PRCTICA 3ACTIVIDAD ENZIMTICA

INTRODUCCIN

La catalasa es una enzima comn encontrada en los organismos vivos, donde funcionan como catalizadores en las reacciones de descomposicin del peroxido de hidrgeno (H2O2) en agua y oxigeno.La catalasa tiene uno de los recambios mas altos de todas las enzimas. Una molcula de catalasa podra convertir millones de molculas de peroxido de hidrgeno a agua y oxigeno por segundos.La catalasa es un tetramero de cuatro cadenas polipeptidicas, cada una larga cadena con 500 aminocidos. contiene cuatro grupos hemo porfirinicos (hierro) que llevan a la enzima a reaccionar con el peroxido de hidrgeno. El pH optimo para la catalasa es aproximadamente de 7, la temperatura varia por especie

La reaccin de descomposicin del peroxido de hidrgeno2 H2O2 2 H2O + O2

Los perixosomas se denominan as porque generalmente contienen una o ms enzimas que utilizan oxgeno molecular para eliminar tomos de hidrgeno a partir de substratos orgnicos especficos a travs de una reaccin oxidativa que produce perxido de hidrgeno.OBJETIVOObjetivos General.Que el alumno conozca, comprenda y pueda observa y valorar la accin de las enzimas en los alimentos y pueda comprender cada uno de los conceptos relacionados con las enzimas como son la catalasa y alfa amilasa en las practicas a realizar en diferentes alimentos y le permita alumno comprender el proceso para poder aplicarlo en la adquisicin de conocimientos bsicos y en los procesos industriales e investigacin particulares1. Observar la presencia de la enzima catalasa en tejidos animales y vegetales.2. Comprobar la accin de la temperatura sobre la actividad de las enzimas.3. Comprobar la accin hidroltica de la amilasa en los alimentos.4. Comprobar la actividad enzimtica de los peroxisomas.

El alumno demostrar in vitro la actividad enzimtica de los Peroxisomas en diferentes clulas.

Materiales de laboratorio por equipoMaterial del alumno por equipo

12 tubos de ensayoHgado de pollo

1 gradillaCorazn de pollo

1 estuche de diseccinRin de pollo

2 cajas de petriRama de apio

5 vasos precipitados de 100mlPapa

1 vaso precipitado de 400mlMateriales de laboratorio por equipo

1 pipeta de 10 mlHCl

1 MecheroAlcohol

1 Mortero con pistiloHidrxido de sodio

Perxido de hidrgeno

ACTIVIDAD DE LA PRCTICA

1. Corta 6 cubos de aproximadamente 1 cm3 de apio, colcalo en hielo.2. Corta 6 cubos de aproximadamente 1 cm3 de papa, colcalo en hielo.3. Corta 6 cubos de aproximadamente 1 cm3 de carne (hgado, rin y corazn), colcalo en hielo.4. Enumera los tubos del 1 al 6 y adiciona 2 ml de perxido de hidrgeno (PRECAUCIN)5. A cada tubo adiciona el tejido tal como se anota en la tabla6. En cada uno de los tubos se debe determinar la presencia o ausencia de 02, inmediatamente despus de adicionar el tejido tapa el tubo con el dedo pulgar y coloca en la boca del mismo tubo, un palillo en punto de ignicin (no acerques los tubos a tu cara o a la de tus compaeros)7. Repite los pasos 4 a 6 para los otros tejidos.

Reportar resultadosTUBOPapaAL MOMENTO DE AGREGAR (H2O2)

1Machacado

2Cocido

3Con HCl

4Con Etanol

5Con NaOH

6Sin ninguna alteracin

TUBOApioAL MOMENTO DE AGREGAR (H2O2)

1Machacado

2Cocido

3Con HCl

4Con Etanol

5Con NaOH

6Sin ninguna alteracin

TUBOHgadoAL MOMENTO DE AGREGAR (H2O2)

1Machacado

2Cocido

3Con HCl

4Con Etanol

5Con NaOH

6Sin ninguna alteracin

TUBOCoraznAL MOMENTO DE AGREGAR (H2O2)

1Machacado

2Cocido

3Con HCl

4Con Etanol

5Con NaOH

6Sin ninguna alteracin

TUBORinAL MOMENTO DE AGREGAR (H2O2)

1Machacado

2Cocido

3Con HCl

4Con Etanol

5Con NaOH

6Sin ninguna alteracin

Hidrlisis del almidn

Ver la actividad de la enzima, la amilasa o ptialina, presente en la saliva. Esta enzima acta sobre el polisacrido almidn, hidrolizando el enlace O-glicosdico, por lo que el almidn se terminar por transformar en unidades de glucosa. Es importante que recuerdes las reacciones caractersticas de glcidos para comprenderla prctica. Las reacciones que nos sirven para identificar polisacridos (almidn) y las que nos permiten identificar monosacridos (glucosa).

