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Preparaciones
Microbiológicas
•Preparaciones en fresco (microorganismos vivos)•Preparaciones fijas y teñidas (microorganismos muertos)
Frotis
Una capa delgada de muestra extendida sobre un
portaobjetos que permite el paso de la luz a través de ella.
•Impronta •Gota de cultivo líquido
•Cultivo sólido resuspendido
•Frotis sanguíneo•Cinta adhesiva transparente
•Hisopo
Tinciones
•Positivas
Se observa teñida la célula sobre un fondo claro.
•Negativas
El fondo se tiñe de oscuro
para observar células o estructuras refringentes.
Frotis Sanguíneo Cryptococcus neoformans
Tinciones
•Simples
Se utiliza un solo colorante (básicos).- Azul de metileno
- Safranina- Cristal violeta
•Compuestas
Se utilizan dos ó más
colorantes. Pueden usar mordentes y decolorantes
- Giemsa- Wrigth
- May Grünwald(Eosina-Azul de metileno)
Bacillus
megaterium. Tinción
simple con cristal
violeta.
Frotis sanguíneo con
Yersinia pestis.
Tinción de Wrigth.
Médula ósea.
Tinción de May
Grünwald-
Giemsa.
Trypanosoma sp
en sangre.
Tinción de
Wrigth.
Tinciones
•Tinción negativa de
Cápsula
•Selectivas
Son utilizadas para dar
color y aislar partes específicas de los microorganismos
- Endosporas- Flagelo
- Núcleo
Tinción
negativa de
cápsula.
Streptococcus
pneumoniae.
Tinción de
endosporas.
Bacillus subtilis.
Tinción de
flagelos.
Proteus sp
Tinciones
•Diferenciales
Reaccionan de manera
diferente entre las distintas
clases de bacterias.
- Ziehl-Neelsen
- Gram
Tinción de
Ziehl-Neelsen.
Tinción de
Gram.
Tinción de
Gram.
Colorantes
Compuestos coloridos que al combinarse con otras sustancias les
imparten color; están formados por un grupo cromóforo que es la parte responsable del color, y un grupo auxócromo que al formar sales le permite disociarse y combinarse. Mordente : compuesto
químico intensificador de color.
•Ácidos.
El cromóforo es el anión de la molécula.
•Básicos.
El cromóforo es el catión de la molécula.
Br
NaO
Br
O
Br
O
Br
COO- Na+
Eosina
N
S(CH3)2N N(CH3)2+
Cl-
Azul de metileno
Técnicas de tinción
•Tinción simpleColorante básico
(1 minuto)
Enjuagar con agua
Frotis
Bacillus anthracis
Tinción simple con
cristal violeta.
Staphylococcus
aureus.Tinción
simple con azul
de metileno.
Neisseria
gonorrhoeae.
Tinción simple con
safranina.
Pseudomonas
aeruginosa.
Tinción simple
con safranina.
Técnicas de tinción
•Tinción de cápsula
Extendido
Muestra + tinta china o
nigrosina
Safranina de Gram o
Cristal Violeta (1 minuto)
Secar al aire
Streptococcus pneumoniae
Acinetobacter calcoaceticus
Técnicas de tinción
Verde de maquila 5% con
emisiones de vapor de
agua (10 minutos)
Lavar con agua
Safranina 0.5% (1minuto)
•Tinción de endosporas
Bacillus subtilis
Clostridium tetani
Técnicas de tinción
•Tinción de flagelo
Colorante primario. Para-
rosa anilina
Mordente. Acido
tánico
Colorante de
contraste. Azul de
metileno
Proteus vulgaris
Vibrio cholerae
Colorante primario. Cristal
violeta 1% en solución de
oxalato de amonio al 0.85%
(1 minuto)
Colorante de contraste.
Safranina 0.25% (1 minuto)
Mordente. Lugol Iº/KI 1g/2g
en 300 mL de agua (1 minuto)
Decoloración. Alcohol-Acetona
70:30. Hasta eliminar el exceso
de colorante
Técnicas de tinción
•Tinción de Gram
Streptococcus pyogenes
Bacilos Gram
negativos y levaduras
Técnicas de tinción
Colorante primario. Fucsina
fenicada con emisiones de
vapor de agua (10 minutos)
Colorante de contraste.
Azul de metileno de Loeffler
(1 minuto)
Decoloración. Alcohol-Acido
(etanol-HCl) 97:3. Hasta eliminar
el exceso de colorante
•Tinción de Ziehl-Neelsen
Mycobacterium tuberculosis
Mycobacterium tuberculosis
Microscopía
Microscopía
http://twistedbacteria.blogspot.com/
Microscopía óptica y
electrónica
Tipos de microscopías
•Óptica de campo claro •Óptica de campo oscuro
•Contraste de fases •Diferencial de contraste de interferencia (DIC).
Tipos de microscopías
•Confocal •De fluorescencia
•Electrónica de barrido •Electrónica de transmisión
Microscopía
http://endospore.freeblog.hu/files/e
arly_microscope.jpg
