodio que impide el crecimiento de la mayoría de las bacterias, sin embargo tolera los estafilococos. Además el cultivo contiene manitol como único carbohidrato y rojo fenol como indicador del pH, cuyo ámbito de viraje esta entre pH 8,4 (rojo) y pH 6,8 (amarillo). Cuando hay producción de ácido a causa de la fermentación de manitol, las colonias aparecen rodeadas de un halo amarillo; el medio permanecerá sin cambio de color o acentuara a rojo medio si las bacterias no fermentan el manitol.

Caldo nutritivo: es un medio líquido compuesto por una infusión de carne, ClNa, peptona, extracto de levadura y también fosfato disódico. Es usado como base para otros caldos que puedan contener más nutrientes.

MATERIALES

1. Muestras

o Cucarachas o Pulgaso Hormigas

o Mosca o Zancudo o Arañas

2. Medios de cultivo: 6 placas con Tnplicaza soya o Miuler Hinton 6 placas con Mac conkey, 6 placas con Manitol sal 10 tubos con TSI 10 tubos con LIA 6 placas con TCBS 6 placas con Agar sangre 6 frascos con 2ml de suero fisiológico estéril

3. Equipos y Reactivos: Mechero de Bunsen, Algodón. Alcohol Asa de Col, 6 Pipetas de 10ml estériles 0 pipetas de 2ml estériles Láminas porta objeto Coloración de Gram Microscopio

PROCEDIMIENTO

1. Emulsionar los muestras anteriores en 2ml de suero fisiológico estéril, con ayuda de

una pipeta, extraer 01ml y sembrarlo en Trypticasa agar (recuento de mesófilos)

2. En el Mac ConKey (para Enterobacterias), Manitol sal (para Estafilococos), TCBS (para

Vibrium) .Por diseminación con ayuda de una asa de plástico descartable.

3. Rotular las placas para su identificación posterior

4. Incubar a 37*C por 24-48 horas

5. Recuento total de colonias en medio Trypticasa soya

6. Identificación de las colonias en los medios selectivos, para repicarlas en medios de

pruebas Bioquímicas como TSI, LIA

7. Siembra por puntura en LIA, TSI Incubar a 37C por 24 horas

8. Identificación

FOTOS

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

A) REACCIONES POSITIVAS EN DISTINTOS MEDIOS

GELOSA SANGRE

Para el aislamiento, cultivo y detección de actividad hemolítica de Staphylococcus, Streptococcus y otrosmicroorganismos fastidiosos. Se observan colonias blancas casi grises, Grandes, convexas de consistenciabutirácea, Presentan bordes regulares. Se observa que Presenta hemólisis. Las colonias en medio sólido son redondeadas, uniformes, Estos crecen rápidamente a 37 C pero tienden a formar pigmentos mejor a temperatura ambiente (20 ºC)

.MANITOL SAL AGAR (MSA)Se utiliza como medio selectivo, para cultivar y enumerar especies clínicas de estafilococos El manitol cuando esutilizado por los microorganismos, vira de su color original rojo a amarillo. Se observan colonias chicas, blancas,convexas, de consistencia butirácea , presentan bordes irregulares. S. aureus Manitol sal Colonia amarilla S.epidermidis Manitol sal Colonia incolora

ESTAFILOCOCOS 110

S 110 Colonias blancas un poco amarillentas, Se observan colonias chicas, convexas, De consistencia butirácea y bordes Regulares.

B) DESCRIPCIÓN DEL TIPO DE COLONIAS OBTENIDAS

Observar las colonias obtenidas y describirlas teniendo en cuenta las siguientes características:

.FORMA: puntiforme, circular, rizoide, irregular, filamentosa.. TAMAÑO: grande (más de 3 Mm.), mediana (2-3 Mm.), pequeña (1-2 Mm.). COLOR. Reportar el color final después de la incubación. BORDE: entero, ondulado, lobulado, filamentoso, ondeado .ELEVACIÓN: plano, elevado, convexo, pulvinado, umbonado. SUPERFICIE: suave, brillante, rugosa, plegada, seca, polvorienta

Principales morfología celulares y coloniales.

BIBLIOGRAFIA

Biología de los Microorganismos; Michael T. Madigan, John M. Martinko, Jack

Parker; 8ª edición, editorialPrentice may.

http://www.prodiversitas.bioetica.

http://es.wikipedia.org/wiki/Foramin%C3%ADfero

http://www.duiops.net/seresvivos/algas.htm