Mtodo1. Poner en una gradilla cuatro tubos de ensayo, numerados del 1 al 4.2. Aadir en cada tubo 5 mililitros de una solucin diluida de almidn.3. A los tubos 3 y 4 aadir una pequea cantidad de saliva. Figura 1Para ayudarte y formar ms saliva, piensa en un limn o en algo que te apetezca mucho comer... As favoreces que formes ms saliva.Figura 1

En el tubo 1, haz la Reaccin de Fehling.Figura 2 En el tubo 2, realiza la Reaccin de Lugol. Figura 3 Los resultados son los esperados para un polisacrido como el almidn.Figura 2Figura 3

Figura 4Figura 5Figura 6

Los tubos 3 y 4 que contienen el almidn, al que le hemos echado la saliva, ponerlos en un vaso de precipitados al bao Mara, controlando la temperatura del agua para que no hierva, ya que lo que intentamos, es que la enzima de la saliva trabaje a unos 37: C. Dejarlo unos 15 minutosFigura 4 . A continuacin realizar las siguientes reacciones: En el tubo nmero 3, realizar la Reaccin de Fehling. Figura 5. En el tubo nmero 4, realizar la Prueba del Lugol. Figura 6 El resultado positivo obtenido en el tubo de ensayo 3, nos dice que no hay ya almidn, porque la amilasa de la saliva ha hidrolizado el almidn transformndolo en glucosa, por eso la reaccin de Fehling es ahora positiva. De una manera similar, podemos interpretar el resultado del tubo de ensayo 4, ahora nos da la reaccin de polisacridos negativa, ya que el almidn (polisacrido) se ha hidrolizado.

CUESTIONARIO

1. Cul es la estructura y funcin de los peroxisomas?2. Qu es la enzima y como se relaciona con las peroxisomas?3. Cul es la funcin de los glioxisomas en la germinacin de las semillas de aceite de ricino?4. Cul son los efectos del etanol y cido clorhdrico sobre las enzimas?5. Al cocinar los alimentos en un largo periodo Cmo influye en la actividad de las enzimas?6. Qu enzimas se encuentran presentes en el peroxisoma?7. Anota las enzimas caractersticas de los glioxisomas, que no estn presentes en los peroxisomas?8. De qu manera acta la catalasa? y por qu libera oxigeno?9. La catalasa de las muestras estn en las mismas concentraciones?10. Cul es la diferencia entre las catalasas animales y vegetales de las muestras que trabajaron?11. Cuales es la reaccin de la alfa amilasa sobre los componentes de los materiales empleados12. la alfa amilasa es una enzima especfica para almidones?13. Qu tipo de polmeros contienen las muestras que trabajaron?14. Qu tipo de azucares tienen estas muestras?

ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS

1. Escriba dos reacciones en donde se genere el H2O2 en la clula:2. Investigue el pH optimo de las siguientes enzimas y su relacin con el estilo de accin: Fosfatasa alcalina, Pepsina, Hidrolasas lisosomicas.3. Qu funcin desempea en la formacin del centro activo el plegamiento de la cadena polipeptdica que da lugar a la formacin de la estructura terciaria de la protena enzimtica?4. Qu importancia tiene el hecho de que en el centro activo exista un ambiente apolar?5. Pudiera inactivarse una enzima modificando grupos del centro activo que no intervienen de forma directa en la catlisis?6. Por qu para la catlisis enzimtica es necesario la formacin del complejo enzima- sustrato? Discuta al menos 2 posibilidades.7. En el centro activo de una enzima existen 3 aminocidos claves que son asprtico, histidina y glutmico. ;Pudiera esto explicar por qu esta enzima es tan sensible a los cambios de pH?