Practica No. 13Pruebas Cruzadas de Compatibilidad SanguineaObjetivo:El alumno al finalizar la prctica determinar si dos sangres; del donador y del receptor, son compatibles, para practicar la transfusin sangunea.Generalidades:En todo banco de sangre y ante la inminencia de transfundir sangre a un individuo, es obligatorio efectuar la determinacin del tipo sanguneo y el factor Rh del receptor; al seleccionar la sangre a transfundir, deber ser del mismo tipo sanguneo y factor Rh del paciente, cumpliendo con esta premisa, se efectuar en el laboratorio un anlisis que nos permita envitrodetectar si en ellas, tenga un anticuerpo anormal, que pueda causar aglutinacin o hemlisis de los glbulos rojos en la circulacin sangunea del receptor. La identificacin correcta de la sangre elegida para la donacin, la del paciente que ha de recibir la transfusin, la exactitud, velocidad, prevencin y de control de calidad y omisin de errores, son aspectos que al realizar las pruebas cruzadas, revisten gran importancia, pues errores humanos descubiertos despus de iniciada una transfusin son imposibles de corregir y ponen en peligro la vida del paciente.Fundamento: Las pruebas cruzadas deben:a) Detectar anticuerpos IgM de carcter aglutinante o hemolizante que fijan complemento, por lo que se debe trabajar con sangre recin extraidas y coaguladas.b) Investigar Anticuerpos IgG que por su naturaleza no producen aglutinacin y se deben utilizar distintosmediosque permitan demostrar su presencia, produciendo aglutinacin o hemlisis.Material y equipo: 1 gradilla 4 tubos 13x 100 12 tubos 10 x 75 6 pipetas Pasteur con bulbo 2 centrifugas Serofuge Bao mara a 37C Slucion salina en pizetas Albmina bovina al 22% Suero Antiglobulina Humana (Coombs)Tcnica:1. Separar los sueros de los globulos rojos2. Realizar una suspensin de globulos rojos del disponente y del receptor al 5% previamente lavados3. Se colocan 7 tubos en lnea recta y se marcan: 1 2 3 4 5 6 7 E r Sr Ed Sd FM fm C1. A la Fase mayor se le pone una gota de suero del receptor ms una gota de globulos rojos al 5% del disponente2. A la fase menor se le pone una gota de suero del disponente ms una gota de globulos rojos al 5% del receptor3. Al tubo control se le pone una gota de suero del receptor ms una gota de globulos rojos al 5% del receptor4. Se centrifugan a 2500 rpm por 30 y se lee desprendiendo suavemente el sedimento en busca de aglutinacion de no existir aglutinacin, se continuar5. Se agregan dos gotas de Albmina Bovina al 22% y se centrifuga a 2500 rpm por 30 y se lee6. Se incuban a 37C durante 30 minutos, se extrae los tubos10.Se centrifuga a 2500 rpm por 30 y se leen11.Se llenan con solucin salina 3/4 de ambos tubos (fase mayor y menor) se mezclan y se centrifugan a 2500 rpm por 30, se sacan de la centrfuga y se decantan y se vuelve a aplicar solucin salina (sta operacin se repite tres veces) en el ltimo lavado, se decantan completamente el tubo12.Al sedimento residual se le agregan dos gotas de reactivo de Coombs a ambos tubos y se centrifugan a 2500 rpm por 30, se leen cuidadosamente para buscar que no haya hemlisis ni aglutinacin13.Se le agrega a cada tubo una gota de clulas control se centrifuga a 2500 rpm por 30 y se leen en busca de aglutinacin.Conclusin: La prueba mayor, menor y control contienen: Prueba mayor: suero del receptor con globulos rojos del disponente (2 gotas de suero del receptor ms 1 gota de suspencin de eritrocitos del disponente) Prueba menor: suero del disponente con globulos rojos del receptor (2 gotas de suero del disponente ms 1 gota de suspencin de eritrocitos del receptor) Control: suero del recpetor y globulos rojos del receptor (2 gotas del suero del receptor ms 1 gota de suspencin de e ritrocitos del receptor ) Si en todos los pasos no existi aglutinacin o hemlisis, las pruebas son 100% compatibles y la sangre puede transfundirse, en caso de existir aglutinacin o hemlisis, en cualquiera de los pasos se considera incompatibilidad, las pruebas se suspenden y se comienza a investigar otra bolsa de sangre del mismo tipo sanguneo y factor Rh, siguiendo los mismos pasos. Si la incompatibi lidad, se encuentra en los tubos con salina (1 y 2) probablemente se trata de una IgM y hay una equivocacin en el tipo sanguneo, por lo tanto se debe ratificar el tipo del donador. Si la aglutina cin es en el tubo menor en salina se trata de una IgM del donante y es de esperarse, en el caso de emplearse sangre O. Cuandose efectua el cruce con receptores de tipo sanguneo distinto esta sangre puede emplearse, de preferencia el paquete globular. Es de hacerse notar que tanto la aglutinacin como la hemlisis son macroscpicas y que en muy pocos casos es necesario utilizar el microscopio. Este mtodo por los numerosos pasos que hay que efectuar, al parecer es complicado, pero la prctica continua del mismo se vuelve simple y automatizado y en muchas ocasiones de acuerdo con la urgencia se puede reducir la incubacin, con primera lectura a los 20 minutos, si se reporta negativo, enviar la sangre a transfundir, continuando con el mtodo hasta cumplir con los tiempos sealados. Las investigaciones de mtodos ms sencillos y gran confiabilidad, han llevado a buscar que la velocidad de algunas reacciones antgeno anticuerpo de grupos sanguneos, aumentan considerablemente si la incubacin se lleva a cabo en condiciones de ba ja fuerza inica entre sus ventajas, se encuentra el acortamiento de los tiempos de incubacin, la posibilidad de detectar algunos anticuerpos dbiles que no pueden detectarse por otros mtodos y la formacin de aglutinados ms fuertes que los producidos por otras tcnicas en la fase de Antiglobulina, aumentan un tanto las reacciones dbiles, probablemente debido a la unin inespecifica de los componentes del complemento. Los reactivos que han de utilizarse en las tcnicas deben prepararse y controlarse con esmero, y las condiciones de las reacciones deben ser tan precisas para evitar resultados positivos falsos no cabe duda de que los mtodos conLISS,si se efectuan adecuadamente son excelentes, siempre y cuando lo empleen pesonal debidamente entrenados este recurso no es de uso comn y su uso est restringido a muy pocos centros especializados.Interpretacin de Resultados Para el corrector manejo de los resultados se deber anotar despus de cada observacin Aglutinacin en cualquiera de las pruebas mayores no sera necesario proseguir con los siguientes pasos, pus demuestra in compatibilidad Las anotaciones se pueden realizar en tarjetas diseadas exprofeso y de las cuales cada laboratorio contar con un modelo, cualquiera que ste sea debe contener los datos generales, de receptor y donador, cada tarjeta debe ser adherida a la bolsa de sangre correspondiente y al enviarse a la aplicacin del paciente, se guardar en el expediente del mismo.